Exposicion Seminario KJ

UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN ANTONIO ABAD DEL CUSCO

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

CARRERA PROFESIONAL DE BIOLOGÍA

Evaluación de toxicidad en Vicia faba, L. inducido por Cafeína, Dicromato de

potasio y Metomilo

Presentado por:

Karen Jessica Jordán Quispe Asesora:

Mgt. Griselda Muñiz Duran

2013

INTRODUCCION

TOXICIDAD

AGENTE

EFECTO

ORGANISMO De Prueba

DOSIS Y TIEMPO

Vicia faba, L

FISICOS

QUIMICOS

ESTRUCTURAL

GENETICO

Evidentes daños causados en los

ecosistemas acuáticos y terrestres

La economía

El ambiente

Y la salud pública

Importante conocer el

efecto toxico de las sustancias

El uso creciente y

mala manipulación de sustancias

químicas

JUSTIFICACIÓN

HIPÓTESIS

La Cafeína, el Dicromato de potasio y el Metomilo causan efectos tóxicos en los meristemos radiculares de V. faba, L.

OBJETIVOS

OBJETIVO GENERAL:

Evaluar la toxicidad en Vicia faba L. inducida por Cafeína, Dicromato de potasio y Metomilo

OBJETIVOS ESPECIFICOS:

˗ Determinar el efecto citotóxico de Cafeína, Dicromato de potasio y Metomilo en la germinación de V. faba.

˗ Medir el efecto genotóxico de Cafeína, Dicromato de potasio y Metomilo en meristemos de V. faba.

GENERALIDADES

TOXICOLOGIA:

Ciencia que estudia el mecanismos de acción y los efectos provocados en organismos biológicos por un tóxico hasta la elaboración e interpretación de pruebas. (Silbergeld, 2001).

Tiempo de exposición

Dosis administrada

Resultados favorables

TIEMPO DE EXPOSICION

TOXICIDAD DOSIS EFECTO

AGUDA UNICA A los 14 días por lo general, sirve

para determinar la Dosis letal media (DL50)

CRONICAConstante,

relativamente baja A largo plazo

(Bello y López, 2001)

RELACION DOSIS-EFECTO y DOSIS-RESPUESTA

%G

erm

inac

ión

Sem

illa

s%

Ger

min

ació

n

REPRESENTACION SEMILOGARITMICA DE LA RESPUESTA ACUMULADA

GENOTOXICIDAD

ADN

Error

- Perdidas cromosómicas

- Reparto no equitativo

El material genético excluido

MICRONUCLEOS

SUSTANCIAS QUIMICAS TOXICAS

De uso industrial

DICROMATO DE POTASIO CAFEÍNA

De uso agrícola

METOMILO

Bioensayo:

Efecto de sustancia química

OrganismoBioensayo

Vicia faba, L

- Presenta cromosomas de buen tamaño.

- Es de fácil manejo y relativamente económico .

- Células indiferenciadas.

- Aplicado por entidades de protección ambiental para la evaluación de muestras ambientales y compuestos puros. (Díaz et al., 2004)

MATERIALES Y MÉTODOSAREA DE ESTUDIO:

Laboratorio de Biología Molecular ( C-264) de la Facultad de Ciencias Biológicas–UNSAAC.

Material biológico:

- Semillas de V. faba ( habas)

Material de laboratorio:

- Matraces de 500 ml

- Vasos de precipitado

- Pipetas serológicas de 10 ml

- Probetas de 50 y 100ml

- Lunas de reloj

- Pinzas

- Placas Petri de 250mm

- Papel toalla

- Varilla de vidrio

- Papel aluminio.

- Bisturí

- Parafilm

- Porta y cubre objetos.

Equipos:

- Balanza analítica

- Cámara de bioseguridad

- Vernier

- Microscopio óptico compuesto.

- Mechero.

- Cámara fotográfica.

Reactivos:

- Hipoclorito de sodio al 5%

- Orceína acética clorhídrica al 2%

- Aceite de inmersión

- Metomil 90 PS

- Cafeína pura anhidra

- Dicromato de Potasio para análisis

Métodos:

Semillas de Vicia faba

Toxicidad

Prueba piloto, Germinación

Germinación y elongación radicular

Genotoxicidad

Micronúcleos

Análisis de datos

RESULTADOS Y DISCUSIÓN

• Evaluación de la prueba piloto:

EFECTO TOXICO DE CAFEÍNA, DICROMATO DE POTASIO Y METOMILO EN LA GERMINACION Y CRECIMIENTO RADICULAR EN V. faba

Tratamiento NGerminación

SI % NO %

Blanco 20 20 100 0 0

Cafeína  

500 20 20 100 0 0

1 000 20 18 90 2 10

2 000 20 14 70 6 30

4 000 20 1 5 19 95

8 000 20 0 0 20 100

Dicromato de Potasio

500 20 20 100 0 0

1 000 20 20 95 1 5

2 000 20 20 95 1 5

4 000 20 7 35 13 65

8 000 20 0 0 20 100

Metomilo  

500 20 20 100 0 0

1 000 20 19 95 1 5

2 000 20 19 95 1 5

4 000 20 16 80 4 20

8 000 20 3 15 17 85

Cuadro N°2: Efecto toxico de Cafeína, Dicromato de potasio y Metomilo en la germinación de V. faba

DETERMINACION DE LA CL50 Y ANALISIS PROBIT

Tóxico LC/EC 50

Cafeína 2 172.787

Dicromato de potasio

3 286.976

Metomilo 5 174.568

Cuadro N° 4: Determinación dosis-respuesta de Cafeína en V. faba

Concentración ppm

Concentración Log 10

IG %Unidades

Probit

500 2.70 0 01000 3.00 10 3.722000 3.30 30 4.484000 3.60 95 6.648000 3.90 100 9.09

Cuadro N° 5: Determinación dosis-respuesta de Metomilo en V. faba

Concentración ppm Concentración

Log 10IG % Unidades

Probit500 2.70 0 0

1000 3.00 5 3.36

2000 3.30 5 3.36

4000 3.60 20 4.16

8000 3.90 85 6.04

Cuadro N° 6: Determinación dosis-respuesta de Dicromato de potasio en V. faba

Concentración ppm

Concentración Log 10

IG %Unidades

Probit

500 2.70 0 0

1000 3.00 5 3.36

2000 3.30 5 3.36

4000 3.60 65 5.39

8000 3.90 100 9.09

Cuadro N° 7: Determinación dosis-respuesta de Cafeína, Dicromato de potasio y Metomilo en V. faba

Concentración ppmConcentración

Log 10

Unidades Probit

Dicromato de Potasio Metomilo Cafeína

500 3 0 0 0

1000 3 3.36 3.36 3.36

2000 3 3.36 3.36 4.48

4000 4 5.39 4.16 6.64

8000 4 9.09 6.04 9.09

Evaluación del efecto citotoxico de Cafeína, Dicromato de potasio y Metomilo en la elongación radicular de V. faba

N° ±ds % %ICR

Blanco 20 58.55±19.07 100.00 0.00

Cafeína  

500 20 24.14±4.95 41.23 58.77

1 000 20 18.92±5.28 32.31 67.69

2 000 20 13.28±5.89 22.68 77.32

4 000 20 0.62±2.04 1.06 98.94

8 000 20 0.00±0.00 0.00 100.00

Dicromato de Potasio

500 20 37.14±11.85 63.43 36.57

1 000 20 35.94±9.94 61.38 38.62

2 000 20 26.9±8.73 45.94 54.06

4 000 20 8.17±8.13 13.95 86.05

8 000 20 0.00±0.00 0.00 100.00

Metomilo  

500 20 43.81±11.52 74.82 25.18

1 000 20 36.28±9.00 61.96 38.04

2 000 20 27.30±6.35 46.63 53.37

4 000 20 9.57±5.21 16.35 83.65

8 000 20 0.71±1.84 1.21 98.79

Cuadro N°8: Porcentaje de Inhibición de Crecimiento radicular de Cafeína, Dicromato de potasio y Metomilo en V. faba

EVALUACION DEL EFECTO GENOTOXICO MEDIANTE LA PRUEBA DE MICRONUCLEOS

Concentraciones MN/200 %MN %MNCafeína  

1 0007 3.5

35 2.5

2 00012 6

5.259 4.5

4 00021 10.5

9.7518 9

8 0000 0

00 0

Dicromato de potasio

1 0006 3

39 4.5

2 00010 5

4.257 3.5

4 00018 9

8.516 8

8 0000 0

00 0

Metomilo

1 0004 2

2.56 3

2 0009 4.5

47 3.5

4 0009 4.5

4.7510 5

8 0000 0

00 0

Cuadro N°9: Presencia y porcentaje de micronúcleos en V. faba sometida a 4 concentraciones de Cafeína, Dicromato de potasio y Metomilo

• MUESTRA CONTROL (1 000X)

Cafeína 1 000 ppm

Dicromato de potasio 1 000 ppm

Cafeína 4 000 ppm

Metomilo 1 000 ppm

Dicromato de potasio 4 000 ppm Metomilo 4 000 ppm

Cafeína 2 000 ppm Dicromato de potasio a 8 000ppm

CONCLUSIONES

I. La Cafeína, el Dicromato de potasio y el Metomilo tienen efecto toxico en Vicia faba, L.

II. La dosis de Cafeína y Dicromato de potasio que presentan efecto toxico en la germinación de V. faba, L. a un 100% es de 8 000 ppm, mientras que para Metomilo a esta misma concentración se obtuvo un 85%.

III. El efecto citotoxico de Cafeína, Dicromato de potasio y Metomilo en el crecimiento radicular de V. faba, L se encuentra a partir de 500ppm y esta efecto se incrementa conforme aumenta la concentración alcanzando un 98, 79% (Metomilo) y 100% (Cafeína y Dicromato de potasio).

CONCLUSIONES

IV. La CL50 para Cafeína es de 2 172.787ppm, para Dicromato de potasio 3 286.976ppm y para Metomilo 5 174. 568ppm. Estableciendo con esto que Cafeína es más toxico que Dicromato de potasio y Dicromato de potasio más toxico que Metomilo

V. La cafeína, Dicromato de potasio y Metomilo tienen efecto genotóxico en V. faba L. Siendo 9,75% a 4 000 ppm el mayor porcentaje de micronúcleos observados en tratamiento con cafeína. Mientras que para el tratamiento con Dicromato de potasio se obtuvo un 8,5% y para el tratamiento con Metomilo el mayor porcentaje fue de 4,75% a esta misma concentración.

SUGERENCIAS 1. Promover los mismos ensayos con otros organismos de

prueba utilizando, Cafeína, Dicromato de potasio y Metomilo, para validar el ensayo de Vicia faba L. como biomarcador.

2. Realizar evaluaciones del efecto toxico a nivel citogenético mediante la determinación de Índice Mitótico (IM), Cromatidas hermanas, puentes cromosómicos.

Gracias…