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3º Encuentro Cultural de los Cinco Continentes
El Conocimiento y las Profesiones
9 al 11 de Octubre 2006
Buenos Aires
NUEVA ALTERNATIVA DE DIAGNÓSTICO PRENATAL
Dr. Roberto Coco
FECUNDITAS - INSTITUTO DE MEDICINA REPRODUCTIVA - afiliado a la Facultad de Medicina de la UBA
PGD
Etiología y Frecuencia de los Trastornos Congénitos
desordenes cromosómicos 0.6%
“ monogénicos 1%
“ multifactoriales 5 – 10%
causas exógenas ?
mutaciones mitocondriales ?
Imprinting y disomía uniparental ?
Amniocentesis
15 – 20 ml líquido amniótico 14 –18 semanas separación de amniocitos estudio directo por FISH o PCR estudio cromosómico completo
por cultivo ( 8 – 10 días )
~ 1% de falla en cultivo en líquido amniótico: AFP, análisis bioquímicos, etc riesgo aborto inducido ~ 0.5%
Amniocentesis
15 – 20 ml líquido amniótico 14 –18 semanas separación de amniocitos estudio directo por FISH o PCR estudio cromosómico completo
por cultivo ( 8 – 10 días )
~ 1% de falla en cultivo en líquido amniótico: AFP, análisis bioquímicos, etc riesgo aborto inducido ~ 0.5%
Vellosidad Coriónica
aspiración placentaria 10 – 13 semanas método directo:
metafases FISH PCR
por cultivo ~ 1% de fracaso error diagnóstico 1 – 3% aborto inducido 1 – 2%
Vellosidad Coriónica
aspiración placentaria 10 – 13 semanas método directo:
metafases FISH PCR
por cultivo ~ 1% de fracaso error diagnóstico 1 – 3% aborto inducido 1 – 2%
Fecundación e Implantación
12 Hs 26 Hs 48 Hs
120 Hs 96 Hs
Desarrollo pre-embrionario in vitro
Programación del óvulo
Expresión de ambos genomas
72 Hs
FIV
ICSI
Profase I Metafase I Anafase I Telofase I
Profase II
Metafase II
Maduración del ovocito
Fecundación
Clivaje
2 Pn 2 Cp Singamia Metafase Anafase
Telofase
aspiración ovocitos semen
clasificación procesamiento
PI MI MII
inseminación
FIV
15-20 hs. Post-inseminación
EVALUACIÓN DE LA FECUNDACIÓN
N F 2 Pn 1 Pn 3 Pn
MB
1
B
2
R
3
M
4
SCORE DE PRONUCLEOS
CLIVAJE TEMPRANO+MULTINUCLEACIÓN
26 hs post-inseminación
Pn Singamia 1er Clivaje Multinucleación
clivaje y calidad 48 hs post-inseminación
MB
4 B
3
R
2 M
1
Evaluación del Desarrollo
MB
4
B
3
R
2 M
1
72 hs post-inseminación clivaje y calidad
Evaluación del Desarrollo
96 hs. Post-inseminación
Morula
Evaluación del Desarrollo
Evaluación del Desarrollo
120 hs. Post-inseminación
Células Embrionarias Progenitoras
Trofoblasto = v. coriónica
MCI = mesodermo placenta
Tejido extraembrionario
Macizo celular interno
alternativa de
DIAGNÓSTICO PRENATAL
que permite el
establecimiento del embarazo
libre de la
afección en riesgo
APLICACIONES DEL PGD
SON
SIMILARES A LOS DP CONVENCIONALES
CON RIESGO GENÉTICO AUMENTADO
SIN RIESGO GENÉTICO
MAYOR EFICACIA REPRODUCTIVA
POR RIESGO AUMENTADO
Trastornos génicos simples
Trastornos cromosómicos
Predisposición a cáncer
Trastornos de comienzo tardío
Incompatibilidad sanguínea
Enfermedad genética + HLA
PREDISPOSICIÓN A CANCER
Sindrome Li Fraumeni
Poliposis coli familiar
Von Hippel Lindeau
Retinoblastoma
Neurofibromatosis I y II
Tumor familiar cerebral fosa posterior
PGD SIN RAZONES MÉDICAS
Elección del sexo
HLA compatible a un nacido
Sordera heredada
Acondroplasia
Orientación sexual
Peso, altura, color de ojos, inteligencia
ESHRE PGD-CONSORTIUM
R. Genético & Objeción al Aborto
R. Genético & Aborto Genético
R. Genético & Subfertilidad
Eficacia Reproductiva
Otras
MOTIVACIONES DE PGD
RIESGO
GENÉTICO
AUMENTADO
MAYOR
EFICACIA
EN FIV
DGP
PGS
PGD
FIV / ICSI Estudio Genético +
P G D
Fertilidad pareja Caracterización Genética +
P G D
FIV / ICSI / PGD
TRANSFERENCIA
DE
POR LO MENOS
UN EMBRIÓN VIABLE
FIV / ICSI / PGD
predecir
la posibilidad
de transferencia
embrionaria
PREDICCIÓN DE EMBRIONES
A TRANSFERIR
EXISTENCIA O NO DE RIESGO GENETICO
RIESGO DE ANEUPLOIDIA
RESERVA OVÁRICA
EMBRIOGENICIDAD DE LOS ÓVULOS
FACTOR MASCULINO
PGS
ANEUPLOIDÍA EN OVOCITOS
INHERENTE A LA EDAD
< 25 5
< 30 15
< 35 20
< 40 35
>40 50
Kuliev & Verlinsky, 2004
Sobre más de 8000 ovocitos estudiados
por análisis de los CPs I y II
con sondas 13, 15, 16, 21 y 22
de mujeres ≥ 35 años
50% ANEUPLOIDIAS
TASA ANEUPLOIDÍA:
9,4% – 13,9%
ESTUDIO CROMOSÓMICO EN
ESPERMATOZOIDES HUMANOS
Inseminación de ovocitos de Hamster denudados de su membrana pelúcida con espermatozoides humanos (FIV híbrida). Inyección de ovocitos de Hamster con espermatozoides humanos (ICSI híbrida)
ANEUPLOIDíA ESPERMÁTICA
INHERENTE A LA CALIDAD DEL SEMEN
OAT: oligoastenoteratozoospermia
TASA DE ANEUPLOIDIA
GRUPO
13
18
21
XY
TOTAL
OAT
N:53
1,9±2,59
0,64 ±0,64
1,56 ±2,40
1,70 ±1,41
24,62 ±18,09
R:4 a 83%
NORMAL
N:10
O,58±0,28
0,26±0,11
0,55±0,39
0,71±0,29
10,09 ±3,78
R:4,2 a 14,3%
Coco et al, 2000
Tasa de aneuploidía
Oocitos Espermios
20 10
Fecundación Normal: 72%
POSIBILIDADES DE FECUNDACIÓN NORMAL
Errores de Fecundación: 1 - 5%
Errores post Fecundación: 5 – 15%
Probabilidad de Pre-embriones Normales: ~ 50
Tasa de aneuploidía
Oocitos Espermios
50 10
Fecundación Normal: 45%
POSIBILIDADES DE FECUNDACIÓN NORMAL
Errores de Fecundación: 1 - 5%
Errores post Fecundación: 5 – 15%
Probabilidad de Pre-embriones Normales: ~ 25
Tasa de aneuploidía
Oocitos Espermios
50 50
Fecundación Normal: 25%
POSIBILIDADES DE FECUNDACIÓN NORMAL
Errores de Fecundación: 1 - 5%
Errores post Fecundación: 5 – 15%
Probabilidad de Pre-embriones Normales: ~ 5
Aneuploidías 13,14,15,16,18, 21, 22, X e Y
Desarrollo hasta Blastocisto
TASA IMPLANTACIÓN
TASA ABORTO
PGD
PREDICCIÓN DE EMBRIONES
A TRANSFERIR
EXISTENCIA O NO DE RIESGO GENETICO
RIESGO DE ANEUPLOIDIA
RESERVA OVÁRICA
EMBRIOGENICIDAD DE LOS ÓVULOS
FACTOR MASCULINO
SIN RIESGO GENÉTICO
EDAD DE LA MUJER
CALIDAD ESPERMÁTICA
RIESGO REPRODUCTIVO
CON RIESGO GENÉTICO
RIESGO REPRODUCTIVO
RIESGO GENÉTICO
EDAD DE LA MUJER
CALIDAD ESPERMÁTICA
ENFERMEDADES LIGADAS AL X
PGD
POR SEXO
50%
POR MUTACIÓN
25%
A
B
PREDICCIÓN EMBRIONES NORMALES VIABLES
A: 1/2 x 1/2 = 1/4
B: 3 / 4 x 1 / 2 = 3/8
Enfermedades autosómicas recesivas
PGD
AFECTADOS: 25%
PORTADORES: 50%
NORMALES: 25%
PREDICCIÓN EMBRIONES NORMALES VIABLES
A: 3/4 x 1/2 = 3/8 PREDICCIÓN EMBRIONES NO PORTAD. VIABLES
B: 1/4 x 1/2 = 1/8
ENFERMEDADES AUTOSÓMICAS DOMINANTES
PGD
AFECTADOS: 50%
PREDICCIÓN EMBRIONES NORMALES VIABLES:
1/2 x 1/2 = 1/4
ENFERMEDADES LIGADAS AL Y
PGD
VARONES AFECTADOS: 100%
PREDICCIÓN DE EMBRIONES NO AFECTADOS VIABLES:
1/2 x 1/2 = 1/4
PORTADOR DE TRANSLOCACIÓN RECÍPROCA
SEGREGACIÓN
ALTERNADA
ADYACENTE
SEGREG. 3:1
SEGREG. 4:0
75% SEGREGACIONES ANORMALES
PORTADOR DE TRANSLOCACIÓN ROBERTSONIANA
NO HOMOLOGA
SEGREGACIÓN
ALTERNADA
ADYACENTE
SEGREG. 3:0
66% SEGREGACIONES SON ANORMALES
TRANSLOCACION ROBERTSONIANA HOMOLOGA
100% RIESGO
PORTADOR DE INVERSION CROMOSOMICA
RIESGO VARIABLE
SEGÚN
EL SEGMENTO
Y
CROMOSOMA INVOLUCRADO
t(13;14)
32,3 18,2 1,0 2,7 3,5 47,0
t(13;14)
35,7 8,8 0 0 0,7 64,4
t(13;14)
40,0 14,2 0,2 5,2 6,0 32,4
Inv(4)
14,0 1,0 0 0 0,6 80,0
9ph
0,7 0,4 0 0,4 0,2 93,7
9ph
2,9 1,0 0,1 0,2 0,6 88,0
9ph
1,8 1,4 0,2 0,2 0,2 86,3
Rearreglo Cromosómico
Segregación Anormal (%)
Posible Efecto Intercromosómico Espermios Normales (%)
13 18 21 XY
t(1;4)
80,2 21,2 15,2 31,0 28,2 0,1
t(1;19)
48,1 0,5 0,8 0,7 0,2 45,3
t(4;15)
57,8 1,4 0,4 0,8 2,6 34,5
t(2;7)
73,8 1,0 0,4 0,8 0,7 22,4
t(1;7)
61,0 3,6 2,6 2,1 6,0 15,9
t(12;16)
60,0 0,6 1,3 0,4 0,8 36,6
t(7;17)
67,9 0,2 0 0 0,6 31,9
t(9,17)
90,0 0,1 0 0,1 0,3 8,0
MARCADORES
LIGADOS
AL
HLA
HLA TYPING
se eligen los STRs más informativos
heterocigotas y diferentes
en los progenitores
¼ EMBRIONES TIENE EL MISMO HAPLOTIPO HEREDADO
POSIBILIDAD EMBRIONES COMPATIBLES VIABLES:
¼ X ½ = 1/8
HLA
+ E. AUTOSÓMICA RECESIVA
E. NORMALES: 1/4 X 3/4 = 3/16
E. NORMALES VIABLES:
3/16 X 1/2= 3/32
Talasemia Mayor + HLA
IVS-1 nt 1
IVS-1 nt 6
PREIMPLANTATORIO PARA HLA
Enfermedad Ciclos Embarazos
Fanconi 39 5
Talasemia 81 11
Hiper IgM 5 2
Wiscott-Aldrich 3 2
Displasia HE+Inmuno deficiencia 1 1
Adrenoleucodistrofia 1 0
Anemia Diamond Blackfan 4 2
Anemia Aplástica 2 0
Leucemia 34 7
Total 170 30
HLA
+ E. LIGADA AL X
POSIBILIDAD E. N. VIABLES
. por sexo 1/4 X 1/ 2 x 1/2 = 1/16
. Por mutación 1/4 X 3/4 x1/2 = 3/32
. No portador 1/4 X 1/ 4 x 1/2 = 1/32
AMBOS MIEMBROS CON RIESGO
CAH + T. ROBERTSONIANA
Gln319stop 12splice
CAH y t(14;22)
T(14;22)
Posibilidad ET
3/4 x 1/3 x 1/2 = 3/24
no port.:1/ 4 x 1/3 x 1/2= 1/24
PREDICCIÓN EMBRIONES NORMALES A TRANSFERIR
Embriones
anormales
Posibilidad embriogénica
(%)
Embriones normales
(%)
Desorden
AR 1/4 50 37,50
AD 1/2 50 25
RLX 1/4 50 37,5
HLA 3/4 50 12,50
AR+HLA 1/4x3/4 50 9,37
AD+HLA 1/2x3/4 50 6,25
RLX+HLA 1/4x3/4 50 9,37
TR 3/4 50 12,50
FC 2/3 50 16,66
IP 1/5 50 40
Sexado 1/2 50 25
EMA 1/2 50 25
EMA+FM 1/2 x 1/3 50 16,66
PGD
PGS
PGDSS
Total
Ciclos aspirados
2913
3115
255
6283
Ciclos PGD/S/SS
2697
2968
241
5906
Ciclos transferidos
2166
2205
204
4575
E. Clínico/asp.
18%
17%
24%
18%
E. Clínico/transf.
24%
24%
29%
24%
DATOS ESHRE
CONSORTIUM
PGS
EMA
A.R.
F.FIV
FMS
Otros
Ciclos iniciados
1058
527
1051
166
327
Ciclos aspirados 1055 515 1038 164 324
Ciclos PGS 1009 503 986 155 315
Ciclos transferidos 691 438 744 133 250
E. Clínico/asp. 15% 18% 16% 31% 21%
E. Clínico/transf.
23%
22%
20%
38%
24%
PGD
DIAGNÓSTICO
DEL
TRASTORNO EN RIESGO
FECUNDACIÓN
En la fecundación queda determinada una nueva constitución cromosómica
FECUNDACIÓN
Los gametos no son dos hemipersonas que al unirse forman una nueva persona
FECUNDACIÓN
FECUNDACIÓN
FECUNDACIÓN
no clivar
clivar y detenerse en 2-4 células
mola
corioncarcinoma
letal
gemelos
quimera
siameses
polimalformado
nacido vivo normal
ASPECTOS BIOLOGICOS DEL DESARROLLO HUMANO
n
2n 2n
gametos
fecundación meiosis mitosis
n
1: gameto – fecundación - cigoto
2: cigoto – mórula –blastocisto - anidación
3: anidación - gastrulación – embrión
4: embrión – feto - nacido
Sucesión de Etapas
FECUNDITAS INSTITUTO DE MEDICINA REPRODUCTIVA Y GENÉTICA
Afiliado a la FACULTAD DE MEDICINA de la UBA
FECUNDITAS
INSTITUTO DE MEDICINA REPRODUCTIVA Y GENÉTICA
AFILIADO A FACULTAD DE MEDICINA - UBA
MUCHAS GRACIAS !
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