AGAR PLATE COUNT(APC)

Agar Plate Count ( APC )Medio de cultivo solido, de identificación de organismo heterotróficos (aerobios mezo filos ,)

HETEROTROFICOS

Son organismos que sobreviven a cambios continuos del ambiente , como cambios leves de temperatura , intensidad luminosa y de nutrientes .que se pueden transportar por muchos medios come el aéreo , acuático y solidos( sobre los seres vivos, dentro de ellos ,etc)

Aerobios

Se caracteriza por estar principal en presencia en el ambiente.

Organismos caracterizados por la necesidad de oxigeno ,para realizar su desarrollo y metabolismo. Su nutrición se basa en la oxidación de la glucosa y otras sustancias libera mucha más energía que su utilización anaerobia por ejemplo, la fermentación.

La capacidad de realizar el metabolismo aerobio integrando a una bacteria aerobia como orgánulo permanente, la mitocondria (teoría de la endosimbiosis).

Aerobiosis, es un proceso conocido como respiración celular, usa el oxígeno

para oxidación del sustrato (por ejemplo azúcares y grasas para obtener energía).

Un buen ejemplo podría ser la oxidación de la glucosa (un monosacárido) en la respiración

aeróbica.

C6H12O6 + 6 O2 -> 6 CO2 + 6 H2O + 38 ATP

Aerobios estrictos : aquellos que no sobreviven sin oxigeno

Anaerobios : que no requieren oxigeno para subsistir

Micro aerobios: que necesitan una mínima cantidad de oxigeno para subsistir

MEZOFILOS

Usado sobre todo en el campo de la microbiología, se refiere a un organismo cuya

temperatura de crecimiento óptima está entre los 15 y los 35 °C (un rango considerado

moderado). Por el contrario, los organismos que prefieren temperaturas frías se

denominan psicrófilos, y los que crecen de forma óptima a altas temperaturas son

llamados termófilos.

El hábitat de los organismos mesófilos incluye el suelo, el cuerpo de un animal, etc. Su

temperatura óptima de crecimiento se encuentra en los 37 °C, la temperatura normal de un

cuerpo humano.

COMPOCICION DE NUTRIENTES DE MEDIO

NUTRIENTE ConcentraciónTriptona 5.0g/lDextrosa 1.0g/l

Extracto de levadura 2.5 g/lAgar 12.0g/l

Ph final: 7.0 +- 0.2

PREPARACION DEL MEDIO PARA TRABAJO

1. Esterilizar el contenedor donde se agregara el agar APC.

2. Agregar 20.5 g de crudo de APC en el contenedor.

3. Agregar 1L de agua destilada en el contenedor y agitar hasta disolver y

homogenizar el medio por apox. 3 minutos.

4. Poner el medio a esterilizar en el autoclave a 7 atm y a 160 C° por alrededor treinta

minutos corridos .

5. Retirarlo del auto clave y dejar enfriar hasta que se solidifique(no se debe trabajar

con el medio directamente después de ser auto clavado posible de solidificación.

6. Licuar el medio en agua hirviendo ,asta homogenizar .

7. Esperar que el medio este en una temperatura adecuada y no olvidar homogenizar el

medio durante su enfriamiento.

8. Colocar 1ml de la muestra en una placa petry estéril .

9. Agregar 3ml aprox. de medio con un mechero a lado y homogenizar formando una

cruz para evitar que los microrganismos no se aíslen en las paredes de la placa.

10. Dejar reposar la placa boca abajo por 24 horas para la lectura de los organismos

aerobios meso filos totales y 24 -48 horas adicionales para el recuento de mohos y

levaduras.

RECONOCIMIENTO Y RECUENTO EN PLACAS

Placa de 24 horas de incubación , los mohos y levaduras no tienen una forma tradicional y

definida.

Bacilos : se caracterizan por su color

amarillento lechoso y en algunas

veces de gran extensión

Otros A.M. : se caracterizan por ser

puntos solitarios y bien de finidos de

color mas blancuzco y lechoso de

baja extensión.

Existe 94 organismos heterotróficos

totales. Que según los LMP como

máximo son 500 UFC /ml.

Placa con mas de 48- 62 horas de incubación , los hongos y mohos se distinguen

claramente y se extienden inhibiendo a los otros organismos muchas veces .

Hongos y levaduras: se distinguen por tener un color mas claro , forma esponjosa cono

algodón y de mayor extensión en su mayoría .

Mohos: se distinguen por un color mas oscuro y verdoso, con forma de formación de su

medio a sus lados extendidos homogéneamente , mas pequeño que el hongo en su mayoría

.

La técnica usada en todo los casos es la del NMP(numero mas probable)

.