Absorcin y elusin de anticuerpos
ABSORCIN Y ELUCIN DE ANTICUERPOSI.-ABSORCIN: la muestra problema
es el plasma del paciente con mezcla de anticuerpos.
las clulas para absorber los anticuerpos, son glbulos rojos con
antigenicidad conocida (comercial o preparadas en cada
laboratorio)Esta tcnica busca separar mezclas de anticuerpos del
plasma de un paciente que este sensibilizado con varios
aloanticuerpos o que posea una combinacin de aloanticuerpos ms
autoanticuerpos. El mecanismo para hacer esto es mediante el uso de
clulas con antgenos conocidos que puedan atraer alguno de los
anticuerpos presentes en la mezcla y dejar otros libres para
posteriormente poder identificar cada uno de ellos.Uso de la
absorcin Inactivar autoanticuerpos fros o calientes, a fin de
permitir la evaluacin de aloanticuerpos, los que pueden ser
enmascarados por los primeros. Fundamento: en anemias hemolticas
por anticuerpos fros es muy potente la reaccin de los anticuerpos,
ya sea en el plasma o en los glbulos rojos del mismo paciente y es
muy difcil compatibilizar transfusiones. En algunos de estos casos,
adems existen mezclas con aloanticuerpos de significancia clnica
que estn siendo enmascarados por la fuerza de la aglutinacin de las
aglutininas fras, entonces, se tiene que brindar un medio en que
los anticuerpos fros se peguen a glbulos rojos y dejen en el resto
del plasma, los otros anticuerpos (si es que los hubiere), de esta
forma, se puede identificar y realizar las pruebas de
compatibilidad sin interferencia. Extraer anticuerpos A y B de
sueros que sern usados como reactivos inertes. Fundamento: en
algunas ocasiones se necesita trabajar con plasma inerte, si se
tiene un plasma AB, ste podra servir como plasma inerte, ya que no
tiene los anticuerpos A y B, pero en caso de no disponer, se puede
absorber estos anticuerpos naturales sobre clulas que expresen el
antigeno A o B segn corresponda y obtener as, un plasma libre de
anticuerpos para poder usarlo como reactivo inerte o como control
negativo en laboratorio de rutina. Para separar muestras con
mezclas de anticuerpos en plasma o eluados. Fundamento: si aparece
un rastreo de anticuerpos irregulares positivo y luego de intentar
identificar estos anticuerpos nos damos cuenta que aparentemente se
est en presencia de una mezcla de anticuerpos y no se puede
identificar por descarte cada uno de ellos, se puede absorber
alguno de los anticuerpos posibles, frente a clulas que tengan
alguno de los antgenos a los que sospechamos estn dirigidos alguno
de los anticuerpos de la mezcla, de esta forma, intentamos dejar un
solo anticuerpo en el plasma del paciente para poder identificar.
En el caso del eluado (procedimiento contrario a la absorcin), es
decir, cuando hemos separado anticuerpos que estaban pegados a
clulas problema y queremos saber contra qu estn dirigidos, los
enfrentamos a clulas con antgenos conocidos para que se peguen a
ellas y comprobar as su especificidad.Procedimiento general:
Elegir g rojos que expresen el antgeno sobre el cual sospechamos
est dirigido el anticuerpo. Lavar 3 a 4 veces con PBS. (verificar
que estas clulas no estn sensibilizadas previo a la absorcin
haciendo un C directo) En el ltimo lavado extraer el sobrenadante
con una pipeta para no perder clulas por inversin, adems a este
sobrenadante se le debe enfrentar con clulas testigos A y B para
comprobar que no tenga anticuerpos anti A o B, seguir con los
lavados hasta que este paso d negativo.
Agregar la muestra del paciente (plasma con mezcla de Ac) en
igual volumen a las clulas que tenemos lavadas, mezclar suavemente
por inversin. (Ej: 1ml GR lavados + 1ml Plasma problema).
Incubar por 30 a 60 minutos
a la temperatura ptima del anticuerpo a absorber. Mezclar cada
cierto tiempo Centrifugar por 5 minutos a altas revoluciones (ej:
3000 rpm)
Trabajar con el plasma haciendo un Coombs indirecto para probar
que el anticuerpo que se sospechaba se peg a las clulas.
Se puede hacer un C directo para comprobar la sensibilizacin de
las clulas(absorcin)
II.- ELUCION
De forma habitual, las tcnicas de elucin y absorcin son
utilizadas en conjunto para resolver problemas en laboratorio de
inmunohematologa. El objetivo de toda elucin es interferir con las
fuerzas no covalentes que mantienen unido el complejo Ag-Ac. Estas
interferencias pueden ser fsicas (calor, ultrasonido,
congelamiento, descongelamiento, detergentes, etc.), o una accin
qumica directa sobre las fuerzas de unin del complejo Ag-Ac,
usando, por ejemplo, alteracin de Ph o concentraciones de sal.USOSu
mayor uso se desarrolla en estudios donde se necesita remover Ac
pegados al glbulo rojo, para luego utilizarlos con diferentes
fines, ejemplo:
Diagnstico en laboratorio de la destruccin inmune de
eritrocitos, ya sea por presencia de aloanticuerpos o
autoanticuerpos. Purificar anticuerpos de grupo sanguneo Detectar
antgenos dbiles Concentrar anticuerpos Retirar anticuerpos de una
mezcla de ellos Dejar eritrocitos libres de Ac que puedan estar
interfiriendo en la tipificacin sangunea (muestras con Coombs
directo 4+)CONSIDERACIONES
El tipo de anticuerpo que se desea eluir nos dir que tipo de
elucin utilizar al momento de intentar trabajar con una muestra en
particular.
Elucin por calor
Se aplica preferentemente en el estudio de la enfermedad
hemoltica del recin nacido por incompatibilidad ABO, y en la elucin
de anticuerpos IgM de los eritrocitos (Ejemplo: enfermedad por
aglutininas fras).
En cada mtodo la solucin salina sobrenadante del ltimo lavado se
analiza en paralelo con el eludo, para determinar si la reactividad
encontrada en ste ltimo representa la recuperacin de anticuerpos de
la superficie clular, o es el resultado de la contaminacin por
suero residual.
Elucin por cloroformo
Se usa en el estudio de un Coombs directo positivo asociado a
anticuerpos reactivos en caliente (IgG), ya sean auto o
aloanticuerpos. En conjunto con tcnicas de absorcin, sirve para
separar mezclas de anticuerpos IgG presentes en un suero.
Elucin cida
Se usa en estudios similares a la elucin por cloroformo, es
decir, para separar anticuerpos de tipo IgG que estn pegados a
glbulos rojos.
