Alfafetoproteina en Pediatria*

Drs. Liliana Rebolledo"*, Benito Gonzalez*** yRicardo Sorensen****

La alfafetoprotefna (AFP) es la fracci6n ma-yor de las protefnas sericas del embrion y es laprimera de las globulinas alfa que aparece enel suero de los mamiferos. Fue descubiertapor Pedersen, en 1944, en el suero de bovi-nos; ma's tarde Bergstrand encontr6 unaproteina similar en el feto humano y Tatari-nov la describi6 en la sangre del cordon.

Estudios posteriores demostraron que la"fetuina" de Pedersen era una mezcla de 2proteinas: una, de movilidad alias—betaT, yla otra de movilidad alfai, la unica realmenteembrionaria. La Organizackm Mundial de laSalud (OMS) ha propuesto desde 1970 ladenominacidn de alfai—fetoproteina. Tieneun PM de 64 000 a 70 000 y una constantede sedimentacion de 4,5 a 5 S. (1)

Se sintetiza en las ceTuIas del parenquinahepatico, en el saco vitelino y en una pequenacantidad, en el tracto gastrointestinal fetal.Desde que en 1960 Yalow y Berson aplicaronel metodo del radioinmunoanalisis al dosagede esta proteina se ha podido tener un mejorconocimi^nto de sus propiedades fisiologicasy pai icas. Asi, se ha comprobado que

*Presentado como Relate Oficial en las V Jorna-das Anuales de la Sociedad Chilena de Pediatria,Lo Barnechea, 1975.

**Q.F. Unidad de Inmunologia Hospital Luis Cal-vo Mackenna. Laboratorio de Investigaci6n, Depar-tamento Pediatrfa, U. de Chile.

***Unidad de Inmunologia Hospital Luis CalvoMackenna.

*** "Unidad de Inmunologfa Hospital Luis CalvoMackenna. Departamento de Inmunologia InstitutoBacteriologico de Chile.

existe AFP circulante en adultos normales enconcentraci6n estable siempre inferior al10 ng/ml, con una cifra promedio de 2,5ng/ml. (2)

Mediante me*todos de mediana sensibilidad,generalmente formaci6n de inmunoprecipita-dos en gel de agar, no se detecta este antfgenoen sujetos normales, pero si en recie*n nacidosy en portadores de hepatomas, cancer primi-tivo del higado, y teratomas ovaricos y tes-ticulares, tal como lo describieron Abelev ycolaboradores. Estos autores demostraron lareaparicion de esta proteina fetoespecifica enel suero de ratones portadores de hepatomasinducidos por cancerigenos quimicos. (3)

Normalmente, AFP se detecta en el em-brion de 7 semanas. Su nlvel se eleva hastaunos 300 mg% a las 13 semanas y luegodeclina linealmente hasta encontrarse alrede-dor de 7 mg% en el recien nacido de tdrmino.En prematuros se alcanzan cifras de 30 a 90mg%. La presencia de AFP en el feto esuna medida de sfntesis y madurez fetal, esta-bleci^ndose una relaci6n inversa entre losntveles s^ricos y la edad gestacional, conrra-riamente a lo que sucede con inmunoglobuli-na G y albumina, cuyos niveles se elevan amedida que la edad gestacional aumenta. (4)

Durante el embarazo AFP aumenta en elsuero materno; se piensa que su presenciaderiva del feto por la correlaci6n que existecon los niveles de este y la cafda brusca dela concentraci6n despues del parto. Brock ySutcliff, (5) en 1972 demostraron que AFPaumenta en el liquido amni6tico en fetos condefectos neurol<5gicos. Basados en esta expe-

Rev. Chilena de Pediatn'a, Vol. 47, N? 3, 1976

riencia, Harris y colaboradores (6) encontra-ron que esta proteina se encuentra elevadaen asociacion con anencefalia y espina bifida,lo que permite su diagnostico precoz. Elhecho de que niveles se"ricos maternos eleva-dos no ocurren en ciertos casos, aun cuandosu nivel en Ifquido amni6tico este" aumentado,induce a concluir que el diagn6stico debereferirse segun los niveles en este ultimo.

Desde hace 2 anos hemos aplicado elmetodo de Inmunoelectroforesis cruzada paradetectar AFP en diversos tumores de ninescontrolados en el Servicto de Oncologfa delHospital Luis Calvo Mackenna.

Nuestra casuistica confirma los resultadospublicados por otros autores, corno asimismolas determin a clones efectuadas en hepatitisneonatal, en las que tambien se ha descritola presencia anormal de esta fetoprotei'na, noencontrandose, en cambio, en atresia de vfasbillares, lo que permitin'a una diferencia-cion. (7)

Sangre obtenida sin anticoagulante. El suerose separo por centrifugacion y se guardo enfreezer a —20?C hasta el memento de anali-sis.

Antisuero de conejo, monoespecifico, anti-alfafetoprotema humana.

Alfafetoprotema como control positive.(Ambos sueros se obtuvieron en el Depar-

tamento de Inmunologfa del Instituto Bacte-rio!6gico de Chile).

Gel agar-agarosa: Agar 0.625 g% y Aga-rosa 0.425% en Buffer Veronal 0.05 M. pH8.20.

Metodo: Inmunoelectroforesis cruzada enBuffer Veronal 0.05 M. pH 8.20 con 6 mA.por cada portaobjetos conteniendo 3 ml dela mezcla del gel.

Gruvos estudiados:

1) Un grupo control de 120 ninos desde RNhasta 4 meses de edad distribuidos en laforma siguiente: prematures menores de1 mes: 22; prematures mayores de 1mes: 5; RN de termino: 19; lactantesde 1 raes: 11; lactantes de 2 meses: 18;lactantes de 3 meses: 26; lactantes de 4meses: 19.

2) Un grupo de lactantes menores con pa-tologfa hepatica: hepatitis neonatal: 4,y atresia de vias biliares: 3.

3) Un grupo de ninos con diversos tumo-res: hepatomas: 4; teratomas y terato-carcinomas: 8; otros tumores s61idos:14.

RESULTADOS

En este estudio se aproveeho la movilidadclectroforetica alfat de esta protema quepermite su detecci6n cualitativa por Inmuno-electroforesis cruzada frente a su antisueromonoespecifico.

Utilizando un control positive del Institu-to Bacteriol6gico de Chile, en concentraci6nde 10.2 mg%, determinamos la sensibilidaddel metodo, pudiendo detectar hasta 0.51mg%.

Los resultados estan consignados en lasTablas N? 1 y N? 2.

Alfafeteprotefna s6rica desciende rapida-mente desde el nacimiento hasta hacerse nodetectable a los 2 6 4 meses de edad (TablaN? 1, a).

Al estudiar esta fetoprotei'na en ninos conpatologfa hepatica se encontro" que persisteen el suero de lactantes con hepatitis neona-tal, no evidenciandose presencia alguna deella en atresia biHar (Tabla N? 1, b).

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Tabla N* 1 (a y b)

ALFAFETOPROTEINA

Unidad de Inmunologfa Hospital L. Calvo Mackenna, 1975

Controles: 120 casos

a)

Edad

N? casosPositives

Positives

Prematures</ ms >J ms

22 522 3

100

RNT

1919

100

1 ms

113

27

2 ms

180

0

3 ms

262

7,7

4 ms

190

0

En lactantes menores

b)

Casos analizados Casos positives

Hepatitis RN(1.5—2.5 ms)

Atresia vias biliares(1—2 y 4 ms)

Tabla N? 2

ALFAFETOPROTEINA EN PATOLOGIA EN NIftOS

Unidad dc Inmunologia Hospital L. Calvo Mackenna, 1975

Hepatomas*Hemangiopericitomatnaligno, hfgadoHepatitis(3 — 13 anos)Teratomas y Teratocarcinomasembrionarios*Otros tumores solidos

Casos analizados

4

1

13

814

Casos positives

4

1

1*'

3***0

*ControIados en el Servicio dc Oncologia, Hospital L.C.M.

**I coma hepatica grave

***! adenocarcinoma ovarico

1 teratoma ovarico

1 teratoma sacro

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Tabla N? 3

APLICACIONES CLINICAS DE ALFAFETOPROTEINAMETODOS

Tipo de andlisis Metodos Aplicacidn

Detecci6ncualitativa

Determinacldncuantitativa

Inmunoelectroforesiscruzada

Mctodo de Ouchterlonyo doble difusidn

Inmunodifusion radial

Radioinmunoanalisis

Tumores

Tumores (evolution)Hepatitis neonatalAtresia biliar

Enfermedades neurol6gicas(Ifquido anmi6tico, sueromaterno)

En la Tabla N? 2 se presentan 4 casos dehepatomas, encontrdndose un 100% de posi-tividad para AFP serica. Un caso cuyo diag-nostico histopatologico fue hemangiopericito-ma maligno del hfgado, result6 positive.Comparativamente, en las hepatitis analiza-das, el unico caso positive fue un comahepatico grave. Al analizar suero de enfermoscon otros tumores sdlidos, entre los cualesse incluyen 4 tumores de Wilms (Tabla N? 2),no se encontr6 AFP.

DISCUSION

El hallazgo de AFP en el suero humano porun test de excelente especificidad, como es laInmunoelectroforesis cruzada, reviste graninterns, por cuanto constituye un nuevo meto-do para establecer el diagn6stico de ciertoscanceres. En este aspecto son 2 los antigenosmas conocidos y definidos quimicamente; unoes la alfafetoprotema, objeto de nuestro estu-dio, y el otro es el antigeno carcinoembriona-rio de los tumores del tubo digestive. Ambosconstituyen el grupo de los llamados antigenoscarcinoembrionarios. Su ausencia en los teji-dos no neoplasicos puede ser solo aparente,

por cuanto la positividad depende de la sen-sibilidad del metodo empleado en su detec-ci6n.

Es interesante hacer notar que en ciertosaspectos clinicos el analisis cualitativo deAFP debe ir seguido de una determinaci6ncuantitativa, a fin de establecer diferentestipos de evolucio*n, diagn(5stico y pronosticode la enfermedad. Tabla N? 3.

En lactantes menores con patologia hepfiti-ca, aunque la casufstica incluye un reducidonumero de casos, pudo apreciarse de AFP entodas las hepatitis neonatal a una edad, !1/2a 21/2 meses, en que AFP no es detectable,como se observa en la Tabla N? 1, a.

Es posible que algunos de los casos encon-trados negativos en atresia de vias biliares sedeban a la desaparicion de AFP propia dela edad, rnotivo por el cual el exarnen debehacerse a una edad lo ma's temprana posiblecuando se sospechan sintomas de esta enfer-medad.

La respuesta compensatoria a hepatitis esla producci6n de AFP por parte del hepatocitoproliferante; en cambio, en atresia de viasbiliares la respuesta compensatoria es la pro-liferacion del endotelio del conducto biliar,incapaz de sintetizar AFP. (7) Este me"todo

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permitiria una diferenciaci6n entre ambasenfermedades, tan importante de estableceren hepatologia pediatrica. Sin embargo, alaplicar este criterio es precise insistir en unadetermination cuantitativa de AFP, ya que,segun Zeltzer y colaboradores, (7) una con-centration promedio de 4 mg% se inclinarfamas a una hepatitis que a una atresia biliar.

Hay reaparicidn de AFP en el suero deindividuos portadores de hepatomas y tumo-res de origen embrionario. Originalmente sepensaba que todos los sueros eran negatives,con excepci6n de los casos citados; de estemodo, en las enfermedades hepaticas la pre-sencia de AFP indicarfa un hepatoma. Sin em-bargo, se han descrito hepatitis graves en queaparece AFP, pero en forma transitoria, aligual que en cierta patologia hepa"tica notumoral. En e*stas se han demostrado, median-te biopsia, numerosos focos de regeneration.Un tipo semejante de estas celulas aparecetambie"n en el hfgado de ratas despues desonaetidas durante 2 meses a un r6gimen adi-cionado de un cancerigeno, Aflotoxina, perodesaparecen despues de suspendido el re*gi-men. (3)

Uriel, en 1973, por m6todos autorradiogrd-ficos mediante estrogenos tritiados y aprove-chando la propiedad estrogenofflica de AFP,demostr6 que esta no seria sintetizada porhepatocitos tumorales, sino por una celulade tipo especial, probablemente transitoria;e*sta estaria presente en el hfgado durante lahistoge"nesis embrionaria y postnatal y podrfa,en el adulto, multiplicarse bajo el efecto deestimulos particulares, sobreviniendo patologfahepatica neopldsica. (3)

Nuestra casufstica en tumores confirmaresultados publicados por otros autores. Con-siderando el total de los tumores analizados,el porcentaje de positividad en este test diag-ndstico es bajo.

Sin embargo, la rapidez y simplicidad desu ejecuci6n (Inmunoelectroforesis cruzadadurante 1 hora) lo hacen indispensable entodo Servicio de Oncologfa. Actualmente lacuantificacio'n por Inmunodifusi6n radialofrece la posibilidad de seguir la evolutionde la enfennedad.

El hecho de no usar un me'todo tan sensi-ble como el radioinmunoanalisis tiene la ven-taja de no dar resultados falsamente positivos.La repetici6n seriada de los extaenes es unfactor importante y decisive, tanto en el diag-n6stico, pron6stico y vigilancia terapeutica,

RESUMEN

Se utiliza el me'todo de Inmunoelectroforesiscruzada para la detecci6n de Alfafetoprotefna(AFP) en un grupo de recien nacidos y lac-tantes, y en ninos con diversos tumores con-trolados en el Hospital Luis Calvo Mackenna.

AFP disminuye rapidamente desde el naci-miento y no se detecta a los 2 6 4 meses deedad. Persiste en hepatitis neonatal y no sele encuentra en atresia de vias biliares. Parauna mejor diferenciacidn entre ambas enfer-medades debe usarse el metodo cuantitativo.(Inmunodifusi6n radial).

En hepatomas, 4 casos, la positividad fuede 100%; en teratomas, 8 casos, se encontra-ron 3 casos positivos. No se detectd en otrostumores solidos analizados ni en las hepatitis,a excepci<5n de un coma hepatico.

Se concluye que este examen es de unaalta especificidad y de gran importancia parael diagn6stico, pron6stico y evoluci6n de laenfennedad.

SUMMARY

Counter-immunoelectrophoresis is used for thedetection of serum AFP in a group of newborninfants, and children suffering from differenttumors. All of them being controlled in Hos-pital Luis Calvo Mackenna.

AFP rapidly decreases during the first daysof life and it is not detected in 2 or 4 monthold infants. This protein was found to bepresent in neonatal hepatitis and absent inbiliary atresia, suggesting a good method fora differentiation between them. In this aspect,the fetoprotein measurement must be cuanti-tative (Radial Immunodifussion).

100% of hepatomas (4 cases) and 3 froma total of 8 teratomas were positive. It wasnot found either in other solid tumors or in

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hepatitis (3-13 years old children) with theexception of an hepatic comma.

It is concluded that the detection of AFPis highly specific and of a great importancein the diagnosis, prognosis and therapeuticsurvey of disease.

REFERENCIAS

1. Buffe, D.: Bull, du Cancer, 60, N? 4: 371-382,1973.

2. Masseyeff, R., Krebs, B.P., Cassuto, J.P., Bonet,

C., Lalanne, CM. et Delmont, ].: Bull, du Can-cer, 60, N? 4: 383-392, 1973.

3. Uriel, /.; Bull, de Cancer, 60, N* 4: 363-370.1973.

4 Hyvarinen, M., Zeltzer, P.M., Ch. W. and Stiehm,E.R.: Pediatrics, Vol. 82, N* 3: 430437, 1973.

5. Seller, M./., Singer, f.D., Coltart, TM. and Camp-bell, S.: Lancet, 1: 428-429, 1974.

6 Harris, R., Jennison, R.F., Barson, A.J., Laurence,KM., Rouslahti, E. and Seppala, M.: Lancet,Vol. 1, N? 7855: 429433, 1974.

7. Zeltzer, P.M., Neerhout, R.C., Fonkalsrud, E.W.and Stiehm, E.: Lancet, Vol. 1, N? 7854: 373-375,1974.

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