View
3
Download
0
Category
Preview:
Citation preview
Prof. Dr. José Raúl Oubiña
Cátedra I de Microbiología, Parasitología e Inmunología
Asignatura: Microbiología y Parasitología II
FIEBRE HEMORRÁGICA ARGENTINA
OBJETIVOS
• Recapitular las bases esenciales de la patogénesis de
la enfermedad.
• Adquirir destrezas indispensables para el diagnóstico
etiológico.
• Deducir las implicancias de la epidemiología de la
virosis.
• Comprender las bases de la profilaxis activa y el
tratamiento.
Fiebre hemorrágica argentina
• Historia
• Manifestaciones clínicas
• El virus Junín: estructura y relaciones filogenéticas
• Patogénesis de la infección
• Diagnóstico
• Epidemiología
• Profilaxis y tratamiento
En 1943 comienzan a registrarse en el
Htal. “Julio de Vedia” de 9 de Julio casos
de una extraña gripe con muy alta fiebre
asociada a un 60 % de mortalidad en
pacientes de áreas rurales aledañas…
Rodolfo Arribalzaga describe el cuadro
clínico completo en 1955…
“Problema de Salud Pública” en 1958…
JRO - Cátedra I de Microbiología, Parasitología e Inmunología
Gripón
o
Mal de los rastrojos
o
Mal de O´Higgins
o
Fiebre hemorrágica argentina
JRO - Cátedra I de Microbiología, Parasitología e InmunologíaFuente: Libonatti – Tchoulamjan. Tratado de Infectología
Maizal
JRO - Cátedra I de Microbiología, Parasitología e Inmunología
Ratón maicero o
Calomys musculinus
Akodon azarae
JRO - Cátedra I de Microbiología, Parasitología e Inmunología
Armando Parodi
Profesor Titular
Cátedra de
Microbiología
Descubridor del
Virus Junín en 1958
JRO - Cátedra I de Microbiología, Parasitología e Inmunología
Virus Junín: estructura
Grant et al. Viruses 4:.2317-39, 2012JRO - Cátedra I de Microbiología, Parasitología e Inmunología
Fiebre hemorrágica argentina
Historia
• Manifestaciones clínicas
• El virus Junín: estructura y relaciones filogenéticas
• Patogénesis de la infección
• Diagnóstico
• Epidemiología
• Profilaxis y tratamiento
15-20 % de mortalidad
si no se administra
tratamientoJRO - Cátedra I de Microbiología, Parasitología e Inmunología
Fuente: Libonatti – Tchoulamjan. Tratado de Infectología
JRO - Cátedra I de Microbiología, Parasitología e Inmunología
Fuente: Libonatti – Tchoulamjan. Tratado de Infectología
JRO - Cátedra I de Microbiología, Parasitología e Inmunología
Fuente: Libonatti – Tchoulamjan. Tratado de Infectología
JRO - Cátedra I de Microbiología, Parasitología e Inmunología
JRO - Cátedra I de Microbiología, Parasitología e Inmunología
Fiebre hemorrágica argentina
Historia
Manifestaciones clínicas
• El virus Junín: estructura y relaciones filogenéticas
• Patogénesis de la infección
• Diagnóstico
• Epidemiología
• Profilaxis y tratamiento
Virus Junín: estructura
Grant et al. Viruses 4: 2317-39, 2012
GP 1
GP 2
N
RNA
N
A
L
Z
RNA ambisentido
Espícula
Ribosoma
RNP
RNP
N
De “Virología Médica”
Carballal - Oubiña, 2015.JRO - Cátedra I de Microbiología, Parasitología e Inmunología
Z: proteína de matriz:
favorece brotación
L: RNA polimerasa
y nucleasa
N: señuelo para caspasa 3,
Inhibe apoptosis
Actividad de nucleasa
Distribución de arenavirus
en el mundo
Viejo
mundo
Nuevo
mundo
Virus de reptiles
Virus de peces
Clado C
Clado B
Clado A
Clado D (tentativo)
• * Patógenos para el humano
• # Pueden enfermar animales Fuente: Brisse ME, Ly H. Front Immunol Mar 13;10:372.2019.
Virus de mamíferos
Fiebre hemorrágica argentina
Historia
Manifestaciones clínicas
El virus Junín: estructura y relaciones filogenéticas
• Patogénesis de la infección
• Diagnóstico
• Epidemiología
• Profilaxis y tratamiento
JRO - Cátedra I de Microbiología, Parasitología e Inmunología
Fuente: Libonatti – Tchoulamjan. Tratado de Infectología
JRO - Cátedra I de Microbiología, Parasitología e Inmunología
Fuente: Libonatti – Tchoulamjan. Tratado de Infectología
JRO - Cátedra I de Microbiología, Parasitología e Inmunología
Replicación inicial en pulmones, y diseminación a tejido hemopoyético, hígado y riñón.
Afectación del RER con expresión de Ag virales.
Afectación grave de la hematopoyesis (necrosis linfoide).
Hemorragias: por alteración cuantitativa y funcional de plaquetas y alteraciones de la hemostasia
(↓ Factor VIII, IX y plasminógeno). Compromiso endotelial: ↑ ICAM y VCAM y mediador vaso activo
NO, ↑ factor von Willebrand y ↓ liberación de prostaglandina I 2 (PGI2) y DAF (decoy accelerating
factor)
Compromiso neurológico: inmunocomplejos en endotelio capilar .
↑ TNF-α e IFN –α . ↓ de Linfocitos T CD4+: inmunodepresión transitoria.
Sobreinfecciones bacterianas. JRO - Cátedra I de Microbiología, Parasitología e Inmunología
JRO - Cátedra I de Microbiología, Parasitología e Inmunología
Cofactores
para ingresar:
DC-SIGN / L-SIGN,
Voltage-gated calcium channels,
y Dyn2/EPS15.
Tropismo del virus Junín
en el humanoCélulas dendríticas
Macrófagos
LMN de sangre periférica:
Monocitos: Sí
Linfocitos: No
Megacariocitos
Células parenquimatosas: pulmón,
riñón, hígado, SNC
Carballal G et al, J Infect Dis, 143:7-14.1981.
Cuadro hemorrágico en el
cobayo inoculado con
virus Junín
Carballal G et al, J Infect Dis, 143:7-14.1981.
Carballal G et al, J Infect Dis, 143:7-14.1981.
El virus Junín induce la autofagia para
promover su multiplicación
*Pérez Vidakovis MLA et al, s. PLoS ONE
14(6): e0218730, 2019.
Roldan JS et al. J Virol 93: e02307-18, 2019.
Membrana de
aislamiento (IM)
Autofagosoma (AP)Lisosoma
Autolisosoma
(AL)
Virus Junín
FusiónFormación y terminación
Inducción
Degradación
Microscopía confocal.
El virus Junín (verde) induce la expresión de la
proteína LC3-B (rojo) –marcadora de la formación de autofagosomas-,
la que colocaliza (amarillo) con antígenos de la proteína N del virus*.
Co
ntr
ol
no
in
fecta
do
Imágenes
fusionadas
Western blot
Una visión global…
Inducción de IFN Vía de señalización del IFN
Meyer B & Ly H.
J Virol 90:3810 –3818, 2016.
Meyer B & Ly H.
J Virol 90:3810 –3818, 2016.
Rol de las citoquinas en la patogénesis
Luego de la inducción inicial de IFN,
¡hay un cambio hacia una respuesta
proinflamatoria!
↑ ↑ ↑ IFN-alfa
↑ ↑ ↑ TNF-alfa↑ IL-6, IL-8 e IL-10
Fiebre de Lassa (África)
Fiebre hemorrágica argentina
Fuente: Brisse ME, Ly H. Front Immunol Mar 13;10:372, 2019.
Fiebre hemorrágica argentina
Historia
Manifestaciones clínicas
El virus Junín: estructura y relaciones filogenéticas
Patogénesis de la infección
• Diagnóstico
• Epidemiología
• Profilaxis y tratamiento
JRO - Cátedra I de Microbiología, Parasitología e Inmunología
Enfermedad clínica
Meses
Infección Incubación
AñosDías10 20 300
1ra. muestra
2da. muestra
Conversión serológica
Viremia
Anticuerpos anti-Junín o anti-N (IFI / ELISA)
Anticuerpos anti-Junín (Nt)
RT-PCRAislamientoELISA para Ag N
De “Virología Médica”
Carballal - Oubiña, 2015.
JRO - Cátedra I de Microbiología, Parasitología e Inmunología
Actualmente reemplazados por la detección de RNA viral mediante RT-PCR
o de la proteína N mediante ELISA.
JRO - Cátedra I de Microbiología, Parasitología e Inmunología
inmunofluoresencia
Prueba de ELISA (Enzyme linked-immunosorbent assay)
Para detectar la proteína N del virus Junín
Lozano et al, J Clin Microbiol 33:1327-1332,1995.
Detección del RNA del virus Junín
mediante amplificación por RT-PCR
Lozano et al, J Clin Microbiol 33:1327-1332,1995.
Los productos de la RT-PCR obtenidos con cebadores específicos para
virus Junín, fueron resueltos mediante electroforesis en gel de agarosa al 2%.
M: marcador de tamaño molecular (indicado en pb a la izquierda).
1. Stock de virus Junín preparado en cerebro de ratón lactante
a partir de un paciente infectado
2. Stock de virus Junín preparado en modo análogo a 1, a partir de
otro paciente infectado.
3. Sobrenadante de células BHK infectadas con el stock mostrado en 1.
4. Sobrenadante de células BHK infectadas con el stock mostrado en 2.
5. Sobrenadante de células BHK no infectadas.
6. Sedimento de células BHK infectadas con el stock mostrado en 1.
7. Sedimento de células BHK infectadas con el stock mostrado en 2.
8. Sedimento de células BHK no infectadas.
Diagnóstico indirecto
Detección de anticuerpos mediante:
Neutralización
Inmunofluorescencia indirecta
Búsqueda de la conversión serológica
JRO - Cátedra I de Microbiología, Parasitología e Inmunología
ACP por Junín JRO - Cátedra I de Microbiología, Parasitología e Inmunología
Neutralización de la ACP por
Junín: presencia de Acs
específicos en el suero del
paciente.
JRO - Cátedra I de Microbiología, Parasitología e Inmunología
IFI sobre células BHK infectadas con
virus Junín persistentemente:
Detección de anticuerpos anti-Junín
presentes en el suero de un paciente con FHA.
JRO - Cátedra I de Microbiología, Parasitología e Inmunología
Carballal G et al, Intervirology 14:173-9, 1980.
Fiebre hemorrágica argentina
Historia
Manifestaciones clínicas
El virus Junín: estructura y relaciones filogenéticas
Patogénesis de la infección
Diagnóstico
• Epidemiología
• Profilaxis y tratamiento
JRO - Cátedra I de Microbiología, Parasitología e Inmunología
1985 - 2006
Cosecha manual del maíz.
JRO - Cátedra I de Microbiología, Parasitología e Inmunología
Año 1979 Año 2018
Población humana
expuesta:
≈5.000.000
personas.
Casos
notificados: 239.
Casos
confirmados: 7.
A trabajadores rurales del área endémica
JRO - Cátedra I de Microbiología, Parasitología e Inmunología
JRO - Cátedra I de Microbiología, Parasitología e Inmunología
FHA: 2012 – 2019
Año Casos
confirmados
2012
2013
2014
21
25
21
2015
2016
2017
2018
2019
15
10
9
7
14Fuente: Ministerio de Salud
y Desarrollo Social de la Nación
Fiebre hemorrágica argentina
Historia
Manifestaciones clínicas
El virus Junín: estructura y relaciones filogenéticas
Patogénesis de la infección
Diagnóstico
Epidemiología
• Profilaxis y tratamiento
Profilaxis activa
Vacuna atenuada Candid #1Estudios que la avalan:
Inoculación Nº de
voluntarios
Tuvieron FHA
Vacuna 3255 1
Placebo 3245 22
Eficacia de la
vacuna
95,5% P= 0,0000028
JRO - Cátedra I de Microbiología, Parasitología e Inmunología
Dr. Julio Isidro
MaizteguiDr. Julio Barrera Oro
Maiztegui JI, et al. J Infect Dis. 177: 277-83, 1998.
Dominio de transmembrana de G2:
Mutación F427I = ¡¡¡atenuación!!!
J Virol 85: 10404–8, 2011
Vacuna atenuada Candid 1
• A partir de los 15 años,
se debe administrar una única dosis
“a residentes o trabajadores con riesgo ocupacional
en zona de riesgo y que no hayan recibido anteriormente
la vacuna”*.
• En 2019, se administraron 185.000 dosis.
* Según el Calendario Nacional de vacunación de la República Argentina.
Atenuación y estabilidad de la vacuna Candid #1 de 2da. generación
York & Numberg, J Virol 92(1). pii: e01682-17, 2017.
K33S
F427I
Stable signal
peptide: SSP
Tratamiento
Plasma inmune humano proveniente de
convaleciente de FHA:
3500 Unidades terapéuticas (UT) / kg de peso
dentro de los 8 días de iniciada la enfermedad
Complicación: síndrome neurológico tardío
UT: ∑ (peso x título de cada unidad) / peso corporal
JRO - Cátedra I de Microbiología, Parasitología e Inmunología
Dr. Julio Isidro Maiztegui
Enría DA, et al. Lancet 2:255-6, 1984.
¡Disminuye la mortalidad de la enfermedad desde ≈20% a <1%!
Mahmutovic et al.,
Cell Host & Microbe
18: 705–713, 2015.
Fiebre hemorrágica argentina:Síntesis
Enfermedad hemorrágica causada por el virus Junín, un arenavirus transmitido por roedores del campo.
El diagnóstico presuntivo de FHA se asocia a leuco-plaquetopenia y a células redondas en orina.
El diagnóstico etiológico puede realizarse por métodos directos durante la fase virémica (por ej., RT-PCR para detectar RNA viral o ELISA para la proteína N) o indirectos (conversión serológica entre muestras pareadas).
Existe una vacuna atenuada (Candid 1) eficaz.
El tratamiento con plasma inmune de convaleciente de FHA es eficaz para disminuir la mortalidad si se administra dentro de los 1ros. 8 días de enfermedad.
Peter Doherty y Rolf Zinkernagel descubrieron la restricción genética de la
respuesta T mediante brillantes experimentos in vitro con el arenavirus LCM.
Recibieron el Premio Nobel de Medicina o Fisiología en 1996.
JRO - Cátedra I de Microbiología, Parasitología e Inmunología
“Lo esencial es invisible a los ojos”.*”
“Lo que hace más importante
a tu rosa, es el tiempo que
has perdido con ella”.*
*Antoine Jean-Baptiste
Marie Roger
de Saint-Exupéry
Recommended