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IAI390 – 1 – BIOQUÍMICA
GUÍA PARA PRÁCTICAS DE LABORATORIO 2016-1
CARRERA DE INGENIERÍA
AGROINDUSTRIAL Y DE ALIMENTOS
FACULTAD DE INGENIERÍA Y CIENCIAS AGROPECUARIAS ________________________________________________________________________
________________________________________________________________________________________
Carrera de Ingeniería Agroindustrial y de Alimentos| Guía para Prácticas de Laboratorio 2
Presentación
La presente Guía para Prácticas de Laboratorio ha sido desarrollada para que los
estudiantes de la asignatura IAI390–1–Bioquímica dispongan de la información
necesaria para la realización de las prácticas correspondientes de acuerdo con los
temas, objetivos y resultados de aprendizaje establecidos. En este documento se
incluye el proceso que debe desarrollarse en el laboratorio de experimentación e
investigación, con los recursos y resultados esperados, para que el estudiante
pueda desarrollar su práctica-taller y la elaboración de sus respectivos informes o
cualquier otra evidencia de aprendizaje, que serán evaluados con las rúbricas
correspondientes.
La Guía presenta una secuencia en la cual se especifica cada sesión de prácticas
de laboratorio, con el consiguiente proceso didáctico y formativo.
En esta guía, a continuación, se incluyen una plantilla para la elaboración del informe de
las prácticas de laboratorio, así como la rúbrica con la cual se evaluará el mismo. Las
actividades indispensables para la preparación, ejecución y análisis de las prácticas de
laboratorio se desarrollarán con ayuda del aula virtual.
Informe de Laboratorio No.
_______________________________________________________________________
Título de la práctica
Autores (Apellido 1, Nombre1; Apellido 2, Nombre 2; etc.)
Estudiantes de la asignatura IAI390 Bioquímica I, Carrera de Ingeniería Agroindustrial y de
Alimentos, Universidad de las Américas, Quito-Ecuador
RESUMEN
Luego de una breve descripción de los objetivos y método de la práctica, se resumen los principales
resultados logrados, en un párrafo que tenga máximo 150 palabras.
Palabras clave: Escriba entre tres y cinco palabras o frases claves encontradas en el resumen.
ABSTRACT
Es la traducción correcta del resumen al idioma inglés.
Keyword: Es la traducción correcta de las palabras clave al idioma inglés.
1. INTRODUCCIÓN
Esta sección incluirá un breve marco teórico
de la práctica. Se incluirán los temas
necesarios para fundamentar la discusión de
resultados y la formulación de conclusiones
No deberá exceder una carilla completa.
La redacción deberá estar en presente y de
forma impersonal. Se evitarán las copias
textuales de documentos, textos o páginas
que deberá validar con ayuda de internet.
Se utilizará un mínimo de tres referencias
bibliográficas, que deberán estar citadas
apropiadamente, Ej. (Waters, 2009, p. 34), y
detalladas en la sección referencias
Bibliográficas, según las normas APA.
2. OBJETIVOS
2.1 Objetivo general
En tres líneas el estudiante deberá redactar el
objetivo general de la práctica, que empezará
con un verbo en infinitivo (Ej. Determinar,
calcular, comparar, etc.).
2.2 Objetivos específicos
Deberá enumerar entre tres y seis objetivos
específicos de la práctica, que se deben
desglosar del objetivo general. También
deberán comenzar por verbos en infinitivo.
3. MATERIALES Y MÉTODOS
El método de la práctica deberá ser redactado
de manera impersonal en tercera persona y
en tiempo pasado (se añadió, se pesaron,
etc.). En esta parte no se debe presentar
ningún tipo de resultados.
A menos que la práctica lo requiera o por
pedido del profesor, se podrán incluir figuras o
tablas, que deberán tener la referencia
apropiada dentro del texto (Ej. Como se
observa en la Figura 5, etc.) y la indicación de
la fuente de procedencia de la información.
El texto de esta sección puede dividirse en los
subtemas siguientes:
Informe de Laboratorio No.
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Carrera de Ingeniería Agroindustrial y de Alimentos| Guía para Prácticas de Laboratorio 4
3.1 Materiales y reactivos
Se escribirá el nombre de todos los reactivos,
materiales y equipos utilizados en la práctica
(equipos y reactivos con marca, cantidades).
3.2 Procedimiento experimental
Se describirá el procedimiento seguido en la
práctica. Se indicarán las cantidades
utilizadas. Se incluirá la descripción de la
forma en la que se realizarán los cálculos y se
usarán las herramientas estadísticas.
Esta sección deberá contener todos los
métodos utilizados para la realización de la
práctica, escritos de manera corrida, sin el uso
de viñetas
4. RESULTADOS
El estudiante redactará los resultados y
observaciones de la práctica realizada. La
información podrá ser presentada en tablas y
figuras debidamente rotuladas, cuya
referencia se encuentre incluida en el texto
(Ej. En la Figura 3 se muestran … ).
La redacción dependerá de lo que se quiera
expresar, pero de forma impersonal. Si se
hace referencia al procedimiento seguido en
la práctica su redacción será en pasado.
5. DISCUSIÓN
Esta sección relacionará los resultados
obtenidos con los hallados en la búsqueda
bibliográfica. Se explicará el porqué de las
diferencias existentes entre los resultados
propios y los de otros autores. Se recomienda
que la discusión sea de al menos media hoja.
La discusión podría escribirse después de
describir cada resultado.
6. CONCLUSIONES
Como regla general, deberá existir al menos
una conclusión por cada objetivo específico y
cada una deberá acompañarse de los
resultados que lo evidencien.
7. RECOMENDACIONES
Esta sección incluirá al menos tres aspectos
de la práctica que puedan ser mejorados o se
presentarán ideas acerca de estudios
complementarios que podrían aportar al
enriquecimiento de lo aprendido.
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
Las referencias bibliográficas se ubicarán en
orden alfabético. No se deben citar los
apuntes de clase ni documentos sin respaldo
editorial. Siempre se deben buscar las fuentes
originales.
CUESTIONARIO
Esta sección es opcional en el informe, puesto
que dependerá de los requerimientos de cada
práctica. Cabe recalcar que puede ayudar al
aprendizaje del estudiante, ya que aclara
ciertos procesos relacionados con el trabajo
de laboratorio realizado.
ANEXOS
Es una sección opcional, dependerá de los
requerimientos del profesor y de la necesidad
de incluir: ejemplos de cálculo, parte
experimental no detallada en el informe,
información bibliográfica interesante, que no
se incluyó en el acápite 1, etc.
FORMATO DE TABLAS: El título de la tabla
debe describir de forma clara el contenido de
la misma y debe ir en la parte superior de la
tabla a la que precede. No se puede dividir
una tabla en partes, siempre debe colocarse
en una misma hoja, a menos, que su
extensión no lo permita. Tanto el título como
la tabla deben ir centrados.
FORMATO DE FIGURAS: El título de la figura
debe describir de forma clara el contenido de
la misma y debe ir en la parte inferior de la
figura. Las figuras deben ser claras. Tanto el
título como la figura deben ir centrados.
_______________________________________________________________________
IAI390-RÚBRICA PARA EVALUAR INFORMES DE LABORATORIO
PROFESOR: Ing. Patricio Castillo, Ph. D
Firma del Profesor: _____________________________
CRITERIO 2 Suficiente 1 por mejorar 0,5 no existe
1. No originalidad
(TURNITIN) Porcentaje menor al 5%. Porcentaje entre 5 al 10% Porcentaje entre 10 al 15%
2. Formato Utiliza el formato en su
totalidad.
Utiliza parcialmente el
formato. No utiliza el formato.
3. Resumen
Describe con claridad los
resultados alcanzados en
máximo 150 palabras.
Realiza una aceptable
descripción de los resultados
alcanzados.
El resumen es inapropiado, se
relaciona más con teoría,
objetivos o metodología.
4. Introducción
Redacta en párrafos inéditos la
teoría relevante relacionada
con la temática de la práctica,
respaldada por fuentes de
información válidas.
Faltan contenidos en la
introducción, debe citar
algunas fuentes adicionales.
También describe algunos
términos como glosario.
La introducción parece un
glosario de términos, no cita
ninguna fuente.
5. Metodología
Se enumeran todos los
materiales y se describen
claramente todos los métodos
usados, en forma impersonal y
con verbos en pasado.
La descripción de materiales
y métodos empleados en la
práctica es parcial, no se
describen en pasado y/o en
forma impersonal, siempre.
No describe los materiales,
reactivos, equipos ni
procedimientos usados.
6. Resultados
A partir de los datos tomados y
entregados en el laboratorio se
generan y presentan los
resultados en tablas, figuras o
texto respectivos.
Se presenta una
combinación parcial de
resultados y datos tomados
en el laboratorio.
Se presentan los datos tomados
en el laboratorio sin el
procesamiento respectivo.
7. Discusión
Confronta los resultados
obtenidos en la práctica con los
alcanzados por otros autores
según el marco teórico
Parcialmente explica y
compara los resultados por lo
que la discusión debería ser
mejor argumentada.
No discute los resultados, la
sección se ha convertido en un
nuevo marco teórico,
8. Conclusiones
Las conclusiones están
basadas en los resultados y
relacionadas directamente con
los objetivos planteados.
Se presentan conclusiones
sin relación directa con los
objetivos o con los
resultados.
Las conclusiones no tienen
relación con los resultados ni
con los objetivos. Son
enunciados muy generales.
9. Bibliografía
En el informe se citan al menos
tres fuentes válidas y sus
referencias bibliográficas
constan de acuerdo con las
normas APA-UDLA.
En el informe se citan al
menos tres fuentes y sus
referencias bibliográficas o
no constan de acuerdo con
las normas APA-UDLA.
No utiliza al menos tres fuentes
de información válidas.
10. Anexos
Se incluyen fotos, tablas,
figuras, ejemplos de cálculo y
otros materiales relacionados
con la práctica, que están
correctamente referenciadas,
nombradas e identificadas.
Se incluyen fotos, tablas,
figuras, ejemplos de cálculo u
otros materiales útiles para la
práctica, que no están
referenciados o no tienen la
calidad apropiada.,
No existen o no son inéditos o
no están relacionados con la
práctica.
INFORME No. ____ GRUPO No. __________________________ FECHA: _________________ NOTA: ____%
FACULTAD DE INGENIERÍA Y CIENCIAS AGROPECUARIAS _______________________________________________________________________
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Carrera de Ingeniería en Biotecnología| Guía para Prácticas de Laboratorio 6
Práctica No. 1
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Carrera de Ingeniería Agroindustrial y de Alimentos| Guía para Prácticas de Laboratorio 7
1.- OBJETIVO
Preparar soluciones molares ácidas, básicas, salinas y amortiguadoras, con HCl, NaOH y NaH2PO4. Utilizar el espectrofotómetro para preparar curvas de calibración
2.- RESULTADOS DE APRENDIZAJE ESPERADOS
Adquirirá las siguientes habilidades:
1. Calcular las cantidades necesarias de soluto para preparar las soluciones químicas
molares y normales, indispensables para el desarrollo de las demás prácticas del curso.
2. Preparar soluciones amortiguadoras, con el uso correcto del pHmetro para el ajuste del valor del pH.
3. Usar el espectrofotómetro para construir curvas de calibración. 4. Emplear las medidas de manejo seguro en el desarrollo de actividades en un laboratorio
bioquímico. Conocimiento y uso permanente de normas fundamentales de bioseguridad.
Equipos: plancha de calentamiento y agitación, pHmetro y espectrofotómetro Materiales y reactivos: Pipetas Pasteur, probetas de 200 ml, vasos de precipitados de 250 mL, piseta con agua, agitador magnético, espátula, soluciones estándar pH 4, 7 y 10, HCl, NaOH, NaH2PO4.Utilice mascarilla y guantes para manipular ácidos y bases fuertes.
1. Recuerde las normas generales de seguridad en el laboratorio y las normas para
manipular instrumentos, reactivos y materiales. Discuta en el grupo la conveniencia de aplicarlas permanentemente.
2. En cada grupo, calcule las cantidades necesarias de soluto para preparar 250 mL de HCl
y NaOH 1 N. Además, determine la cantidad de soluto necesaria para preparar 100 mL de una solución madre de NaH2PO4 1M, soluciones de rojo de metilo, naranja de metilo y fenolftaleína.
3. Prepare 250 mL de una solución tampón de fosfatos 50 mM, de pH 7,5.
ASIGNATURA: BIOQUÍMICA
SIGLA: IAI390 PARALELO: PERIODO: 2015-2
Fecha: 2015-10-01
PRÁCTICA No: 1 SESIONES: 2
TEMA: 1. Preparación de soluciones salinas,
ácidas, básicas y amortiguadoras. Uso del
espectrofotómetro
3.- MATERIALES/RECURSOS Y EQUIPOS
4.- METODOLOGÍA
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Carrera de Ingeniería Agroindustrial y de Alimentos| Guía para Prácticas de Laboratorio 8
4. Determine la longitud de onda de máxima absorción del indicador en la solución
entregada, convenientemente diluida. 5. Prepare una curva de calibración en un rango de concentraciones apropiado. 6. Al terminar la práctica, registre la marca, modelo y características básicas de los equipos
usados. Entregue todos los materiales recibidos y la hoja de datos elaborada durante la práctica.
5.- ACTIVIDAD FORMATIVA
Prerrequisitos (Antes de comenzar este ejercicio, deberá dominar lo siguiente:)
Normas de seguridad en el laboratorio. Expresión química de la concentración de soluciones. Calibración del pHmetro. Preparación de soluciones ácidas, básicas, salinas y amortiguadoras. Preparación de curvas de calibración.
Descripción de la actividad: En esta y en todas las prácticas siguientes se recordarán y aplicarán las normas de seguridad dispuestas para el trabajo en el laboratorio. Los cálculos realizados en cada grupo se revisarán y discutirán públicamente y una vez validados se procederá con la preparación de las soluciones y la construcción de la curva de calibración, como se indica en la guía metodológica. Para esta y las demás prácticas elabore un formato para datos.
6.- REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
1. Wilson, K., Walker, J. (2010). Principles and Techniques of practical Biochemistry.
Seventh edition. Cambridge University Press. USA. 2. Robyt, J. F., White B. J. (1990). Biochemical Techniques: Theory and Practice. First
edition. Waveland Press, Inc. USA. 3. Boyer, R. F. (2000). Modern Experimental Biochemistry. Third edition. The
Benjamin/Cummings Publishing Company, Inc. USA.
7.- MECANISMO DE EVALUACIÓN Y ANEXOS
Antes de la práctica elabore en WORD una tabla, por grupo, para registrar los datos
experimentales que obtenga.
Entregue la hoja de datos preliminares llenada durante la práctica.
Elabore y envíe el informe de acuerdo con las instrucciones y a través del aula virtual, con
el programa TURNITIN.
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Práctica No. 2
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Carrera de Ingeniería Agroindustrial y de Alimentos| Guía para Prácticas de Laboratorio 10
Comparar la solubilidad de ovoalbúmina y caseína frente a agentes desnaturalizantes físicos y químicos.
2.- RESULTADOS DE APRENDIZAJE ESPERADOS
Adquirirá las siguientes habilidades:
Detectar la solubilidad de la ovoalbúmina y caseína bajo el efecto de agua, soluciones salinas, ácidos, bases, sales, solventes orgánicos, detergentes y del calor.
Equipos: Mechero Bunsen, plancha de calentamiento/agitación
Materiales y reactivos: Tubos de ensayo, vasos de precipitación de 100 mL, solución
de albúmina, leche, agua destilada, solución salina o tampón, NaOH, HCl, NaCl, (NH4)2SO4,
etanol absoluto, detergente. Utilice permanentemente mascarilla y guantes para manipular ácidos y bases fuertes.
1. En cada grupo, coloque la clara de un huevo (ovoalbúmina) en un vaso de precipitación
de 100 mL. 2. En un tubo de ensayo encuentre la relación volumétrica ideal soluto:solvente para
conseguir una solución homogénea de ovoalbúmina en agua, tampón o solución salina. Agite las soluciones proteicas con moderación para evitar la formación de espuma.
3. Con la relación encontrada, prepare 20 mL de solución de ovoalbúmina, en un vaso de
precipitación de 100 mL. 4. En 8 tubos de ensayo coloque unos 2 mL de la solución de ovoalbúmina preparada. 5. En otros 8 tubos de ensayo coloque unos 2 mL de leche.
ASIGNATURA: BIOQUÍMICA
SIGLA: IAI390 PARALELO: PERIODO: 2015-2
Fecha: 2015-10-29
PRÁCTICA No: 2 SESIONES: 2 TEMA: Estudio de la solubilidad de las
proteínas globulares
1.- OBJETIVO
3.- MATERIALES/RECURSOS Y EQUIPOS
4.- METODOLOGÍA
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Carrera de Ingeniería Agroindustrial y de Alimentos| Guía para Prácticas de Laboratorio 11
6. Investigue por separado el efecto de la adición paulatina de hidróxido de sodio, ácido
clorhídrico, cloruro de sodio, sulfato de amonio, detergente, etanol absoluto y el calentamiento en la solubilidad de la albúmina de huevo y de la caseína de la leche.
7. Registre por duplicado todas las observaciones que haga en comparación con el blanco. 8. Analice los factores que influyen en la coagulación de las proteínas globulares. 9. Al terminar la práctica, entregue todos los materiales recibidos y la hoja de datos
elaborada durante la práctica.
5.- ACTIVIDAD FORMATIVA
Prerrequisitos (Antes de comenzar esta práctica, deberá dominar lo siguiente:)
Estructura, propiedades y clasificación morfológica de las proteínas. Desnaturalización de proteínas globulares. Descripción de la actividad: Considere que la desnaturalización altera las interacciones, usualmente débiles, que mantienen estable la conformación globular de las proteínas. En condiciones dadas, se altera el plegamiento óptimo de las proteínas globulares, lo que altera su solubilidad y produce su coagulación. Con el estricto cumplimiento de todas las precauciones establecidas, prepare la solución de albúmina, ensaye cuidadosamente el efecto de los agentes desnaturalizantes sobre la ovoalbúmina y la caseína, escriba los resultados obtenidos, junto con todas las observaciones realizadas y sus evidencias.
6.- REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
1. Wilson, K., Walker, J. (2010). Principles and Techniques of practical Biochemistry.
Seventh edition. Cambridge University Press. USA. 2. Robyt, J. F., White B. J. (1990). Biochemical Techniques: Theory and Practice. First
edition. Waveland Press, Inc. USA.
7.- MECANISMO DE EVALUACIÓN Y ANEXOS
Antes de la práctica elabore en WORD una tabla, por grupo, para registrar los datos
experimentales que obtenga.
Entregue la hoja de datos preliminares llenada durante la práctica.
Elabore y envíe el informe de acuerdo con las instrucciones y a través del aula virtual, con
el programa TURNITIN.
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Práctica No. 3
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Carrera de Ingeniería Agroindustrial y de Alimentos| Guía para Prácticas de Laboratorio 13
Comparar la actividad esterásica presente en las vísceras de pollo, res y cerdo.
2.- RESULTADOS DE APRENDIZAJE ESPERADOS
Adquirirá las siguientes habilidades:
1. Manipular proteínas con actividad catalítica.
2. Recuperar esterasas a partir de muestras de tejido animal.
3. Cuantificar la actividad esterásica presente en el extracto obtenido.
Equipos: Licuadora, planchas de calentamiento/agitación, centrífuga, balanza analítica, espectrofotómetro UV-VIS.
Materiales y reactivos: Tubos de ensayo, vasos de precipitación de 100, 250 y 500 mL,
vidrios de reloj, tubos de centrífuga, probetas, agitadores, micropipetas, termométro, espátulas, cuchillos, etanol absoluto, pisetas con agua destilada, 20 g de vísceras de pollo,
res o cerdo. Utilice mascarilla y guantes para manipular material biológico.
1. En cada grupo, prepare una porción aproximada de 20 g de una víscera. Lave, escurra,
pese, separe materiales extraños, trocee y vuelva a pesar. Registre el peso. 2. En una licuadora, homogeneice los trozos de la muestra con tampón fosfato 50 mM pH
7,5, en una proporción de 1:2 (m:v), durante 3 min, con intervalos de reposo de 30 s, cada min.
3. De considerar necesario, filtre en gasa el homogenato obtenido. Centrifugue a 4 000 rpm
durante 10 min, recoja el sobrenadante. 4. Caliente el sobrenadante en baño maría, hasta 60 ºC, mantenga a esa temperatura solo
durante 10 min. Centrifugue nuevamente a 4 000 rpm, durante 10 min. Recoja el sobrenadante, denominado extracto.
ASIGNATURA: BIOQUÍMICA
SIGLA: IAI390 PARALELO: PERIODO: 2015-2
Fecha: 2015-11-19
PRÁCTICA No: 3 SESIONES: 2 TEMA: Estudio de la actividad esterásica
presente en extractos animales.
1.- OBJETIVO
3.- MATERIALES/RECURSOS Y EQUIPOS
4.- METODOLOGÍA
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Carrera de Ingeniería Agroindustrial y de Alimentos| Guía para Prácticas de Laboratorio 14
5. Para determinar la actividad esterásica del extracto, prepare una mezcla de reacción con
2,25 mL de tampón fosfato 50 mM pH 7,5; 30 L del extracto y 30 L de solución de sustrato (p-NPA: acetato de p-nitro fenilo) en acetonitrilo anhidro. Mida la absorbancia a 348 nm, cada 15 s, durante 3 min. De manera similar, mida la hidrólisis espontánea de la reacción, con tampón en lugar de extracto.
6. Calcule la actividad enzimática AE. La unidad de actividad esterásica, se define como la
cantidad de enzima que produce 1 mol de p-nitrofenol en 1 min de reacción.
7. Al terminar la práctica, registre la marca, modelo y características básicas de los equipos usados. Entregue todos los materiales recibidos y la hoja de datos llenada durante la práctica. Recopile los datos de todos los grupos, para enriquecer la
discusión de los resultados en el informe.
5.- ACTIVIDAD FORMATIVA
Prerrequisitos (Antes de comenzar esta práctica, deberá dominar lo siguiente:)
Estructura y propiedades de las enzimas. Insolubilización de proteínas globulares. Determinación de la actividad enzimática de esterasas. Descripción de la actividad: Considere que la comparación de la actividad enzimática presente en las vísceras podrá realizarse si todas las materias primas y reactivos se añaden de manera cuantitativa. Si conoce la densidad del material, puede medir solo la masa o el volumen, caso contrario mida ambos parámetros. Al manipular las enzimas fundamentalmente se debe considerar el pH del medio y la temperatura.
6.- REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
1. Wilson, K., Walker, J. (2010). Principles and Techniques of practical Biochemistry.
Seventh edition. Cambridge University Press. USA. 2. Robyt, J. F., White B. J. (1990). Biochemical Techniques: Theory and Practice. First
edition. Waveland Press, Inc. USA. 3. Boyer, R. F. (2000). Modern Experimental Biochemistry. Third edition. The
Benjamin/Cummings Publishing Company, Inc. USA.
7.- MECANISMO DE EVALUACIÓN Y ANEXOS
Antes de la práctica elabore en WORD una tabla, por grupo, para registrar los datos
experimentales que obtenga.
Entregue la hoja de datos preliminares llenada durante la práctica.
Elabore y envíe el informe de acuerdo con las instrucciones y a través del aula virtual, con
el programa TURNITIN.
FACULTAD DE INGENIERÍA Y CIENCIAS AGROPECUARIAS _______________________________________________________________________
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Práctica No. 4
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Comparar el contenido específico de glucógeno presente en el hígado de pollo, res y cerdo.
2.- RESULTADOS DE APRENDIZAJE ESPERADOS
Adquirirá las siguientes habilidades:
1. Recuperar glucógeno a partir de muestras de hígado.
2. Identificar y cuantificar el glucógeno presente en el extracto obtenido.
Equipos: Licuadora, planchas de calentamiento con agitación, centrífuga, balanza analítica. Materiales y reactivos: Tubos de ensayo, vasos de precipitación de 100, 250 y 500 mL, vidrios de reloj, tubos de centrífuga, probetas, agitadores, espátulas, cuchillos, pisetas con agua destilada, TCA, cloruro de sodio, glucosa, reactivo de Lugol, 20 g de hígado de pollo,
res o cerdo. Utilice mascarilla y guantes para manipular material biológico y sustancias corrosivas.
1. En cada grupo, prepare una porción aproximada de 20 g de hígado. Lave, escurra, pese,
separe materiales extraños, trocee y vuelva a pesar. Registre el peso. 2. En una licuadora, homogenice los trozos de la muestra con ácido tricloro-acético (TCA)
al 10%, en una proporción de 1:1 (m:v), durante 3 min, con intervalos de reposo de 30 s, cada min. Filtre en gasa el homogeneizado de ser necesario. Centrifugue a 4000 rpm durante 5 min. En una probeta de 100 mL, recoja el sobrenadante.
3. Enjuague el vaso de la licuadora con 20 mL de TCA al 5%. Resuspenda los residuos de
la primera extracción, en los mismos 20 mL de TCA al 5%. Agite la suspensión, centrifugue a 4000 rpm, durante 5 min. Recoja el sobrenadante en la misma probeta.
ASIGNATURA: BIOQUÍMICA
SIGLA: IAI390 PARALELO: PERIODO: 2015-2
Fecha: 2015-12-10
PRÁCTICA No: 4 SESIONES: 2 TEMA: Aislamiento e identificación de
glucógeno
1.- OBJETIVO
3.- MATERIALES/RECURSOS Y EQUIPOS
4.- METODOLOGÍA
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Carrera de Ingeniería Agroindustrial y de Alimentos| Guía para Prácticas de Laboratorio 17
4. Coloque los sobrenadantes en un vaso de 250 mL, añada con agitación 2 volúmenes de etanol al 95%, por cada volumen de extracto. Deje en reposo la mezcla hasta que el precipitado flocule. Si no flocula añada un poco de NaCl y caliente suavemente en baño maría. Cuando haya floculado el precipitado, centrifugue a 2 000 rpm, durante 5 min. Recoja el precipitado. Seque el precipitado en un vidrio de reloj. Pese y registre.
5. En un tubo de ensayo, disuelva una parte del glucógeno obtenido en 2 mL de agua
destilada, añada 2 gotas de Lugol y observe el color. Repita el proceso con agua pura y con 2 mL de solución acuosa de glucosa. Compare la coloración de los 3 tubos.
6. Al terminar la práctica, registre la marca, modelo y características básicas de los equipos
usados. Entregue los materiales recibidos y la hoja de datos llenada durante la práctica. Recopile los datos de los otros grupos, para la discusión de los resultados en el informe.
5.- ACTIVIDAD FORMATIVA
Prerrequisitos (Antes de comenzar esta práctica, deberá dominar lo siguiente:)
Estructura y propiedades del glucógeno. Insolubilización de polisacáridos. Identificación cualitativa de glucógeno. Descripción de la actividad: Considere que la comparación del contenido de glucógeno presente en las muestras de hígado podrá realizarse si todas las materias primas y reactivos se añaden de manera cuantitativa. Si conoce la densidad del material, puede medir solo la masa o el volumen, caso contrario mida ambos parámetros. Al extraer el glucógeno tome todas las precauciones para recuperar la mayor cantidad posible.
6.- REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
1. Wilson, K., Walker, J. (2010). Principles and Techniques of practical Biochemistry.
Seventh edition. Cambridge University Press. USA. 2. Robyt, J. F., White B. J. (1990). Biochemical Techniques: Theory and Practice. First
edition. Waveland Press, Inc. USA. 3. Boyer, R. F. (2000). Modern Experimental Biochemistry. Third edition. The
Benjamin/Cummings Publishing Company, Inc. USA.
7.- MECANISMO DE EVALUACIÓN Y ANEXOS
Antes de la práctica elabore en WORD una tabla, por grupo, para registrar los datos
experimentales que obtenga.
Entregue la hoja de datos preliminares llenada durante la práctica.
Elabore y envíe el informe de acuerdo con las instrucciones y a través del aula virtual, con
el programa TURNITIN.
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Práctica No. 5
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Cuantificar el rendimiento de la reacción que permite la obtención de jabón mediante la hidrólisis alcalina de aceites o mantecas.
2.- RESULTADOS DE APRENDIZAJE ESPERADOS
Adquirirá las siguientes habilidades:
1. Saponificar aceites o mantecas.
2. Cuantificar el jabón recuperado de la mezcla de reacción de saponificación.
3. Calcular el rendimiento real de la reacción a partir del peso de jabón seco.
Equipos: Planchas de calentamiento con agitación, bomba de vacío, estufa, balanza analítica, refrigerador. Materiales y reactivos: Tubos de ensayo, vasos de precipitación de 100, 250 y 500 mL,
vidrios de reloj, tubos de centrífuga, probetas, agitadores, espátulas, embudo Buchner, pisetas con agua destilada, hidróxido de sodio, cloruro de sodio, etanol absoluto, 5 g de
grasa o aceite vegetal. Utilice mascarilla y guantes para manipular bases fuertes. Maneje con cuidado suspensiones en ebullición.
1. En cada grupo, coloque una muestra de 5 g de grasa o aceite vegetal, en un vaso de
precipitación. Agregue 15 mL de NaOH al 25% y 10 mL de etanol al 70%. 2. Caliente la mezcla en baño maría, durante 30 min, hasta que no queden glóbulos ni olor
a grasa. Agite continuamente. Considere que si se evapora demasiado líquido, durante el proceso, puede añadir 10 mL de etanol al 10%.
3. Terminada la reacción de saponificación, agregue 60 mL de NaCl 1 M a la mezcla. Agite
por unos minutos. Registre todos los cambios observados en olor, color y consistencia, durante el proceso.
4. Filtre la suspensión y separe el jabón. Lave dos veces con porciones de 10 mL de agua
refrigerada. Seque el producto en una estufa a 40 ºC, hasta peso constante. Registre.
ASIGNATURA: BIOQUÍMICA
SIGLA: IAI390 PARALELO: PERIODO: 2015-2
Fecha: 2016-01-07
PRÁCTICA No: 5 SESIONES: 1 TEMA: Saponificación cuantitativa de lípidos
1.- OBJETIVO
3.- MATERIALES/RECURSOS Y EQUIPOS
4.- METODOLOGÍA
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5. Al terminar la práctica, registre la marca, modelo y características básicas de los equipos
usados. Entregue todos los materiales recibidos y la hoja de datos llenada durante la práctica. Recopile los datos de todos los grupos, para enriquecer la discusión de los resultados en el informe.
5.- ACTIVIDAD FORMATIVA
Prerrequisitos (Antes de comenzar esta práctica, deberá dominar lo siguiente:)
Estructura y propiedades de los lípidos saponificables. Estequiometría de las reacciones de saponificación. Descripción de la actividad: Considere que la obtención cuantitativa de jabón podrá realizarse si se conocen las masas de todas las materias primas y reactivos añadidos. A partir de la estequiometría de la reacción, calcule el rendimiento teórico y con el peso obtenido del jabón seco, el rendimiento logrado en la reacción de saponificación efectuada.
6.- REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
1. Wilson, K., Walker, J. (2010). Principles and Techniques of practical Biochemistry.
Seventh edition. Cambridge University Press. USA. 2. Robyt, J. F., White B. J. (1990). Biochemical Techniques: Theory and Practice. First
edition. Waveland Press, Inc. USA. 3. Boyer, R. F. (2000). Modern Experimental Biochemistry. Third edition. The
Benjamin/Cummings Publishing Company, Inc. USA.
7.- MECANISMO DE EVALUACIÓN Y ANEXOS
Antes de la práctica elabore en WORD una tabla, por grupo, para registrar los datos
experimentales que obtenga.
Entregue la hoja de datos preliminares llenada durante la práctica.
Elabore y envíe el informe de acuerdo con las instrucciones y a través del aula virtual, con
el programa TURNITIN.
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Práctica No. 6
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Comparar el contenido de ácidos nucleicos presentes en muestras de frutas y legumbres.
2.- RESULTADOS DE APRENDIZAJE ESPERADOS
Adquirirá las siguientes habilidades:
1. Recuperar los ácidos nucleicos presentes en muestras de frutas y legumbres.
2. Identificar y cuantificar los ácidos nucleicos presentes en el precipitado obtenido.
Equipos: Planchas de calentamiento con agitación, bomba de vacío, centrífuga, balanza analítica, refrigerador. Materiales y reactivos: Tubos de ensayo, vasos de precipitación de 100, 250 y 500 mL,
vidrios de reloj, tubos de centrífuga, probetas, agitadores, cuchillos, espátulas, embudo Buchner, pisetas con agua destilada, bicarbonato de sodio, cloruro de sodio, etanol
absoluto, muestras de frutas o verduras. Utilice mascarilla y guantes para manipular material biológico. Maneje con cuidado material cortante.
1. En cada grupo, prepare un tampón con 60 mL de agua destilada; 0,75 g de NaCl; 2,5 g
de NaHCO3 y 2,5 mL de detergente líquido. Evite la formación de espuma. Refrigere. 2. Pese la muestra (tomate de árbol, espinaca o cebolla) y corte en pedazos pequeños. Con
ayuda de un pistilo, en un mortero triture los trozos de muestra con el mínimo volumen (medido) de agua destilada fría, previamente refrigerada.
3. De considerar necesario, filtre en gasa el homogenato obtenido y coloque 5 mL del
filtrado en tubos de ensayo. En cada tubo, añada 10 mL del tampón frío y agite fuertemente durante 2 min.
4. Centrifugue la muestra durante 5 min a baja velocidad. Coloque 5 mL del sobrenadante
en tubos limpios y añada 10 mL de etanol absoluto frío, despacio y por las paredes del tubo que debe mantenerse inclinado, para no mezclar las fases.
ASIGNATURA: BIOQUÍMICA
SIGLA: IAI390 PARALELO: PERIODO: 2015-2
Fecha: 2016-01-07
PRÁCTICA No: 6 SESIONES: 1 TEMA: Aislamiento y cuantificación de ácidos
nucleicos
1.- OBJETIVO
3.- MATERIALES/RECURSOS Y EQUIPOS
4.- METODOLOGÍA
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5. Introduzca una pipeta Pasteur hasta debajo de la separación entre el alcohol y el tampón
y agite suavemente de adelante hacia atrás durante un minuto. Recoja los fragmentos de ADN en un vidrio de reloj, seque y pese. Registre todas sus observaciones. A partir del peso inicial de la muestra, determine el rendimiento de la extracción.
6. Al terminar la práctica, registre la marca, modelo y características básicas de los equipos
usados. Entregue todos los materiales recibidos y la hoja de datos llenada durante la práctica. Recopile los datos de todos los grupos, para enriquecer la discusión de los resultados en el informe.
5.- ACTIVIDAD FORMATIVA
Prerrequisitos (Antes de comenzar esta práctica, deberá dominar lo siguiente:)
Estructura y propiedades de los ácido nucleicos. Extracción de ácidos nucleicos. Descripción de la actividad: Considere que la comparación del contenido de ácidos nucleicos presentes en las muestras vegetales podrá realizarse si todas las materias primas y reactivos se añaden de manera cuantitativa. Si conoce la densidad del material, puede medir solo la masa o el volumen, caso contrario mida ambos parámetros. Al precipitar los ácidos nucleicos considere tomas las precauciones indicadas, que favorecerán su recuperación.
6.- REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
1. Wilson, K., Walker, J. (2010). Principles and Techniques of practical Biochemistry.
Seventh edition. Cambridge University Press. USA. 2. Robyt, J. F., White B. J. (1990). Biochemical Techniques: Theory and Practice. First
edition. Waveland Press, Inc. USA. 3. Boyer, R. F. (2000). Modern Experimental Biochemistry. Third edition. The
Benjamin/Cummings Publishing Company, Inc. USA.
7.- MECANISMO DE EVALUACIÓN Y ANEXOS
Antes de la práctica elabore en WORD una tabla, por grupo, para registrar los datos
experimentales que obtenga.
Entregue la hoja de datos preliminares llenada durante la práctica.
Elabore y envíe el informe de acuerdo con las instrucciones y a través del aula virtual, con
el programa TURNITIN.
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