3M™ FOOD SAFETY™

3M™ Petrifilm™ MétodosMicrobiológicos

3

METODO TRADICIONAL

Cuenta estándar en placa

Número más probable

4

1. Pesar medio de cultivo en polvo

Método tradicional o convencional de análisis

5

2. Agregar agua, disolver y hervir

6

3. Esterilizar en autoclave

7

4. Atemperar el medio a 40-45°C

5. Preparar la muestra a analizar

8

6. Adicionar el medio a la muestra

La muestra debe estar previamente colocada en una caja de Petri.

9

7. Incubar a tiempo y temperatura según la prueba

10

8. Hacer recuentos y calcular resultado.

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Medios de Cultivo

Preparación

• Errores en su preparación :

- Sobrecalentamiento, que trae como consecuencia:

- hidrólisis del agar

- caramelización de carbohidratos

- alteración de pH

- alteración de inhibidores

- precipitación de componentes

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TIEMPO

CONTAR

INCUBAR

INOCULAR

PREPARAR

MUESTRAS

PREPARAR

MEDIOS

LIMPIAR

MATERIALES

40%

60%

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METODO TRADICIONAL VS PETRIFILMTM

CONTAR

INCUBAR

INOCULAR

PREPARAR

MUESTRAS

PREPARAR

MEDIOS DE CULTIVO

LAVAR Y ESTERILIZAR

MATERIAL

40%

60%

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Inoculación Incubación Lectura

Análisis Microbiológicos en 3 pasos...

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Certificado de Calidad 3MPetrifilmMEDIO Placas Petrifilm

TM E. coli /Coliformes (6404/ 6414)

CERTIFICADO DE REGISTRO BSI NUMERO FM 14552 (de acuerdo con ISO 9002 / EN 29002:

BS 5750 : Parte 2 : 1987)

FECHA DE EXPIRACION / NUMERO DE LOTE Expiración y numero de lote indicado en cada paquete. El numero de lote esta indicado en cada placa

FORMULACION Nutrientes de bilis y rojo violeta. Gel soluble en agua fría,

indicador de tetrazolium, indicador bromo-cloro-indolil-beta-D-glucurónido.

METODO DE PREPARACION Nutrientes y geles recubiertos sobre films. Para usarlas

hidratar con 1 ml de muestra acuosa ó dilución de la

muestra. Ver información contenida en el paquete para instrucciones detalladas.

CHEQUEO DE CONTAMINACION Minimo 85 placas probadas por lote

Incubadas a 32°C por 24 horas Plan Columbia de muestreo secuencial

CHEQUEO DE EFICACIA Los organismos de prueba incluyen, entre otros:

Organsimo Resultado Lote aceptable

Escherichia coli ATCC 51813

Enterobacte amnigenus ATCC 51816

Enterococcus faecalis ATCC 14506

Colonias azules con gas

Colonias rojas con gas

No crecimiento

Recuentos no menores a 3

desviaciones estándar por debajo de

la cuenta con agar VRB

POSICIONAMIENTO PLACAS PETRIFILM

TM

Ventajas:

• No se somete la muestra a "shock térmico"

Beneficios:

• Reducción en la variación de resultados

• Cuentas bacterianas mas confiables.

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POSICIONAMIENTO PLACAS PETRIFILM

TM

Contrucción en película Laminada

Ventajas:

• Compactas

• Apilables

• Materiales ligeros y seguros

Beneficios:

• Requieren menor espacio en incubación y almacenaje.

• Fácilmente transportables para muestreos en planta.

• Menor volumen de desperdicio y costos de tratamiento.

• Mejor manejo de inventarios

• Mayor espacio disponible en el autoclave

POSICIONAMIENTO PLACAS PETRIFILMTM

Presencia de Indicadores Químicos

Ventajas:

• Colonias coloreadas

• Indicador beta-glucuronidasa

• Indicador fosfatos

Beneficios:

• Fácil de leer colonias puntiformes.

• Diferenciación entre

colonias/partículas.

• Identificación de E. coli.

• Distinción de mohos/ levaduras.

POSICIONAMIENTO PLACAS PETRIFILMTM

Contrucción en película Laminada

Ventajas:

• Capacidad para ver producción de gas.

Beneficios:

• Mayor predicción del valor

de coliformes, E. coli y

acidolácticas.

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22

Placas Petrifilm en General

Tecnología

• Film

• Adhesivos

• Capas

23

3MTM PetrifilmTM

Estructura de una Placa Petrifilm

24

PETRIFILM RAPIDA MOHOS Y LEVADURAS

25

26

PLACA RÁPIDA DE AEROBIOS

27

Un tinte indicador de color rojo y azul colorea las

colonias. Contar todas las colonias indiferentemente de

su tamaño o intensidad de color

28

29

PLACA PETRIFILM ACIDO LACTICAS

3M ™ Placa Petrifilm diseñada para recuperar cuantitativa de bacterias ácido lácticas (LAB organismos) de descomposición (Streptococcus, Lactococcus, Leuconostoc, Pediococcus y Lactobacillus) en un incubador aeróbico equivalente a la recuperación en agar MRS

30. All Rights Reserved.15 December 2016© 3M 3M Confidential.

Petrifilm LAB Traditional AgarMRSAPT

Petrifilm AC Procedures

bioMerieux Tempo Neogen Soleris(BioLumix)

Competitive Dry Film Products

TTR

(negative result)2 days 2-3(5*) days 2-3 days 40-48 hours

2 days

(<100 cfu)

None

TTR

(early alert + result)TBD N/A N/A N/A

30-35 hours

(<100 cfu)

Differentiate homo-

/heterofermentersYes No Yes No No

Consumables -PF Plate-Agar Plate

-Gas Pak

-PF PAC-2X MRS+/-CPR Diluent

-Gas Pak*

-Tempo Reagents

-Tempo Card

-Soleris Direct Vials

-Soleris Lactic Media

-Tryptone Broth

-Kovac’s reagent

Pain Points for Customers-Incubator Space

-Media Prep/Qualify

-Gas Paks

-Diluent Ordering/Prep

-Interpretation

-Gas Paks*

-Cost-Qualitative result

-Cost

Estimated

Market ShareN/A 94.5% 2.5% 2.0% 1.0%

Petrifilm BAL - competencia

AOAC PTM and OMAAOAC PTM and OMA ISO 16140

3M está en búsqueda de aprobaciones de métodos reconocidas globalmente.

Aprobaciones del Método

32

33

Técnicas y Fundamentos para

el monitoreo rápido de

Ambientes

34

• Monitoreo de Aire

- Impactación

- Exposición

• Método de contacto directo

- Placas Petrifilm

- Placas Rodac

• Método de Arrastre

- Esponjado

- Enjuague

- Hisopado

3MTM PetrifilmTM

35

3M™ Quick SwabHisopo autocontenido listo para

usar.

Inocula 1.0 mL de muestra, elimina

el uso de pipetas.

Hisopo de 5 pulgadas de largopermite llegar a puntos de díficil

acceso.

Caldo de letheen ayuda a

neutralizar el sanitizante residual.

Puede ser usado en superficies

secas o húmedas

Método de Arrastre

Hisopado

3M Health Care AcademySM

3M™ MDS™ Sistema de Detección Molecular de Patógenos

2015

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Tecnología Central

Amplificación

IsotérmicaDetección por

Bioluminiscencia+

Una innovadora combinación de tecnologías que proporcionan mejoras

en velocidad, precisión, facilidad de uso costo-efectivo.

Una innovadora combinación de tecnologías que proporcionan mejoras

en velocidad, precisión, facilidad de uso costo-efectivo.

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¿Cómo funciona?Amplificación Isotérmica de ADN

•Múltiples iniciadores reconocen diferentes regiones del genoma

•Una ADN polimerasa con desplazamiento de cadena

•Amplificación eficiente, rápida y continua del ADN objetivo

Detección por Bioluminiscencia

•Generación exponencial de pirofosfato como subproducto de la

amplificación de ADN

•Conversión de Pirofosfato en Adenosine Tri Phosphate (ATP)

•Luciferasa termoestable que utiliza ATP para generar luz

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¿Cómo funciona la prueba?

ATP

Luciferinluciferasa

Bioluminiscencia

40

Componentes del Sistema 3M™ de Detección Molecular

Incluido con el modelo MDS100

Equipo

Calentador interno del equipo

Cable USB y cable de alimentación

Hoja de seguridad/Guía de instalación

Software

Kit básico de accesorios *

* Contenido del Kit Básico de Accesorios

Bandeja de carga rápida

Bloque de enfriamiento y bandeja para bloque de enfriamiento

Herramienta para abrir/cerrar – tubos de Lisis y Reactivos

Gradilla vacía para tubos de lisis y Reactivos

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3M™ MDS™ Sistema de Detección Molecular de Patógenos

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3M™ MDS™ Sistema de Detección Molecular de Patógenos

3M Innovación – Tubos de Reactivos de Colores

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3M™ MDS™ Sistema de Detección Molecular de Patógenos

Salmonella: Verde

Listeria: Azul

Listeria monocytogenes: Amarillo

E. coli O157 (incluye H7): Rojo

Cronobacter: Rosa

Control de Matriz: Incoloro

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Día 1

Día 2

Enriquecimiento de la muestra

Hidratación del Pellet de Reactivos: Transferir 20 uL de muestralisada a los tubos de reactivo

Amplificación y Detección: Colocar lostubos en el instrumento. Presionar “Inicio”

Amplificación en 75 min. Resultados con código de color en tiempo-real

1

2

3

Configuración del Protocolo de Ensayo: Dividido en 3 partes

Assay

set up

Lisis: Transferir 20 uL de muestra al tubo de lisis.Calentar 100°C-15 min. Enfriar 5-10 min. a temperature ambiente

Ensayo Completo

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Sistema para

Monitoreo

Rápido

de Higiene

3MTM Clean TraceTM

47

En que se basa?

• En la medición indirecta de materia orgánica a partir de la detección de ATP

• Que es el ATP: adenosina trifosfato o ATP, constituye la fuente principal de energía utilizable por las células para realizar sus actividades

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Luciferin/Luciferasa (L/L)

En las células, el ATP pierde uno o más fosfatos para liberar energía.

Luciferasa de las luciérnagas utiliza esta energía para producir LUZ.

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Relación simple

Aumento de microorganismos o restos de alimentos

Aumento de los niveles de ATP

Aumento de las Unidades Relativas de Luz (URL)

NUESTRO NUEVO LUMINÓMETRO

50

51

52

Se estima que el 70% de la contaminación de los alimentos

se produce por una mala higienización de las superficies

asociadas a su producción y expendio.

3M MLS II – Sistema de Bioluminiscencia Microbiana para bebidas UHT

Principio del Test

ATP está presente en todas las celulas vivas y por eso puede ser usado como un marcador de contaminación biológica.

ATP - Tecnología de Bioluminiscencia

Adenosina

TRI-fosfato

oxígeno

Adenosina

MONO-fosfato

Para la medida de Bacterias y otros Microbios en la Leche usando ATP, hay un

problema…

Las vacas son seres vivos y sus fluidos corporales (como la LECHE) tienen ATP

Como medimos solo el ATP de los microbios y no el ATP de las vacas?

Respuesta: Nos deshacemos del ATP de la Vaca usando otra enzima llamada ATPasa…dejando ATP

microbiano para reaccionar con la Luciferasa

Diferentes fuentes de ATP

� Kit de ensayo: ATPasa, Extractante, Complejo LL1

� Kit de Limpieza

� Kit de Mantenimiento

� Kit de Control

� Micro pozos

El ensayo UHT

ATPase ATPase

Extractant Extractant

LLLL

A

AA

AAA

A

A

AA

A

A

A

Muestra

Limpia

Muestra

Contaminada

El ensayo UHT

• Cargue 50 microlitros de muestradentro de los micro-pozos

• El instrumento:1) Adicionará ATPasa para remover el ATP

de las Vacas (No puede romper las paredes celulares de losmicroorganismos)

2) Incubará 15 minutos para dar tiempo a la ATPasa para trabajar

3) Adicionará el Extractantante para abrirlos microbios, liberando su ATP

4) Adicionará Luciferase/Luciferin (LL1) para reaccionar con el ATP microbiano.

5) Medirá la luz de la reacción LL1-ATP

30 RLU

Pasa

9735 RLU

NO PASA

3M MLS II – Sistema de Bioluminiscencia Microbiana para bebidas UHT

Respuesta 48 – 72 horasvs. 10 dias para analisis de esterilidad commercial.

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Preguntas ???

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