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DETERMINACIÓN DE LINEZOLID POR CROMATOGRAFIA LIQUIDA DE ALTA EFICACIA (HPLC)
EN DISTINTAS MUESTRAS BIOLÓGICASGuerrero L1, Sarasa M2, López Y3, Soy D1
1Servicio de Farmacia.2Departament de Investigación Clínica. Palau Pharma (Grupo Uriach)3Servicio de Farmacología Clínica. Hospital Clínic de Barcelona
INTRODUCCIÓNLinezolid es un agente antibacteriano del grupo de las oxazolidinonas que actúa inhibiendo la síntesis de proteínas
bacterianas. Tiene un amplio espectro de actividad frente a microorganismos Gram positivos, tales como estafilococos resistentes a meticilina, neumococos resistentes a penicilina y Enterococcus faecalis y E.Faecium resistentes a vancomicina.
MATERIAL Y MÉTODOS
Se dispone de muestras de plasma, líquido cefalorraquídeo (LCR) y humor vítreo (HV) de varios pacientes. El fármaco se extrae de la matriz biológica mediante una precipitación proteica con ácido perclórico al 3% (1:1 v/v) a partir de 200 mcL de plasma. Posteriormente se centrifuga y se inyectan 100 mcL del sobrenadante obtenido. Las muestras de LCR y HV no requieren de dicho proceso, por lo que se inyecta muestra directa: 100 mcL en el caso de LCR y 50 mcL de HV.
La separación cromatográfica se realiza mediante la elución con una fase móvil compuesta de 80% tampón K2HPO4(15mM; pH = 5) y 20 % acetonitrilo (ACN). El flujo de trabajo es de 1 mL/min y la longitud de la columna cromatográfica utilizada es la NOVAPAK C18 150 * 3.9 mm, con precolumna.
RESULTADOS
Plasma L. Cefalorraquídeo Humor vítreo
Linealidad 0.5 – 100 mcg/mL 0.1 – 10 mcg/mL 0.1 – 10 mcg/mL
t retención 4.44 min 4.64 min 3.99 min
Límite de Cuantificación 0.5 mcg/mL 0.1 mcg/mL 0.1 mcg/mL
Exactitud 94.4 – 106.1% - -
CV intra / CV inter 3.44% / 4.65% - -
CONCLUSIONES
El método se comporta de forma lineal, precisa y exacta. Además es rápido, sensible y de bajo coste económico. La metodología descrita permite determinar las concentraciones de linezolid en distintas matrices biológicas: plasma, LCR y HV, pudiendo ser utilizada como base para estudios de farmacocinética clínica.
Recta de calibración linezolid
0 25 50 75 100 1250
2500
5000
7500
10000
12500
Y = 105.31X - 100.49R2 = 0.9997
[Linezolid; mcg/mL]
Áre
a ba
jo c
urva
m0 1 2 3 4 5 6 7
mAU
0
200
400
600
800
1000
VWD1 A, Wavelength=254 nm (C:\HPCHEM\1\DATA\L-200704\P5-9.D)
1.1
03 1
.173
1.3
26 1
.460
1.6
23 1
.738
1.9
85 2
.209
2.4
40 2
.656
2.8
72
3.3
39 3
.563
4.4
44
Cromatograma muestra plasma
m0 1 2 3 4 5 6
mAU
0
50
100
150
200
250
VWD1 A, Wavelength=254 nm (C:\HPCHEM\1\DATA\L-210605\LCR1-20.D)
1.0
97 1
.232
1.5
59
1.9
80
2.5
61
4.6
42
Cromatograma muestra LCR
m0 1 2 3 4 5 6 7
mAU
0
200
400
600
800
1000
VWD1 A, Wavelength=254 nm (C:\HPCHEM\1\DATA\L-211004\ATO-HV.D)
1.0
03 1
.111
1.3
42 1
.413
1.5
50 1
.683
2.1
36
3.9
92
Cromatograma muestra HV
Conflictos de interesesFinanciado por el CIBER de Enfermedades Respiratorias 06/06/0028 y el fondo de Investigaciones sanitarias (FIS) beca FIS PI070419.
OBJETIVOS
Determinación de concentraciones de linezolid en diferentes muestras biológicas, mediante cromatografía líquida de alta eficacia de fase reversa con posterior detección ultravioleta (HPLC-UV), para su implementación en posterior estudios de farmacocinética clínica.
NO
F
N O
O
HNC
CH3
O
Estructura química del LINEZOLID
021
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