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Consejos para el mantenimiento de su LC
Agilent Crosslab
Zacarías León
Agilent-ASP, PhD
LC-U(H)PLC-MS-MS/MS
OBJETIVOS
Recomendaciones
generales para el
mantenimiento de su
LC:
Elementos más
importantes y
consejos
Conocer
- Su aplicación y su
método
- Su sistema LC
- Su muestra
Planificar
Mantenimiento
- Menor
(diario/semanal)
- Mayor
(6 meses o anual)
Nano LC
LC Capilar
LC AnalíticoLC Prep
Chip LC
¿Donde están las parte móviles?
¿Dónde puede obstruirse el flujo?
¿Dónde están los consumibles que
necesitan ser reemplazados
frecuentemente (PM)?
¿Dónde pueden aparecer fugas?
¿Qué puedo hacer para eliminar,
reducir o anticipar problemas
potenciales en el LC ?
CONOCER SU LC
Sistema 1100/1200 Infinity
Bomba
Automuestreador
Horno
Detector
Desgasificador
Bomba
CONOCER SU LC
Sistema 1290 Infinity
Bomba con
desgasificador
incorporado
Automuestreador
Compartimento de
columnas
Detector
Cabina de
solventes
CONFIGURACIÓN
DE UNA TORRE:
Esta configuración
optimiza
el paso de flujo y
garantiza un
volumen de
retardo mínimo.
La bomba Agilent
1290 Infinity se
debe instalar
siempre en la base
de la torre de
módulos.
CONOCER SU LC
Sistema 1290 Infinity
Bomba con
desgasificador
incorporado
Termostato
ALS
TCC (horno)
Detector
• CONFIGURACIÓN DE DOS
TORRES:
• En caso de que el termostato del
inyector automático esté
incorporado en el sistema, se
recomienda una configuración
de dos torres de módulos.
• De esta forma, los dos módulos
pesados (la bomba 1290 Infinity y
el termostato) se colocan en la
base de cada torre y se evita
crear una torre alta.
• Algunos usuarios prefieren la
menor altura de esta
distribución, incluso sin el
termostato del inyector
automático.
ALS
CONOCER SU LC
CONOCER FLUJOS,
MINIMIZAR OBSTRUCCIONES
FILTRAR, FILTRAR y FILTRAR!
FASE MÓVIL MUESTRA
EVITAR CRECIMIENTO
BACTERIANO EN BOTELLAS
EVITAR MAYOR DESGASTE DE
COMPONENTES DE LC (SELLOS,
ROTORES DE VÁLVULAS…)
PROPONER MEDIDAS QUE
ABARATEN LA PIEZA A
REEMPLAZAR
(P.E., FILTROS EN LÍNEA VS
COLUMNAS)
IMPORTANCIA DEL
MANTENIMIENTO PREVENTIVO
CONOCER FLUJOS,
MINIMIZAR OBSTRUCCIONES
FILTRAR, FILTRAR y FILTRAR!
FASE MÓVIL: DTES Y TAMPONES
RAZÓNDIÁMETROS INTERNOS DE CAPILARES DE CONEXIÓN
PARTÍCULAS Y TAMAÑO DE LOS POROS DE LAS COLUMNAS:
CADA VEZ MÁS PEQUEÑOS
FILTRAR ES MÁS IMPORTANTE PARA EVITAR OBSTRUCCIONES
EN VÁLVULAS, CAPILARES Y FILTROS
Color I.D.
Red 0.12 mm (0.005 inches)
Green 0.17 mm (0.007 inches)
Blue 0.25 mm (0.01 inches)
Orange 0.50 mm (0.02 inches)
PUREZA DE LOS DISOLVENTES:
INFLUENCIA EN LÍNEA BASE
CONOCER FLUJOS,
MINIMIZAR OBSTRUCCIONES
FILTRAR, FILTRAR y FILTRAR!
FASE MÓVIL: DTES Y TAMPONES
¿CÓMO? HPLC:
0.45 um ó
0.20 um
UPLC:
0.20 um
PN: 3150-0577 (250 mL)
5067-0215 (1.000 mL)
CONSECUENCIAS DE
NO FILTRAR
OBSTRUCCIÓN FILTROS ENTRADA DISOLVENTE:
DISMINUYE RENDIMIENTO DE LA BOMBA
TIEMPOS DE RETENCIÓN IRREPRODUCIBLES
SE EVITAN POSIBLES PICOS FANTASMAS EN DETECTOR
PERTURBACIONES PERIÓDICAS DE LA LÍNEA BASE
FLUJO INESTABLE, PUDIENDO LLEGAR A FALLAR LA BOMBA
(DESGASIFICADOR!)
CONOCER FLUJOS,
MINIMIZAR OBSTRUCCIONES
FILTRAR, FILTRAR y FILTRAR!
FASE MÓVIL: DTES Y TAMPONES
CONSIDERACIONES:
pHINTERVALO ACEPTADO EN MÓDULOS HPLC: 1-12.5
PRECAUCIONES
SELLOS ROTOR: TEFZEL O PEEK (1-14) MEJOR QUE VESPEL
DISOLVENTES CON pH < 2.3
NO DEBERÍA CONTENER ÁCIDOS QUE ATAQUEN EL ACERO
INOXIDABLE (P.E., HCl)
DISOLVENTES CON pH > 9.5
FILTROS ENTRADA DTE: ACERO INOX MEJOR QUE VIDRIO
CELDAS FLUJO: CUIDADO CON CUARZO, NO DEJAR TIEMPO
CONOCER FLUJOS,
MINIMIZAR OBSTRUCCIONES
FILTRAR, FILTRAR y FILTRAR!
FASE MÓVIL: DTES Y TAMPONES
CONSIDERACIONES:
ABSORBANCIAMÍNIMAS LONGITUDES DE ONDA DE TRABAJO
PRECAUCIONES
DISMINUYE SENSIBILIDAD Y RANGO DE LINEALIDAD
AL ACERCARSE A LA λ DE CUT-OFF
AUMENTA RUIDO Y DERIVA DE LA LÍNEA BASE EN GRADIENTE
Wavelength (nm)190 200 210 220 230 240 250 260
Absorbance (
AU
)
0
0.2
0.4
0.6
0.8 Espectros UV/VIS
Metanol y
Acetonitrilo
200 210 220 230 240 250 nmmin5 10 15 20 25
mAU
0
50
100
150
200
250
300
350
DAD1 A, Sig=210,10 Ref=360,100 (GRAD0801\NV--1402.D) DAD1 A, Sig=210,10 Ref=360,100 (GRAD0801\NV--0301.D)
Metanol
350mUA
Acetonitrilo
16mUA
Blanco gradiente a 1ml/min de
Orgánico /Agua 5 a 100% en 20 min.Columna 125 x 4mm 5μ C18
400mUA
CONOCER FLUJOS,
MINIMIZAR OBSTRUCCIONES
FILTRAR, FILTRAR y FILTRAR!
FASE MÓVIL: DTES Y TAMPONES
CONSIDERACIONES:
ABSORBANCIAMÍNIMAS LONGITUDES DE ONDA DE TRABAJO
PRECAUCIONES
AL AUMENTAR LA DIFERENCIA DE ABSORBANCIA ENTRE DTES
AUMENTA RUIDO DE LA MEZCLA OBTENIDA POR LA BOMBA
200 220 240 260 280 300 320 340nmWavelength (nm)200 220 240 260 280 300 320
Absorb
ance (
AU
)
0
0.2
0.4
0.6
0.8
n-Hexano
iso-OH
CH2Cl2
THF
Agua + 100ppm Azida Sódica
Acetona
1 UAEspectros UV/VIS
CONOCER FLUJOS,
MINIMIZAR OBSTRUCCIONES
FILTRAR, FILTRAR y FILTRAR!
MUESTRA
EVITAR MAYOR DESGASTE DE
COMPONENTES DE LC (SELLOS,
ROTORES DE VÁLVULAS…)
MEJORES RESULTADOS
ANALÍTICOS
¿CÓMO?
Los Viales UniPrep llevan
un filtro integrado de
0.20µm o 0.45µm de
porosidad, de materiales
como PTFE, PP, Nylon o
Celulosa Regenerada.
FILTROS DE JERINGA
VIALES MINI-UNIPREP
CONOCER FLUJOS,
MINIMIZAR OBSTRUCCIONES
FILTRAR, FILTRAR y FILTRAR!
MUESTRA
¿EN QUÉ MEDIO RECONSTITUIR O PREPARAR LA MUESTRA?
RELACIÓN ENTRE EL VOLUMEN DE INYECCIÓN Y EL PODER ELUOTRÓPICO DE DTE DE MUESTRA
50µl
560
mUA
5µl
25µl
50µl
5µl
50µl240
mUA
5µl
MUESTRA:
H2O: MeOH (50:50, v/v)
FASE MÓVIL:
H2O: MeOH (20:80, v/v)
TS
MUESTRA:
H2O: MeOH (0:100, v/v)
FASE MÓVIL:
H2O: MeOH (20:80, v/v)
HARDWARE
DESGASIFICADOR
HARDWARE
DESGASIFICADOR
CAUDAL
G1322A G1379B G4225A
BOMBA
MODO TRABAJO
VOLUMEN MUERTO
DETECTOR
>10 mL/min
QUAT
INTERMIT
12 mL
UV
>5 mL/min
BINARIA
(CAP, NANO)
CONTÍNUO
1 mL
UV/FLD/MS
HARDWARE
DESGASIFICADOR
EVITAR
OBSTRUCCIONES
FILTROS ENTRADA DE DISOLVENTE
LAVADOS O REEMPLAZOS DE FILTROS, CUIDADO CON TAMPONES
SUMERGIR EN HNO3 35%, 1 HORA
ENJUAGAR BIEN CON H2O
REINSTALAR, NO UTILIZAR SISTEMA NUNCA SIN FILTROS!
NO SONICAR!
HARDWARE
DESGASIFICADOR
EVITAR CRECIMIENTO
BACTERIANO
FILTROS ENTRADA DE DISOLVENTE
PRECAUCIONES
USO DE BOTELLAS ESTÉRILES (ÁMBAR)
EVITAR EXPOSICIÓN DIRECTA DE LUZ SOLAR (PAPEL Al, VENTANAS)
REEMPLAZAR FASE MÓVIL CADA 2 DÍAS SIN REFILTRAR
SI ES POSIBLE, AÑADIR 5% ORGÁNICO A FASE A O
0.1-1 mM AZIDA SÓDICA
HARDWARE
DESGASIFICADOR
G1322A
PURGA O CEBADO
JERINGA
EN INSTALACIÓN O SI ESTÁN TUBOS TOTALMENTE SECOS
ASPIRAR SOBRE 30 mL IPA
CAMBIO ENTRE DISOLVENTES INMISCIBLES
ASPIRAR SOBRE 15 ML DTE 1
ASPIRAR SOBRE 30 ML IPA (O BIEN H2O/IPA, PARA BUFFERS)
ASPIRAR SOBRE 15 ML DTE 2
BOMBEAR CON BOMBA DURANTE 10 MIN
HARDWARE
DESGASIFICADOR
G1322A
PURGA O CEBADO
BOMBA
AL ENCENDER EL EQUIPO AL DÍA SIGUIENTE
CAMBIO ENTRE DISOLVENTES MISCIBLES
BOMBEAR CON BOMBA 30 ML A 3-5 ML/MIN
BOMBEAR CON BOMBA DURANTE 10 MIN A FLUJO DE MÉTODO,
CON COLUMNA
HARDWARE
DESGASIFICADOR
G1322A
PURGA O CEBADO
BOMBA
AL ENCENDER EL EQUIPO AL DÍA SIGUIENTE
CAMBIO ENTRE DISOLVENTES MISCIBLES
BOMBEAR CON BOMBA 30 ML A 3-5 ML/MIN
BOMBEAR CON BOMBA DURANTE 10 MIN A FLUJO DE MÉTODO,
CON COLUMNA
G1379B O G4225A BOMBA, A FLUJO MODERADO
JERINGA, CUANDO FALLE LA BOMBA, A BAJA VELOCIDAD
HARDWARE
DESGASIFICADOR
MANTENIMIENTO
LIMPIAR LÍNEAS CON IPA (CON H2O E IPA, CASO DE BUFFERS)
COMPROBAR APARICIÓN DE BURBUJAS EN LÍNEAS DE SALIDA
VERIFICAR LA COMPATIBILIDAD DE DISOLVENTES
CANALES NO UTILIZADOS: IPA O MeOH
PROBLEMAS MÁS HABITUALES
FLUCTUACIONES DE PRESIÓN, DESGASIFICADOR DEFECTUOSO?
RUIDO EN LÍNEA BASE, DESGASIFICADOR DEFECTUOSO?
HARDWARE
BOMBA
Autosampler
Pump
Bomba
Automuestreador
Detector UV
HARDWARE
BOMBA
ISOCRÁTICACUATERNARI
ABINARIA
HARDWARE
BOMBA
CABEZAL: COMPONENTES PPALES
Bloque del émbolo
Cabezal de la Bomba
´Válvula de Bola
De salida
Válvula de Purga
Fritay
sello
Válvula de Entrada Activa
HARDWARE
BOMBA
MANTENIMIENTO
CABEZAL
QUITAR
DESMONTAR
PISTONES
SELLOS
JUNTAS
LIMPIAR CON H2O, QUE NO ESTÉN RALLADOS!
REEMPLAZAR
LIMPIAR CON H2O
MONTAR
AJUSTE SELLOS
ADEMÁS DE PM, CAMBIAR SI:
- FLUCTUACIÓN DE PRESIÓN INESTABLE
- TPOS RET NO COHERENTES
- FUGAS EN PARTE INFERIOR
HARDWARE
BOMBA
MANTENIMIENTO
VÁLVULA PURGA
QUITAR
DESMONTARFILTRO
PTFEREEMPLAZAR
REEMPLAZAR
PTFE frit.
Gold Seal.
Plastic cap.
MONTAR
SELLO
HARDWARE
BOMBA
MANTENIMIENTO
VÁLVULA
ENTRADA, IAV
QUITAR CABLE
DESMONTAR
CARTUCHO
MONTAR
Cartridge.
CONECTAR
CABLE
SONICAR CON H2O
HARDWARE
BOMBA
MANTENIMIENTO
VÁLVULA SALIDA,
OBV
QUITAR
DESMONTAR
OBV SONICAR CON H2O
Valve housing.
Gold Seal.
Plastic cap.
MONTARSELLO REEMPLAZAR
HARDWARE
BOMBA
MANTENIMIENTO
SENSOR FUGAS
LIMPIAR
ASEGURAR
POSICIÓN
TUBO DESECHO
PRESIÓN
TESTS
FUGAS
HARDWARE
BOMBA
LAVADO DE SELLOS
CUÁNDO SE RECOMIENDA?
Opción lavado
de sellos
Solvente
de lavado
Solvente
de lavado
Bomba
peristáltica
Cabezal de la bomba
Solvente de lavado
SI SE UTILIZAN TAMPONES O DSONES SALINAS > O.1M
EVITA DESGASTE EXCESIVO DE PISTONES Y SELLOS
H2O:IPA, (90:10, V/V)
HARDWARE
BOMBA
PROBLEMAS HABITUALES
HARDWARE
INYECTOR
Autosampler
Pump
Bomba
Automuestreador
Detector UV
HARDWARE
INYECTOR
G1329A, viales
Tarjeta ASM
Fuente de
alimentación Válv.de Inyección
Asiento de la Aguja
Aguja
Pistones(Metering device)
Transportador de la muestra
HARDWARE
INYECTOR
Toma de Muestra
Válvula en Posición Bypass
Inyección y Analisis
Válvula en posición Mainpass
PRINCIPIO DE OPERACIÓN
FLUJO CONTÍNUO,
MINIMIZA CARRY-OVER
LAVADO PARTE EXTERNA
AGUJA
HARDWARE
MANTENIMIENTO
INYECTOR
Válvula de
inyección
PistonesAguja/asiento de
la aguja
Gripper (finger caps)
HARDWARE
MANTENIMIENTO
VÁLVULA
INYECCIÓN
QUITAR
DESMONTARSELLO
ROTORREEMPLAZAR
MONTAR
INYECTOR
7
65
32
1
41. Tornillos del Estator
2. Cabezal del Estator
3. Cara del Estator
4. Arandela del Estator
5. Sello del Rotor (Vespel or Tefzel )
6. Sello de Aislamiento
7. Cuerpo de la Válvula
ADEMÁS DE PM, CAMBIAR SI:
- PRESENCIA DE PICOS DOBLES
- DISMINUYE LA PRECISIÓN DEL VOL INYECC
- GOTA PERMANECE EN AGUJA PRE-
INYECTAR
HARDWARE
MANTENIMIENTO
AGUJA Y ASIENTO
DE AGUJA
PREPARAR SW
INYECTOR
Lab Advisor:Instant Pilot:
HARDWARE
MANTENIMIENTO
AGUJA
INYECTOR
1. SW:
SELECCIONAR
NEEDLE DOWN
2.DESCONECTA
EL LOOP DE
INYECCIÓN
3.DESCONECTA
LA AGUJA A
CAMBIAR
4.INSTALAR LA
NUEVA AGUJA
HARDWARE
MANTENIMIENTO
ASIENTO DE
AGUJA
INYECTOR
ADEMÁS DE PM, CAMBIAR SI:
- AGUJA DOBLADA O CON REBABAS
- ASIENTO CON EVIDENCIA DE FUGAS O
BLOQUEOS (SALES)
1.DESCONECTA
PUERTO 5 DE
VÁLV INYECC
2.SACAR EL
ASIENTO
3.INSERTAR EL
NUEVO ASIENTO
AGUJA Y ASIENTO
DE AGUJA
HARDWARE
MANTENIMIENTO
SELLO METERING
DEVICE
INYECTOR
1. Tornillos
2. Pistón (émbolo)
3. Anillo del soporte del sello
4. Sello
5. Cuerpo del cabezal
HARDWARE
MANTENIMIENTO
INYECTOR
SENSOR FUGAS
LIMPIAR
ASEGURAR
POSICIÓN
TUBO DESECHO
LIMPIAR CON IPA
RODILLO
TRANSPORTE
PRESIÓN
TESTS
HARDWARE
INYECTOR
PROBLEMAS MÁS HABITUALES
SOBREPRESIÓN, VÁLVULA O ASIENTO DEFECTUOSOS?
IRREPRODUCIBILIDAD ÁREA/ALTURA PICOS,
VÁLVULA O ASIENTO DEFECTUOSOS?
HARDWARE
FLUJO DE LA FASE MÓVIL:
POSIBLES OBSTRUCCIONES
FILTROS ENTRADA DISOLVENTE EN BOTELLA
SOBREPRESIÓN?
(>10 BAR, @5ML/MIN H2O)BOMBA: AIV, OBV, VÁLVULA PURGA
FILTROS EN LÍNEA
PRE-COLUMNA
COLUMNA
CAPAS NEGRAS
EN FRITA
SELECCIONAR LA FRITA CORRECTA
(2 um VS 3-5 um COLUMNA; 0.5 um VS < 2um)
PREFERIBLE CAMBIAR FILTROS EN LÍNEA O PRECOLUMNAS QUE COLUMNAS!!!
IMPORTANCIA DE LOS PM
HARDWARE
DETECTOR
Autosampler
Pump
Bomba
Automuestrador
Detector UV
HARDWARE
DETECTOR
Lámpara de DeuterioCelda del Detector
Lámpara de
Tungsteno
DAD O MWL,
1200
HARDWARE
MANTENIMIENTO
DETECTOR
SENSOR FUGAS
LIMPIAR
ASEGURAR
POSICIÓN
TUBO DESECHO
INTENSIDAD
TESTS
FILTRO
ÓXIDO HOLMIO
CELDA? VENTANAS?
LÁMPARA?
MOTOR FILTRO?
EXACTITUD λ CALIBRACIÓN λ
HARDWARE
LÁMPARAS
DETECTOR
DURACIÓN
DEUTERIO LARGA
DURACIÓN
> 2000 H
REEMPLAZAR
1.SACAR
TORNILLOS DE
SUJECIÓN
2.INSTALAR
LÁMPARA
NUEVA
3. REALIZAR TESTS:
- CALIBRACIÓN λ
- INTENSIDAD (REFERENCIA)
HARDWARE
CELDAS FLUJO
DETECTOR
CUIDADOS
EVITAR USO DSONES pH > 9.5 ATACAN AL CUARZO
EVITAR CRISTALIZACIÓN TAMPONES BLOQUEO O DAÑO
EVITAR DEJAR EN DTES ACUOSOS CRECIM BACTERIANO
RESPETAR LÍMITES PRESIÓNCUIDADO CON
VÁLVULAS…
HARDWARE
DETECTOR
PROBLEMAS MÁS HABITUALES
HARDWARE
LC
RESUMEN MANTENIMIENTO
CAMBIA
R
BOMBA INYECTOR COLCOM
TESTS
CHECK
FILTRO PTFE,
SELLO PURGA
SELLOS
BOMBA
SELLO OBV
PRESIÓN,
FUGAS
CARTUCHO
AIV
AGUJA
ASIENTO
AGUJA
SELLO ROTOR
PRESIÓN
DETECTOR
SELLO ROTOR
PRESIÓN,
TERMOSTATO
LÁMPARA
VENTANAS
INTENSIDAD,
ÓXIDO HOLM...
CELDA FLUJO
ENTRADA DTE
FILTRO
(LIMPIAR)
PISTONES
ARANDELAS
SUJECIÓN
SOFTWARE
SISTEMA DE DATOS
MANTENIMIENTO OPENLAB
DESFRAGMENTAR DISCO DURO
USO ANTIVIRUS
USO UTILIDAD DISK-CLEANUP (BORRAR ARCHIVOS TEMPORALES)
REALIZAR BACK-UP (DATOS, MÉTODOS, SECUENCIAS…)
COPIA PARÁMETROS DE CONFIG EDITOR, NÚMEROS DE LICENCIA..
RECURSOS AGILENT
Hay muchas fuentes disponibles de información, incluyendo:
•Manual de Referencia– incluido con cada módulo, .pdf’s en la web
•Guía de Mantenimiento del 1200 LC – incluido con el sistema, .pdf en la web,
•Videos de Mantenimiento 1200 LC– disponibles en la web,
•Lista de comprobación del 1200 LC PM (Mantenimiento Preventivo) – proporcionadoen el momento del PM
•Cursos de Mantenimiento y Resolución de Problemas Agilent 1100/1200 Series HPLC (H8969A, 3 días), registro en la web
•Software de diagnóstico 1200, con Early Maintenance Feedback (EMF)
•Su Ingeniero de Mantenimiento Local
•www. agilent.com/chem
• Centro de atención al cliente, 901-116890 ó customercare_spain@agilent.com
Gracias!
Soporte Técnico de Agilent: 901- 116890
www.agilent.com/chem
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