APLICACIONES CLÍNICAS DE LA ESPECTROMETRIA DE MASAS Mª Jesús Maza Castillo Residente 1º...
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APLICACIONES APLICACIONES CLÍNICAS DE LA CLÍNICAS DE LA ESPECTROMETRIA DE ESPECTROMETRIA DE MASAS MASAS Mª Jesús Maza Castillo Mª Jesús Maza Castillo Residente 1º Análisis Clínicos Residente 1º Análisis Clínicos Hospital Universitario de Hospital Universitario de Guadalajara Guadalajara 25 Abril 2007 25 Abril 2007
APLICACIONES CLÍNICAS DE LA ESPECTROMETRIA DE MASAS Mª Jesús Maza Castillo Residente 1º Análisis Clínicos Hospital Universitario de Guadalajara 25 Abril
APLICACIONES CLNICAS DE LA ESPECTROMETRIA DE MASAS M Jess Maza
Castillo Residente 1 Anlisis Clnicos Hospital Universitario de
Guadalajara 25 Abril 2007
Diapositiva 2
- 1.Deteccin de Helicobacter pylori - 2.Evaluacin de la funcin
pancretica exocrina
Diapositiva 3
DETECCIN DE Helicobacter pylori 1.QU ES? -Bacilo gram negativo
que se encuentra en la mucosa gstrica asociado a distintas
enfermedades digestivas
Diapositiva 4
-Catalasa y oxidasa positivo -Vive en mucosa gstrica antral
-Libre en mucus, en la superfcie de las clulas epiteliales o en el
intersticio celular -NO es invasivo -NO se ha aislado en
hemocultivos -MVIL -FORMA ESPIRAL -UREASA POSITIVA
CARACTERISTICAS
Diapositiva 5
2. HISTORIA Robin Warren y Barry Marshall -1982 Demuestran que
la principal causa de la lcera pptica y gstrica es Helicobacter
pylori La bacteria que destron al estrs -2005- Premio Nobel. La
bacteria que destron al estrs
Diapositiva 6
3. EL POR QU SE SU IMPORTANCIA TRATAMIENTO Las infecciones por
H.pylori afectan aproximadamente a la mitad de la poblacin mundial
DOS RAZONES PATOLOGA
Diapositiva 7
Helicobacter pylori Infiltrado inflamatorio Gastritis atrfica
autoinmune (tipo A) Gastritis atrfica multifocal (tipo B) MALT PMN
prominentes Linfoma Gastritis central difusa Ulcera duodenal
Gastritis central superficial Cncer difuso Cncer intestinal lcera
gstrica Vasculares Autoinmune Dermatolgicas Encefalopatias
Diabaetes mellitus Extradigestivas RR=3.8
Diapositiva 8
MECANISMOS POR LOS CUALES H. Pylori LESIONA LA MUCOSA GSTRICA
Sustancias externas Lipopolisacrido Ureasa Induce apoptosis
Endotoxina Actividad citotxica Urea+ H 2 O CO 2 + 2NH 4 + Daa la
microcirculacin
Diapositiva 9
4. DIAGNSTICO INVASIVOS NO INVASIVOS DIRECTOS INDIRECTOS
-CULTIVO -HISTOLOGA -TC.MOLECULARES (PCR) -TC.MOLECULARES.( Jugo
pancretico, saliva o heces) -ANTGENO EN HECES -UREASA RPIDA -PRUEBA
DEL ALIENTO (con urea *C13) -SEROLOGA
Diapositiva 10
SENSIBILIDAD Y ESPECIFICIDAD S(%) E(%) UREASA RPIDA HISTOLOGA
CULTIVO TEST DE ALIENTO SEROLOGA- ELISA ANTGENOS EN HECES 97 94.1
98.2 100 77.4 100 95.5 93.5 91 50 89.5 77.8
Diapositiva 11
PRUEBA DEL ALIENTO. DETERMINACIN DE 13 CO2 EN EL ALIENTO Prueba
estndar entre las pruebas diagnsticas no invasivas de infeccin por
Helicobacter pylori
Diapositiva 12
Test de la urea marcada Test de la urea marcada O NH 2 UREASA
*CO 2 + 2NH 4 + O NH 2 UREASA *C
Diapositiva 13
1.PROCEDIMIENTO PARA LA REALIZACIN DEL TEST Sobre de cido
ctrico Comprimido de urea (*C) Tubos de recogida de muestra 2
tapones verde (basal) 2 tapones blanco (post)
Diapositiva 14
200ml AGUA + AC.CTRICO 10 MIN 2.Muestra Posterior 125 ml AGUA +
UREA (Comprimido) 1.Muestra Basal 30 MIN + 2 tubos
Diapositiva 15
2.ANLISIS DE LA MUESTRA -Los valores corresponden a la relaccin
13 CO 2 /CO 2 en el aire espirado y el resultado se expresa como
enriquecimiento isotpico ( 13 CO 2 /CO 2 )m - ( 13 CO 2 /CO 2 )c (
13 CO 2 /CO 2 )c = ---------------------------------------- x 1000
o / oo 1. Basal o / oo 2. Post o / oo o0 / oo Post Basal o /
oo
Diapositiva 16
RESULTADOS Paciente 1 o / oo < 5 Negativo Si o / oo > 5
Positivo Si 1. Basal -23.74 2. Post -22.47 1.27 < 5 o / oo
Negativo Paciente 2. 1. Basal -22.39 2. Post 69.28 91.67 > 5
Positivo
Diapositiva 17
Falsos negativos -Realizacin de la prueba antes de 4 semanas de
finalizar el tratamiento erradicador Tratamiento con inhibidores de
la bomba de protones o sales de Bismuto en el momento de la prueba
o dias previos Vaciamiento gtrico rpido Realizacin de la prueba en
las 4 h despus de la endoscopia Falsos positivos Produccin de
ureasa por otros bacterias en pacientes aclohdricos.(gastritis
crnica atrfica) Recoger las muestras antes de tiempo. Recoger las
muestras demasiado tarde. Elevacin por la accin hidroltica sobre la
urea de la flora bacteriana.
Diapositiva 18
Fisiologa del pncreas Digestin de carbohidratros, protenas,
lpidos conversin en molculas absorbibles EVALUACIN DE LA FUNCIN
PANCRETICA EXOCRINA PNCREAS 1. Endocrino 2. Exocrino - Porcin
enzimtica - Porcin acuosa
Diapositiva 19
Pancreatitis crnica - Proceso inflamatorio progresivo e
irreversible caracterizado por la fibrosis de la glndula con
destruccin del parnquima exocrino en la primera fase y en una
segunda fase del parnquima endocrino -Malabsorsin por afectacin del
pncreas exocrino, (esteatorrea, creatorrea), y en fases avanzadas,
diabetes mellitus
Diapositiva 20
1.Clasificacin: ( Marseille Rome) 1. Pancreatitis Crnica
calcificante 2. Pancreatitis crnica obstructiva Obstruccin del
conducto pancretico principal 3.Pancreatits inflamatoria Fibrosis
densa e infiltrado inflamatorio mononuclear Alcohol
Diapositiva 21
3. Sintomatologa: 1.Dolor crnico (80%): 1.Dolor crnico (80%):
Dolor continuo abdominal de intensidad moderada. 2.Diarrea y prdida
de peso 2.Diarrea y prdida de peso: Inadecuada digestin de los
alimentos y la imposibilidad del organismo para asimilarlos.
Desnutricion progresiva
Diapositiva 22
4. Diagnstico: -Pruebas de imagen: Radriografa, Ecografa,
Ultrasonidos,... -Pruebas de funcin pancretica exocrina. -Mtodos
con intubacin duodenal: Jugo pancretico -Mtodos sin intubacin
duodenal: - Niveles de enzimas en suero - CUANTIFICACIN DE LA GRASA
FECAL(VAN DE KAMER) ( S y E) - Cuantificacin de quimiotripsina
fecal - Cuantificacin de elastasa fecal - Prueba del pancreolauril
- Prueba de bentiromina - TEST DE TRIGLICRIDOS MIXTOS.TEST DE
ALIENTO
Diapositiva 23
APLICACIONES CLNICAS -Detectar decrementos en la actividad de
la lipasa intraduodenal. -Seguimiento de la evolucin de la
enfermedad pancretica ( este test es ms sensible que el estudio de
esteatorrea, ya que esta no se produce hasta que la produccin de
lipasa es menor del 10%. -Monitorizacin del efecto del
tratamiento
Diapositiva 24
Fundamento: Se basa en marcar con 13 C distintos sustratos que
requieren la participacin de enzimas pancreticas para su escisin y
absorcin. Los niveles de 13 CO 2 en aire espirado nos permitirn
valorar la actividad enzimtica del pncreas.
Diapositiva 25
REPRESENTACIN DEL TEST DE ALIENTO CON TG MIXTOS MARCADOS
GLICEROLGLICEROL C 20 1,3 diesteraril-2-13C-carboxil-octanoil
glicerol 13 C 8 C 20 Lipasa pancretica GLICEROLGLICEROL C 20 13 C 8
C 20 Absorcin intestinal 13 C 8 + GLICEROLGLICEROL Oxidacin heptica
13 CO 2 Respiracin
Diapositiva 26
COMIDA DE PRUEBA ( 13 C-Triglicridos Mixtos) Ingredientes
Mantequilla (20 gramos) Biscottes (15 gramos) Agua (200 mL) Modo de
preparacin Untar la mantequilla en ambos biscottes Aadir los 250 mg
de 13 C-Triglicridos en la mantequilla 50 tubos: 2 basales + 48
posteriores
Diapositiva 27
PROTOCOLO DEL TEST DEL ALIENTO 1.+ 10mg METOCLOPRAMIDA 10 min 2
tubos BASALES 2. CADA 15 MINUTOS COMIDA DE PRUEBA: Biscotes,
mantequilla, 13C-TG mixtos 48 tubos POSTERIORES DURACIN:
6HORAS
Diapositiva 28
ANLISIS DE LAS MUESTRAS o / oo =
---------------------------------------- x 1000 ( 13 CO 2 /CO 2 )m
- ( 13 CO 2 /CO 2 )c ( 13 CO 2 /CO 2 )c Resultados: % de
13C-recovery/h y valores acumulados durante 6 h. Se calcula
utilizando un programa matemtico que calcula el porcentaje de
sustracto recuperado como 13 CO 2 -Los valores corresponden a la
relaccin 13 CO 2 /CO 2 en el aire espirado y el resultado se
expresa como enriquecimiento isotpico
Diapositiva 29
NEGATIVO
Diapositiva 30
POSITIVO
Diapositiva 31
TRAS TTO CON KREN
Diapositiva 32
BUENA ALTERNATIVA A LAS TCNICAS TRADICIONALES - No invasivo
-Recogida de muestra sencilla - No radioactivo (13C) PACIENTE
INVESTIGADOR -Fcil conservacin -Manejo -Anlisis de las muestras
VENTAJAS -Realizacin del test en mujeres frtiles, embarazadas, nios
y ancianos -No instalaciones especiales: Espectrometria de masas (
13 CO2 )
Diapositiva 33
FALSOS POSITIVOS: Vaciamiento gstrico retrasado Dao extenso de
la mucosa intestinal (celacos, enfermedad de Crohn) Tiempo de
contacto corto entre la comida de prueba y las secreciones
pancreato-biliares (pacientes gastrectomizados) Diabetes y
enfermedad heptica severa FALSOS NEGATIVOS: Enfermedad pancretica
moderada
Diapositiva 34
-Este test es capaz de detectar disfuncin pancretica incluso en
ausencia de esteatorrea, as como de diferenciar si la esteatorrea
est asociada o no a enfermedad pancretica (La esteatorrea se
produce si la lipasa cae por debajo de 40KU/h. )