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PRUEBA DEL EFECTO DE CONSUL 65 WP SOBRE EL CONTROL DE CANCER BACTERIAL (Pseudomona syringae pv. syringae) EN CEREZO
(Prunus avium) CV. BING.
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2 Departamento de Fitopatología
CER
ÍNDICE
PRUEBA DEL EFECTO DE CONSUL 65 WP SOBRE EL CONTROL DE CANCER BACTERIAL (Pseudomona syringae
pv. syringae) EN CEREZO (Prunus avium) CV. BING. ..................................................................................... 3
RESUMEN .................................................................................................................................................... 3
OBJETIVO ..................................................................................................................................................... 4
ANTECEDENTES GENERALES ......................................................................................................................... 4
Lugar ....................................................................................................................................................... 4
Datos del cultivo .................................................................................................................................... 4
MATERIALES Y MÉTODOS ............................................................................................................................ 8
Evaluaciones ......................................................................................................................................... 10 Identificación y cuantificación ................................................................................................................. 10
Brotación ............................................................................................................................................... 10 Incidencia y Severidad ............................................................................................................................. 10
Evaluación de yemas................................................................................................................................ 10
Cuaja y retención de la fruta.................................................................................................................... 11
Diseño experimental y análisis estadístico ......................................................................................... 11
RESULTADOS.............................................................................................................................................. 12
Prospección de plantas .......................................................................................................................... 12
Identificación y cuantificación ............................................................................................................ 12
Prueba de eficacia in vitro ................................................................................................................... 12
Cuantificación previa y posterior a la primera aplicación del ensayo .............................................. 13
Incidencia y Severidad ......................................................................................................................... 14
Daño en yema ....................................................................................................................................... 15
Cuaja y retención ................................................................................................................................... 16
CONCLUSIONES .......................................................................................................................................... 18
ANEXO DE TABLAS Y DATOS ...................................................................................................................... 19
Anexo 1. Informe de laboratorio. Prueba de eficacia in vitro. ................................................................ 19
Anexo 2. Informe de laboratorio. Recuento de Unidades formadoras de colonia previo a la primera aplicación. ............................................................................................................................................. 23
Anexo 3. Informe de laboratorio. Recuento de Unidades formadoras de colonia posterior a la primera aplicación. ............................................................................................................................................. 26
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PRUEBA DEL EFECTO DE CONSUL 65 WP SOBRE EL CONTROL DE CANCER BACTERIAL
(Pseudomona syringae pv. syringae) EN CEREZO (Prunus avium) CV. BING.
RESUMEN
Con el objetivo de evaluar el efecto de Consul 65 WP en el control de cáncer bacterial (Pseudomona syringae pv. Syringae) en plantas de cerezo (Prunus avium) cv. Bing, se realizó un ensayo de campo en Agrícola Comercial Puntí, ubicado en la localidad de Chanqueahue comuna de Rengo (34° 23’44.75” Latitud Sur; 70°48’20.70” Longitud oeste), Región del Libertador Bernardo O’Higgins, Chile. Se utilizaron plantas de cerezo (Prunus avium) cv. Bing, injertadas sobre mericier, plantadas el año 2002 con un marco de plantación de 5 x 2 m y conducidos bajo un sistema de Tatura (V). Este ensayo se llevó a cabo desde el día 12 de mayo de 2013 hasta el día 12 de Diciembre de 2014, momento en el cual se realizó la última evaluación. A fin de cumplir con el objetivo planteado, se establecieron siete tratamientos, constituidos por cuatro repeticiones: (T1) Consul 65 WP a razón de 2.7 kg/ha-1; (T2) Consul 65 WP a razón de 3.6 kg/ha-1; (T3) Consul 65 WP a razón de 4.5 kg/ha-1; (T4) Hidróxido de cobre a razón de 4.5 kg/ha-1; (T5) Óxido cuproso a razón de 3.1 kg/ha-1; (T6) Consul 65 WP a razón de 3.6 kg/ha-1 e Hidróxido de cobre a razón de 4.5 kg/ha-1 y (T7) programa de campo; Oxicloruro de cobre a razón de 9 kg/ha-1 y Sulfato cuprocálcico a razón de 13.5 kg/ha-1 , las aplicaciones se realizaron en caída de hojas y cada veinte días hasta yema hinchada, contemplando en total 6 aplicaciones. Con el fin de cumplir con el objetivo planteado, se evaluaron las siguientes variables por tratamiento: (a) prueba de eficacia in vitro, a igual dosis que la utilizada en campo; (b) identificación y cuantificación previo y posterior a la primera aplicación; (c) incidencia medida como el número de ramillas con sintomatología; (d) severidad midiendo la longitud de cancros en el tiempo; (e) evaluación visual de daño en yemas; (f) cuaja y retención de la fruta. Los resultados de las pruebas de laboratorio mostraron diferencias entre los distintos tratamientos
evaluados, la prueba de eficacia de productos mostró un efecto similar entre los distintos
tratamientos evaluados en campo, diferenciándose todos ellos absolutamente del tratamiento
testigo y el tratamiento correspondiente a streptomicina. El recuento de unidades formadoras de
colonia previo y posterior a la primera aplicación, si bien mostró una diferencia al inicio del
ensayo, el recuento se reduce a menos de 10 UFC/g para cada uno de los tratamientos evaluados,
presentando el mismo efecto para esta medición. Las variables de incidencia, severidad y daño en
yema, no presentaron diferencias de significancia estadística entre los distintos tratamientos (p-
valor = 0,5518 y 0,5466 para incidencia y severidad respectivamente). En cuanto a la cuaja y
retención de fruta no fue posible establecer diferencias entre tratamientos, obteniendo para
ambas mediciones valores cercanos al 50%.
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OBJETIVO
Evaluar el efecto de las aplicaciones de cónsul 65 WP sobre el control de cáncer bacterial (Pseudomona syringae pv. Syringae) en plantas de cerezo (Prunus avium) cv. Bing.
ANTECEDENTES GENERALES Lugar El ensayo se realizó en un huerto propiedad de Agrícola Comercial Punti, ubicado en la localidad de Chanqueahue comuna de Rengo (34° 23’44.75” Latitud Sur; 70°48’20.70” Latitud oeste), Región del Libertador Bernardo OHiggins, Chile.
Datos del cultivo Nombre científico Prunus avium.
Variedad utilizada Bing
Portainjerto mericier
Año de plantación 2002
Distancia de plantación 2 m x 5 m
Sistema de conducción Tatura
Fecha de cosecha 15 de diciembre 2014
Duración del ensayo 30 diciembre 2013 – 12 de Diciembre 2014
Figura 1. La imagen corresponde al lugar donde se realizó el ensayo.
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Datos meteorológicos Todos los datos climáticos fueron obtenidos de una estación meteorológica ubicada en el predio donde se realizó el ensayo. Los cuadros 1 y la figura 2 muestran el registro de las temperaturas mínimas, máximas y oscilación térmica. En la figura 3 se detalla la precipitación (mm) durante el periodo de duración del ensayo.
Cuadro 1. Media aritmética mensual de temperaturas mínima, máxima, oscilación térmica y precipitación acumulada mensual durante el periodo de ensayo.
Mes
Temperatura Precipitación
Mínima Máxima Oscilación térmica
(°C) mm
Mayo 0,8 25,9 25,1 73,2
Junio -0,9 23 23,9 124,5
Julio -1,3 19,7 21 54,4
Agosto -2 27,4 29,4 31
Septiembre 2,4 26,3 23,9 64
Octubre 4,4 30,8 26,4 0,4
Noviembre 3,3 30,4 27,1 14,2
Diciembre 7,5 32,4 24,9 0
Cuadro 2 Datos climáticos el día de las aplicaciones
Fecha
Temperatura
Mínima Máxima Oscilación térmica
(°C)
12-05-2014 7,3 21,0 13,7
22-05-2014 4,7 7,3 2,6
16-06-2014 3,3 20,7 17,4
07-07-2014 1,1 15,6 14,5
27-07-2014 9,0 14,6 5,6
18-08-2014 6,3 27,1 20,8
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Cuadro 3. Registro de evento de heladas durante el periodo del ensayo.
Fecha Temperatura mínimas °C
26-06-2014 -0,9
06-07-2014 -0,2
24-07-2014 -1,3
08-08-2014 -0,2
13-08-2014 -2,0
Figura 2. Media mensual temperatura máxima, mínima y oscilación térmica para el periodo del estudio
Figura 3. Precipitación (mm) durante el periodo del estudio.
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Figura 4. Acumulación de horas frio.
Figura 5. Porciones de frio correspondientes a localidad donde se realizó el ensayo.
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MATERIALES Y MÉTODOS
El ensayo utilizó una superficie total de 1120 m2 en los cuales se sortearon los tratamientos en un
diseño completamente aleatorizado. El ensayo estuvo constituido por siete tratamientos de cuatro
repeticiones cada uno. El detalle de los tratamientos se presenta en el cuadro 4.
Cuadro 4. Descripción de los tratamientos realizados.
Tratamiento Producto Dosis Mojamiento
(l*ha-1)
Dosis N° aplicaciones
Momento de aplicación
Fecha de aplicación (ml o g*hl-1) (l o kg*ha-1)
T1 Consul 65 WP 150 1800 2,7 6
Caída de hojas 12-05-2014
20 DDA 22-05-2014
20 DDA 16-06-2014
20 DDA 07-07-2014
20 DDA 27-07-2014
20 DDA 18-08-2014
T2 Consul 65 WP 200 1800 3,6 6
Caída de hojas 12-05-2014
20 DDA 22-05-2014
20 DDA 16-06-2014
20 DDA 07-07-2014
20 DDA 27-07-2014
20 DDA 18-08-2014
T3 Consul 65 WP 250 1800 4,5 6
Caída de hojas 12-05-2014
20 DDA 22-05-2014
20 DDA 16-06-2014
20 DDA 07-07-2014
20 DDA 27-07-2014
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T4 Hidróxido de cobre 53,8%
250 1800 4,5 6
Caída de hojas 12-05-2014
20 DDA 22-05-2014
20 DDA 16-06-2014
20 DDA 07-07-2014
20 DDA 27-07-2014
20 DDA 18-08-2014
T5 Óxido
cuproso 86% 170 1800 3,1 6
Caída de hojas 12-05-2014
20 DDA 22-05-2014
20 DDA 16-06-2014
20 DDA 07-07-2014
20 DDA 27-07-2014
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T6 Consul 65
WP/Hidróxido de cobre
200/250 1800 3,6/4,5 6
Caída de hojas 12-05-2014
20 DDA 22-05-2014
20 DDA 16-06-2014
20 DDA 07-07-2014
20 DDA 27-07-2014
20 DDA 18-08-2014
T7 Oxicloruro de cobre/sulfato cuprocálcico
500/750 1800 9/13,5 6
Caída de hojas 12-05-2014
20 DDA 22-05-2014
20 DDA 16-06-2014
20 DDA 07-07-2014
20 DDA 27-07-2014
20 DDA 18-08-2014
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Los tratamientos Consul 65 WP/ Hidróxido de cobre (T6) y Oxicloruro de cobre/Sulfato
cupracálcico (T7), cada uno de sus productos fueron aplicados de forma alternada.
Las aplicaciones fueron realizadas mediante el empleo de una motobomba conectada a un pitón
con boquilla que, a la presión utilizada, permitía un caudal de 4,4 litros por minuto. Las
dosificaciones fueron llevadas a litros a aplicar por planta, en base al marco de plantación dado y
fueron realizadas buscando una mojamiento equivalente a 1.800 l/ha (de acuerdo al manejo del
huerto).
Figura 6. Modo de aplicación del ensayo.
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Evaluaciones
Receso Invernal 2014
Identificación y cuantificación
Previo a la primera aplicación se realizó una evaluación in situ haciendo un catastro de las plantas dañadas, evaluando la severidad del daño a través de una escala de nivel utilizada por CER.
Cuadro 5. Escala de daño cáncer bacterial (Pseudomona syringae pv. syringae).
Nivel 0 Planta sin daño
Nivel 1 Cancros y/o gomosis en ejes secundarios
Nivel 2 Cancros y/o gomosis en el eje principal
Nivel 3 Planta con 50% de daño en su estructura
Nivel 4 Planta con 100% de daño en su estructura
Con el objetivo de detectar la presencia de la bacteria, en las plantas sintomáticas seleccionadas, se realizó una toma de muestras de madera de 5 a 15 cm de longitud por repetición previo a la primera aplicación, desde la cual se identificó y cuantificó las unidades formadoras de colonias (UFC); se realizó una prueba de patogenicidad en las UFC detectadas con productos utilizados en el ensayo a igual dosis de la aplicación realizada en campo. Quince días posteriores a la primera aplicación se tomó una muestra nuevamente, la que fue
enviada al laboratorio para la cuantificación de UFC.
Brotación
Incidencia y Severidad
Se evaluó la incidencia, medida como el número de ramillas con sintomatología en una muestra de 10 ramillas de cada repetición, las que fueron marcadas una vez que comenzó la brotación y fueron evaluadas cada 20 días hasta el momento de cosecha. La severidad se evaluó midiendo la longitud de los cancros ubicados en al menos cinco ramillas de cada repetición cada 20 días desde brotación a cosecha.
Precosecha Evaluación de yemas Se realizó la evaluación visual de 10 dardos tomados al azar, en los cuales se evaluó el daño en yemas, por repetición.
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Cuaja y retención de la fruta
Para medir la cuaja se contaron entre 100 y 120 flores de la sección media de ocho laterales de las plantas centrales de cada repetición. Posteriormente, pasada la floración, en las mismas laterales se contó el número de frutos cuajados, obteniendo de este modo el porcentaje de cuaja expresado como “número de frutos cuajados / número de flores iniciales”. Para medir la retención de frutos se consideraron los frutos cuajados como el número inicial de frutos, previo a la cosecha y pasado el periodo de la caída natural de frutos se contó en las mismas laterales evaluadas inicialmente el número de frutos. El resultado fue expresado en porcentaje y se obtuvo la relación “frutos previo a la cosecha/frutos cuajados”.
Diseño experimental y análisis estadístico El ensayo se montó en un diseño completamente aleatorizado sobre hileras en que los árboles elegidos fueron parejos en tamaño y con signos de cáncer aparente. Los análisis estadísticos se realizaron con el programa Infostat, versión profesional 2013, incorporando un diseño completamente aleatorizado. Para las evaluaciones de ramillas infectadas se realizó un análisis de regresión evaluando la relación de daño en el tiempo, y con ello se compararon los resultados con un ANDEVA, en el caso de encontrar diferencias entre las medias se trabajó un test de comparaciones múltiples de la familia de Fisher con un 95% de significancia.
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RESULTADOS
Prospección de plantas
Para asegurar la condición homogénea de las plantas utilizadas al comienzo del ensayo, se trabajó con plantas categorizadas en un nivel de daño 1 y 2 (cuadro 3).
Identificación y cuantificación
Las muestras obtenidas fueron enviadas a un laboratorio para la identificación de la bacteria, cada una de las muestras resulto positiva a Pseudomona syringae pv. syringae.
Prueba de eficacia in vitro
La prueba de eficacia realizada en laboratorio, muestra diferencias estadísticamente significativas (p-valor <0,0001), diferenciándose todos los tratamientos evaluados en campo del tratamiento testigo y el tratamiento extra de laboratorio correspondiente a streptomicina. Medias y desviación estándar son presentadas en el cuadro 6. Los detalles de dicha prueba se presentan en el anexo 1.
Cuadro 6. Porcentaje de inhibición obtenido en pruebas de eficacia in vitro.
Tratamiento
Porcentaje de inhibición
(%)
MEDIA D.E
T0 control 0 c 0
T1 consul 65 wp (1) 100 a 0
T2 consul 65 wp (2) 100 a 0
T3 consul 65 wp (3) 100 a 0
T4 Hidróxido de cobre 98,5 a 2,8
T5 Óxido cuproso 100 a 0
T7 Oxicloruro de cobre 100 a 0
T8 streptomicina 29,2 b 0
p-valor <0,0001
Tratamientos unidos por la misma letra no presentan diferencias estadísticamente significativas,
según prueba de Tukey (p-valor ˃0,05).
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Figura 7. Porcentajes de inhibición obtenidos en la prueba de eficacia in vitro.
Cuantificación previa y posterior a la primera aplicación del ensayo
El número inicial de colonias no fue semejante para todos los tratamientos, pese a ello el recuento 15 días posteriores a la primera aplicación disminuye considerablemente, detectando un valor inferior a 10 UFC/g para cada uno de los tratamientos, sin encontrar diferencias estadísticas entre ellos. Los valores de las medias y la desviación estándar (D.E) para cada momento de evaluación, son presentados en el Cuadro 7. La Figura 8 presenta de forma gráfica los resultados de dicha evaluación.
Cuadro 7. Recuento de UFC/g, previo y posterior a la primera aplicación del ensayo.
TRATAMIENTOS Previo a la primera aplicación 15 días después de la primera aplicación
MEDIA D.E MEDIA D.E
T1 Concul 65 wp (1) 1450000 a 1562050 <10 0
T2 Concul 65 wp (2) 733333 a 728583 <10 0
T3 Concul 65 wp (3) 9250000 c 1671078 <10 0
T4 Hidróxido de cobre 8983333 c 1533243 <10 0
T5 Óxido cuproso 2700000 ab 2551470 <10 0
T6 Consul 65 wp/ Hidróxido de cobre 8266667 c 76376 <10 0
T7 Oxicloruro de cobre/Sulfato cuprocálcico 6333333 bc 1877720 <10 0
p-valor <0,0001
Tratamientos unidos por la misma letra no presentan diferencias estadísticamente significativas, según prueba de Fisher (p-valor˃0,05).
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Figura 8. Recuento de Unidades formadoras de colonias, barras de la izquierda corresponden al recuento
previo a la primera aplicación y barras de la derecha corresponden al recuento 15 días posteriores a la
primera aplicación por tratamiento.
Incidencia y Severidad
Los resultados de la evaluación de incidencia, medida como número de ramillas con cancro en una muestra de 10 ramillas por repetición, no presentó diferencias estadísticamente significativas entre los distintos tratamientos evaluados (p-valor=0,5518), presentando niveles de incidencia que varian entre un 45 y 61,8%. En el cuadro 8 se presentan las medias y desviación estándar (D.E.) y el error típico (E.E.), correspondientes a dicha evaluación. La figura 9 presenta de forma gráfica medias y error típico asociados a la evaluación anteriormente mencionada.
Cuadro 8. Incidencia de daño en brotes.
Tratamiento (%)
MEDIA D.E
T1 Concul 65 wp (1) 55,0 19,2
T2 Concul 65 wp (2) 42,5 17,1
T3 Concul 65 wp (3) 45,0 17,3
T4 Hidróxido de cobre 61,8 16,7
T5 Óxido cuproso 55,0 17,3
T6 Consul 65 wp/ Hidróxido de cobre 45,0 10,0
T7 Oxicloruro de cobre/Sulfato cuprocálcico 55,0 10,0
p-valor 0,5518
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Figura 9. Incidencia de daño, la figura presenta las medias y error típico correspondientes a la variable
incidencia de daño en brotes.
La severidad fue medida como el crecimiento de cancros en una muestra de cinco brotes por repetición, los resultados no presentan diferencias de significancia estadística (p-valor= 0,5466). Medias y desviación estándar, son presentados en el Cuadro 9. La Figura 10 muestra de forma gráfica medias y error típicos asociados a dicha medición. Cuadro 9. Tasa de crecimiento de cancros
Tratamiento Tasa de crecimiento de cancros
MEDIA D.E
T1 Concul 65 wp (1) 1,27 0,34
T2 Concul 65 wp (2) 1,96 0,86
T3 Concul 65 wp (3) 1,12 0,2
T4 Hidróxido de cobre 0,72 0,85
T5 Óxido cuproso 0,94 0,46
T6 Consul 65 wp/ Hidróxido de cobre 1,61 1,78
T7 Oxicloruro de cobre/Sulfato cuprocálcico 1,77 0,73
p-valor 0,5466
Daño en yema
No fue posible realizar el análisis de esta evaluación dado que no se evidenció un nivel de daño en yema significativo, para ninguno de los tratamientos evaluados en este ensayo.
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Cuaja y retención
La evaluaciones correspondientes al porcentaje de cuaja y retención de fruta no presentaron diferencias estadísticas entre los distintos tratamientos (p-valor= 0,8710 y 0,3078; respectivamente), presentando valor de cuaja y retención cercanos al 50%. Media, desviación estándar (D.E.) y error típico correspondientes a las variables cuaja y retención de fruta, son presentados en el cuadro 10. La figura 10 muestra de manera gráfica la evaluación antes señalada.
Cuadro 10. Porcentaje de cuaja y retención de fruta.
Tratamiento
Porcentaje de fruto cuajado Porcentaje de fruto retenido
(%) (%)
MEDIA D.E E.E MEDIA D.E E.E
T1 Concul 65 wp (1) 59,98 6,53 3,27 43,64 11,73 5,87
T2 Concul 65 wp (2) 54,51 14,9 7,45 50,21 9,3 4,65
T3 Concul 65 wp (3) 65,04 10,46 5,23 60,85 9,56 4,78
T4 Hidróxido de cobre 53,78 12,11 6,05 48,65 10,98 5,49
T5 Óxido cuproso 55,82 16,69 8,35 42,87 16,66 8,33
T6 Consul 65 wp/ Hidróxido de cobre 57,82 14,3 7,15 48,36 8,66 4,33
T7 Oxicloruro de cobre/Sulfato cuprocálcico 59,41 7,05 3,52 54,19 7,2 3,6
p-valor 0,8710 0,3078
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Figura 10. Medias y error típico correspondientes a las evaluaciones de cuaja y retención de fruta, barras de
la izquierda presentan el porcentaje de cuaja y las barras de la derecha corresponden al porcentaje de
retención de fruta obtenido para cada tratamiento.
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CONCLUSIONES
Según los resultados obtenidos en las condiciones del presente ensayo se puede concluir que: El efecto en las pruebas de eficacia de laboratorio, en las dosis recomendadas en huerto para cada uno de los tratamientos, mostró diferencias de significancia estadística con el tratamiento testigo, concluyendo que el producto Consul 65 WP (ingrediente activo Dodina), evaluado en tres dosis distintas presenta el mismo efecto in vitro que un producto en base a cobre en el control de cáncer bacterial (Pseudomona syringae pv. syringae).
En cuanto a las evaluaciones de incidencia y severidad en evaluaciones de campo no fue posible establecer alguna diferencia entre los distintos tratamientos, dado que en ambas evaluaciones el nivel de daño fue similar en cada unidad de observación. Lo mismo ocurrió para la evaluación visual de yemas. No se evidenció diferencia para las variables cuaja y retención, presentando valores que se ajustan bastante a la carga de fruta recomendada para la variedad en estudio, obteniendo para cada tratamiento valores cercanos al 50%.
19 Departamento de Fitopatología
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ANEXO DE TABLAS Y DATOS
Anexo 1. Informe de laboratorio. Prueba de eficacia in vitro.
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21 Departamento de Fitopatología
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22 Departamento de Fitopatología
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23 Departamento de Fitopatología
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Anexo 2. Informe de laboratorio. Recuento de Unidades formadoras de colonia previo a la primera
aplicación.
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25 Departamento de Fitopatología
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26 Departamento de Fitopatología
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Anexo 3. Informe de laboratorio. Recuento de Unidades formadoras de colonia posterior a la
primera aplicación.
27 Departamento de Fitopatología
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