1. Fundamentos del microscopio óptico1.1 El microscopio de campo claro1.2 Tinción de microorganismos para su observación almicroscopio de campo claro1.3 Microscopio de contraste de fases1.4 Microscopio de campo oscuro1.5 Microscopio de fluorescencia

2. Microscopio confocal de barrido con láser

3. Fundamentos del microscopio electrónico3.1 Microscopio electrónico de transmisión3.2 Microscopio electrónico de barrido

Observación de microorganismos

Aumento

Ninguno

Imagen visualizada

ojo

Lente ocular

Imagen intermedia(invertida respecto

a la muestra)

Lente objetivo

Muestra

Condensador

Fuente de luz

Microscopio óptico

Recorrido de la luz

Tinción de células para la observación microscópica

Extensión de una fina capa de células sobre el porta

Secado al aire

Fijación por flameado del porta

Adición del colorantelavado y secado

Se coloca una gota de aceite de inmersión sobre el porta yse observa con el objetivo de100X

Tinción de Gram

Paso 1

Paso 2

Paso 3

Paso 4

Tinción del frotisPreviamente fijado al calor,con cristal violetaDurante 1 minuto. Todas las células se tiñen de color azul-violeta.

Añadir Lugol, dejar actuar 2 minutos

Todas las células siguen de color azul-violeta.

Decolorar con alcoholLas células Gram + siguen de color azul-violeta.Las Gram negativas se decoloran.

Tinción de contrasteCon safranina 2 minutos.

Las células G+ se ven azul-violeta.

Las G- rosas o rojas.

Gram +

Gram -

Microscopio de Campo ClaroAlga verde(eucariota)

Microscopio deFluorescencia

Bacteria filamentosaTeñida con naranja de acridina

MicroscopíaConfocal por Láser

Cianobacteriafilamentosa

Microscopio de Contraste de FasesSaccharomyces cerevisiae

Microscopio láser de barrido confocal

Microscopio de fluorescenciaTinción células con sondas filogenéticas unidas a un

colorante fluorescente

Sonda filogenética Colorante fluorescente

FISH aplicado a bacterias nitrificantes de aguas residuales

Rojo: bacterias oxidadoras de amonio (NH3 → NO2-)Verde: bacterias oxidadoras de nitritos (NO2- → NO3-)

Oxidación anaerobia de metano en sedimentos marinos

Agregados de bacterias metanogénicas (rojo) rodeados por bacterias reductoras de sulfato (verde)

Cada tipo celular está teñido con un colorante filogenético (FISH) diferente

Bacterias metanogénicas

Bacterias sulfato-reductoras

Micrografía Láser Confocal de una muestra de fango de aguas residuales

Microscopio Electrónico

Transmisión

Barrido