1°Reacciones cualitativas de grupos funcionales de proteinas y aminoacidos

8/17/2019 1°Reacciones cualitativas de grupos funcionales de proteinas y aminoacidos

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LABORATORIO DE BIOQUÍMICA - UNMSM

REACCIONES CUALITATIVAS (DE COLORACIÓN) SOBRE GRUPOS FUNCIONALES DE PROTEÍNAS Y AMINOÁCIDOS

1.-Reacción de Biuret sobre el grupo peptídico.

Permite determinar la presencia de enlaces peptídicos en una muestra. Los polipéptidosen solución alcalina con sulfato de cobre (II) forman compuestos complejos de cobre de

coloración azul violeta con matices rojizo o azulado, la intensidad de la cual depende

del número de enlaces peptídicos en la molécula.

Resultados:

ubo (!), con "licina #e tornó de un color verde diluido. $eacción ne%ativa.

La %licina no reaccionó con el reactivo de &iuret

por'ue est en forma libre no *a enlaces peptídicos

con los 'ue pueda reaccionar este reactivo.

ubo (+), con voalbúmina #e tornó de un color violeta intenso. $eacción positiva.

Ejemplo:

2.- Reacción de la ninhidrina sobre el grupo -amino.

Permite identificar la presencia de proteínas aminocidos libres. -l %rupo /amino de

los aminocidos al reaccionar con la nin*idrina (*idrato detriceto*idrindeno) forma

complejos de color azul/violeta.

Ejemplo:

ubo (!), ovoalbúmina #e tornó de color azul. $eacción positiva.

ubo (+), / alanina #e tornó color violeta. $eacción positiva.

ubo (0), 1 / alanina 2o se realizó puesto 'ue no se contaba con este

reactivo. Pero por teoría se sabe 'ue *a reacción

ne%ativa.

Reactiv

o

agitacióVioláceo

Clara de


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Ejemplo:

a.- Reacción Xantoproteica sobre el anillo aromático de aminoácidos cíclicos

-sta prueba caracteriza a los aminocidos aromticos. Los aminocidos reaccionan con

cido nítrico concentrado forman nitrocompuestos de color amarillo. La reacción

3antoproteica es característica para la fenilalanina, tirosina triptófano dandonitrocompuestos de color amarillo.

Resultados:

ubo (!), con voalbúmina #e tornó de un color amarillo. $eacción positiva.

ubo (+), con 4enilalanina #e tornó de un color amarillo. $eacción positiva. ubo (0), con irosina 2o *ubo reactivo. Pero por teoría *a reacción positiva.

ubo (5), con 6istidina 2o *ubo reactivo. Pero por teoría *a reacción ne%ativa.ubo (7), con "elatina 2o se realizó. Pero por teoría se sabe 'ue como la

%elatina no contiene aminocidos aromticos entonces

la reacción ser ne%ativa.

Ejemplo:

Ninhidrina

Violáceo

Δ Violáceo

α - alanina

VioláceoΔ

HNO3

Δ

Blanco

Amarillo

Clara de


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b. Reacción de millón sobre la tirosina

Permite identifcar la presencia de tirosina en una muestra. La mecla de

nitrito ! nitrato merc"ricos ! de ácido n#trico$ %reactivo de &illón' reaccionacon este aminoácido (ormando una sal de color ro)o-purpura.

Resultados:

ubo (!), con voalbúmina Produce un precipitado blanco 'ue pro%resivamente por

acción del calor se torna rojo. $eacción positiva.

ubo (+), con irosina 2o *ubo reactivo. Pero por teoría *a reacción positiva.

ubo (0), con 4enilalanina #e tornó transparente. $eacción ne%ativa

ubo (5), con "elatina 2o se realizó. Pero por teoría se sabe 'ue *abr reacción

2e%ativa. 8a 'ue la %elatina carece de aminocidos como tirosina triptófano.

Ejemplo:

HNO3

Blanc

Amarill

Amarill

o

pálido

Δ

Ba*o

&ar#a

+irosina NaOH

Anaran)a

,o)o

Reactiv

o

Clara de


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c. Reacción de Hopkins-Cole (Adamkiewicz sobre el triptó!ano

s una pruea estándar para el triptó(ano ! para las prote#nas /ue

contienen triptó(ano. 0n anillo entre violeta ! ro)o en la unión de los dos

l#/uidos indica /ue la reacción es positiva.

Res"ltados#

ubo (!), con voalbúmina 9parición de un anillo violeta rojizo. $eacción positiva.

ubo (+), con riptófano Aparición de un anillo violeta ! ro)o en la uniónde los dos

l#/uidos.,eacción positiva.

-jemplo:

d. Reacción de $ol% sobre amino&cidos '"e contienen az"!redbilmente "nido (ciste)na* cistinal m1todo está asado en la capacidad /ue tienen en sus aminoácidos /uecontienen au(re$ de (ormar por calentamiento en medio alcalino$ sul(uro desodio$ el mismo /ue con plumito de sodio da un precipitado de color negro

o pardo.

Resultados:

+uo %2'$ con 3voal"mina La solución se torna pardo oscura. ,eacción

positiva.

3servación4 La ovoal"mina es rica en ciste#na ! metionina ! presenta

grupos sul(h#dricos

+uo %5'$ con Ciste#na 6ormación de un precipitado negro. ,eacción

positiva.

+uo %7'$ con &etionina

6ormación de un precipitado negro. ,eacciónpositiva.

Ejemplo:

Blanco

Violáceo

Pard

+res (ases

Clara

de

NaOHAc+,b

8isolución

total 9ncoloroBlancoClara de


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e. Reacción de amino&cidos '"e contienen az"!re con nitropr"siato

de sodio.

:e asa en la capacidad del sul(uro de sodio$ otenido por hidrolisis alcalina

de aminoácidos /ue contienen au(re$ de (ormar con nitroprusiato de sodio

un compuesto comple)o coloreado de color ro)o violeta.

Res"ltados#

+uo %2'$ con 3voal"mina 6ormación de comple)o ro)o-violeta. ,eacción

positiva.

3servación4 La ovoal"mina es rica en ciste#na ! metionina ! presenta

grupos sul(h#dricos

+uo %5'$ con Ciste#na 6ormación de comple)o ro)o-violeta. ,eacción

positiva.

+uo %7'$ con &etionina 6ormación de comple)o ro)o-violeta. ,eacción

positiva.

Ejemplo:

!. Reacción de AA/0CH1 (caracter)stica de las 2"anidinas como la

ar2inina

l m1todo se asa en la reacción de coloración de la arginina en medio

ásico con α-na(tol ! en presencia de un o;idante. :e desarrolla un color

anaran)ado-ro)io.

Res"ltado#


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n un solo tuo4 :olución anaran)ado ro)ia. ,eacción positiva.

2. ,r"eba de ,a"l% (caracter)stica de la histidina

:e asa en la capacidad de la histidina de reaccionar con el ácido

diaoencensul(ónico para (ormar un compuesto de color intenso ro)o-

guinda.

Res"ltado#

:olución de color intenso ro)o-guinda. ,eacción positiva.

HrO 4-NaOH

9ncoloro9ncoloroArginina

,o)o


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7A8A R6096N :6 R6087A:O 7RAA;A:O 6N 68 8AORA7OR1O

1 C ?

2 al"mina > > > > > > >

5 Arginina >

7 +irosina > >

? triptó(ano > >

@ istidina - >

6enilalanina > -

Ac.

Aspártico

D &etionina > >

E Ciste#na > >

2F Lisina

22 α-alanina >

25 β-alanina -

27 Leucina

2? :erina


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!E"#$%&'R$%

@. C"&les son los amino&cidos b&sicos* &cidos % ne"trosB

'minoácidos neutros:

O

NH3+

CH3

O-

Alanina

O

O

NH2

NH3+

O-

Asparagina

O

NH3+

SH

O-

Cisteína

O O

NH2

NH3+

O-

Glutamina Glicina

ONH3

+

O-

O

NH3+

CH3

CH3O-

Isoleucina

O

NH3+

CH3

CH3

O-

Leucina

O

NH3+

SCH3

O-

Metionina

O

NH3+

O-

Fenilalanina

ON

+

O-

H

H

Prolina

O

NH3+

OH

O-

Serina

O

NH3+

OH

CH3O

-

reonina

O

NH3+

NH

O-

ript!"ano

O

NH3+

OH

O-

irosina

O

NH3+

CH3

CH3

O-

#alina


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'minoácidos ácidos:

O

ONH3+

O-

O-

$ci%o asp'rtico

O O

NH3+

O-

O-

$ci%o glut'mico

'minoácidos básicos:

NHO NH

NH3+

NH3+

O-

Arginina

ONH3

+

NH

N

O-

Histi%ina

O

NH3+

NH3+

O-

Lisina

2. (uáles son los aminoácidos esenciales)

Los seres *umanos pueden sintetizar apro3imadamente la mitad de los aminocidos

'ue forman las proteínas, el resto de aminocidos, denominados aminocidos

esenciales, *an de ser in%eridos en la dieta. Los diez aminocidos esenciales son los

si%uientes:

9r%inina (9r%) reonina (*r)

Lisina (Ls) ;alina (;al)

4enilalanina (P*e) riptófano (rp)


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?#/26+, /?(26)26+/, /?6+/26+,

?$6/26+, /?66?6+/26+ >?626+/?6+6. Los aminocidos 'ue dan

resultado positivo con el reactivo de &iuret contienen un %rupo amino bsico un

%rupo carbo3ilo cido@ es decir, son bifuncionales , por lo tanto, su valor como

blo'ue de construcción proviene del *ec*o de 'ue se puede unir en %randes cadenas

formando enlaces amida entre el 26+/ de un aminocido el >?+6 del otro,formndose los péptidos (menos de 7A aminocidos) o proteínas (para cadenas ms

lar%as). Los aminocidos constituentes se consideran como residuos terminales 'ue

en ambos e3tremos son diferentes a todos los dems , adems, distintos entre sí:

uno, el 2/terminal, contiene un %rupo amino alfa libre el otro, el residuo ?/

terminal, contiene un %rupo carbo3ilo alfa con respecto a la unión peptídica, también

libre.

-n medio fuertemente alcalino, los %rupos peptídicos de los polipéptidos pasan a la

forma enólica, en la 'ue interaccionan con el ión ?u (II), formando el complejo

coloreado de &iuret (color rojo). ?on los aminocidos libres %eneralmente dan

reacción ne%ativa, a e3cepción de los aminocidos *istidina, serina, treonina

aspara%ina, los cuales, en solución a altas concentraciones, pueden formar el

complejo coloreado de &iuret ?u (II).

0. (En /u, se undamentan las reacciones de coloración de los aminoácidos)

#e fundamentan en la fuerte absorbancia de la luz característica a una determinada

lon%itud de onda de la maoría de proteínas. La molécula de aminocido al absorber

la luz mediante la captación selectiva de una lon%itud de onda, reflejar el color

característico para su inmediata identificación cualitativa.

?ual'uier %rupo funcional (o asociación de %rupos) responsable de la absorción,

%eneralmente debido a la presencia de enlaces múltiples conju%ados, recibe el

nombre de cromóforo. La modificación de la lon%itud de onda o la absorbancia

molar podría ser también por la e3istencia de %rupos au3ócromos, 'ue son

sustituentes 'ue no son cromóforos en sí mismos pero 'ue estn unidos a %rupos

cromóforos.


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Las bandas de absorción pueden desplazarse *acia menores frecuencias o maores

lon%itudes de onda (desplazamiento batocrómico) o desplazarse *acia maores

frecuencias o menores lon%itudes de onda (desplazamiento *ipsocrómico).

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