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BIOMETRÍA HEMÁTICA
DIVISIÓN
FÓRMULA ROJA
FÓRMULA BLANCA
Cuenta de eritrocitos
Hemoglobina
Hematocrito
Cuenta de leucocitos
Conteo diferencial
FÓRMULA ROJA
CUANTIFICACIÓN DE LA HEMOGLOBINA
MÉTODO: CIANOMETAHEMOGLOBINA
Fundamento:
La sangre se diluye con una solución de ferricianuro potásico y cianuro de potasio (Reactivo de Drabkin) . La Hb se oxida a metahemoglobina por el ferricianuro potásico. El cianuro potásico a continuación convierte la metahemoglobina a cianometahemoglobina.
PROCEDIMIENTO
1. Con la pipeta de sahli medir 0.02 mL de sangre heparinizada.
2. Limpiar la pipeta y transferir a 5 ml de reactivo de Drabkin.
3. Descargar el contenido de la pipeta enjuagando por succión varias veces.
4. Por burbujeo homogenizar la sangre en el reactivo.
5. Reposar la muestra 10 minutos .
6. Leer la absorbancia en el espectrofotómetro a 540 nm utilizando como blanco el reactivo de Drabkin.
Cálculos:
Hb = Absorbancia X 36.8 = g de Hb/dL
Valor normal:
Hombres: 13.5 – 14.5 g/dL
Mujeres:12.5 - 14 g/dL
HEMATOCRITO
CLASIFICACIÓN
a) Microhematocrito
b)Macrohematocrito
CONCEPTO:
Es la cantidad de eritrocitos centrifugados que ocupa un volumen determinado de sangre entera expresado como porcentaje
Microhematocrito
Paso 1. llenar el capilar ¾ partes Con sangre heparinizada
Paso 1. limpia el capilar y sella el extremo del capilar con el anillocoloreado con calor o plastilina.
Paso 3. Equilibrar el capilar por duplicado en la microcentrífuga con los extremos sellados hacia fuera y centrifugar 2500 rpm durante 10 min.
Paso 4. Obtener el resultado utilizando una regla o bien haciendo uso del lector para hematocrito.
Microhematocrito
Escala de hematocrito
Plasma
Leucocitos y plaquetas
Eritrocitos
Macrohematocrito
0
100
10
20
30
40
30
50
100
Paso 1. Lenar el tubo de Wintrobe con ayuda de una pipeta pasteur de punta larga hasta la marca de 100
Paso 2. Centrifugar el tubo a 3000 rpm durante 30 min.
Sacar el tubo y leer a partir de 0 hacia arriba, cada línea representa el 10 %.
Normal (Hematocrito= 45%)
Anemia (Hematocrito= 30%)
Policitemia (Hematocrito= 70%)
Deshidratación (Hematocrito= 70%)
Interpretación del hematocrito
Valor normal:
Hombres: 41-44%
Mujeres: 38 - 42 %
Reactivos
Líquido de Hayem
Fundamento
La técnica se basa en diluir la sangre con líquido de HAYEM en porciones exactas. El líquido de Hayem es una solución compuesta por sales, las cuales hacen que la solución obtenga el grado de isotónica permitiendo que los eritrocitos se mantengan completos, mientras que los leucocitos se lisan por acción de la concentración de la solución al penetrar al núcleo.
Conteo de eritrocitos
Material
Cámara de Neubauer o hemocitómetro
Pipeta de thoma para glóbulos rojos
microscopio
Contador de células
Procedimiento
Paso 1. Llenar la pipeta con sangre a la marca de 0.5 limpiar la punta de la pipeta y aforar con líquido de Hayem a la marca de 101.
Paso 2. Agitar la pipeta por dos minutos de forma manual o 1 minuto con un mezclador.
Paso 3. Eliminar las 4 primeras gotas.
Paso 4. Cargar la cámara de Neubauer colocando el cubrehemocitómetro de forma vertical sobre la cámara y tocar a este con la punta de la pipeta hasta llenar.
Paso 5. Dejar reposar por 2 minutos.
Paso 6. Colocar la cámara en el microscopio y localizar la cuadrícula
Si se considera que el retículo central tiene 400 cuadritos se realizará el siguiente cálculo.
N x 200 x 10 x 400 = N x 10,000 80
N= número de eritrocitos contados
200= factor de dilución
10= corrección x altura de la cámara
Valores de referencia:
Hombres 5.0 - 6.0 x 106 mm3
Cálculos
Mujeres 4.5 - 5.5 x 106 mm3
Velocidad de sedimentación globularVSG
Hombres 0 – 10 mm/hrMujeres 0 – 15 mm/hr
La VSG es la cantidad de milímetros que los eritrocitos sedimentan en 1 hora
La VSG es útil para monitorear enfermedades inflamatorias
Valor normal
Fundamento:
La membrana de los eritrocitos tienen una carga electrostática negativa (potencial z), esta carga forma fuerza de repulsión entre ellos, sin embargo, con el tiempo acaban depositándose debido a la fuera de gravedad en el fondo del tubo.
En el proceso de sedimentación se distinguen tres fases:
1.-Fase inicial o de agregación, dura diez minutos.
2.-Fase de sedimentación rápida: dura 40 minutos.
3.-Fase final de concentración: se observa después de la segunda hora.
Procedimiento
Paso 1. Obtener sangre con anticoagulante (EDTA)
Paso 2. Llenar con una pipeta pasteur con bulbo el tubo de Wintrobe a la marca de 0 evitando que se formen burbujas.
Paso 3. Dejar reposar sobre una gradilla los tubos por un tiempo de 1 hora
Paso 4. Leer la escala de arriba hacia abajo y reportar el resultado.
Valores normales:
Niños: 0 - 10 mm / hr
Adultos: 0 - 15 mm / hr
ÍNDICES DE WINTROBE
(VCM) Volumen corpuscular medio
(HCM) Hemoglobina corpuscular media
(CMHC) Concentración media de Hb
corpuscular
Volumen corpuscular medio (VCM)
Es el volumen medio de los eritrocitos expresado en femtolitro (fL)
Valor Normal: 80 - 103 fL
Interpretación:Si VCM es menor a 80 hay una microcitosisSi VCM es mayor a 100 hay una macrocitosis
10xseritrocito
HctoVCM
Concentración de la Hb corpuscular media CHbCM
x100HctoHb
CHbCM
Es la concentración media de la hemoglobina en cada eritrocito expresado en gramos por decilitro (g/dl)
Valor Normal: 32 - 37 g/dL
Interpretación:Si es menor a 32 hay una hipocromiaSi es mayor a 37 hay una hipercromia
Hemoglobina corpuscular media (HCM)
Es el peso medio de la hemoglobina en un eritrocito expresado en picogramos (pg)
Valor Normal: 28 - 32 pg
x10seritrocito
HbHCM
VCM (fL)VCM (fL) CHbCM (g/dl)CHbCM (g/dl) Morfología del Morfología del eritrocitoeritrocito
Presente en:Presente en:
Menor a 80Menor a 80 Menor de 32Menor de 32 Microcitico Microcitico HipocrómicoHipocrómico
Anemia por Anemia por deficiencia de deficiencia de hierro, hierro, talasemia, talasemia, anemia anemia sideroblásticasideroblástica
80 - 10080 - 100 32 - 3632 - 36 NormocíticoNormocítico
NormocrómicoNormocrómico
Anemia Anemia hemolítica, hemolítica, leucemia.leucemia.
Mayor a 100Mayor a 100 32 - 3632 - 36 MacrocíticoMacrocítico
NormocrómicoNormocrómico
Anemias Anemias megaloblásticasmegaloblásticas
Indices de Wintrobe y anemias relacionadas
Fórmula Blanca Conteo de leucocitosConteo diferencial
Clasificación de Leucocitos
Por presencia o ausencia de Granulocitos
Según su forma del núcleo
Polimorfonuclearesmononucleares
GranulocitosAgranulocitos
Granulocitos o
Polimorfonucleares
Agranulocitos o
mononuclares
NeutrófilosEosinófilosBasófilos
Monocitoslinfocitos
NEUTRÓFILOS1- neutrófilo en banda2- neutrófilos segmentados
Presentan divisiones de sus núcleos en lóbulos en un número que va de 3 a 5. Si es mayor el número de divisiones nucleares se habla de Neutrófilos hipersegmentados
banda
segmentado
EOSINÓFILOSObsérvese el núcleo en forma de anteojo y los gránulos gruesos del citoplasma.
Los Eosinófilos tienen actividad fagocítica, es decir que "se comen" a los agentes extraños al organismo
Es una célula fácilmente identificable por la presencia de grandes gránulos color naranja en su citoplasma.El eosinófilo maduro es redondeado, con un diámetro entre 12 a 17 µm y un núcleo generalmente bilobulado
Basófilo Posee un núcleo en forma de lóbulos que muchas veces cuesta verlo por los gránulos gruesos del citoplasma
Linfocitos normales.El núcleo es redondo y no tan comprimido se observa un reborde basófilo (azulado) en el borde del citoplasma celular.
Monocitos
son células fagocíticas con gran capacidad bactericida. Ante estímulos de sustancias químicas siguen a los neutrófilos en la reacción inflamatoria
Célula más grande en sangre periférica
Reactivos
Líquido de Turk
Fundamento
La técnica se basa en diluir la sangre con líquido de Turk, que es una solución hipotónica de ácido acético que destruye a los eritrocitos, el azul de metileno o violeta de genciana permiten reconocer fácilmente el líquido y observar mejor a los glóbulos, a los que tiñe ligeramente.
Procedimiento
Paso 1. Llenar la pipeta con sangre a la marca de 0.5 limpiar la punta de la pipeta y aforar con líquido de Turk a la marca de 11.
Paso 2. Agitar la pipeta por dos minutos de forma manual o 1 minuto con un mezclador.
Paso 3. Eliminar las 4 primeras gotas.
Paso 4. Cargar la cámara de Neubauer colocando el cubrehemocitómetro de forma vertical sobre la cámara y tocar a este con la punta de la pipeta hasta llenar.
Paso 5. Dejar reposar por 2 minutos.
Paso 6. Colocar la cámara en el microscopio y localizar la cuadrícula
Cálculos
N x 20 x 10 = N x 50 4
N= número de leucocitos contados
20= factor de dilución
10= corrección x altura de la cámara
4= número de cuadrículas contadas
Valores de referencia:
5,000 a 10,000
Conteo Diferencial
El extendido de sangre periférica es muy importante ya que su utilidad consiste en poder observar y diferenciar la morfología celular principalmente leucocitos por lo que para la prueba se utiliza la tinción de Wright.
Fundamento
El colorante de Wright está compuesto de azul de metileno y eosina, dos colorantes que de acuerdo a sus características químicas tiñen a las células por su afinidad.
La tinción depende del pH, el azul de metileno es básico y tiñe componentes ácidos como el RNA, la eosina es ácida y tiñe componentes básicos, se utiliza un buffer de fosfatos para amortiguar el pH de la tinción.
Materiales:
Colorante de Wright
Buffer de Fosfatos pH 6.4
Portaobjetos limpios y sin grasa
Puentes de tinción
Sangre con anticoagulante
Procedimiento:
Paso 2. Secar al aire el frotis
Paso 3. Colocar el frotis sobre un puente de tinción y adicionar colorante de Wright
Paso 4. Esperar 3 minutos y adicionar solución buffer, soplar a la tinción para homogenizar ambos reactivos.
Paso 2. Secar al aire y observar con el objetivo de 100X con aceite de imersión
Neutrófilo banda
Neutrófilo segmentado
FROTIS SANGUINEO
Número total de Leucocitos
5.000 — 10.000 mm3
Neutrófilos 50-62 %
Segmentados 95 %
Baciliformes 1-2 x mm3 (5%)
Juveniles 0 x mm3
Mielocitos 0 x mm3
Mieloblastos 0 x mm3
Basófilos 0-1 %
Eosinófilos 0-3 %
Monocitos 3-7 %
Linfocitos 25-40 %
VALORES NORMALES
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