Coloración ácido resistente

Coloración Ácido-Resistente(De Ziehl-Neelsen)

Ginel Mesa 09-0470Lab. Microbiología ISección 71

¿Qué es la tinción de Ziehl-Neelsen?• Es un tintado

bacteriológico especial utilizado para identificar organismos acido-resistentes, en su mayoría mycobacterias. Mycobacterium tuberculosis es el más importante de este grupo, y es responsable de la enfermedad conocida como tuberculosis (TB).

Fundamento• Ciertos parásitos y bacterias contienen ácidos

grasos de cadena larga en sus paredes celulares que les dan la propiedad de resistir la decoloración con alcohol-ácido, después de la tinción con colorantes básicos.

Cont.

• La coloración clásica de Ziehl-Neelsen requiere calentamiento para que el colorante atraviese la pared bacteriana que contiene ceras. Al suspender el calentamiento y enfriar con agua, provoca una nueva solidificación de los ácidos grasos de modo que el colorante ya no puede salir de las bacterias.

Procedimiento Caliente.• Hacer un frotis de la muestra.• Aplicar fucsina-fenicada. Calentar por 3-5

minutos. –ENJUAGAR CON AGUA.• Decolorar con alcohol-ácido por 7 minutos. –

ENJUAGAR. Si elportaobjetos aún están rosa, aplique una cantidad adicional de alcohol de 1 a 3 minutos.

• Aplicar azul de metileno (1 minuto).–ENJUAGAR.• Ahora coloque una pequeñita gota de aceite de

inmersión y haga la observación al microscopio.

Procedimiento Frio.1. Hacer un frotis.2. Dejarlo en el puente

de tinción.3. Aplicar fucsina-

fenicada (solución con fenol y mayor concentración de fucsina).

4. Dejar en vasos Coplin durante 20 minutos.

5. Decolorar con alcohol ácido.

Resultados.Algunos microorganismos ácido-alcohol resistentes

• BAAR: rojo.• Núcleos: azul semiamarillo.

• Mycobacterium: fuertemente ácido-alcohol resistentes.

• Nocardia y Actinomices: débilmente ácido-alcohol resistentes.

• Parásitos coccídeos (Cryptosporidium) de muestras fecales.