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CROMATOGRAFÍA DE CAPA FINA
(PRÁCTICA No.2)
Profesora: Catalina Vasco, PhD.
Ayudante: Sr. Carlos Navas C.
Barba, M., Inguillay, S. y Tamayo, P.
(mikhal24@hotmail.es)
Grupo 3 (Martes)
Fecha de realización: Martes 20 de agosto del 2013
Fecha de entrega: Martes 27 de agosto del 2013
RESUMEN EJECUTIVO:
El planteamiento de la práctica posee dos objetivos en la aplicación de cromatografía de
capa fina, primero, la separación de distintos pigmentos vegetales presentes en hojas de espinaca;
para lo que se procedió a la extracción de la muestra por trituración, con mortero, y su disolución
con acetona:éter (1:1); de la que se colocó una alícuota en la placa, previamente preparada, que
luego se introdujo en la cámara de saturación con cloroformo:éter (3:7), durante media hora. Al
cabo de lo que se extrajo la placa y se midieron las distancias recorridas por el eluyente y los
pigmentos, y se calculó sus factores de retención (R f), de 0.750 para el pigmento verde (clorofilas),
y 0.983 para el amarillo (carotenoides). El segundo objetivo era la identificación de sustancias no
coloreadas, para lo que se siguió un proceso similar al anterior, pero sin disolución de las muestras,
y empleando hexano como eluyente, además para medir las distancias en la placa se empleó una
cámara UV, con lo que se concluyó valores R f de 0.283, 0.783, 0.842, 0.858 para los componentes
del diesel, y 0.150 para el naftaleno, mientras para benceno y tolueno, no hubo coloración, y no
pudo calcularse. Con lo que se concluyó, con las limitaciones de la técnica, que los pigmentos
vegetales así como el diésel se componen de variadas sustancias, en el primer caso, de clorofilas y
carotenos, y en el segundo, de alcanos y aromáticos principalmente.
ÍTEM PUNTAJE
Coloquio /3.0
Participación /2.0
Presentación y formato /0.5
Resumen ejecutivo /1.0
Tablas de datos y diagramas
/1.0
Cálculos /0.5
Resultados y discusión /1.5
Conclusiones y recomendaciones
/0.5
Subtotal /10.0
PENALIZACIÓN
Atraso en la entrega del informe
/1.0
TOTAL /10.0
ESCUELA POLITÉCNICA NACIONAL
CARRERA DE INGENIERÍA QUÍMICA
Informe de Laboratorio de Análisis Instrumental I Período 2013B
TABLAS DE DATOS
Tabla 1. Distancias recorridas en la placa de
separación de pigmentos vegetales
Distancia del Eluyente= 12 cmColor de pigmentos Distancia [cm.]
Verde 9.0Amarillo 11.8
Tabla 2. Distancias recorridas en la placa de
separación de sustancias no coloreadas
(Diésel)
Tabla 3. Distancias recorridas en la placa de
separación de sustancias no coloreadas
(Naftaleno)
Tabla 4. Valores de factor de retención de Rf
ideales para pigmentos vegetales. (Harborne,
1998, p. 231; Adds, Larkcom y Miller, 2004,
p. 14).
Pigmentos Rf (ideal)Clorofilas (Tipo a) 0.60
Carotenos (Tipo β) 0.98
Tabla 5. Valores de serie eluotrópica (de
menor a mayor polaridad) de solventes en
Silica Gel 20
(Bidlingmeyer, 1992, p. 190)
CÁLCULOS
La ecuación principal en esta práctica es el
cálculo del factor de retención, mediante:
R f=Distanciarecorrida por el sustratoDistanciarecorrida por el eluyente
Cálculo del Rf para las clorofilas
R f=9[cm .]
12[cm.]=0.750
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Tabla 6. Valores de Rf obtenidos para los
pigmentos vegetales
Color de pigmentos RfVerde 0.750
Amarillo 0.983
Distancia del Eluyente= 12 cmComponente Distancias [cm]
1 3.42 9.43 10.14 10.3
Distancia del Eluyente= 12 cmComponente Valores(cm)
1 1.8
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Informe de Laboratorio de Análisis Instrumental I Período 2013B
Tabla 7. Valores de Rf obtenidos para los
componentes del Diésel
Tabla 8. Valores de Rf obtenidos para el
Naftaleno
Los datos calculados de Rf permitieron una
comparación para conocer que compuestos se
encontraron en el extracto de espinaca, al
cotejar con valores de bibliografía, obtenidos
de experiencias similares (Tabla 4.).
Aunque no se pueden considerar los valores Rf
como constantes universales, ya que pequeñas
variaciones en el método o incluso en el
material (estructura) empleado, las modifican,
siendo una debilidad de la técnica, se observó
una relación cercana entre el valor para el
pigmento verde y la clorofila en especial la
tipo A, y entre el pigmento amarillo y lo
carotenoides en especial el β-caroteno, lo que
permitió concluir su equivalencia, al menos
como una buena aproximación.
En el caso del diésel, que se halla formado por
cientos de compuestos de variado tipo, la
comparación de Rf, se hizo más compleja ya
que se tiene una gama tan amplia que fue
difícil e incluso en cierta manera “erróneo”
compararlo con valores de otras experiencias.
Además al ser incoloro y tener que emplearse
una lámpara UV, el espectro de emisión de
ésta, que pudo dejar invisibles o poco
perceptibles parte de las muestras, así como las
erratas de observación, complicaron la
obtención de datos.
Sin embargo, al tomar en cuenta que el
hexano empleado como eluyente es no polar y
la sílica gel polar, a partir de polaridad de las
muestras “serie eluotrópica” (Tabla 5.) se
estableció que las muestras más polares
(benceno y tolueno), difícilmente pudieron ser
disueltas por el eluyente, a diferencia de las
menos polares (naftaleno). Por lo que al
considerar el diésel, se pudo inferir que en su
composición se hallaban especialmente
hidrocarburos saturados alifáticos, así como
aromáticos.
CONCLUSIONES
Se consideró, valores de Rf de bibliografía y
por comparación con los obtenidos (Rf.
verde=0.750, Rf. Amarillo=0983), en el caso
del extracto de espinaca, se pudo concluir que
está formado esencialmente de carotenoides y
clorofilas.
Componente Rf1 0.28332 0.78333 0.84174 0.8583
Componente Rf1 0.15
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Informe de Laboratorio de Análisis Instrumental I Período 2013B
Para los compuestos no coloreados, del
naftaleno se pudo concluir que es
prácticamente puro, aunque poco perceptible
(Rf=0.15), en el caso del benceno y tolueno,
muy probablemente porque su espectro de
absorción se hallaba lejano del de emisión de
la lámpara, y por su diferencia de polaridad
con el eluyente su análisis fue imposible, en el
diésel su amplia cantidad de componentes
(Rf1=0.283, Rf2=0.783, Rf3=0.842, Rf4=
0.858) impidió una identificación clara, sin
embargo, por consideraciones de polaridad, se
pudo concluir que en su mayoría se compone
de alcanos alifáticos y aromáticos, que son los
más comunes en el petróleo del que se extrae.
RECOMENDACIONES
Para la aplicación de la cámara UV, se
deberían analizar compuestos que tengan
el mismo espectro de absorción, en el que
emite la lámpara.
Para una mejor observación de los
componentes del extracto vegetal, se
deberían fijar cantidades específicas de
hojas y solvente durante la extracción (p.
ej. 10 g. de hojas con 50 mL. de solvente,
(Ocampo, Ríos, Betancur y Ocampo,
2008, p. 86).
La adición de colorantes, reactivos con las
muestras podrían facilitar el análisis de
los compuestos no coloreados.
BIBLIOGRAFÍA:
Harborne, J. (1998). Phytochemical
Methods A Guide to Modern Techniques
of Plant Analysis. (3ra. Ed.). Londres,
UK: Thomson Science.
Adds, J., Larkcom, E. y Miller, R. (2004).
Genetics, Evolution and Biodiversity).
(1ra. Ed.). Londres, UK: Nelson Thornes
Ltd.
Lee, M. (1981). Analytical Chemistry of
Polycyclic Aromatic Compounds. (1ra.
Ed.). New York, EUA: Academic Press,
Inc.
Bidlingmeyer, B. (1992). Practical
HPLC: Methodology and Applications.
(1ra. Ed.). New York, EUA: John Wiley
& Sons, Inc.
Reichardt, C. (2003). Solvents and
Solvent Effects in Organic Chemistry.
(3ra. Ed.). Weinheim, Alemania: Wiley-
VCH Verlag GmbH & Co.
ANEXOS:
ESCUELA POLITÉCNICA NACIONAL
CARRERA DE INGENIERÍA QUÍMICA
Informe de Laboratorio de Análisis Instrumental I Período 2013B
Imagen 1. Placas de cromatografía de capa
fina de pigmentos vegetales.
Imagen 2. Placas de cromatografía de capa
fina bajo luz UV, de compuestos no
coloreados
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