CULTIVOS CELULARES Y SUS APLICACIONES

APLICACIONES EN BIOLOGÍA CELULAR

• OBTENER Y AILAR LAS CÉLULAS DE UN TEJIDO

• TRASPASAR LAS CÉLULAS A UN MEDIO DE CULTIVO (FUENTE DE NUTRIENTES Y EL SUSTRATO DONDE

LAS CÉLULAS VAN A CRECER)

• MANTENCIÓN DEL CULTIVO BAJO CONDICIONES ADECUADAS DE ACUERDO AL TIPO CELULAR

(TEMPERATURA, CONCENTRACIÓN DE CO2, PH, ETC.)

CULTIVOS CELULARES Y SUS APLICACIONES

APLICACIONES EN BIOLOGÍA CELULAR

CULTIVOS CELULARES Y SUS APLICACIONES

APLICACIONES EN BIOLOGÍA CELULAR

LINEAS CELULARES TUMORALES (INMORTALES)

CÉLULAS QUE PRESENTAN UNA CAPACIDAD INDEFINIDA DE CRECIMIENTO EN MEDIOS DE

CULTIVO, INCLUSO ANTE MANIPULACIÓN GÉNICA O DE MUTACIONES DIRIGIDAS.

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APLICACIONES EN BIOLOGÍA CELULAR

• ENZIMAS• ANTICUERPOS

• FACTORES DE CRECIMIENTO• AGENTES CANCERÍGENOS

• ENTRE OTROS

GEN BACTERIA

PROTEÍNA

CULTIVOS CELULARES Y SUS APLICACIONES

APLICACIONES EN BIOLOGÍA CELULAR

EN EUCARIONTES, LAS PROTEÍNAS ESTÁN CONSTITUIDAS NO SOLAMENTE POR UNA LARGA CADENA DE AMINOÁCIDOS, SINO QUE TAMBIÉN

CONTIENEN COMPLEJOS MOLECULARES UNIDOS A ELLA, FRECUENTEMENTE CARBOHIDRATOS.

TRADUCCIÓN

COMPLEJOS MOLECULARE

SCULTIVOS CÉLULAS

ANIMALES

TRANSFECCIÓNINCORPORACIÓN DEL ADN

INCORPORACIÓN DE ADN DENTRO DE CÉLULAS DE UN CULTIVO, CON EL OBJETO DE QUE ESTAS SINTETICEN UNA PROTEÍNA EN PARTICULAR.

ELECTROPORACIÓNTRANSFECCIÓN

FORMACIÓN DE POROS EN LA SUPERFICIE CELULAR POR ESTIMULACIÓN ELÉCTRICA.

BIOBALÍSTICATRANSFECCIÓN

DISPARO DE MICROPROYECTILES RECUBIERTOS DE ADN DENTRO DE LA CÉLULA.

TRANSFECCIÓN VIRALTRANSFECCIÓN

INCORPORACIÓN DE ADN FORÁNEO A TRAVÉS DE VIRUS

ANTICUERPOS MONOCLONALES

CIERTAS PROTEÍNAS SON ALTAMENTE ESPECÍFICAS EN SU UBICACIÓN, HACIENDOLO SOLAMENTE EN

CIERTOS TEJIDOS E INCLUSO EN ALGUNOS ORGANELOS CELULARES.

INMUNOLOCALIZACIÓN

LOCALIZACIÓN DE PROTEÍNAS

ANTICUERPOS MONOCLONALES

SE UTILIZA LA CAPACIDAD DE LOS ANTICUERPOS PARA UNIRSE, DE FORMA BASTANTE ESPECÍFICA, A

MOLÉCULAS EXÓGENAS.

LOS CIENTÍFICOS HAN DESARROLLADO TÉCNICAS DE

INMUNOLOCALIZACIÓN.

TÉCNICA DE LOCALIZACIÓN POR ANTICUERPOS MONOCLONALES

INMUNIZACIÓN

1

SE INYECTA LA PROTEÍNA DE ESTUDIO A UN ANIMAL DE LABORATORIO

EL SISTEMA INMUNE DEL ANIMAL SE ACTIVA Y GENERA ANTICUERPOS ESPECÍFICOS PARA LA PROTEÍNA INYECTADA

TÉCNICA DE LOCALIZACIÓN POR ANTICUERPOS MONOCLONALES

PRODUCCIÓN DE HIBRIDOMAS

2

HIBRIDOMAS: FUSIÓN DE CÉLULAS PLASMÁTICAS (INMUNE) Y TUMORALES (CÁNCER)

CAPACIDAD DE PRODUCIR ANTICUERPOS REQUERIDOS Y MULTIPLICARSE RÁPIDAMENTE.

TÉCNICA DE LOCALIZACIÓN POR ANTICUERPOS MONOCLONALES

SELECCIÓN DE CÉLULAS HÍBRIDAS

3

LOS HIBRIDOMAS SON CULTIVADOS EN UN MEDIO ESPECIAL DENOMINADO HAT. EN ESTE MEDIO, SOLO LAS CÉLULAS HÍBRIDAS

PUEDEN SOBREVIVIR, POR LO TANTO, SE ELIMINAN LAS CÉLULAS TUMORALES Y LAS CÉLULAS PLASMÁTICAS NO FUSIONADOS.

TÉCNICA DE LOCALIZACIÓN POR ANTICUERPOS MONOCLONALES

IDENTIFICACIÓN DE CÉLULAS

PRODUCTORAS DE ANTICUERPOS

4

TODAS LAS CÉLULAS HÍBRIDAS SOBREVIVIENTES DEL CULTIVO HAT SON HÍBRIDAS, PERO SOLO UNAS POCAS PRODUCE EL ANTICUERPO NECESARIO.

PARA LA DETECCIÓN SE UTILIZAN PRUEBAS BIOQUÍMICAS. UNA VEZ DEFINIDAS SE AISLAN Y SE MANTIENEN EN CONDICIONES DE CULTIVO, PARA

GENERAR UNA GRAN CANTIDAD DE ANTICUERPOS.

TÉCNICA DE LOCALIZACIÓN POR ANTICUERPOS MONOCLONALES

MARCACIÓN DE ANTICUERPOS

5

LOS ANTICUERPOS GENERADOS SE MARCAN CON UNA SUSTANCIA FLUORESCENTE. ESTO PERMITE DETECTAR LA PRESENCIA DE LA PROTEÍNA A

TRAVÉS DEL COLOR DEL ANTICUERPO QUE FUE MARCADO.

GENERALMENTE SON MARCADOS CON REACTIVOS FLUORESCENTES, LAS QUE PUEDEN VISUALIZARSE EN MICROSCOPIOS DE FLUORESCENCIA.