ANLISIS CUALITATIVO Y CUALITATIVO DE DROGAS CON

TANINOS

INTRODUCCION

Los taninos son compuestos sintetizados de

forma natural por las plantas. En funcin del

origen botnico del tanino ste pertenecer a

un grupo qumico distinto, pero todos pueden

unirse a protenas. Esto nos explica el empleo

de taninos en vindicacin: en mosto pueden

usarse como agentes claricantes y en vino

como aditivo. Nuestros taninos protegen y

refuerzan la estructura, el cuerpo y la fruta de

los vinos, destacando las caractersticas

varietales. Son seleccionados en base a

estrictos controles de pureza y calidad, para

obtener vinos redondos, armoniosos y

aterciopelados.1

CLASIFICACIN:

La clasificacin de los taninos se realiza

comnmente en dos grandes grupos:

Taninos condensados o

proantocianidnico o no hidrolizables,

cuya particularidad es que liberan tras

una hidrlisis cida una antocianidina. En

el caso del tanino de pepita se libera

cianidina, por lo que se denomina

procianidina. En el caso del tanino de

hollejo se trata de una mezcla de

procianidina y prodelfinidina. El nombre

genrico de proantocianidina se usa

cuando se desconoce la antocianidina

formada. Qumicamente se trata de

polmeros de flavanoles. 2

Taninos hidrolizables, en los cuales

despus de una hidrlisis cida se libera

cido glico o cido elgico. Se

denominan galotaninos o elagitaninos

respectivamente. Los elagitaninos estn

estructurados como molculas lineales de

glucosa enlazadas a las funciones

carboxilo de los grupos

hexahidroxidifnicos del cido elgico,

mientras que los galotaninos estn

constituidos por ncleos de glucosa en

forma cclica que forman enlaces con la

funcin cida del cido glico. En ambos

casos se trata de estructuras de una

complejidad relativa (Figuras 1 y 2).2

Figura 1: Derivados de la hidrlisis de los taninos hidrolizables

a) cido 3, 4, 5 trihidroxibenzoico (c. Glico) b) cido elgico.

Figura 2:: Flavan-3-ol. Monmero estructural del que derivan los taninos condensados

DROGAS CON TANINOS:

Los taninos industriales para uso

agroalimentario y farmacutico son

obtenidos de diversas especies vegetales

mediante su extraccin de las partes leosas,

frutos o agallas. En enologa se utilizan

comnmente como coadyuvante de

clarificacin de vinos y mostos, y

particularmente, en vinificacin en tinto,

como coadyuvante de afinado, buscando la

estabilizacin de la materia colorante y la

estructuracin armnica de los vinos.

La calidad del producto final depende de su

riqueza en polifenoles totales y ms

especficamente de la tipologa y

concentracin en el principio activo, es decir,

de tanino. A partir de aqu se empiezan a

distinguir notables diferencias entre los

productos que se pueden encontrar en el

mercado.

La cantidad de tanino depende, adems de su

origen botnico, de su proceso de obtencin

(atomizacin, liofilizacin, evaporacin, etc.),

del tipo de solvente (etanol, agua, etc.) y del

tiempo de extraccin, pudiendo obtener,

como demuestra la tabla II, un rango de

concentracin del principio activo muy

amplio, lo cual condiciona sin duda la calidad

de los resultados finales tras su utilizacin.2

La tara (Caesalpinia spinosa) es un rbol de

origen peruano que crece en las zonas secas.

El Per es el mayor productor de tara en el

mundo con el 80% de la produccin mundial.

La mayor parte de esta produccin se destina

a la exportacin, como polvo de vaina de tara

a pases como: Argentina, Italia, Estados

Unidos, Alemania, Brasil, Uruguay, Blgica,

China, Sudfrica, Mxico, Corea, Suiza y

Francia3

La tara, como fuente natural integral (tallo,

hojas y frutos) es utilizada desde la poca

prehispnica en la medicina folclrica o

popular como: astringente, cicatrizante,

antidisentrico, tambin como mordiente en

teidos. Se atribuye estas propiedades a su

gran potencial como antioxidante. 3

Las vainas, previamente despepitadas,

representan aproximadamente el 62% del

peso del fruto, en esta se concentra la mayor

parte de los taninos. Las vainas secas son

molidas para obtener polvo de tara de

diferente granulometra (grueso o ultrafino),

del que se puede obtener un extracto acuoso

que luego de ser decantado/filtrado,

concentrado y secado por atomizacin se

obtiene extracto tnico de tara, del que se

puede obtener cido tnico, cido galotnico

y cido glico.3

En los ltimos aos se ha incrementado la

aplicacin industrial de la tara, debido a que

sus vainas son fuentes importante de taninos,

un compuesto fenlico que se utiliza en la

industria como clarificador del vino, como

sustituto de la malta en la elaboracin de

cerveza y como materia prima para la

produccin de cido glico que es utilizado

como antioxidante en la industria de los

aceites.4

Figura 3 ; Caesalpinia spinosa

(Tara)

En las tres titulaciones el punto final de la

reaccin se determina con tiras de papel

almidonado (indicador externo), vira a violeta

intenso en el punto de equivalencia.

El blanco nos servir para determinar el gasto

real de la titulacin.

Gasto A Gasto B = A-B

Gasto C Gasto B = C-B

Se determinara la cantidad de g obtenidos en

10 mL de muestra segn:

A-B ----------- 0.1 g (patrn)

C-B ----------- X

X = contenido de taninos (g) en 10 mL de

muestra problema

Expresar los resultados en porcentajes de

taninos en la muestra

MATERIALES Y METODOS:

b. Anlisis Cuantitativo: Se separa 10 mL de la solucin obtenida en la etapa de

extraccin de la harina de Tara y se

procede a titular con Yodo segn como se

muestre en los siguientes esquemas:

PREPARACIN DEL PATRN:

PREPARACIN DEL BLANCO:

PREPARACIN DE LA MUESTRA:

YODO 2.5%

GASTO: A

2mL de NaHCO3 + c.s.p

para 20 mL con agua

destilada

YODO 2.5%

GASTO: B

10 mL de solucin de cido

tnico 1% + 2mL de

NaHCO3 + c.s.p para 20 mL

con agua destilada

10 mL de solucin muestra

problema + 2mL de NaHCO3 +

c.s.p para 20 mL con agua

destilada

YODO 2.5%

GASTO: C

RESULTADOS:

a. Anlisis Cualitativo

b. Anlisis Cuantitativo:

Clculos:

- Calculo del gasto real

9.1 mL 1.4 mL = 7.7 mL

8 mL 1.4 mL = 6.6 mL

- Determinacin cantidad de g obtenidos

en 10 mL de muestra:

7.7 mL ----------- 0.1 g (patrn)

6.6 mL ----------- X

X = 0.085 g taninos en 10 mL en la

muestra

- Expresando los resultados en

porcentajes de taninos en la muestra:

0.085g taninos ----- 10 mL

0.8571g taninos ----- 100mL

1g de tara ----- 100 %

0.8571 ----- X%

X = 85.71 %

Gasto del patrn: 9.1 mL

Gasto del blanco: 1.4 mL

Gasto de la muestra: 8 mL

CONCLUSIONES:

La tara presenta taninos hidrolizables

del tipo taninos glicos.

El anlisis cuantitativo de taninos de la

extraccin de harina de Tara se pudo

determinar porque el cido tnico fija el

yodo metlico el cual est en medio

alcalino.

La cantidad de taninos que

encontramos en nuestra muestra fue

de 85.71% , es decir el procedimiento

tuvo un rendimiento muy cercano al

100 % .

CUESTIONARIO

1. Explique las funciones de los taninos en las especies vegetales

En las plantas cumplen funciones de defensa ante el herbivorismo. Los taninos en

general son toxinas que reducen significativamente el crecimiento y la supervivencia de

muchos herbvoros cuando se adicionan a su dieta. Los taninos pueden inactivar las

enzimas digestivas de los herbvoros y crear complejos agregados de taninos y protenas

de plantas que son difciles de digerir. Adems, tienen potencial de producir rechazo al

alimento ("antifeedants" o "feeding repellents") en una gran diversidad de animales. Los

mamferos como la vaca, el ciervo y el simio caractersticamente evitan a las plantas o

partes de las plantas con alto contenido de taninos. Las frutas no maduras, por ejemplo,

con frecuencia tienen altos contenidos de taninos, que pueden estar concentrados en

las capas celulares ms externas de la fruta.1

Es interesante el dato de que los humanos usualmente prefieren un cierto nivel de

astringencia en las comidas que contienen taninos, como las manzanas, las zarzamoras,

y el vino tinto. Recientemente, son los taninos del vino tinto los que mostraron poseer

propiedades de bloquear la formacin de endotelina-1, una molcula seal ("signaling

molecule") que produce la constriccin de los vasos sanguneo2, lo cual disminuira el

riesgo de enfermedades cardacas a aquellos que consuman vino tinto en forma

moderada.

Si bien hay taninos especficos que pueden ser saludables para el hombre, en general

son txicos, debido a las mismas propiedades que los hace buenos para la curtiembre:

su capacidad de unir entre s protenas de forma no especfica. Durante mucho tiempo

se pens que los taninos formaban complejos con las protenas del intestino de los

herbvoros formando puentes de hidrgeno entre sus grupos hidroxilo y los sitios

electronegativos de la protena, pero evidencia ms reciente tambin avala una unin

covalente entre los taninos (y otros compuestos fenlicos provenientes de las plantas)

y las protenas de los herbvoros que los consumen.1

Los taninos de las plantas tambin funcionan como defensas contra los

microorganismos. Por ejemplo, el corazn de madera muerta de muchos rboles

contiene altas concentraciones de taninos que ayudan a prevenir el desmoronamiento

por ataques de hongos y bacterias patgenos.1

2. Describa los principales mecanismos de accin que expliquen el efecto antidiarreicos de

los taninos.

En los pases en desarrollo, un cuarto de la mortalidad infantil est relacionada con la diarrea .

Lalas tasas de mortalidad ms altas se han informado de que en nios menores de cinco aos

de edad. Durante la pasada decada la terapia de rehidratacin oral, ha reducido muertes por

enfermedad diarreica aguda, mientras que la diarrea crnica sigue siendo un problema que

amenaza la vida de los diferentes pases del mundo, en las que la malnutricin es un factor de

co-existente y complicacin comn. Nmero de factores, talescomo infecciosa, inmunolgica y

nutricional ha sido involucrados en la perpetuacin del sndrome diarreico .Muchas plantas

convenientemente disponibles en la India se utilizan en la medicina tradicional para el

tratamiento de la diarrea y la disentera. De las plantas autctonas usadas, Andrographis

paniculata, Asparagus racemosus, Butea monosperma, Cassia auriculata y otros. Varios estudios

han demostrado que la administracin previa con algunos extractos de plantas tenaun efecto

protector en el tracto intestinal. En el estudio citado , etanol y extractos acuosos de Asparagus

racemosus que no han sido estudiados hasta ahora, sern evaluado por su potencial anti-

diarreicas en contra de la diarrea inducida por aceite ricino, la motilidad gastrointestinal en la

prueba preparado de carbn y PGE2. Entero estancamiento inducida enRatas Wistar albino.

El etanol y el extracto acuoso de Asparagus racemosus exhibi actividad anti-diarreicas

significativa contra aceite de ricino diarrea inducida en ratas. Los extractos tenan una actividad

similar a la loperamida, cuando se prob en 200 y250 mg / kg y reduccin estadsticamente

significativa en la frecuencia de defecacin y la humedad de la fecal excrementos en

comparacin con las ratas de control no tratadas.

Es ampliamente conocido que el aceite de ricino o cido ricinoleico su componente activo induce

cambios de permeabilidad en fluido de la mucosa y el transporte de electrolitos que resulta en

una respuesta hipersecretor y diarrea. La estudios experimentales en ratas demostraron un

aumento significativo en la vena porta de la concentracin de PGE2 despus administracin oral

de aceite de ricino. Ricinoleico cido aument notablemente la PGE2 contenido en el intestino

lumen y tambin causado en aumento de la secrecin neta del agua y electrolitos en el intestino

delgado.

Los resultados indican que el etanol y acuosa extracto de Asparagus racemosus posee

significativa actividad anti-diarreicas debido a su efecto inhibidor tanto sobre la propulsin

gastrointestinal y secrecin de fluidos. La datos obtenidos son consistentes con el informe de la

literatura sobre actividad antidiarreico de la raz pubescens Asparagus mediante la prueba de la

motilidad gastrointestinal y diarrea oilinduced ricino y la acumulacin intraluminal de fluido en

ratas . El efecto inhibidor del extracto justificado el uso de la planta como un agente anti-

diarreica no especfica en la medicina popular. Otras investigaciones detalladas estn en marcha

para determinar la exacta fitoconstituyentes que son responsables de la actividad antidiarreica3.

3. Proponga la metodologa de trabajo para la extraccin y cuantificacin de taninos y acido

glico de la tara

Estudio de la cintica de hidrlisis de taninos:

Se realiz un proceso de extraccin de los taninos y una hidrlisis cida; teniendo como

variable independiente el tiempo de hidrlisis (15 niveles) y variables dependientes la

concentracin de cido glico libre y compuestos fenlicos totales. Para la evaluacin

de las caractersticas antioxidantes de los taninos hidrolizados, se procedi a una

purificacin del cido sulfrico, mediante una separacin lquido-lquido con acetato de

etilo. 4

a. Extraccin.- Se realiz una extraccin con acetona al 80% (solvente que no

interfiere con el proceso de hidrlisis y que garantiza una mxima extraccin), con

una relacin materia prima: solvente de 1: 100 (p/v), durante 20 horas a 4 C; luego

se centrifug a 4000 rpm durante 15 min, obtenindose el extracto entero (EE). El

EE se concentr a vaco a 38 C, para eliminar la acetona luego se resuspendi en

agua destilada; se enfri a 4 C y mantuvo durante 16 horas a esta temperatura y

posteriormente se centrifug a 4000 rpm por 15 min, con el fin de conseguir una

clarificacin adecuada. El extracto acuoso obtenido se denomina extracto bruto

(EB).

b. Hidrlisis.- Al EB con una concentracin de taninos de 20 mg glico equi./ml se

adicion H2SO4 hasta una concentracin 2N y se someti en bao Mara a 100C por

diferentes tiempos: 0; 0.5; 1; 1; 2; 4; 5; 6; 8; 9; 20; 24 y 28 horas. El extracto fue

centrifugado para obtener el extracto hidrolizado (EH), al cual se determin su

concentracin de cido glico y compuestos fenlicos totales y se determin el

grado de hidrlisis (GH) mediante la siguiente relacin:

c. Purificacin.- El EH, se someti a una purificacin mediante una separacin

liquido-liquido con acetato de etilo, en una relacin 1:2 (v/v) hidrolizado: acetato de

etilo, dos veces consecutivas con la finalidad de eliminar el cido sulfrico en la fase

acuosa. El acetato de etilo fue removido por evaporacin al vaco a 38 C hasta

sequedad, aproximadamente 5 minutos, recuperndose los compuestos con etanol

absoluto.

Figura a: Proceso

de extraccin

Referencias bibliogrficas:

1. GW Felton, K Donato, RJ Del Vecchio, SS Duffey. 1989. "Activation of plant foliar oxidases

by insect feeding reduces nutritive quality of foliage for noctuid herbivores". Journal of

Chemical Ecology 15: 2667-2694.

2. R Corder, JA Douthwaite, DM Lees. 2001. "Endothelin-1 synthesis reduced by red wine".

Nature. 414: 863-864.

3. Venkatesan N, Vadivu T, Sathiya N, Arokya A, James BP. Anti-diarrhoeal potential of

Asparagus racemous wild root extract in laboratory animals. J Pharm Pharmaceut Sci

2005; 8: 39-46

4. Campos Gutierrez, D. Obtencin y caracterizacin de taninos hidrolizados de tara

(Caesalpinia spinosa) y evaluacin de su eficacia antioxidante en carnes y aceites

vegetales. Per biodiverso (Lima, Per) 2010