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Medición de crecimiento de microorganismos
Martha Fernanda Martínez ChaviraCarolina Lizeth Domínguez ErivesNorma Angélica Bolivar Jacobo
El examen de alimentos en cuanto a presencia y número de microorganismos es básico en la microbiología de los alimentos.
Los cuatro métodos básicos empleados para los números “totales” son:
Recuentos en placas normales (SPC) Métodos de los números más probables (NMP) Técnica de reducción de colorantes Recuentos microscópicos directos (DMC)
Recuento convencional en placa normal (SPC)
Se mezclan y se homogeneizan porciones de muestras, se diluyen seriadamente, se siembran en la placa y se incuban a una temperatura y tiempo apropiados.
Aunque el SPC se determina con mayor frecuencia por inundación de placas, se pueden obtener resultados equiparables por siembra en superficie.
Organismos aerobios estrictos resultan favorecidos por la siembra en superficie
Microaerófilos crecen más lentamente.
Homogenización de las muestras de alimentos
En 1971 fue ideado el Colwell Stomacher
Homogeniza las muestras en una bolsa de plástico mediante machacamiento energético de dos tambores.
Es específico de los alimentos; es mejor que la mezcladora de alta velocidad para algunos tipos de alimentos pero no para otros.
Aparato para la siembra de placas en espiral
Distribuye el inóculo líquido sobre la superficie de una placa rotatoria que contiene un medio de agar o que ha sido vertido y endurecido.
El recuento de las colonias se realiza con un retículo especial.
Dependiendo de la densidad relativa de las colonias, se cuentan las que aparecen en una o más zonas específicas del retículo.
Filtros de membrana.
Se usan membranas de un diámetro de poro que retiene las bacterias (0.45 micras) pero que permiten ser atravesadas por el agua o por el diluyente.
Una vez recogidas las bacterias por la filtracion, se coloca la placa sobre el agar o sobre una almohadilla absorbente.
Despues del crecimiento se cuentan las colonias en el microscopio despues de la tincion apropiada, lavado y tratamiento de la membrana para hacerla transparente.
Técnica directa del filtro epiflourescente (DEFT)
Emplea colorantes fluorescentes y microscopìa de fluoresencia.
El homogenizado se pasa a través de un filtro de nilon 5 micras.
Triton X-100 y 0.5 ml de tripsina.
Incubacion.
Membrana de policarbonato
El filtro se tiñe con naranja de acridina
Conteo de celulas teñidas mediante microscopia de flourescencia.
DEFT en microcolonias.
Permite detectar células viables. Se utiliza el filtro de nylon 5 micras.
Incubaciòn: Gram + 3 horas Gram – 6 horas Coliformes, pseudomonas y stap 8
horas.
Muestras tratamiento enzimatico. Membrana policarbonato.
Medio selectivo 3-6 horas.
Filtro de membrana con retículo hidrófobo.
Sharpe y Michaud. Se filtra 1 ml homogenizado a
través de una membrana de filtro.
Se coloca la membrana en el agar aproiado
Incubaciòn durante la noche Conteo de las celdillas
Métodos de recuento de colonias al microscopio
Supone el recuento de las microcolonias que se forman en capas de agar dispuestas sobre portaobjetos.
Método de las gotitas de agar.
Sharpe y Kilsby
Incuba durante 24 horas. Conteo con lupa de 10 aumentos.
Método Petrifilm.
Son películas deshidratadas de medios de cultivos generales o selectivos.
Método del número más probable
Se trata de un método estadístico para averiguar el número de organismos. Se basa en la presunción de que, pasado un cierto tiempo, si están los organismos que creemos, la prueba deberá ser positiva.
Ventajas:
Relativamente sencillo Se pueden determinar el número de
microorganismos pertenecientes a grupos concretos
Determinación de coliformes fecales.
Reducción de colorantes.
Numero de m.O. viables en alimentos.
Azul de metileno y resazurina. Se añaden los colorantes al
alimentos y se toma el tiempo en que estos son reducidos.
Método de los tubos rodantes.
Son tubos herméticamente cerrados en los que haciéndolos girar se forma una fina capa de agua. Útiles para recuento de anaerobios.
Recuento microscópico directo.
Recuento microscópico directo
Contadores electrónicos de partículas (tipo Coulter) Se hace pasar una suspensión microbiana por un tubo capilar, entre los dos polos de una corriente eléctrica, que detecta el número y el tamaño de las partículas que van pasando
Recuento microscópico directo
Examen microbiológico de superficies.
Placas de contacto.Se utilizan para determinar la calidadmicrobiológica de superficies planas.Presiona la placa sobre la superficie.
Examen microbiologico de superficies.
Método del hisopo Se debe definir el área donde se va a
tomar la muestra, generalmente se usa una plantilla con un área entre 24 y 30 cm
Otros métodos para el examen de superficie.
Siembra directa en superficie Pelicula pegajosa
GRACIAS POR SU ATENCIÒN.
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