Determinación de Fosfatasa Alcalina

Transferencia defosfato

Hidrolisis

FOSFATASA ALCALINA

Son un grupo de enzimas hidrolasas de baja especificidadHidrolizan esteres fosfatos inorgánicos muy diversosAtacan monoesteres del acido orto fosfóricoActividad óptima cerca de pH 9.8Se desconoce sustrato natural: Fosfato de etanolamina?Iones Mg++ y Mn++ son activadoresActividad In vitro depende de los buffersPresente en casi todos los organos del cuerpo

orto-fosfórico-monoéster hidrolasa.

La fracción hepática es termoestable, en cambio, la fracción que proviene del hueso, sistema reticuloendotelial y vesicular, es termolábil. La actividad sérica de fosfatasa alcalina ósea en condiciones normales, alcanza su mayor actividad en los niños en edad de crecimiento (llegando a triplicar los niveles del adulto) debido a que esta isoenzima se localiza en los osteoblastos (relacionados con la calcificación y formación de estructuras óseas).

Se produce un aumento al final del primer trimestre del embarazo, a expensas de la isoenzima placentaria, que en este período alcanza niveles máximos (aproximadamente el doble de los valores normales). 

Tiene dos aplicaciones clínicas muy útiles: en enfermedad obstructiva hepática y en enfermedad metabólica ósea, asociada a incremento de la actividad osteoblástica. 

NombreBodansky

(Shinowara)Buffer Barbital

Sustrato a-Glicerol-P

pH 9.3Producto FósforoT° 37°Tiempo 60’Método Dos puntos

Fiske-SubbarowUnidades U Bodansky

Expresion mg P/hora

El complejo formado de fosfomolibdato de amonio absorbe luz a 340 nm

Nombre King-Amstrong Kind-King Bessey, Lowry y Brock

Buffer Veronal sódico Carbonato Glicina

SustratoFenilfosfato

disodicoFenilfosfato

disodicop-Nitrofenilfosfato

(p-NPP)

pH 9 9.5 9.8-10.1

Producto Fenol Fenol p- Nitrofenol (p-NP)

T° 37° 37°Tiempo 30’ 15’ 60’

Método Punto final (St) Punto final (St) Punto final (Curva)

R. Folin-C 4-amino-antipirina NaOH

Unidades U K-A U U

Expresion1 mg

Fenol/30’1 mg

Fenol/15’ 1mmol PNP/60’

NombreBowers-McComb

W Cinetico

WPunto final V

Buffer AMP DEA AMP Tris

Sustrato p-NPP p-NPP Fenilfosfato disodico p-NPP

pH 10.5 9.8 10 10.1

Producto p-NP p-NP Fenol p-NP

T° 37° 25,30 ó 37°C 37° 30°Tiempo 4’ 3’ 10’ 1’Método Cinético Cinético Punto final (St) Cinético

e p-NP e p-NP

4-amino-antipirina + ferricianuro

e p-NP

Unidades U/L U/L U/L U/L

eee

(Forma quinoide en medio alcalino)

Sustrato: p-NPP

a) Cinéticob) Punto final

NaOH

Leer a (l 405)

(amarillo)

SUSTRATO: Fenil fosfato

Bl St MPSustrato (mL) 0,2 0,2 0,2 Preincubar a 37 oC x 5'Suero (mL) 0,02St (mL) 0,02

Mezclar e incubar exactamente 10’R. color (mL) 1 1 1

Retirar los tubos del BM

Leer a 520 ƞm

Protocolo de la práctica