Método de detección de coliformes

Integrantes:

Mendoza Blancas DarghiTarazona Tapia Maricruz

Coliformes fecales Mesofilos

MICROORGANISMOS INDICADORES

Libre microorganismos

consideradospatógenos

libre de bacterias indicadoras de contaminación

fecal

Determinar la calidad bacteriológica del agua subterránea de consumo humano determinando el recuento de heterótrofos, coliformes totales y termotolerantes

22/10/13

Muestra:

Aguas Subterráneas de los 46 pozos de la Yarada y Los Palos –

Tacna

Muestra:

Aguas Subterráneas de los 46 pozos de la Yarada y Los Palos –

Tacna

22/10/13

Composición y preparación de medios de cultivos y reactivos

Verde Brillante Bilis 2% Caldo (gramos/litro )

• Bilis de buey deshidratada………… 20,0gr • Lactosa ………………………………..10,0gr • Peptona……………………………… 10,0 gr• Verde brillante ………………………..0,0133gr

pH: 7,2 +/-0,2

Preparación de Brilla simple en tubos de 10 ml: 66 tubos x 10 ml = 660 ml pero se prepara 661

40 g -----------> 1000 ml X g <------------ 661 ml

X = 24,44 g para 66 tubos simples.

Preparación del Brilla doble en tubos de 10 ml: 33 tubos x 10 ml = 330 ml pero se prepara 331

40 g ------------> 1000 ml X g <------------- 331 ml

X = 13,24 g pero por ser doble se usa 13,24 x 2 = 26,48 g Agua Peptonada (gramos/litro)

• Peptona de carne………. 10,0 gr• Cloruro de sodio………... 5,0gr pH: 7,2 +/-0,2

Agar Cuenta Colonias + TTC al 0,5%

Agua destilada estéril

+ 0,5 g de TTC

Filtro de celulosa estéril de 45 µm

Solución TTC al 0,5 % estéril

Agar Cuenta Colonias PCA +

TTC 0,5%

Procedimiento

COLIFORMES TERMOTOLERANTES

Muestra de Agua Subterránea

Gas (+) 24

horas

Gas (-) 24

horas

Reincubar 24 HorasPrueba de

temperatura elevada en Caldo Bri l la e incubar a 44,5 +/- 0,2

°CGas (+) 48

horas: Prueba posit iva

para Coliformes

totales

Gas ( -) 48 horas: Prueba

negativa

Gas (+) 24 horas

Prueba confirmati

va posit iva

para Coliforme Termotole

rante

Gas (-) 24

horas

Prueba negativ

a

10ml

Caldo Brilla Doble

Concentrado

Caldo Brilla Simple

Concentrado

22/10/13

Siembra en Caldo Brilla

Presencia de turbidez

Colonias coloreadas teñidas por la reducción del TTC

conteo de bacterias mesófilas

se observa que la mayoría del agua subterránea de los pozos muestreados (54%), no cumplió con la norma nacional establecida para la cantidad aceptable de

coliformes totales

22/10/13

resultados

MO Aerobios Mesófilos :

Muestra : preparados de nutricion enteral Metodo : recuento en placa por siembra en profundidad Medio : agar plate countDiluyente : agua de peptona 0,1 %

MO Coliformes Fecales :

Muestra: preparados de nutricion enteral Metodo: recuento en placa Medio : agar violeta cristal rojo neutro bilis (VRBA)Diluyente: agua de peptona 0,1%

MO AEROBIOS MESÓFILOS

•ISO 4833 :Directiva general para el recuento de microorganismos. Método por recuento de colonias a 30º C

•AF V 08-01 :Método de rutina para el recuento de microorganismos. Método de recuento de las colonias a 30º C

COLIFORMES TOTALES

•ISO 4831 Directiva general para el recuento de coliformes

•NF V 08-050 Método de rutina para la enumeración de coliformes mediante el recuento de colonias a 30º C.

Métodos normalizados