CURSO : BioqumicaGRUPO : BDOCENTE: Carmen Yzsiga
BarreraPRACTICA: IVALUMNOS: Esquivel Saavedra Cristopher Huamn Lin
Lucy Fernndez Solrzano Celeste Snchez Regalado PabloCICLO : III
Nuevo Chimbote Per
INTRODUCCION
Las enzimas son catalizadores orgnicos que disminuyen la energa
deactivacin de las reacciones metablicas, por lo que aumentan la
velocidad,y permiten que se produzcan a temperaturas y presiones a
las quenormalmente no tendran lugar. En una curva de saturacin de
una reaccinenzimtica, al inicio, la velocidad permanece constante
denominndosevelocidad inicial (Vo), la cual va disminuyendo hasta
llegar a un plateau queda a conocer una saturacin de la enzima por
el sustrato.AMILASA:Catalizala-1,4glucosidicosdelaregincentralde la
cadena de amilosa y amilopeptina, exceptuando las molculascercanas
a la ramificacin, obteniendo como resultado maltosa yoligosacridos
de varios tamaos. La actividad de la enzima se
determinacualitativamente mediante la disminucin de la capacidad de
la solucin dealmidn para formar el color azul caractersticos con el
yodo o midiendo ladisminucin de la viscosidad de la suspensin de
almidn.La alfa-amilasa cataliza la hidrlisis de la cadena lineal
(amilosa) y laramificada (amilopectina) del almidn, rompiendo
enlaces 1,4 interiores(endoamilasa) para formar una mezcla de
dextrinas; por ello se la conocecomo enzima dextrinognica (mezcla
de amilodextrina, eritrodextrina,acrodextrina y maltodextrina) con
poca produccin de maltosa.ALMIDON DE CEBADA:El almidn es un polmero
semicristalino de glucosa de gran abundancia enla naturaleza. La
cantidad de almidn contenido en el grano de cereal varia,pero
generalmente oscila entre el 60 y 75 % del peso del grano. El
almidnpresente en los granos es el ms importante de los
carbohidratos para finesindustriales resultando preciso degradarlo
enzimticamente con unagelatinizacin previa por accin de calor o
sometindolo a un intensotrabajo mecnico. El almidn consta de dos
fracciones: amilosa yamilopectina.
OBJETIVOS:
-Determinar la actividad enzimtica de una amilasa, extrada de la
cebada, dosando almidn residual.-Determinar la actividad especfica
de la amilasa vegetal.
MATERIALES Y MTODOS1. Se puso a germinar 50 semillas de cebada
por 1 semana.2. Luego se tritur las semillas y se coloc en una
placa Petri.3. A estas semillas se le agreg 10 ml de Buffer y
cloruro de calcio.4. Se filtr la muestra.5. En 4 tubos de ensayo se
agreg 1 ml de sustrato en cada uno y se dej incubar por 5 min a
30C.6. En el primer tubo de ensayo no se agreg nada, en el segundo
tubo se agreg 0.1 ml del extracto crudo de enzima, en el tercer
tubo se agreg 0.2 ml y en el cuarto tubo se agreg 0.3 ml.7. Luego
se dej incubar por 15 min a 30C.8. Se agreg 1 ml de cido clorhdrico
a cada tubo de ensayo y se dej en reposo por 5 min.9. Luego se
agreg agua destilada, en el primer tubo 9.9 ml, en el segundo tubo
9.8 ml, en el tercer tubo 9.7 ml y en el cuarto tubo 9.6 ml.10. Se
agreg 0.5 ml de lugol a cada muestra, luego se dej reposar por 5
min.11. Se llev los 4 tubos al espectrofotmetro para observar la
absorbancia a 620nm. 12. En otros 4 tubos de ensayo se agreg
preparado enzimtico, en el primer tubo nada, en el segundo tubo 0.2
ml, en el tercer tubo 0.1 ml y en el cuarto tubo 0.05 ml.13. Luego
se agreg agua destilada, en el primer tubo 1 ml, en el segundo tubo
0.8 ml, en el tercer tubo 0.9 ml y en el cuarto tubo 0.95 ml.14. A
estos 4 tubos de ensayo se agreg 4 ml del reactivo biuret y se dej
incubar por 30 min a 37C.15. Estos tubos fueron llevados al
espectrofotmetro para observar la absorbancia a 540 nm.
DISCUSIONES
Al adicionarle lugol a los 4 tubos de ensayo se espera poder
determinar la presencia de polisacridos, si se observa que los
tubos se ponen color azul hay presencia de almidn, pero si se pone
de color amarillo intenso quiere decir que es todo lo
contrario.
La alfa-Amilasa se encuentra ampliamente distribuida en el reino
vegetal, particularmente en la semillas con reservas de hidratos de
carbono como el trigo, la cebada, de donde ha sido posible aislarla
en forma pura.
La amilasa es una de las enzimas mas estudiadas debido a su rol
de degradacin del almidn, ya que permite una germinacin de las
semillas, el cual es degradado por los enlaces 1-4 del interior
(endoamilasa) en diferentes dextrinas, que debido a su disminucin
en tamao puede ser hidrolizada por la B-amilasa, sin embargo la
-amilasa es una enzima que se encuentra regulada tanto por
hormonas, o diferentes factores, tales como la temperatura y el pH,
adems posee un peso molecular de 50 Kda aproximadamente.
CONCLUSIONES
Concluida la prctica nos damos con la sorpresa que a una mayor
absorbancia depende de mayor cantidad de enzima aadida al tubo de
ensayo junto con cierta cantidad de lugol (4ml) ya que el lugol nos
indica la presencia de almidon, con ayuda del espectrofotmetro esto
se pudo comprobar. La amilasa es una de las enzimas mas estudiadas
debido a su rol de degradacin del almidn
La actividad de la amilasa vegetal contenida en la cebada se
puede medir tambin en el espectrofotmetro donde nos podemos fijar
que a mayor preparado enzimatico junto con los 4 ml de reactivo de
Biuret la absorbancia es menor.
CUESTIONARIO1.- En la sntesis de arginina a partir de acido
glutmico se observaron las siguientes reacciones 1342
Glu ------ N ac. Glu ------ Orn ------ Cit ------ Arg Siendo 1,
2, 3,4 enzimas Indica cuales son los sustratos y productos
correspondientes para estas enzimas mediante un cuadro.
2.-Por que se sometieron las raicillas del cereal a un proceso
fsico y qumico en el proceso de extraccin?El proceso de extraccin
se basa en la obtencin de amilasa, por lo que es necesario que las
raicillas de los cereales sufran un proceso fsicodonde se van a
fragmentar en pedazos ms pequeos con la ayuda de un mortero pero
aun as siguen conservando su naturaleza, luego se da el proceso
qumicodonde se va a filtrar la parte liquida que seria la amilasa
de las semillas con la ayuda de una gasa ,luego a este extracto se
le van agregando una seria de reactivos lo cual permitirn
transformarla en un preparado enzimtico para posteriormente
utilizarla en diferentes pruebas.
3.- Si se te da una solucin que supuestamente contiene una
enzima, Cmo determinaras en la solucin la presencia de una enzima
que cataliza la hidrolisis de almidn?Para determinar la presencia
de una enzima en una solucin y a la vez observar que cataliza la
hidrolisis de almidn solo se podra lograr a travs de una va ,la
cual consiste en agregar reactivos que permitan evidenciar tal
presencia como es el caso del lugol , adems porque mientras el
color de la mezcla sea mas intenso significa que la actividad
enzimtica que ejerce la amilasa sobre el almidn ser un poco mas
baja , adems tambin la podemos notar ya que en la solucin se va a
observar la formacin de anillos en la parte superior de dicho
liquido o sustancia.
4.- Represente mediante un flujograma el proceso de extraccin de
una amilasa de una fuente diferente a la utilizada en prctica.
LAVADORALLADOTAMIZADOCascarillaMancha de
aguaAguaSEDIMENTACIONFERMENTACION SECADOSECADOAlmidn agrio Almidn
nativo AguaAfrechoRACES DE YUCA
5.- Como se puede incrementar la actividad especfica de una
enzima?La actividad especfica de las enzimas se calcula dividiendo
la actividad enzimtica (por ejemplo; U/mL) entre la concentracin de
protenas (mg/mL). El resultado final indica la cantidad de enzima
por milgramos de protenas presente. Se supone que si purificas la
enzima normalmente la actividad especfica de la misma debe
aumentar, ya que la proporcin de enzima del total de las protenas
presentes debe tambin irse incrementando. A veces esto no ocurre.
En ese caso debe revisar el procedimiento otra vez ya que algo
puede estar saliendo mal. Por ejemplo que se desnaturalice la
enzima en el proceso de purificacin por empleo de algn solvente o
pH o fuerza inica inadecuada. Tambin debe tener en cuenta si la
protena en milimtrica, ya que la prdida de una subunidad puede
reducir significativamente su actividad.
REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
ANDERSON, L y Col. Nutricin y dieta de Cooper. 17. Ed. Mxico,
Interamericana S.A. 1985. 730 pp. ALEMANY, M y S. FONT. Prcticas de
Bioqumica. Madrid. Alhambra S.A. 1983 335 pp. BOHINSKY, R.
Bioqumica. Bogot. Fondo Educativo Interamericano. S.A. 1978, 667
pp. BRAVERMAN, J.B.S. Introduccin a la bioqumica de los alimentos.
3ra Ed Barcelona Omega S.A.358 pp. CHANG, R. Fsico Qumica con
Aplicaciones a Sistemas Biolgicos. Mxico C.E.C.S.A 1986 792 pg.
CHEFTEL, J.C Introduccin a la bioqumica y tecnologa de alimentos
Vol I-II Zaragoza, Acribia 1976. 33 y 405 pp. DAWES, E.A. Problemas
cuantitativos d Bioqumica. 2da ed. En Espaol. Zaragoza Acriba. 1970
380 pg. FENNEMA, O.R. Introduccin a la ciencia de los alimentos.
Tomo I-II FREIFELDER, D. Tcnicas en bioqumica y biologa molecular.
Barcelona Revert S.A.1979 631, pp. GONZALES DE BUITRAGO. Problemas
de bioqumica. Madrid. Espaa. CERTYX 1986, 432 pp. HORNA, B. E. La
clula: Mdulo I de bioqumica. Chimbote. Universidad Nacional del
Santa. 1988. 204 pp. HORNA, B. E. transformaciones energticas.
Mdulo 2 de Bioqumica. Chimbote. UNS 1988. 150 pp. JUNGERMANN, K y
H. MoBLER. Bioqumica. Madrid. Primide. 1984,790 pp. LASKOWSKI W y
W. PLIT. Biofsica. Omega S.A. 1976, 506 pp. LEHNINGER, A.L
Bioenergtica. Fondo Educativo Interamericano S.A. 1975 242 pp.
LEHNINGER, A.L Bioqumica 9na Reimpresin. Barcelona Espaa.Omega S.A.
1985. 1117 pp. LEHNINGER, A.L Principals of Biochemistry. New York.
Worth Publisher, 1982, 1011pp. MORRIS, J.B. Fsico Qumica para
Bilogos. Barcelona, Reverte S.A. 1976, 357 pp.
