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Carlos Quesada-Gómez
Facultad de Microbiología
Universidad de Costa Rica
1
Tipos de prueba Ventajas Desventajas
Detección
de toxinas
Inmunoensayos
enzimáticos
(EIA)
• Detecta A o A/B
• Rápido
Baja sensibilidad
65-94%
Citotoxicidad en
cultivo celular
Especificidad y senbilidad para
C. difficile
70-100%
-Experiencia
--Cara
-24-48 horas
ID
bacteria
Glutamato
deshidrogenasa
Rápido y sensible
No específico
Requiere confirmación
de toxinas
PCR Rápidos y sensibles
Presencia de genes de toxinas
-Caro
Cultivo de
heces
Permite tener el aislamiento para
estudios posteriores
Vigilancia epidemiológica
-Experiencia
-Resultados 1 a 2
semanas
2
3
Shock con alcohol
Inocular en medio 2 -3días selectivo (CCFA)
Inocular en medio enriquecimiento (FAB) 7 días
4
•Proteosa peptona
•Fosfato disódico
•Cloruro de Sodio
•Císteína
•Fosfato monopotásico
•Sulfato de Magnesio
•Agar
•Fructosa
•Rojo Neutro
•cicloserina
•Cefoxitina
•Taurocolato (TCCFA)
Cicloserina-Cefoxitina-Fructuosa Agar (CCFA)
5
•Peptona proteasa
•Dihidrógeno fosfato de sodio
•Potasio dihidrógeno fosfato
•Sulfato de magnesio
•Cloruro de sodio
•Cisteína
•Fructosa
•Sangre
•Agar
•Norfloxacina
•Moxalactam
C. difficile-Moxalactam-Norfloxacina (CDMN)
6
•Patentado
•Casa comercial bioMeriuex
•Inoculación directa y crecimiento
en 24 horas
ChromID C. difficile agar
7
•Brucella Agar
•Sangre lisada de cabello
•Vitamina K
BAK
8
CCFA
BAK
Identificación presuntiva
Identificación definitiva
PSA
Pruebas moleculares (tipificación)
9
Tinción de Gram
Aglutinación en látex
Detección de proteína de
superficie (GDH)
Falsos positivos:
C. innocuum
C. bifermentas
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PCR convencional
Gen tpi – triosa fosfato isomerasa
exclusiva de C. difficile
tcdA, tcdB, tcdC
1 y 20: Marcadores de PM Controles 3 : Tox A-, B+ 4 Y 11: NAP1 10: C. difficile ATCC NAP2
tpi
tcdC del
tcdB
tcdA
cdtB
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Ensayo de neutralización en células También se puede realizar a la muestra de heces
13
CSLI (EUA) – EUCAST (Europea)
Puntos de corte para definir R, I, S
Cepa control – ATCC 700057
Clindamicina Levofloxacina
Metronidazol Piperacilina
Vancomicina Ticarcilina Moxifloxacina Tigeciclina
Las pruebas para C. difficile o sus toxinas se deben realizar solamente en heces diarreicas.
Prueba de pacientes asintomáticos no es clínicamente útil y no se recomienda. Solo para investigación epidemiológica.
Cultivo de heces con la confirmación de la toxigenicidad (“cultivo toxígeno") proporciona el estándar contra el cual otros resultados de las pruebas clínicas deben compararse.
Cohen SH, et al. Infect Control Hosp Epidemiol. 2010;31(5):431-455.
EIA es un buen método alternativo para el diagnóstico clínico rápido.
Combinar dos pruebas, puede ayudar a superar la baja sensibilidad de la prueba de la toxina.
Las pruebas de PCR convencional no es recomendado para las pruebas de rutina.
Se recomienda al menos una repetición de la prueba de detección de toxinas durante el mismo episodio de diarrea.
Cohen SH, et al. Infect Control Hosp Epidemiol. 2010;31(5):431-455.
Para uso clínico la prueba en dos etapas: EIA de
GDH + toxinas o citotoxicidad + cultivo
Estándar de oro es el cultivo de heces seguido
por ensayo de “cultivo toxigénico”
La toxina es muy inestable, se degrada a
temperatura ambiente, y no detectables en las 2-
4 horas (falsos negativos)
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Definición de caso
Clínico: presencia de diarrea y
Laboratorio: Un resultado de la prueba de heces positivo para
toxigénicas C. difficile o sus toxinas o colonoscópicos /
hallazgos histopatológicos que demuestran evidencia de
´pseudomembranas
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SHEA- ADSA, 2010
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