Electroforesis

ELECTROFORESIS

Lee Bojórquez Juan Francisco

Madrid Ruiz Daniela

Morales Carrasco Reyes

Moreno Quiroz Mayra

Orozco Avilés Rebeca

Ramírez Lee Leslie Jennifer

método en el que se utiliza una corriente eléctrica controlada con la finalidad de separar biomoléculas según su tamaño y carga eléctrica a través de una matriz gelatinosa.

Atracción hacia el polo opuesto

Moléculas ionizadas

Campo eléctrico

Moléculas positivas

Cátodo-

Moléculas negativas

Ánodo+

FUERZAS ADICIONALES

Fricción con el disolvente

Movimiento Browniano

Dificulta el movimiento temperatura

Difusión

Moléculas no migran de forma homogénea

Se forma un frente

Para reducir la anchura del frente…

Se reduce el movimiento de las

moléculas empleando un medio que oponga

mas resistencia a dicho movimiento

G E L

Polímero soluble de muy alto peso molecular que atrapa moléculas de agua y forma un tamiz  que dificulta el

movimiento de los solutos

la migración electroforética de las moléculas será mas lenta, pero el ensanchamiento del frente se vera reducido

también

MÉTODOS ELECTROFORÉTICOS ZONALESSon útiles para

lograr la separación de

mezclas complejas

Se aplican pequeñas cantidades de la

disolución de proteínas a un soporte sólido, que

se impregna con una solución tampón

Como soporte han sido utilizados

papel (celulosa), almidón,

poliacrilamida, agarosa y acetato

de celulosa

Equipamiento

Fuente de poder

Cubeta vertical u horizontal

Soporte& dos

electrodos

Electroforesis en gel de poliacrilamida

Electroforesis en geles de gradientes

Electroforesis en geles de agarosa

Electroforesis Capilar

isoelectroenfoque

Electroforesis bidimensional

Electroforesis en gel de poliacrilamida

Polimerización de acrilamida

Químicamente inerte

Forma geles transparentes

Estabilidad mecánica

No iónicos

Permiten buena visualización

neurotoxicidad

Control del tamaño del poro

Electroforesis en geles de gradientes

la proteína migra hasta alcanzar una

zona donde el tamaño de poro impida cualquier

avance

Tamaño decreciente del poro

al alcanzarse el limite del poro no se produce una

migración apreciable aunque

no se detiene completamente

concentra las bandas en regiones

mas estrechasIncrementa el rango

de pesos moleculares que se pueden resolver en

un mismo gel

Electroforesis en geles de agarosa

polisacárido• Obtenido de algas

Permanece liquido por encima de los 50°C• Forma un gel semisólido al

enfriarseConstituido por matriz de fibras poliméricas

• Separa moléculas grandes (20 000nucleotidos)

• Realizada sobre un capilar de silica• Fundida a 20 a 30 kv en un campo de 400 a 500 v/cm • El capilar de silica fundida permite el pasaje de la luz UV

Electroforesis Capilar

Es posible separar cationes, aniones, proteínas, macromoléculas y sustancias no cargadas en forma simultanea.

Region del anodo es acida y catodo es alcalina

isoelectroenfoque

Sustancias en PH inferior a su punto isoeléctrico cargadas (+) cátodo

Sustancias en PH alto a su punto isoeléctrico cargadas (-) ánodo

Electroforesis bidimensional

FUENTES DE ERROR

temperatura velocidad

Niveles de catalizador

Tiempo de corrida &

preparación