[ ]13 [ ]14

Columnas de HPLC Atlantis

La familia Atlantis® de columnas de HPLC fue creada para resolver uno de los problemas cromatográficos

más complejos, la retención de compuestos polares. Los analitos polares suelen ser difíciles de retener

por cromatografía tradicional de fase reversa (RP) y habitualmente eluyen en el volumen de exclusión de

la columna o coeluyen con especies endógenas presentes dentro de las matrices biológicas, afectando

adversamente a la precisión y exactitud de los análisis biológicos cuantitativos. Gracias a la experiencia

acumulada y a la innovación en la síntesis, las columnas Atlantis lideran el sector, ofreciendo excepcional

rendimiento, versatilidad, retención y estabilidad cromatográfica para compuestos polares, ofreciendo al mismo

tiempo una retención equilibrada para mezclas complejas de analitos.

[ ]3

Columnas Atlantis T3: versatilidad por innovación

La cromatografía de fase reversa es la técnica mas empleada en separaciones por LC debido a su versatilidad para retener y resolver una

amplia gama de compuestos diferentes. La culminación de más de tres décadas de experiencia y conocimientos en el diseño de fases

estacionarias ha permitido la creación de las columnas Atlantis T3. Con una retención equilibrada de moléculas polares e hidrófobas, las

columnas Atlantis T3 resuelven uno de los mayores problemas analíticos que afectan a los usuarios de sistemas cromatográficos. Además,

la optimización selectiva del diámetro de los poros, de la densidad del ligando C18 y del recubrimiento final permite que las columnas

Atlantis T3 ofrezcan una magnífica retención para los compuestos polares, excelente forma de los picos y eficiencia para todos los

analitos, así como una estabilidad química excepcional en una amplia gama de pH.

El excelente rendimiento que ofrece la tecnología de fase enlazada T3 puede lograrse en plataformas tecnológicas HPLC y UPLC®. Las

columnas ACQUITY UPLC® HSS T3 incorporan la misma tecnología de fase enlazada T3 y recubrimiento final que las columnas Atlantis,

ofreciendo así las mismas posibilidades independientemente de la plataforma de separación.

Columnas de sílice Atlantis HILIC: mejor retención de los compuestos polares

Las columnas de sílice Atlantis HILIC mejoran la retención de analitos y metabolitos muy polares, que se retienen mal por

cromatografía de fase reversa, mediante cromatografía de interacción hidrofílica (HILIC). Además de la retención mejorada

de los compuestos polares, las columnas de sílice Atlantis HILIC ofrecen una mayor respuesta de la espectrometría de masas,

compatibilidad directa con los eluatos de SPE, así como selectividad ortogonal, en comparación con los materiales de fase reversa, lo

cual convierte a la HILIC en una atractiva técnica de separación alternativa.

[ ]4

Redefine la Ret ención de compuestos polaRes

El excepcional rendimiento de las columnas Atlantis T3 HPLC es consecuencia del diseño inteligente de la fase esta-cionaria. El proceso avanzado de funcionalización T3 de Waters utiliza una fase alquílica C18 trifuncional,

unida con una densidad intermedia del ligando de 1.6 µmol/m2 para promover la retención de compuestos polares*1. Esta menor densidad del ligando permite que los analitos

accedan con más facilidad a la estructura de los poros del material, donde tiene lugar más del 99% de la retención cromatográfica, permitiendo una

retención mejorada.

*1 P.D. McDonald et al. "Topics in Liquid Chromatography Part 1. Designing a Reversed-Phase Column for Polar Compound Retention" Waters W hitepaper 2006, 8 pp;

buscar 720001889EN en waters.com.

CondicionesColumna: Atlantis T3, 4,6 x 150 mm, 5 µmReferencia: 186003747Fase móvil A: H2OFase móvil B: ACNFase móvil C: HCOONH4 100 mM, pH 3,0Caudal: 1,0 mL/minGradiente: Tiempo Perfil (min) %A %B %C 0,00 95 0 5 5,00 95 0 5 15,00 70 25 5 20,00 70 25 5 21,00 95 0 5 25,00 95 0 5 Volumen de inyección: 10 µLTemperatura de la columna: 30 °CDetección: UV @ 280 nm.

Compuestos: 1. Norepinefrina (NE) 2. Epinefrina (E) 3. 3,4-dihidroxifenilalanina (DOPA) 4. Dopamina (DA) 5. Ácido 4-hidroxi-3-metoximandélico (VMA) 6. Serotonina (5-HT) 7. 3-metoxi-4-hidroxifenilglicol (MHPG) 8. Ácido 3,4-dihidroxifenilacético (DOPAC) 9. Ácido 5-hidroxi-3-indolacético (5-HIAA)10. Ácido 4-hidroxi-3-metoxifenilacético (HVA)

1

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75

6

8

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10

6 10 12 14 18 20 min0 2 4 8 16

ATLANTIS T3

[ ACQUITY UPLC SYSTem ACCeSSorIeS ]

[ ]5

Ret ención equil ibRada de mezclas de div eRsos analitos

Ante la tarea de analizar una serie de compuestos con una amplia gama de polaridades, existen pocas opciones que permitan una retención adecuada de las especies polares sin excesiva retención de los componentes menos polares. En el desarrollo de fármacos, hay que cribar gran número de candidatos, muchas veces con poca o ninguna definición previa de sus propiedades químicas. Muchos candidatos polares se pasan a veces por alto, debido a su elución en el volumen de exclusión de la columna, mientras que las especies hidrófobas pueden unirse de forma permanente a la fase estacionaria.

Las columnas Atlantis T3 están diseñadas para ofrecer un rendimiento excepcional para una extensa gama de polaridades de compuestos, lo cual las hace muy adecuadas como columnas universales de fase reversa para entornos de acceso abierto.

CondicionesColumna: Atlantis T3, 4,6 x 150 mm, 5 µmReferencia: 186003747Fase móvil A: H2OFase móvil B: ACNFase móvil C: HCOOH al 1%, pH 2,3Fase móvil D: MeOH.Caudal: 2,0 mL/minGradiente: Tiempo Perfil (min) %A %B %C %D 0,00 55 17,5 10 17,5 4,00 35 27,5 10 27,5 6,00 9 40,0 10 41,0 15,00 9 40,0 10 41,0 16,00 55 17,5 10 17,5 20,00 55 17,5 10 17,5Volumen de inyección: 10 µL Temperatura de la columna: 30 °C.Detección: UV @ 280 nm. 0 2 4 6 8 10 12 14 min

1 2

3

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5

6

7

8

Hidrófobos: antioxidantes liposolubles

CondicionesColumna: Atlantis T3, 4,6 x 150 mm, 5 µmReferencia: 186003747Fase móvil A: H2OFase móvil B: ACNFase móvil C: CH3COONH4 100 mM, pH 5,0Caudal: 1.0 mL/minGradiente: Tiempo Perfil (min) %A %B %C 0,00 90 0 10 10,00 84 6 10 11,00 90 0 10 15,00 90 0 10Volumen de inyección: 10 µLTemperatura de la columna: 30 °C.Detección: UV @ 254 nm.

Compuestos: 1. Citosina2. 5-fluorocitosina3. Uracilo4. 5-fluorouracilo5. Guanina6. Timina7. Adenina

0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 min

1

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54

polares: bases de ácidos nucleicos

Retención de uracilo

AtlAntis t3

Compuestos: 1. Galato de propilo2. 2,4,5-trihidroxibutirofenona3. Terc-butilhidroquinona4. Hidroxianisol butilado5. 2,6-di-terc-butil-4-hidroximetilfenol6. Galato de octilo7. Hidroxitolueno butilado8. Laurilo

AtlAntis t3

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1 342

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0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 min

0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 min

La prueba de “interrupción de flujo” de Waters determina la susceptibilidad de una fase estacionaria a la deshumectación de los poros utilizando fases móviles 100% acuosas. Bajo estas difíciles condiciones de prueba, las columnas Atlantis T3 presentan una pérdida de retención insignificante, mientras que la columna C18 de alta funcionalización sufre una pérdida de retención completa.

CondicionesColumnas: 4,6 x 100 mm, 3 μmFase móvil: HCOONH3 10 mM, pH 3,0Caudal: 1,2 mL/minVolumen de inyección: 7,0 μLDetección: UV @ 254 nm.

Compuestos:1. Tiourea2. 5-fluorocitosina3. Adenina4. Guanosina-5-monofosfato5. Timina

atlantis t3, c18 de funcionalización intermedia

zorbax® eclipse plus c18, c18 de alta funcionalización

100% de retención perdida

7% de retención perdida

Atlan

tis T3

[ ]6

Ret ención sin React ivos de paR iónico

El uso de reactivos de par iónico en columnas de fase reversa es un enfoque frecuente para retener compuesto ionizables altamente polares. A medida que la espectrometría de masas se ha convertido en una técnica de detección importante en muchos laboratorios, los reactivos de par iónico se vuelven una opción menos atractiva a causa de la supresión de la respuesta de MS que provocan. Las columnas Atlantis T3 presentan una retención mejorada sin necesidad de dichos reactivos, lo cual permite obtener límites de detección y cuantificación más bajos para método de LC/MS.

CondicionesColumnas: Atlantis T3, 2,1 x 50 mm, 3 µmReferencia: 186003717Fase móvil A: HCOOH al 0,1%Fase móvil B: ACNCaudal: 0,5 mL/minGradiente: Tiempo Perfil (min) %A %B 0,00 98 2 5.00 2 98Volumen de inyección: 15 μLTemp. de la columna: 45 °C.MRM: morfina 286 > 201 morfina-3ß-D-glucurónido 462 > 286 morfina-6ß-D-glucurónido 462 > 286 N-óxido de morfina 302 > 162 6-acetilmorfina 328 > 165 10-hidroximorfina 302 > 58

Compuestos:1. 10-hidroximorfina2. Morfina-3ß-D-glucurónido3. Morfina-6ß-D-glucurónido4. Morfina5. N-óxido de morfina6. 6-acetilmorfina

6

1

2

3

4

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1.0 1.5 min.50

HO

O

HO

NCH3

HOH

HO

O

O

NCH3

H

O

OHOH

OHOHO

O

O

HO

NCH3

H

O

HO HO

OHOHO

HO

O

HO

NCH3

H

HO

O

O

NCH3

H

O

HO

O

HO

NH +

O–

10-Hydroxymorphine

Morphine-3ß-D-glucuronide Morphine-6ß-D-glucuronide

Morphine

Morphine N-oxide

6-Acetylmorphine

Resist encia opt imizada a la desHumectación en fases móviles 100% acuosas

En la cromatografía de fase reversa, se intenta aumentar la afinidad de una molécula polar hacia la fase estacionaria reduciendo el contenido orgánico de la fase móvil, incrementando así la retención. Bajo estas condiciones, las columnas C18 de alta funcionalización son propensas a perder repentinamente la retención si se detiene e inicia de nuevo el flujo. Esto ocurre cuando se libera la presión de la columna, provocando que la fase móvil acuosa sea expulsada de los poros del material (donde se halla la mayor parte de la superficie)*2. Si los poros permanecen in-accesibles, los analitos pasan a través de la columna sin ser retenidos. Este fenómeno se llama deshumectación de los poros. Otro indicador claro que respalda esta teoría es un cambio del marcador de volumen muerto. Las columnas Atlantis T3 fueron optimizadas con un cociente equilibrado entre el tamaño de los poros y la densidad del ligando, para reducir al mínimo la deshumectación de los poros.

*2 T.H. Walter, P. Iraneta y M. Capparella J. Chromatogr. A 2005, 075 177-183.

AtlAntis t3

exc elent e duRación de la columna a pH bajo

Cuando se exponen a fases móviles con fuerte acidez (esto es, pH < 2,0), las columnas C18 tradicionales pueden presentar hidrólisis de la fase enlazada, que da lugar a una pérdida gradual de retención, pérdida de eficiencia así como cambio de selectividad. El proceso de funcionalización T3 es resistente a la escisión del ligando gracias a una fijación trifuncional de la fase C18 a la superficie de la partícula, lo cual procura una excepcional duración de la columna a pH bajo.

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20 horas de exposición a tfa al 0,5% a 60 °c

% d

e pé

rdid

a de

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nció

n pa

ra e

l met

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aben

o

excepcional foRma de los picos

Además de la densidad intermedia del ligando, el equilibrio óptimo de forma de los picos y retención que presentan las columnas Atlantis T3 es consecuencia de la baja concentración de silanoles superficiales residuales. El proceso de recubrimiento final patentado de la T3 es notablemente más efectivo en la reacción con los sitios activos de los silanoles superficiales residuales que el trimetilsilano (TMS) tradicional, lo cual da lugar a una excelente forma de los picos y estabilidad.

1 2 34

5

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43,5

1

2

3,4

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1 2

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0 1 2 3 4 5 6 7 8 min

Atlantis® T3

Agilent Zorbax® SB-AqThermo

Thermo Hypersil Gold aQ™

Phenomenex® Synergi™ Hydro-RP

Shiseido Capcell PAK® C18 AQ

Compuestos:1. Tiourea2. 5-fluorocitosina3. Adenina

4. Guanosina-5'-monofosfato5. Timina

Atlan

tis T3

SunFi

re™ C 1

8

Pheno

mene

x® Sy

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™ Hydr

o-RP

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pcell P

AK® A

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Pheno

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x® Sy

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Atlan

tis dC 1

8

Pheno

mene

x® Aq

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YMC H

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C 18

GL Sci

ences

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sil® O

DS-SP

YMC-P

ack™ O

DS AQ

™

[ ]7

AtlAntis t3

[ ]8

minimice el Riesgo con un Rendimiento fiable de las columnas

La evolución de las prácticas correctas de fabricación actuales (cGMP) dentro de los organismos reguladores ha estimulado a las industrias farmacéu-ticas y de productos biológicos a poner en práctica principios basados en la gestión de calidad y riesgos a lo largo de todo el proceso de desarrollo farmacéutico. Con un estricto control del proceso de fabricación, Waters está posicionado de manera singular como proveedor para rebajar los riesgos asociados con la variabilidad asociada a las columnas.

Las columnas Atlantis se fabrican en nuestras instalaciones certificadas cGMP, ISO 9001 e ISO 13485 para garantizar a los científicos dedicados a la separación que los resultados obtenidos hoy serán repetibles y reproducibles año tras año.

Lote A – 5 µm

Lote B – 3 µm

Lote C – 3 µm

Lote D – 5 µm

Lote E – 3 µm

Lote F – 5 µm

Nota: el cociente de longitud de columna (L) a tamaño de partícula (Dp) fue escalado para mantener constante la resolución. Las columnas Atlantis T3 eran de 4,6 x 150 mm, 5 µm o de 4,6 x 100 mm, 3 µm.

sist emas de calidad

Las organizaciones multinacionales están limitando el número de opciones de columnas de LC disponibles para sus científicos dedicados a separaciones cromatográficas, mediante la evalua-ción previa de una serie de columnas frente a cierto conjunto de criterios de rendimiento, entre ellos la selec-tividad, la escalabilidad, la reproducibilidad, la robustez y la resistencia. Estos esfuerzos de armonización constituyen un intento de ofrecer una transferencia de métodos simplifi-cada a lo largo de toda la organización, costes de consumi-bles controlados y predecibles, así como una reducción de la diversidad de proveedores, con objeto de rebajar el riesgo.

Waters ha establecido la referencia del sector para la reprodu-cibilidad entre lotes. Como fabricante original de partículas de sílice e híbridas, los procesos de fabricación se vigilan y controlan meticulosamente para garantizar una definición coherente y completa de los materiales a lo largo de la vida útil del producto.

AtlAntis t3

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18

CondicionesSistema de LC: Sistema ACQUITY UPLC.Columna: ACQUITY UPLC HSS T3, 2,1 x 100 mm, 1,8 μmReferencia: 186003539Fase móvil A: CF3COOH al 0,15% en H2OFase móvil B: CF3COOH al 0,02% en ACN:MeOH 75:25 (v/v)Gradiente: Tiempo %A %B 0 99,9 0,1 0,5 99,9 0,1 1,7 87,0 13,0 3,6 67,0 33,0 7,5 1,0 99,0 8,0 1,0 99,0 8,5 99,9 0,1 9,5 99,9 0,1 Caudal: 0,6 mL/minInyección: 1,0 μLTamaño del bucle: 2,0 μLModo de inyección: Bucle parcial con sobrellenado de agujaTemp. de la columna: 30 °CDetección: UV @ 254 nm.Velocidad de adquisición: 20 HzConstante de tiempo: 0,2

Orden de elución TR Resolución USP 1. 4-aminofenol 0,858 - 2. Maleato 1,042 4,25 3. Fumarato 1,506 12,58 4. Fenilefrina 2,027 17,72 5. Paracetamol 2.340 10,71 6. Fenilpropanolamina 2,778 14,17 7. Feniramina 2,864 2,83 8. Doxilamina 2,939 2,62 9. Seudoefedrina 3,016 2,5110. Mepiramina 3,336 10,0811. Clorfenamina 3,622 8,9212. Bromofeniramina 3,782 4,8813. Guaifenesina 3,938 4,1114. Ácido acetilsalicílico 4,040 2,4215. 4-nitrofenol 4,310 6,3616. 4-cloroacetanilida 4,708 9,9317. Dextrometorfano 4,970 7,6918. Difenhidramina 5,022 1,6419. Clemastina 5,997 30,9520. Ibuprofeno 6,448 14,09Los picos 1, 15 y 16 son impurezas del paracetamol.

Referencia: E.S. Grumbach, D.M. Diehl, J.R. Mazzeo "Quantitation of Over-The-Counter Cold Medications Using UPLC Technology" Waters Application Note 2007, 5 pp; buscar 720002005EN en waters.com.

escalabilidad entRe platafoRmas tecnológicas

Basadas en diferentes sustratos de partículas, las columnas Atlantis T3 y HSS T3 permiten lograr una selectividad y retención similares en plata-formas tecnológicas HPLC y UPLC, facilitando la transferencia de métodos a lo largo de una organización.

la unión t3 permite la transferencia de Hplc a uplc

5

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0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 min

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0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 min

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Hplc Atlantis T3

5

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7

0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2 1.4 min

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7

80% de reducción del tiempo de análisis

uplc ACQUITY UPLC HSS T3

Compuestos Tiempo de Resolución retención (min) USP1. Citosina 2,77 -2. 5-fluorocitosina 3,58 4,563. Uracilo 3,93 1,714. 5-fluorouracilo 4,59 3,415. Guanina 5,92 7,766. Timina 7,63 11,017. Adenina 8,39 4,70

Compuestos Tiempo de Resolución retención (min) USP1. Citosina 0,34 -2. 5-fluorocitosina 0,44 5,023. Uracilo 0,48 1,504. 5-fluorouracilo 0,56 3,175. Guanina 0,80 8,166. Timina 1,25 14,657. Adenina 1,33 3,50La unión T3 permite la transferencia de métodos de HPLC a UPLC.

Selectividad similar

[ ]9

Rendimiento de las columnas t3 con la t ecnología uplc

Las columnas ACQUITY UPLC HSS T3 utilizan la misma tecnología de fase enlazada y recubrimiento final que las columnas de HPLC Atlantis T3, ofreciendo así la misma versatilidad y rendimiento para mezclas de diversos analitos, independientemente de la plataforma de separación.

[ ]12

cRomatogRafía de inteRacción HidRófila (Hilic)

La HILIC es una técnica cromatográfica alternativa que ofrece una selectividad complementaria a la fase reversa, y con frecuencia retiene especies muy polares que no pueden ser retenidas por medios tradicionales. Las columnas de sílice Atlantis HILIC han sido diseñadas para retener moléculas orgánicas demasiado polares para ser retenidas por fase reversa*3. A diferencia de las fases móviles altamente acuosas necesarias para la retención polar en las separaciones de fase reversa, las columnas de sílice Atlantis HILIC emplean fases móviles de elevada volatilidad (> 80% orgánicas) que son ideales para la respuesta y la sensibilidad de la espectrometría de masas (MS). Además, la compatibilidad directa con los eluatos de SPE altamente orgánicos aumenta espectacularmente el número de muestras que se pueden manejar, incrementando así sustancialmente el rendimiento de la separación.

*3 E.S. Grumbach et al. LCGC N. Am. 2004, 22, 1010-1023.

mejoR Ret ención paRa los compuestos polaRes

Los mecanismos de retención de la HILIC son una compleja combinación de partición, intercambio iónico y enlaces de hidrógeno, dando lugar a una retención mejorada para analitos polares*3,4. Las columnas de sílice Atlantis HILIC, utilizadas en combinación con fases móviles altamente orgánicas (> 80% de acetonitrilo), ocasionan la retención de analitos que son simplemente demasiado polares para ser retenidos por cro-matografía de fase reversa tradicional.

*4 E.S. Grumbach et al. J. Sep. Sci. 2008, 31, 1511-1518.

0 1 2 3 4 5 min

0 1 2 3 4 5 min

NH

HN

O

OHNH2N

O

fase reversaFactor de retención = 0

HilicFactor de retención = 1,1

Atlantis HILIC Silica

Alantoína

AtlAntis HiliC siliCA

las columnas estÁndaR paRa sepaRaciones Hil ic

Para obtener la mejor combinación de forma de los picos y retención, las columnas de sílice Atlantis HILIC establecen el estándar del sector para las separaciones por HILIC.

1 2

1 2 3 4 min0

12

1

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1 2 Atlantis HILIC Silica 3 μm

XBridge™ HILIC 3,5 μm

Phenomenex® Luna® HILIC 3 μm

Tosoh TSKgel® Amide-80 3 μm

SeQuant ZIC® HILIC 3,5 μm

v0 = 0.37 min

v0 = 0.35 min

v0 = 0.29 min

v0 = 0.29 min

v0 = 0.34 min

[ ]10

1. Acetilcolina (Ach) 2. Colina (Ch)

ON+

O

HON+

[ ]12

AtlAntis HiliC siliCA

Respuesta mejoRada de la espectRometRía de masas

La utilización de HILIC ha adquirido popularidad, principalmente debido a la amplia adopción de la espectrometría de masas como detector, y a la necesidad de mejorar la sensibilidad para la cuantificación de analitos polares. A diferencia de la fase reversa, que utiliza fases móviles altamente acuosas para inducir la retención, la HILIC emplea una fase móvil rica en acetonitrilo. Esta fase móvil altamente orgánica se desolvata con facilidad, permitiendo una mejora en la eficiencia de la ionización y en la respuesta de la espectrometría de masas. Por estos motivos, la HILIC se ha convertido en una técnica popular para los laboratorios bioanalíticos.

100

%

2

1

0,5 1,0 1,5 2,5

1,92

1,53

2,0 3,0 3,5 4,0 4,5 5,0 min

0

100 1,84

1

2100

1 2 3 4 5 min0

%

0

%

1,84 2,181 2

2,18

0,5 1,0 1,5 2,52,0 3,0 3,5 4,0 4,5 5,0 min

fase reversa0 – 50% ACN

HilicAtlantis HILIC Silica

95 – 50% acn

mayoR Rendimiento de anÁlisis

Cuando se utilizan métodos de extracción en fase sólida (SPE) para la limpieza de las muestras, con frecuencia se utiliza una fracción altamente orgánica, para eluir selectivamente del dispositivo los analitos de interés. Antes de inyectar esta fracción en una columna de fase reversa, hay que evaporar primero la fracción orgánica y después reconstituirla con una porción de disolvente acuoso. Estos dos pasos son frecuentemente los pasos más largos de un procedimiento de SPE. Con las columnas de sílice Atlantis HILIC, la fracción altamente orgánica se puede inyectar directamente, con lo que se elimina la necesidad de evaporación y se aumenta el rendimiento del análisis.

1.49 1.84

0

100

0.50.0 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 4.5 5.0 min

%

21

N H

HO

O H

H3C

HOCH3

CH3H3C NH

OH

OH

1. Albuterol 2. Bametan

1. Bametan

2. Albuterol

HO

HN

OH

HO

HO

OH HN

[ ]11

Elución

75 μL de IPA:ACN 60:40 con HCOOH al 2%

Lavado 1

1200 μL de MeOH al 5% en H2O

Carga 75 μL de plasma enriquecido, 75 μL de

estándar interno con NH4OH al 2%

Broncodilatador en plasma de rata

Placa Oasis® HLB μElution

Acondicionamiento/equilibrado

200 μL MeOH/200 μL H2O

Inyección directa del eluato

Elimina prolongados pasos de evaporación y reconstitución.

[ ACQUITY UPLC SYSTem ACCeSSorIeS ]

[ ]12

EstrAtEgiA dE rEtEnCión polAr

guía para retener compuestos polares

Atlantis T3

¿Retención insuficiente?

Técnica de separación alternativa, como

pares iónicos o intercambio iónico.

Si

Si

Básico Ácido o neutro

No No

Si

No

¿El compuesto polar es ácido,

neutro o básico?

Atlantis T3o

XBridge C18

¿Puede ser retenido por fase

reversa?

¿Suficiente sensibilidad para espectrometría

de masas?

Atlantis HILIC Silica o

XBridge HILIC

¿Puede ser retenido por fase

reversa?

Si

leyenda:

atlantis t3 = pH bajo (pH 3), altamente acuosa (> 95%).

xbridge c18 = pH alto (pH 10), altamente acuosa (> 95%).

atlantis Hilic silica = pH bajo (pH 3), formiato amónico 10 mM con ácido fórmico al 0,2% en 95% ACN:5% H2O.

xbridge Hilic = pH medio (pH 5), acetato amónico 10 mM con ácido acético al 0,02% en 95% ACN:5% H2O.

Cuaderno de aplicaciones de las columnas Atlantis, referencia bibliográfica 720000472EN.

Nota técnica de las columnas Atlantis T3 y ACQUITY UPLC HSS T3 , referencia bibliográfica 720001887EN.

Topics in Liquid Chromatography: Part 1. Designing a Reversed-Phase Column for

Polar Compound Retention White Paper, referencia bibliográfica 720001889EN.

Folleto de las columnas XBridge, referencia bibliográfica 720001255EN.

Folleto de las columnas OBD™, referencia bibliográfica 720002336EN.

Tabla interactiva de selectividad de las columnas de fase reversa de Waters www.waters.com/selectivitychart

Calculadora para HPLC preparativa OBD www.waters.com/prepcalculator

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Referencias bibliográficas

[ ]12

[ ACQUITY UPLC SYSTem ACCeSSorIeS ]

[ ]13 [ ]14[ ]13

Columnas analíticas Atlantis

Dimensiones Tipo Tamaño de partícula T3 HILIC Silica

1,0 x 50 mm Columna 3 µm 186003713 1860020031,0 x 150 mm Columna 3 µm 186003714 —2,1 x 10 mm Precolumna 3 µm 1860037561 18600200512,1 x 15 mm DC 3 µm — 1860020072,1 x 20 mm Precolumna 3 µm — —2,1 x 20 mm IS™ Columna 3 µm 186003715 —2,1 x 30 mm Columna 3 µm 186003716 1860020092,1 x 50 mm Columna 3 µm 186003717 1860020112,1 x 100 mm Columna 3 µm 186003718 1860020132,1 x 150 mm Columna 3 µm 186003719 1860020153,0 x 20 mm IS Columna 3 µm 186003720 —3,0 x 50 mm Columna 3 µm 186003721 1860020173,0 x 100 mm Columna 3 µm 186003722 1860020193,0 x 150 mm Columna 3 µm 186003723 —3,9 x 20 mm Precolumna 3 µm 1860037573 18600202133,9 x 50 mm Cartridge 3 µm — —3,9 x 100 mm Columna 3 µm — —3,9 x 150 mm Columna 3 µm — —4,6 x 20 mm Precolumna 3 µm 1860037583 18600202334,6 x 20 mm IS Columna 3 µm 186003724 —4,6 x 30 mm Columna 3 µm 186003725 1860020254,6 x 50 mm Columna 3 µm 186003726 1860020274,6 x 75 mm Columna 3 µm 186003727 —4,6 x 100 mm Columna 3 µm 186003728 1860020294,6 x 150 mm Columna 3 µm 186003729 1860020311,0 x 50 mm Columna 5 µm 186003730 1860020041,0 x 150 mm Columna 5 µm 186003731 —2,1 x 10 mm Precolumna 5 µm 1860037591 18600200612,1 x 15 mm DC 5 µm — 1860020082,1 x 20 mm Precolumna 5 µm — —2,1 x 20 mm IS Columna 5 µm 186003732 —2,1 x 30 mm Columna 5 µm 186003733 1860020102,1 x 50 mm Columna 5 µm 186003734 1860020122,1 x 100 mm Columna 5 µm 186003735 1860020142,1 x 150 mm Columna 5 µm 186003736 1860020163,0 x 20 mm IS Columna 5 µm 186003737 —3,0 x 50 mm Columna 5 µm 186003738 1860020183,0 x 100 mm Columna 5 µm 186003739 1860020203,0 x 150 mm Columna 5 µm 186003740 —3,0 x 250 mm Columna 5 µm 186003741 —3,9 x 20 mm Precolumna 5 µm 1860037603 18600202233,9 x 50 mm Cartridge 5 µm — —3,9 x 100 mm Columna 5 µm — —3,9 x 150 mm Columna 5 µm — —4,6 x 20 mm Precolumna 5 µm 1860037613 18600202434,6 x 20 mm IS Columna 5 µm 186003742 —4,6 x 30 mm Columna 5 µm 186003743 1860020264,6 x 50 mm Columna 5 µm 186003744 1860020284,6 x 75 mm Columna 5 µm 186003745 —4,6 x 100 mm Columna 5 µm 186003746 1860020304,6 x 150 mm Columna 5 µm 186003747 1860020324,6 x 250 mm Columna 5 µm 186003748 186002033

Kits de columnas Atlantis para validación de métodos

Dimensiones Tamaño de partícula T3 HILIC Silica

4,6 x 150 mm 3 µm 186003751 1860023154,6 x 150 mm 5 µm 186003754 1860023144,6 x 250 mm 5 µm 186003755 186002316

1 Requiere soporte para precolumnas Sentry WAT097958.2 Requiere soporte para precolumnas Sentry 186000262.3 Requiere soporte para precolumnas Sentry WAT046910.

4 Requiere conectores para cartuchos WAT037525. Uso previsto

Tipo de partícula Tipos de química disponibles Intervalo de pH Presión nominal máxima Tamaño de partícula Diámetro/volumen de poros Superficie

Características de la fase estacionaria

HPLC

Atlantis Silica T3, dC18, sílice HILIC

T3: 2-8; dC18: 3-7; sílice HILIC: 1-5 6000 psi [∼400 bar]

3, 5, 10 �m 100Å/1,0 mL/g

330 m2/g

Atlantis Prep Columns Dimensiones Tipo Tamaño de partícula T3 HILIC

10 x 10 mm PreColumnaa 5 µm 1860036951 — 10 x 50 mm Columna 5 µm 186003691 — 10 x 100 mm Columna 5 µm 186003692 — 10 x 150 mm Columna 5 µm 186003693 — 10 x 250 mm Columna 5 µm 186003694 — 19 x 10 mm PreColumna 5 µm 1860036992 1860039562 19 x 50 mm Columna OBD 5 µm 186003696 186003957 19 x 100 mm Columna OBD 5 µm 186003697 186003958 19 x 150 mm Columna OBD 5 µm 186003698 186003959 19 x 250 mm Columna OBD 5 µm 186004026 — 30 x 50 mm Columna OBD 5 µm 186003700 186003960 30 x 75 mm Columna OBD 5 µm 186003701 — 30 x 100 mm Columna OBD 5 µm 186003702 186003961 30 x 150 mm Columna OBD 5 µm 186003703 186003962 50 x 50 mm Columna OBD 5 µm 186004080 — 50 x 100 mm Columna OBD 5 µm 186004081 — 50 x 150 mm Columna OBD 5 µm 186004082 — 10 x 10 mm PreColumna 10 µm 1860037061 — 10 x 150 mm Columna 10 µm 186003704 — 10 x 250 mm Columna 10 µm 186003705 — 19 x 10 mm PreColumna 10 µm 1860037102 — 19 x 50 mm Columna OBD 10 µm 186003707 — 19 x 150 mm Columna OBD 10 µm 186003708 — 19 x 250 mm Columna OBD 10 µm 186003709 — 30 x 150 mm Columna OBD 10 µm 186003711 — 30 x 250 mm Columna OBD 10 µm 186003712 — 50 x 50 mm Columna OBD 10 µm 186004083 — 50 x 100 mm Columna OBD 10 µm 186004084 — 50 x 150 mm Columna OBD 10 µm 186004085 — 50 x 250 mm Columna OBD 10 µm 186004086 —

Descripción Referencia

Soporte para cartuchos de 10 x 10 mm 289000779 Soporte para cartuchos de 19 x 10 mm 186000709Junta tórica de repuesto, 7,8 mm, 2/paq. 700001019Junta tórica de repuesto, 10 mm, 2/paq. 700001436Junta tórica de repuesto, 19 mm, 2/paq. 700001020

Soportes para cartuchos de purificación y aislamiento

1 Requiere soporte para precolumnas preparativas de 10 x 10 mm 289000779.

2 Requiere soporte para precolumnas preparativas de 19 x 10 mm 186000709.

INformACIóN PArA PedIdoS

[ ]13

[ ACQUITY UPLC SYSTem ACCeSSorIeS ]

[ ]14

Dimensiones Tipo Tamaño de partícula T3 HILIC

10 x 10 mm PreColumnaa 5 µm 1860036951 — 10 x 50 mm Columna 5 µm 186003691 — 10 x 100 mm Columna 5 µm 186003692 — 10 x 150 mm Columna 5 µm 186003693 — 10 x 250 mm Columna 5 µm 186003694 — 19 x 10 mm PreColumna 5 µm 1860036992 1860039562 19 x 50 mm Columna OBD 5 µm 186003696 186003957 19 x 100 mm Columna OBD 5 µm 186003697 186003958 19 x 150 mm Columna OBD 5 µm 186003698 186003959 19 x 250 mm Columna OBD 5 µm 186004026 — 30 x 50 mm Columna OBD 5 µm 186003700 186003960 30 x 75 mm Columna OBD 5 µm 186003701 — 30 x 100 mm Columna OBD 5 µm 186003702 186003961 30 x 150 mm Columna OBD 5 µm 186003703 186003962 50 x 50 mm Columna OBD 5 µm 186004080 — 50 x 100 mm Columna OBD 5 µm 186004081 — 50 x 150 mm Columna OBD 5 µm 186004082 — 10 x 10 mm PreColumna 10 µm 1860037061 — 10 x 150 mm Columna 10 µm 186003704 — 10 x 250 mm Columna 10 µm 186003705 — 19 x 10 mm PreColumna 10 µm 1860037102 — 19 x 50 mm Columna OBD 10 µm 186003707 — 19 x 150 mm Columna OBD 10 µm 186003708 — 19 x 250 mm Columna OBD 10 µm 186003709 — 30 x 150 mm Columna OBD 10 µm 186003711 — 30 x 250 mm Columna OBD 10 µm 186003712 — 50 x 50 mm Columna OBD 10 µm 186004083 — 50 x 100 mm Columna OBD 10 µm 186004084 — 50 x 150 mm Columna OBD 10 µm 186004085 — 50 x 250 mm Columna OBD 10 µm 186004086 —

©2009 Waters Corporation. Waters, The Science of What’s Possible, Atlantis,

SunFire, UPLC, ACQUITY UPLC, XBridge, Oasis, IS y OBD son marcas comerciales de

Waters Corporation. Todas las demás marcas comerciales pertenecen

a sus respectivos propietarios.

720002861ES Marzo de 2009 KK-WA

Austria y exportación en Europa (Europa central sudoriental, CEI y Oriente Medio) 43 1 877 18 07

Australia 61 2 9933 1777

Bélgica 32 2 726 1000

Brasil 55 11 5094-3788

Canadá 1 800 252 4752 x2205

China 86 21 6879 5888

CEI/Rusia +7 495 3367000

República Checa 420 2 617 1 1384

Dinamarca 45 46 59 8080

Finlandia 09 5659 6288

Francia 33 1 30 48 72 00

Alemania 49 6196 400600

Hong Kong 852 29 64 1800

Hungría 36 1 350 5086

India y subcontinente indio 91 80 2837 1900

Irlanda 353 1 448 1500

Italia 02 265 0983

Japón 81 3 3471 7191

Corea 82 2 820 2700

México 52 55 5200 1860

Países Bajos 31 76 508 7200

Noruega 47 63 84 60 50

Polonia 48 22 833 4400

Puerto Rico 1 787 747 8445

Singapur 65 6273 1221

España 34 93 600 9300

Suecia 46 8 555 11 500

Suiza 41 56 676 70 00

Taiwán 886 2 2543 1898

Reino Unido 44 208 238 6100

Todos los demás países: Waters Corporation U.S.A. 1 508 478 2000

1 800 252 4752

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