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UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADORFACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS
MICROBIOLOGÍA GENERAL
MÉTODOS ESPECTROMÉTRICOS
PAULINA LUCINA
INTRODUCCIÓN
Aquellos métodos de análisis óptico más usados en el área de investigación.
Es la medida de la cantidad de radiación absorbidapor las moléculas de una muestra en función de laslongitudes de onda específicas.
Radiación Electromagnética
Se puede describir como un flujo de partículas llamadas fotones
o bien como una onda propagándose en el espacio.
Se toma el concepto de longitud de onda, definiéndolo como la distancia entre dos máximos consecutivos de la onda.
Esta es inversamente proporcional a la energía de la misma, de tal manera que el espectro de radiaciones electromagnéticas abarca un amplio rango de energías, las de menor energía son las ondas de radio y las de mayor energía son las llamadas radiación gamma.
Efecto del haz de luz sobre un objeto
Un haz choca con una sustancia puede suceder:
Puede pasar a través de lamateria haciendo una solapequeña absorción.
La dirección de propagaciónde la luz puede ser alteradapor :
Refracción Reflexión Difracción Dispersión
Energía puede ser absorbida total o parcialmente
Absorbancia: Es una medida de la cantidad de Energía incidente absorbida por
una sustancia en solución.
Si:
La Ley de Lambert y BeerExpresa que la absorbancia de una solución es directamenteproporcional al camino recorrido por la radiación electromagnéticay a la concentración de la solución
= Es la cte. de proporcionalidad llamada coeficiente de absortividad molar (L mol-1cm-1).b = Es el paso óptico, anchura de la celda (cm).c = concentración de la muestra (M).
Requerimientos:
Luz monocromática.Disolución diluida (< 0,01M).Especie absorbente no participe en un equilibrio que dependa de su concentración.
Espectrofotómetro
Los aparatos de medida de la absorción de la radiaciónelectromagnética se denominan espectrofotómetros y puedenrepresentarse de forma sencilla mediante el siguiente esquema:
Componentes esenciales de un Espectrofotómetro
Lámpara: Fuente de luz de alta intensidad para efectuar la medición.
Fuentes continuas
Fuentes Líneas
Laser
LÁMPARAS
Fuentes Continuas TungstenoHidrógeno /Deuterio Arco de Xenón
Vis – IRUVUV –Vis
Fuentes de Líneas SodioMercurioHidrógeno
VisUV –Vis
Selectores de longitud de
onda
Filtros
Absorción
Interferencia
Monocromadores
Prisma
Red de difracción
Transmisión
Reflexión
Filtro de Interferencia
Monocromadores Dispositivos ópticos que descomponen laradiación electromagnética en sus
componentes y permite aislar cualquierporción deseada del espectro
De prisma: Aíslan la radiación mediante el
fenómeno de la dispersión óptica
De Red: Aíslan radiación mediante el
fenómeno de interferencia óptica
Portamuestras
Material de la celda
Cuarzo o Sílice fundida
Región UV
Vidrio
Región Vis
Forma de la celda
Cilíndricas Rectangulares
DetectoresDispositivos que convierte laradiación electromagnética en unaseñal utilizable
Fototubos FotomultiplicadoresFotodiodos
Bibliografía: Skoog, Principios de Análisis Instrumental, 5ta Edición, Editorial McGraw Hill, Cap. 6 – 7 http://www.slideshare.net/SantosSerkovic/espectrofotometria-pdf http://www.fcn.unp.edu.ar/sitio/quimicabiologica1/wp-content/uploads/2010/08/2011-TP-1-ESPECTROFOTOMETRIA.pdfhttp://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/cineticapractica6_19764.pdf
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