BOLETÍN DE LA SECYT A V O L UMEN 36 NÚM.1 (2015) W W W

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Innovacioacuten con Integridad

UHR-Q TOF MS

Soacutelo para investigacioacuten No para uso diagnoacutestico

Sistema LCMS Q-TOF impact IITodo el detalle en la primera foto

Amplio Rango Dinaacutemico - Cinco oacuterdenes de magnitud para un conocimiento exhaustivo de su muestra

Adquisicioacuten completa de una sola vez - Garantiza los mejores resultados cualitativos y cuantitativos en un solo anaacutelisis cromato-graacutefico Miacutenimo tiempo desde la medida al resultado final

Instant Expertisetrade Integridad Espectral en todo el rango desde moleacuteculas de masa bajas hasta proteinas intactas

Fidelidad Isotoacutepica para la determinacioacuten definitiva de la foacutermula molecular

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IacuteNDICE

2 EDITORIAL

ARTIacuteCULO3 Revalorizacioacuten y aprovechamiento de subproductos de la industria agroalimentaria

obtencioacuten de peacuteptidos bioactivos R Vaacutesquez-Villanueva MC Garciacutea ML Marina

NOTICIAS DE LA SECyTA22 XV Reunioacuten Cientiacutefica de la Sociedad Espantildeola de Cromatografiacutea y Teacutecnicas Afines

(SECyTA 2015)25 Nuevos socios28 In Memoriam Prof Claire Vidal-Madjar

INFORMACIONES29 Calendario de actividades

INFORMACIOacuteN BIBLIOGRAacuteFICA32 Artiacuteculos de intereacutes

DE NUESTRAS EMPRESAS COLABORADORAS35 Nota teacutecnica39 Novedades teacutecnicas

49 NORMAS GENERALES DE PUBLICACIOacuteN

51 NORMATIVA DE CONCESIOacuteN DE AYUDAS PARA LA ASISTENCIA A CONGRESOSYO REUNIONES

Redaccioacuten Mariacutea Luz Sanz (mlsanziqogcsices)Ana Cristina Soria Monzoacuten (acsoriaiqogcsices)

Instituto de Quiacutemica Orgaacutenica General (CSIC)Juan de la Cierva 3 28006 Madrid Tel 91 562 29 00

Fco Javier Moreno (javiermorenocsices)Instituto de Investigacioacuten en Ciencias de la Alimentacioacuten (CSIC-UAM)Nicolaacutes Cabrera 9 28049 Madrid Tel 91 001 79 00

Publicidad Mario Fernaacutendez (marioiqogcsices)Instituto de Quiacutemica Orgaacutenica General (CSIC)Juan de la Cierva 3 28006 Madrid Tel 91 562 29 00

Colaboradores B Hernaacutendez

Depoacutesito legal M-1902-1975

Disentildeo preimpresioacuten e impresioacuten Helios SL bull Duque de Sevilla 16 bull 28002 Madrid bull Tel 91 768 49 50

Disentildeo de portada Pau de Riba

Los autores son responsables del contenido de sus artiacuteculos

CROMATOGRAFIacuteA Y TEacuteCNICAS AFINESMadrid Junio de 2015 Vol 36 nuacutem 1ISSN 1132-1369

Sociedad Espantildeola de Cromatografiacutea y Teacutecnicas Afines (httpwwwsecytaorg)

Quiero enviar desde aquiacute un mensaje de optimismo a todos los que trabajamos en el campo de la Quiacutemica Analiacutetica yparticularmente en las teacutecnicas de separacioacuten Como ya sabeacuteis durante los uacuteltimos antildeos hemos asistido a una total revolu-cioacuten en las teacutecnicas y el anaacutelisis instrumental Los avances en el mundo de la microelectroacutenica y la informaacutetica han permi-tido desarrollar una instrumentacioacuten cientiacutefica con un potencial enorme Por poner alguacuten ejemplo el desarrollo de la cro-matografiacutea en dos dimensiones GC x GC y LC x LC ha supuesto un salto cuantitativo en la capacidad de separacioacuten decompuestos quiacutemicos en mezclas complejas lo que hace solo unos antildeos hubiera sido imposible de llevar a cabo La intro-duccioacuten de la espectrometriacutea de masas como sistema de deteccioacuten acoplada a las teacutecnicas de separacioacuten ha supuesto laposibilidad de detectar cantidades en torno a los femtogramos con una gran precisioacuten y exactitud Ello ha supuesto unamejora tanto en la comprensioacuten del comportamiento de los contaminantes en el medio ambiente como en el control y elaumento de la calidad y seguridad de los alimentos Por otra parte el desarrollo de la electroforesis capilar la introduccioacutende nuevas fases estacionarias en la cromatografiacutea de liacutequidos y sus acoplamientos a detectores de masas tipo ToF asiacute comola introduccioacuten de nuevas interfases han permitido analizar biomoleacuteculas cada vez maacutes complejas y convertirse en unaherramienta fundamental en los estudios de proteoacutemica y metaboloacutemica Por ello y a pesar de la crisis econoacutemica que hahecho que la productividad cientiacutefica en Espantildea este disminuyendo poco a poco en el caso de las teacutecnicas de separacioacuten ysus aplicaciones el nuacutemero de publicaciones cientiacuteficas sigue aumentando situaacutendonos en el estudio realizado en el nuacuteme-ro de marzo del ldquoAnalytical Scientific Journalrdquo entre los cinco paiacuteses que maacutes publican en el mundo por detraacutes de ChinaUS Alemania y Japoacuten

En la vida de la Sociedad Espantildeola de Cromatografiacutea y Teacutecnicas Afines (SECyTA) las reuniones cientiacuteficas anualesson una de nuestras actividades maacutes importantes ya que permiten el encuentro con los socios el intercambio de opinionesy la presentacioacuten de las innovaciones maacutes interesantes en el campo de las teacutecnicas de separacioacuten Como ya sabeacuteis del 27 al30 del proacuteximo mes de octubre se celebraraacute en Castelloacuten la XV Reunioacuten Cientiacutefica de la SECyTA de forma conjunta conla VII Reunioacuten Nacional de la Sociedad Espantildeola de Espectrometriacutea de Masas (SEEM) lo que le daraacute una resonanciamayor dentro de la comunidad quiacutemica espantildeola y de otros paiacuteses No es la primera vez que nuestra sociedad organiza sureunioacuten anual con la SEEM siempre con muy buenos resultados Ademaacutes de las buenas relaciones que mantenemos con laSEEM desde hace antildeos coincidimos en temaacuteticas y en objetivos En esta ocasioacuten y como ya es habitual se prestaraacute espe-cial atencioacuten a los joacutevenes investigadores favoreciendo su asistencia y participacioacuten en las actividades de las 2 reuniones

Como en anteriores ediciones a lo largo de las jornadas tendremos ocasioacuten de conocer el impacto que la innovacioacuten yel desarrollo del conocimiento que tanto las Teacutecnicas Analiacuteticas de Separacioacuten como la Espectrometriacutea de Masas tienen enla resolucioacuten de los problemas actuales de la sociedad Se presentaraacuten los uacuteltimos avances en estos campos enfocados prin-cipalmente a la miniaturizacioacuten automatizacioacuten acoplamientos on-line tratamiento de muestra etc y sus aplicaciones adiversas aacutereas de conocimiento como medio ambiente alimentos faacutermacos y sistemas bioloacutegicos Se ha elaborado unprograma cientiacutefico atractivo competitivo y sugerente que permitiraacute crear un foro de discusioacuten entre todos los profesiona-les del sector favoreciendo la interaccioacuten entre ellos (cientiacuteficos empresas estudiantes administracioacuten etc) lo quepotenciaraacute las colaboraciones entre todos los profesionales implicados y que revertiraacute en beneficio de todos Toda la infor-macioacuten sobre la reunioacuten la encontrareacuteis en la paacutegina web de la SECyTA y en wwwsecytaseem2015com

Durante las jornadas contaremos con conferenciantes de elevado prestigio como son los Drs Facundo M Fernaacutendez(Georgia Institute of Technology Atlanta USA) Pablo Martiacutenez-Lozano Sinues (ETH Zurich Switzerland) JanaHajslova (Institute of Chemical Technology Prague Czech Republic) Coral Barbas (University of CEU San PabloMadrid Spain) Paola Dugo (University of Messina Messina Italy) Joseacute Manuel Florencio Nogueira (University ofLisboa Lisbon Portugal) Eric Reiner (University of Toronto Toronto Canada) y Feacutelix Hernaacutendez (University Jaume ICastelloacuten Spain) que nos contaraacuten el resultado de sus uacuteltimas investigaciones en relacioacuten a las teacutecnicas de separacioacuten y laespectrometriacutea de masas Tambieacuten tendremos nuestras sesiones de joacutevenes investigadores y como no podiacutea ser de otramanera la XI edicioacuten de los premios Joseacute Antonio Garciacutea Domiacutenguez patrocinados por Bruker Espantildeola SA Os animo atodos a asistir y os espero en octubre en Castelloacuten

Mariacutea Joseacute Gonzaacutelez Carlos

Presidenta de la SECyTA

EDITORIAL

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Cromatografiacutea y Teacutecnicas Afines

RESUMEN

La industria agroalimentaria genera gran cantidad deresiduos que suponen un problema medioambiental yeconoacutemico Aunque se han desarrollado estrategias parala reutilizacioacuten de estos desechos como la produccioacuten depiensos y fertilizantes estos residuos pueden ser de utili-dad para la obtencioacuten de compuestos con alto valor antildeadi-do como peacuteptidos bioactivos Las teacutecnicas de separacioacutenjuegan un papel muy relevante en el desarrollo de meto-dologiacuteas para el aislamiento e identificacioacuten de sustan-cias bioactivas a partir de residuos de la industria agroali-mentaria La obtencioacuten de peacuteptidos bioactivos a partir dematrices tan complejas requiere el uso de distintas teacutecni-cas de purificacioacuten e identificacioacuten El objetivo de estetrabajo ha sido revisar las teacutecnicas y metodologiacuteas analiacuteti-cas maacutes empleadas en el aislamiento e identificacioacuten depeacuteptidos bioactivos a partir de subproductos de la indus-tria agroalimentaria

1 INTRODUCCIOacuteN

La industria agroalimentaria genera una gran cantidadde residuos que si no son aprovechados o debidamenteprocesados acaban en vertederos o siendo incineradosAmbas posibilidades provocan la emisioacuten de contami-nantes ambientales y gases de efecto invernadero que tie-nen un gran impacto medioambiental y suponen impor-tantes costes y riesgos para la salud puacuteblica (RestrepoGallego 2006 wwwprtr-es)

Se puede hacer una diferenciacioacuten entre los residuosgenerados por los alimentos procedentes de fuentesvegetales de los que proceden de fuentes animales Losprimeros estaacuten constituidos principalmente por residuosacuosos hojas caacutescaras pieles y huesos de frutosDependiendo de la fuente estos residuos puedenconstituir entre el 10 y el 65 del producto inicial(wwwprtr-es) Entre los residuos de origen animal sepueden considerar las escamas cabezas viacutesceras raspas(procedentes de pescados) huesos plumas patas picos

sangre (procedentes de aves) y carcasas pieles huesostendones sangre tejido graso cuernos pezuntildeas y oacuterga-nos internos (procedentes de ganado vacuno y porcino)(Di Bernardini y col 2011 Ajila y col 2012 Toldraacute ycol 2012 Lasekan y col 2013)

Actualmente existen distintas viacuteas de reutilizacioacutenpara estos subproductos La mayor parte de ellas suponenla preparacioacuten de productos de bajo valor como piensospara ganado fertilizantes o compost (Ajila y col 2012Piotrowska y col 2013) Estas estrategias no suponen unbeneficio econoacutemico sino que son maacutes bien una viacutea paradeshacerse de este material y evitar la gestioacuten de estosresiduos que siacute que supone un coste econoacutemico Sinembargo estos subproductos contienen sustancias valio-sas y la extraccioacuten y utilizacioacuten de estas sustancias permi-tiriacutea su revalorizacioacuten garantizando asiacute un uso maacutes efi-ciente de los recursos naturales Ademaacutes de polifenolesliacutepidos fibra vitaminas etc (Moure y col 2001Jayathilakan y col 2012) algunos subproductos presen-tan un elevado contenido proteico y constituyen portanto fuentes baratas de proteiacutenas Estas proteiacutenas tienenvalor desde un punto de vista nutricional pero tambieacutenpueden contener peacuteptidos bioactivos de intereacutes para laindustria alimentaria farmaceacuteutica y cosmeacutetica

Asiacute el aprovechamiento de los subproductos genera-dos por la industria agroalimentaria no solo permitiriacuteareducir el impacto ambiental como consecuencia de laemisioacuten de este material de desecho sino que tambieacuten per-mitiriacutea la revalorizacioacuten de este residuo y la obtencioacuten decompuestos con elevado valor antildeadido Un adecuado tra-tamiento de estos subproductos que por lo general pue-den ser considerados muestras complejas es un retoimportante para poder establecer una metodologiacutea para sureutilizacioacuten Ello requiere un importante trabajo deinvestigacioacuten dado que la principal limitacioacuten de estoscompuestos es la viabilidad econoacutemica del proceso deextraccioacuten y aislamiento En este trabajo se describen lasmetodologiacuteas analiacuteticas empleadas con el fin de llevar acabo el aislamiento e identificacioacuten de peacuteptidos bioactivosa partir de subproductos de la industria agroalimentaria

Revalorizacioacuten y aprovechamiento de subproductos de laindustria agroalimentaria obtencioacuten de peacuteptidos bioactivosRomy Vaacutesquez-Villanueva Mordf Concepcioacuten Garciacutea Mordf Luisa MarinaDepartamento de Quiacutemica Analiacutetica Quiacutemica Fiacutesica e Ingenieriacutea Quiacutemica Facultad de Biologiacutea Ciencias Ambientales yQuiacutemica Universidad de AlcalaacuteCtra Madrid-Barcelona Km 33600 28871 Alcalaacute de Henares (Madrid)e-mail mluisamarinauahes teleacutefono +34-918854935 fax +34-918854971

CTA Vol 36 (1) 2015

ARTIacuteCULO

Revalorizacioacuten y aprovechamiento de subproductos de laindustria agroalimentaria obtencioacuten de peacuteptidos bioactivos

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ARTIacuteCULO

2 PEacutePTIDOS BIOACTIVOS

Los peacuteptidos bioactivos son pequentildeas cadenas deaminoaacutecidos (entre 2-30 aminoaacutecidos de longitud) quejuegan un papel importante en ciertas rutas metaboacutelicas ypor lo tanto afectan de manera beneficiosa a nuestro esta-do de salud Para que un peacuteptido sea bioactivo debe gene-rar un efecto medible a nivel fisioloacutegico que debe serbeneficioso para la salud En muchas ocasiones los peacutep-tidos bioactivos se encuentran encriptados en la secuen-cia de una proteiacutena y solo ejercen su actividad cuando sonliberados (Korhonen y Pihlanto 2006 Ajibola y col2011) Aunque con menor frecuencia los peacuteptidos bioac-tivos tambieacuten pueden encontrarse como entidades inde-pendientes en cuyo caso no seriacutea necesario ninguacuten proce-so para su liberacioacuten

Los peacuteptidos bioactivos pueden presentar diferentesbioactividades Entre otras se han encontrado peacuteptidoscon capacidad antioxidante antihipertensiva opioideantibacteriana antihipercolesteroleacutemica antitromboacuteticaanticanceriacutegena etc (Hartmann y Meisel 2007) aunqueson los peacuteptidos con actividad antihipertensiva antioxi-dante y antimicrobiana (antibacteriana y antifuacutengica) losque maacutes frecuentemente han sido aislados a partir de resi-duos de la industria agroalimentaria

Los peacuteptidos con capacidad antihipertensiva actuacuteansobre el sistema renina-angiotensina cuya funcioacuten es lade regular la tensioacuten arterial De forma simplificada eldecapeacuteptido angiotensina I es hidrolizado por la enzimaconvertidora de la angiotensina (ACE del ingleacutes ldquoangio-tensin converting enzymerdquo) obtenieacutendose el octapeacuteptidoangiotensina II que es un potente vasoconstrictor Losfaacutermacos sinteacuteticos utilizados para el tratamiento de lahipertensioacuten suelen tener efectos secundarios indeseablescomo la sequedad bucal tos seca o incluso riesgo depadecer aneurismas (Atkinson y Robertson 1979Sweeting y col 2010) Los peacuteptidos antihipertensivosinhiben la actividad de la ACE y no presentan efectossecundarios con lo que podriacutean ser de intereacutes en el trata-miento de esta enfermedad Generalmente contienenentre 2-12 residuos de aminoaacutecidos siendo habitual lapresencia de aminoaacutecidos hidrofoacutebicos como leucina (L)y prolina (P) y aminoaacutecidos aromaacuteticos como histidina(H) tirosina (Y) fenilalanina (F) y triptoacutefano (W)Ademaacutes la posicioacuten de los residuos de P en la secuenciadel peacuteptido parece afectar de forma significativa a la esta-bilidad del peacuteptido (Cheung y col 1980) En algunosresiduos caacuternicos puede aparecer un aminoaacutecido deriva-do de la hidroacutelisis de P la hidroxiprolina (Hyp) La Hypes necesaria para la siacutentesis de colaacutegeno y por ello se haencontrado en residuos de la piel del ganado bovino y

porcino y en patas de pollo ricas en colaacutegeno (Kim y col2001a Saiga y col 2008 Ichimura y col 2009)

Los peacuteptidos con capacidad antioxidante presentangran intereacutes tanto desde el punto de vista terapeacuteutico comodesde el punto de vista de la industria alimentaria Lasespecies reactivas del oxiacutegeno (ROS del ingleacutes ldquoreactiveoxygen speciesrdquo) son moleacuteculas derivadas del oxiacutegenomolecular o radicales libres formados endoacutegenamente enel organismo o generados por causas exoacutegenas como eltabaco exposicioacuten a la radiacioacuten o la polucioacuten medioam-biental (Lee y col 2004) La acumulacioacuten de ROS en elorganismo se ha relacionado con la aparicioacuten de ciertosdesoacuterdenes fisioloacutegicos estados patoloacutegicos y la acelera-cioacuten del envejecimiento (Valko y col 2007) Por otrolado la oxidacioacuten de los alimentos es un fenoacutemeno habi-tual especialmente en aquellos que contienen liacutepidos loque conduce a su degradacioacuten progresiva y provoca cam-bios en el olor color y sabor del alimento La adicioacuten deantioxidantes sinteacuteticos para evitar estos procesos oxidati-vos y alargar la vida del alimento es habitual en la indus-tria alimentaria No obstante existe una percepcioacuten nega-tiva de los consumidores hacia su uso que en muchoscasos estaacute permitido dentro de unos liacutemites establecidosdebido a su carcinogenicidad (Andreacute y col 2010) La uti-lizacioacuten de peacuteptidos antioxidantes es una alternativa aestos compuestos sinteacuteticos Los peacuteptidos con capacidadantioxidante se suelen caracterizar por contener en susecuencia residuos de aminoaacutecidos como la H cisteiacutena(C) P metionina (M) y aminoaacutecidos aromaacuteticos

Los peacuteptidos con capacidad antibacteriana y antifuacutengicaejercen actividad inhibitoria frente a distintos microorganis-mos (Cudic y Otvos 2002) Pueden actuar contra bacteriasGram (+) y Gram (-) como la Escherichia ColiHelicobacter Listeria Salmonella y Staphylococcus ade-maacutes de contra levaduras y hongos (Fitzgerald y Murray2006) Una caracteriacutestica importante de los peacuteptidos concapacidad antibacteriana y antifuacutengica es que ademaacutes de serde pequentildeo tamantildeo suelen presentar residuos de C y o gli-cina (G) Tambieacuten se ha observado una relacioacuten entre aque-llos peacuteptidos que presentan esta actividad y la presencia deresiduos de aminoaacutecidos cargados Por regla general elnuacutemero de aminoaacutecidos cargados positivamente (arginina(R) yo lisina (K)) en estos peacuteptidos es mucho mayor que elde los aminoaacutecidos cargados negativamente (aacutecido aspaacuterti-co (D) y aacutecido glutaacutemico (E)) (Barbosa-Pelegrini y col2011) El efecto de inhibicioacuten parece estar relacionado conla carga neta positiva de estos peacuteptidos En efecto los peacutepti-dos interaccionan con las membranas de los microorganis-mos a traveacutes de los fosfoliacutepidos cargados negativamentealterando su permeabilidad y provocando la muerte celular(Barbosa-Pelegrini y col 2011 Maroacuteti y col 2011)

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De especial intereacutes son los peacuteptidos con muacuteltiplesbioactividades como los aislados por Adje y col (2011) apartir de sangre de ganado bovino que mostraban simul-taacuteneamente actividad antibacteriana e inhibidora de laACE

3 METODOLOGIacuteAS ANALIacuteTICAS PARA LA

EXTRACCIOacuteN DE PEacutePTIDOS BIOACTIVOS A

PARTIR DE SUBPRODUCTOS DE LA INDUS-

TRIA AGROALIMENTARIA

La Figura 1 muestra un esquema de las diferentes eta-pas que se llevan a cabo para la obtencioacuten de peacuteptidosbioactivos a partir de subproductos de la industria agroa-limentaria Los peacuteptidos bioactivos suelen estar encripta-dos en el interior de la secuencia de una proteiacutena de la quetienen que ser liberados para poder ejercer su actividadAsiacute la obtencioacuten de peacuteptidos bioactivos implica laextraccioacuten de las proteiacutenas la obtencioacuten de los peacuteptidosgeneralmente mediante digestioacuten enzimaacutetica la purifica-cioacuten de los hidrolizados utilizando diferentes teacutecnicas deseparacioacuten y la identificacioacuten de los peacuteptidos bioactivosaislados Ademaacutes es necesario realizar ensayos de bioac-tividad para evaluar y seguir la funcionalidad de los peacutep-tidos a lo largo de las diferentes etapas del proceso

Durante la extraccioacuten de las proteiacutenas deben eliminar-se todos los posibles interferentes como pueden ser lamateria grasa fibra vitaminas distintos hidratos de car-bono etc (Saravanan y Rose 2004 Jayathilakan y col2012) La extraccioacuten de las proteiacutenas suele realizarse uti-lizando un medio tamponado que puede contener sustan-cias tensioactivas reductoras o caotroacutepicas para mejorarla eficacia y rendimiento del proceso La utilizacioacuten deultrasonidos en forma de bantildeo o sonda es tambieacuten habi-tual con el fin de favorecer la extraccioacuten

Una vez obtenido el aislado proteico el peacuteptidobioactivo ha de ser liberado siendo la hidroacutelisis enzimaacuteti-ca la metodologiacutea maacutes habitual para este fin Esto puedellevarse a cabo in vivo durante la digestioacuten gastrointesti-nal o in vitro mediante el uso de enzimas o microorganis-mos proteoliacuteticos (Korhonen y Pihlanto 2006) Tanto eltipo de enzima o microorganismo empleado como lascondiciones utilizadas (relacioacuten enzimasustrato tiempode hidroacutelisis pH y temperatura etc) durante la hidroacutelisispueden afectar de forma significativa a la actividad de lospeacuteptidos obtenidos Enzimas como la alcalasa pepsinaflavourzima termolisina o tripsina son opciones habitua-les cuando se realiza la hidroacutelisis in vitro de las proteiacutenasEn otras ocasiones se utilizan enzimas extraiacutedas tambieacutende residuos alimentarios como hicieron Fontoura y col

(2014) que usaron queratinasas alcalinas producidas porbacterias previamente aisladas de residuos del procesadode la carne de pollo La autolisis del subproducto con pro-teasas endoacutegenas es otra opcioacuten para la liberacioacuten de lospeacuteptidos bioactivos que resulta maacutes barata pero suele sermaacutes lenta Esta opcioacuten fue utilizada por Nogata y col(2009) y Jamdar y col (2011) para la obtencioacuten de peacutepti-dos bioactivos a partir de un subproducto del procesadodel trigo y de viacutesceras de carne de aves de corral respecti-vamente Otras opciones utilizadas para liberar peacuteptidosbioactivos son la fermentacioacuten o el empleo de muacuteltiplesenzimas Li y col (2007) realizaron una digestioacuten con uncoacutectel de enzimas constituido por papaiacutena por proteasasde paacutencreas bovino una proteasa de Streptomices y otrade Bacillus polimixa para obtener peacuteptidos antioxidantesa partir del colaacutegeno de la piel de cerdo

Con fines a comprobar si la bioactividad buscada seobserva entre los peacuteptidos obtenidos es habitual la reali-zacioacuten de ensayos de bioactividad en este momento Loshidrolizados peptiacutedicos maacutes prometedores en teacuterminos deactividad seraacuten posteriormente sometidos a diferentesetapas de purificacioacuten Las etapas de separacioacuten debenser elegidas y optimizadas con el fin de reducir su tiempoy coste y evitar la peacuterdida de muestra teniendo siempre encuenta que los hidrolizados son muestras complejas conun elevado rango dinaacutemico


PURIFICACIOacuteN DE PEacutePTIDOS BIOACTIVOS A



La Tabla 1 agrupa las teacutecnicas empleadas en la purifi-cacioacuten de peacuteptidos bioactivos a partir de residuos de laindustria agroalimentaria asiacute como la secuencia de lospeacuteptidos purificados Dado el elevado nuacutemero de trabajosenfocados a la obtencioacuten de peacuteptidos bioactivos a partirde subproductos del pescado y el marisco y debido a queexisten numerosos trabajos de revisioacuten bibliograacuteficaenfocados a este tipo de residuos este trabajo se ha cen-trado en el resto de subproductos de la industria agroali-mentaria subproductos procedentes del procesado de lacarne bovina y porcina subproductos del procesado de lacarne de aves de corral y subproductos del procesado delhuevo productos laacutecteos frutos secos frutas cereales yotros vegetales etc

Dada la complejidad de estos subproductos en generales habitual la utilizacioacuten de varias etapas de purificacioacutencon fines a aislar peacuteptidos bioactivos tras el empleo deteacutecnicas de extraccioacuten como la extraccioacuten en fase soacutelida



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ARTIacuteCULO

Figura 1 Esquema de las diferentes etapas seguidas en la obtencioacuten de peacuteptidos bioactivos a partir de subproductos de laindustria agroalimentaria

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Tabla 1 Bioactividad y etapas utilizadas en la purificacioacuten de peacuteptidos bioactivos a partir de subproductos de la industriaagroalimentaria incluyendo la secuencia de los peacuteptidos en el caso de que esteacute disponible


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ARTIacuteCULO

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La primera etapa de purificacioacuten normalmente conlleva lautilizacioacuten de teacutecnicas de baja resolucioacuten como la ultrafil-tracioacuten (UF) el isoelectroenfoque OFFGEL la cromato-grafiacutea de exclusioacuten molecular (SEC) o la cromatografiacutea deintercambio ioacutenico (IEC) Un fraccionamiento maacutes fino seobtiene a partir de las fracciones anteriores utilizando teacutec-nicas de alta resolucioacuten como la cromatografiacutea en faseinversa (RPC) (Figura 1)

41 Extraccioacuten en fase soacutelida

La extraccioacuten en fase soacutelida se utiliza frecuentementecomo un paso previo a la purificacioacuten con fines a limpiarla muestra a concentrar los analitos o a reducir la com-plejidad de la muestra Es habitual utilizar cartuchos deextraccioacuten en fase soacutelida con fases C18 (Saito y col1997 Nogata y col 2009 De Simone y col 2009)Pengnuam y col (2013) utilizaron un cartucho de inter-cambio catioacutenico fuerte como uacuteltima etapa en la purifica-cioacuten de peacuteptidos antioxidantes Los autores obtuvierondiez fracciones utilizando concentraciones crecientes deformiato de amonio (pH 36) como medio de elucioacuten

42 Ultrafiltracioacuten

La UF es una teacutecnica sencilla y raacutepida que no requierede un equipamiento sofisticado Se trata de una teacutecnica debaja resolucioacuten que se emplea para fraccionar los extrac-tos peptiacutedicos en funcioacuten del tamantildeo de los peacuteptidos opara preconcentrarlos Para ello se utilizan membranas ofiltros de corte con tamantildeos de poro controlado siendo losmaacutes habituales dado el tamantildeo de los peacuteptidos bioacti-vos los filtros de 1 3 5 y 10 kDa En general los hidroli-zados que contienen los peacuteptidos de menor tamantildeo sonlos que presentan mayor bioactividad Por ejemplo lasfracciones de lt 3 kDa fueron las que mostraron la mayorcapacidad para inhibir la ACE en peacuteptidos obtenidos apartir de sangre de pollo (Huang y Liu 2010) de viacutescerasde aves (Jamdar y col 2012) de semillas de albaricoque(Zhu y col 2010) y de aceituna (Esteve y col 2015) y deplumas de pollo (Fontoura y col 2014) La Figura 2muestra la capacidad para inhibir la ACE del extractocompleto obtenido con termolisina a partir de la semillade la aceituna y de tres fracciones obtenidas por UF (gt 5kDa 3-5 kDa y lt 3 kDa) a partir de este extracto Comose observa los peacuteptidos antihipertensivos quedaban con-centrados en la fraccioacuten de menos de 3 kDa (Esteve y col2015)

Aunque la UF es una teacutecnica que carece de selectivi-dad especialmente para bajos pesos moleculares es muyempleada como paso previo a una purificacioacuten maacutesexhaustiva (Schratter 2004) Un problema adicional de

la UF es la baja recuperacioacuten de los peacuteptidos separadosque frecuentemente quedan retenidos en los filtros

43 Isoelectroenfoque (OFFGEL)

La separacioacuten de los peacuteptidos en funcioacuten de su puntoisoeleacutectrico (pH para el cual la carga neta de la moleacuteculaes nula) a nivel preparativo ha sido posible gracias a laintroduccioacuten de equipos que permiten recoger las fraccio-nes separadas Para ello se utilizan anfolitos que permi-ten establecer el gradiente de pH necesario para separarlos peacuteptidos y tiras con pocillos cada uno con pH diferen-te donde quedan separados los peacuteptidos Al aplicar unelevado potencial entre los extremos de las tiras los peacutep-tidos cargados junto a los anfolitos migran a traveacutes de lospocillos hasta que alcanzan un pH igual a su punto isoe-leacutectrico donde quedan confinados Aunque en principioestaacute teacutecnica constituye una alternativa a las anteriores esimportante resaltar el hecho de que es necesario la utiliza-cioacuten de anfolitos y en muchas ocasiones estos anfolitospueden interferir en los ensayos de medida de la actividadde los peacuteptidos aislados (Esteve y col 2015) Esta teacutecnicaha sido empleada en el fraccionamiento de peacuteptidos inhi-bidores de la ACE y antioxidantes a partir del residuoobtenido tras la extraccioacuten del aceite de palma (Zarei ycol 2014)

44 Cromatografiacutea de exclusioacuten molecular

La SEC es tambieacuten una teacutecnica de baja resolucioacuten quese utiliza habitualmente en la separacioacuten de peacuteptidos enfuncioacuten de su tamantildeo SEC utiliza fases estacionariasconstituidas por partiacuteculas de un material que contieneporos con diaacutemetro controlado Cuando la mezcla de peacutep-tidos pasa a traveacutes de la fase estacionaria estos son elui-dos por orden decreciente de tamantildeo molecular Como seobserva en la Tabla 1 las fases estacionarias maacutes emplea-das en la purificacioacuten de peacuteptidos bioactivos a partir deresiduos de la industria agroalimentaria son las Sephadexque estaacuten constituidas por un poliacutemero de dextranoentrecruzado con epiclorohidrina Entre ellas destaca laSephadex G-10 con un liacutemite de permeacioacuten de 07 kDala Sephadex G-15 con un liacutemite de permeacioacuten de 15kDa la Sephanex G-25 utilizada para fraccionar peacutepti-dos de entre 1-5 kDa la Sephadex G-50 para separarpeacuteptidos de entre 8-10 kDa y la Sephadex LH-20 prepa-rada por hidroxipropilacioacuten de dextranos lo que permitesu utilizacioacuten con disolventes acuosos y disolventes orgaacute-nicos polares y la separacioacuten de compuestos de naturale-za hidrofiacutelica y lipofiacutelica Otro relleno polimeacuterico quetambieacuten se ha empleado en SEC es el dextrano entrecru-zado con agarosa como la Superdex Peptide (01-7 kDa)y la Superdex 75HR (3-70 kDa) Esta fase estacionaria


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ARTIacuteCULO

Figura 2 Comparacioacuten de la capacidad para inhibir la ACE del hidrolizado con termolisina a partir de la semilla de la acei-tuna y de tres fracciones obtenidas por UF (gt 5 kDa 3-5 kDa y lt 3 kDa) a partir de este extracto Reproducida de Esteve ycol 2015 con autorizacioacuten

permite la obtencioacuten de separaciones en SEC con unaresolucioacuten maacutes alta de lo habitual con este tipo de relle-nos Las fases Sephacryl consisten en dextrano entrecru-zado con bisacrilamida y son similares a las Superdexpero con un mayor intervalo de tamantildeos Aunque menoshabituales tambieacuten se han utilizado rellenos de agarosa(Superosa) y de polivinil alcohol (Asahipak GS 320)Ademaacutes de los rellenos polimeacutericos tambieacuten se han utili-zado fases estacionarias de siacutelice como las columnasZorbax GF-250 (4-400 kDa) y TSK G2000SW (5-15kDa) Dado que la siacutelice muestra una menor estabilidad apH extremos y con fines tambieacuten a evitar posibles inter-acciones ioacutenicas con la fase estacionaria la superficie dela siacutelice ha sido modificada con grupos diol y estabilizadacon metales como el circonio lo que ha permitido la utili-zacioacuten de estas fases hasta un pH de 85 La elucioacuten serealiza isocraacuteticamente utilizando fases moacuteviles acuosasque pueden contener sales a pH entre 60-80 aunque tam-bieacuten se han empleado condiciones maacutes agresivas como enel caso del aislamiento de peacuteptidos inhibidores de la ACEa partir de la semilla de albaricoque (Zhu y col 2010)Asimismo tambieacuten es posible la utilizacioacuten de pequentildeasproporciones de disolventes orgaacutenicos como en el casodel aislamiento de peacuteptidos inhibidores de la ACE a partirde la piel de cerdo donde se utilizoacute una fase moacutevil queconteniacutea un 30 de metanol (Ichimura y col 2009)Ademaacutes de ser una teacutecnica sencilla la SEC tambieacuten es

compatible con las condiciones utilizadas en la obtencioacutende los hidrolizados

La deteccioacuten tanto en cromatografiacutea de exclusioacutencomo en el resto de modos cromatograacuteficos se ha realiza-do preferentemente utilizando deteccioacuten UV a bajas lon-gitudes de onda (~ 220 nm) o bien a longitudes de ondacaracteriacutesticas de la F (254 nm) o del W y la Y (280 nm)

45 Cromatografiacutea de intercambio ioacutenico

La IEC es utilizada frecuentemente despueacutes de la SECyo UF La separacioacuten tiene lugar mediante la interaccioacutende los peacuteptidos con la fase estacionaria constituida porgrupos cargados positiva (cromatografiacutea de intercambiocatioacutenico CEC) o negativamente (cromatografiacutea de inter-cambio anioacutenico AEC) inmovilizados en una matrizCon fines a evitar la interaccioacuten de las moleacuteculas con lamatriz de la fase estacionaria se han utilizado resinashidrofiacutelicas como las de base celuloacutesica empleadas en elaislamiento de un peacuteptido antifuacutengico a partir de piel degranada (Guo y col 2009) Otras matrices hidrofiacutelicasdesarrolladas posteriormente fueron las de agarosa(Sepharose) las de dextrano (Sephadex) y las polimeacuteri-cas como las Toyopearl Como se muestra en la Figura 1los grupos cargados maacutes empleados son los sulfopropilos(SP) para intercambio catioacutenico fuerte los carboximeti-

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los (CM) para intercambio catioacutenico deacutebil el amoniocuaternario de dietilaminoetilo (DEAE) para intercambioanioacutenico deacutebil y los dietil-(2-hidroxipropil)aminoetilos(QAE) y trimetilaminometilos (Q) para intercambio anioacute-nico fuerte (Kim y Kuga 2002) En este tipo de cromato-grafiacutea es importante tener controlado el pH ya que lacarga de los peacuteptidos se veraacute afectada Para ello es fre-cuente el empleo de tampones fosfato Tris-HCl o acetatode amonio La forma maacutes habitual de elucioacuten es utilizan-do gradientes de fuerza ioacutenica creciente haciendo uso desales como el NaCl

Como este modo cromatograacutefico permite la separa-cioacuten de compuestos en funcioacuten de su carga se ha utiliza-do en la buacutesqueda de peacuteptidos con capacidad antibacte-riana y antifuacutengica (Froidevaux y col 2001 Guo y col2009) ya que el mecanismo de accioacuten de estos peacuteptidosse fundamenta en interacciones electrostaacuteticas con lasuperficie de las ceacutelulas patoacutegenas

46 Cromatografiacutea en fase inversa

Debido a que normalmente los peacuteptidos con capaci-dad antioxidante y antihipertensiva contienen residuosaminoaciacutedicos hidrofoacutebicos el empleo de la RPC es muyhabitual en la separacioacuten de estos peacuteptidos Al ser unmodo cromatograacutefico de alta resolucioacuten es frecuente suutilizacioacuten como uacuteltimo paso en la purificacioacuten de lospeacuteptidos bioactivos

La mayor parte de las fases estacionarias empleadasson de siacutelice modificada con cadenas alquiacutelicas C18 C8 yC4 Los rellenos C18 se utilizan para separar peacuteptidospoco hidrofoacutebicos y son muy apropiadas para peacuteptidos depequentildeo tamantildeo mientras que los peacuteptidos maacutes hidrofoacute-bicos y largos se separan mejor con fases ligadas C4(Puchalska y col 2015) Adicionalmente tambieacuten se hanempleado otras fases ligadas como la feniletil utilizadaen la separacioacuten de peacuteptidos inhibidores de la ACE a par-tir de huesos de pollo (Nakade y col 2008) En algunasocasiones como se puede ver en la Tabla 1 se utilizandiferentes columnas de cromatografiacutea en fase inversa condiferentes dimensiones o selectividad para conseguir elaislamiento de un nuacutemero limitado de los peacuteptidos bioac-tivos (Saito y col 1997 Nakade y col 2008 Nogata ycol 2009 Megiacuteas y col 2009 Lee y col 2012)

La elucioacuten de los peacuteptidos se realiza mediante la utili-zacioacuten de gradientes con una fase moacutevil acuosa comofase moacutevil A y un disolvente orgaacutenico polar como fasemoacutevil B El acetonitrilo (ACN) es el modificador orgaacuteni-co maacutes empleado aunque tambieacuten son muy utilizadosdisolventes como el metanol etanol e isopropanol Es

habitual la adicioacuten a la fase moacutevil de un reactivo forma-dor de pares ioacutenicos para potenciar la interaccioacuten de lospeacuteptidos con la fase estacionaria apolar El aacutecido trifluo-roaceacutetico (TFA) es el reactivo formador de pares ioacutenicosmaacutes empleado por ser el que mejores separaciones pro-porciona por ser miscible con las fases orgaacutenicas y trans-parente a la radiacioacuten UV y por ser un compuesto muyvolaacutetil lo que facilita su eliminacioacuten por liofilizacioacutenOtros agentes formadores de pares ioacutenicos utilizados sonel aacutecido aceacutetico el aacutecido fosfoacuterico y el aacutecido heptafluoro-butiacuterico Tambieacuten se han utilizado sales de acetato deamonio y carbonato de amonio En ocasiones la mismacolumna de RPC se utiliza para realizar una primera sepa-racioacuten con unas determinadas condiciones de gradiente yfase moacutevil seguida de una segunda separacioacuten con lamisma columna pero con un gradiente o fases moacutevilesdistintas lo que permite separar una fraccioacuten de los peacutepti-dos iniciales (Kim y col 2001a Yu y col 2006 Nakadey col 2008)

47 Cromatografiacutea de afinidad

La cromatografiacutea de afinidad fue empleada por Guo ycol (2009) para el aislamiento de un peacuteptido antifuacutengicoa partir de la piel de la granada A pesar de ello no es unateacutecnica habitualmente incluida en el proceso de fraccio-namiento de peacuteptidos bioactivos

Como ejemplo la Figura 3 muestra el fraccionamien-to de peacuteptidos antioxidantes a partir de cuerno de buacutefalo(Liu y col 2010) SEC permitioacute obtener cuatro fraccio-nes (1 2 3 y 4) observando la mayor actividad antioxi-dante en la fraccioacuten 3 La fraccioacuten 3 fue posteriormenteseparada en tres fracciones (I II y III) utilizando AEC yobservando la mayor actividad antioxidante para las frac-ciones II y III que finalmente se separaron por RPC LaRPC permitioacute la purificacioacuten de dos peacuteptidos en la frac-cioacuten II y un peacuteptido en la fraccioacuten III que posteriormentefueron identificados

5 TEacuteCNICAS ANALIacuteTICAS EMPLEADAS PARA

LA IDENTIFICACIOacuteN DE LOS PEacutePTIDOS

BIOACTIVOS PROCEDENTES DE SUBPRO-

DUCTOS DE LA INDUSTRIA AGROALIMEN-

TARIA

Tras el fraccionamiento de los peacuteptidos y el estudio delas actividades in vitro de eacutestos la siguiente etapa sueleser la identificacioacuten de los peacuteptidos que han mostrado lasmayores actividades La electroforesis en gel de poliacri-lamida con dodecil sulfato de sodio (SDS-PAGE) se hautilizado para estimar la masa molecular de los peacuteptidos


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ARTIacuteCULO

obtenidos e incluso para monitorizar la hidroacutelisis de lasproteiacutenas de partida Por otra parte la degradacioacutensecuencial de Edman es una teacutecnica robusta que se ha uti-lizado para la identificacioacuten de la secuencia de los peacutepti-dos aunque hoy en diacutea estaacute en desuso En esta teacutecnica elresiduo N-terminal del peacuteptido se marca con fenilisotio-cianato (en medio baacutesico) se separa del peacuteptido por

hidroacutelisis (en medio aacutecido) y se detecta Este proceso serepite con todos los aminoaacutecidos que constituyen el peacutep-tido por lo que es un meacutetodo tedioso y largo Ademaacutes noes posible la secuenciacioacuten de peacuteptidos cuyo residuoN-terminal se encuentre bloqueado (por ejemplo por ungrupo amino acetilado formilado etc) Ademaacutes el rendi-miento de la teacutecnica no es del 100 y por tanto cuando

Figura 3 Purificacioacuten de tres peacuteptidos con actividad antioxidante a partir de un hidrolizado de cuerno de buacutefalo utilizandocromatografiacutea de exclusioacuten molecular (A) seguida de cromatografiacutea de intercambio anioacutenico (B) y cromatografiacutea en faseinversa (C) Reproducida de Liu y col 2010 con autorizacioacuten

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se llevan a cabo muchos ciclos (maacutes de 50 aminoaacutecidosanalizados) se incrementa la probabilidad de errores(Nehete y col 2013) La degradacioacuten de Edman se puedellevar a cabo manualmente o mediante secuenciadoresautomaacuteticos de proteiacutenas yo peacuteptidos (Nakade y col2008 Saiga y col 2008 Ichimura y col 2009) Esta teacutec-nica se ha empleado en la identificacioacuten de peacuteptidosantioxidantes e inhibidores de la ACE obtenidos de la pielde vaca (Kim y col 2001a y b) de peacuteptidos inhibidoresde la ACE procedentes de subproductos del huevo(Pokora y col 2014) de peacuteptidos con propiedades anti-fuacutengicas obtenidos a partir de semillas de chile y de pielde granada (Diz y col 2006 Ribeiro y col 2007 Guo ycol 2009) y de peacuteptidos inhibidores de la ACE proceden-tes del residuo que queda tras la extraccioacuten del aceite degirasol (Megiacuteas y col 2009)

Hoy en diacutea es habitual utilizar la espectrometriacutea demasas (MS) en el modo de ionizacioacuten positivo para reali-zar la secuenciacioacuten de peacuteptidos Aunque se ha utilizadola ionizacioacuten mediante el bombardeo con aacutetomos raacutepidos(FAB) (Piot y col 1992) y la desorcioacutenionizacioacuten conlaacuteser asistida por matriz (MALDI) la ionizacioacuten por elec-trospray (ESI) ha sido el modo de ionizacioacuten maacutes usualdada la posibilidad de acoplamiento a teacutecnicas de separa-cioacuten como RPC y la cromatografiacutea de interaccioacuten hidrofiacute-lica (HILIC) En el caso de la utilizacioacuten de RPC esimportante tener en cuenta que el TFA es un reactivo noadecuado cuando se realiza deteccioacuten por espectrometriacuteade masas por ser un importante supresor de la sentildeal y for-mar fuertes pares ioacutenicos con los peacuteptidos que son difiacuteci-les de romper en las condiciones en las que tiene lugar laionizacioacuten (Garciacutea 2005) HILIC se utiliza para separarcompuestos de naturaleza hidrofiacutelica no solubles enmedios apolares como los empleados en cromatografiacuteaen fase normal Es un modo muy adecuado para la separa-cioacuten de peacuteptidos de pequentildeo tamantildeo o muy hidrofiacutelicosque difiacutecilmente se retienen en las columnas de faseinversa La elucioacuten se realiza con gradientes en los que lafase moacutevil A es acetonitrilo o metanol y la fase moacutevil B esagua Es tambieacuten habitual la adicioacuten de una sal (acetato oformiato de amonio) con fines a mejorar la separacioacutenEstas fases moacuteviles son completamente compatibles conla deteccioacuten por MS con lo que HILIC se ha convertidoen un modo complementario a la RPC en la identificacioacutende peacuteptidos bioactivos Gonzaacutelez-Garciacutea y col (2015) yVaacutesquez-Villanueva y col (2015a y b) utilizaron tantoRPC como HILIC acoplada a MSMS con fines a obteneruna identificacioacuten completa de los peacuteptidos bioactivosencontrados en extractos peptiacutedicos procedentes de hue-sos de ciruela y melocotoacuten La Figura 4 muestra la sepa-racioacuten de un mismo extracto peptiacutedico por RPC e HILICy la identificacioacuten por MS en taacutendem de un peacuteptido El

cromatograma total de iones obtenido por RPC mostrabaun nuacutemero de sentildeales mayor que el que se observaba en elcromatograma obtenido con HILIC No obstante la utili-zacioacuten de HILIC permitioacute la deteccioacuten de algunos picosque no se podiacutean observar cuando la separacioacuten se reali-zaba por RPC (Vaacutesquez Villanueva y col 2015a) Estehecho se ilustra en la Figura 5 que muestra un diagramade Venn que compara los peacuteptidos identificados por RPC-e HILIC-ESI-QTOF MS del hidrolizado de la semilla demelocotoacuten obtenido con la enzima termolisina que mos-traba la mayor capacidad antioxidante (Vaacutesquez-Villanueva y col 2015a) Los peacuteptidos identificados pre-sentaban una gran cantidad de residuos de aminoaacutecidoshidrofoacutebicos y aromaacuteticos muy comunes entre peacuteptidoscon capacidad antioxidante

En relacioacuten a los analizadores de masas se han utili-zado tanto el cuadrupolo (Q) como la trampa de iones(IT) el tiempo de vuelo (TOF) y sistemas hiacutebridos comoel Q-TOF el TOF-TOF y el QqQ Algunos autores hanrealizado una identificacioacuten tentativa de peacuteptidos bioacti-vos a partir del valor de la masa detectada utilizando unsolo analizador de masas Sin embargo la espectrometriacuteade masas en taacutendem utilizando sistemas hiacutebridos es laestrategia maacutes habitual para la identificacioacuten de peacuteptidosEl peacuteptido precursor seleccionado en el primer analiza-dor es fragmentado en una celda de colisioacuten y sus frag-mentos detectados en funcioacuten de su relacioacuten mz en unsegundo analizador de masas Aunque existen diferentesmecanismos de fragmentacioacuten la disociacioacutenactivacioacuteninducida por colisiones (CID) es el maacutes popular La frag-mentacioacuten del peacuteptido puede ocurrir en tres posicionesdiferentes generando dos tipos de fragmentos seguacuten si lacarga ha quedado en la posicioacuten N-terminal (iones an bncn) o C-terminal (iones xn yn zn) del peacuteptido En el casode CID son iones tipo bn y tipo yn los que mayoritaria-mente se generan (Hughes y col 2010) Los espectros deMSMS se interpretan a partir del anaacutelisis de los patronesde fragmentacioacuten Dado que la interpretacioacuten manual estediosa y lenta se han desarrollado bases de datos con losproteomas identificados que facilitan en gran medida lasecuenciacioacuten Para ello se emplean motores de buacutesque-da como MASCOT PEAKS mMass o SEQUESTCuando las bases de datos no contienen la secuencia delas proteiacutenas de intereacutes la secuencia de los peacuteptidos ha deser obtenida mediante secuenciacioacuten De novo

La espectrometriacutea de masas por lo general no permi-te diferenciar entre aminoaacutecidos isobaacutericos como K yGlutamina (Q) que presentan masas muy similares y L eisoleucina (I) que presentan masas ideacutenticas aunque Liuy col (2010) destacan que los anaacutelisis de masa exactaobtenidos con MALDI-TOF-TOF MS permitieron


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ARTIacuteCULO

Figura 4 Cromatogramas de iones totales obtenidos por HPLC-ESI-Q-TOF MS en los modos RPC (imagen superior) eHILIC (imagen inferior) para la fraccioacuten de lt 3 kDa procedente de la semilla contenida en el hueso de melocotoacuten quemostroacute mayor capacidad para inhibir la ACE Se incluyen en ambos casos a modo de ejemplo los espectros de fragmenta-cioacuten correspondientes a los peacuteptidos LYSPH y HLLP

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distinguir entre K y Q y ademaacutes mediante el uso de CIDfue posible tambieacuten distinguir entre L e I para peacuteptidoscontenidos en el cuerno de buacutefalo

Otra teacutecnica aunque menos utilizada para la determi-nacioacuten de la estructura molecular del peacuteptido es la reso-nancia magneacutetica nuclear (NMR) Esta teacutecnica se haempleado en el anaacutelisis de peacuteptidos antioxidantes proce-dentes de residuos de pintildeoacuten (Phengnuam y col 2013) yantibacterianos del residuo de la extraccioacuten del aceite depalma (Tan y col 2013) aunque hay que sentildealar que hasido utilizada como teacutecnica adicional a la MS y nuncapara sustituirla

6 CONCLUSIONES

Una estrategia de creciente intereacutes con fines a revalo-rizar residuos procedentes de la industria agroalimentariaes la obtencioacuten de sustancias con alto valor antildeadido comolos peacuteptidos bioactivos Se han desarrollado metodologiacute-as analiacuteticas que han permitido la obtencioacuten preferente de

peacuteptidos antihipertensivos (inhibidores de la enzima con-vertidora de la angiotensina) peacuteptidos antioxidantes ypeacuteptidos antibacterianos a partir de subproductos del pro-cesado de la carne de vaca de cerdo y de aves de corral apartir de subproductos del procesado del huevo a partirde subproductos del procesado de productos laacutecteos de laextraccioacuten de aceites vegetales huesos y pieles de frutaetc El aislamiento de peacuteptidos bioactivos requiere laextraccioacuten inicial de las proteiacutenas de las que proceden laliberacioacuten de los peacuteptidos generalmente mediante hidroacute-lisis enzimaacutetica y su purificacioacuten Dada la complejidadde los hidrolizados obtenidos es necesaria la utilizacioacutende maacutes de una etapa de purificacioacuten empleando tanto teacutec-nicas de baja resolucioacuten como la ultrafiltracioacuten la croma-tografiacutea de exclusioacuten molecular o la cromatografiacutea deintercambio ioacutenico como teacutecnicas de alta resolucioacutencomo la cromatografiacutea en fase inversa Tras el aislamien-to y estudio de la bioactividad de los peacuteptidos es habitualsu identificacioacuten mediante espectrometriacutea de masas entaacutendem o teacutecnicas de separacioacuten acopladas a espectrome-triacutea de masas Los trabajos realizados demuestran que losresiduos de la industria agroalimentaria constituyen una

Figura 5 Diagrama de Venn para los peacuteptidos identificados por HPLC-ESI-Q-TOF en los modos de RPC e HILIC delhidrolizado completo procedente de la semilla de melocotoacuten y obtenido con la enzima termolisina que mostroacute la mayorcapacidad antioxidante (datos tomados de Vaacutesquez-Villanueva y col 2015b)


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ARTIacuteCULO

fuente importante de peacuteptidos bioactivos de intereacutes tantoen la industria farmaceacuteutica o cosmeacutetica como en la pro-pia industria agroalimentaria en la cual se pueden utilizarcon el fin de obtener alimentos con alto valor antildeadido porsus propiedades beneficiosas para la salud que se suman alas propiedades nutritivas inherentes a los alimentos Aestas ventajas hay que antildeadir la reduccioacuten del coste eco-noacutemico y medioambiental asociado a la eliminacioacuten delos residuos no reutilizados

AGRADECIMIENTOS

Los autores agradecen la financiacioacuten recibida delMinisterio de Economiacutea y Competitividad (proyectoAGL2012-36362) y de la Comunidad de Madrid yPrograma Europeo FEDER (S2013ABI-3028 AVAN-SECAL)

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bull Theacuteolier J Hammami R Labelle P Fliss I Jean JJ Funct Foods (2013) 5 706-714

bull Toldraacute F Aristoy M C Mora L Reig M Meat Sci(2012) 92 290-296

bull Valko M Leibfritz D Moncol J Cronin M T DMazur M Telser J Int J Biochem Cell Biol (2007)39 44-84

bull Vaacutesquez-Villanueva R Marina M L Garciacutea MC JFunct Foods (en prensa 2015a)

bull Vaacutesquez-Villanueva R Marina M L Garciacutea M CJ Chromatogr A (en prensa 2015b)

bull wwwprtr-eses Ministerio de Medio Ambiente ldquoGuiacuteade mejoras teacutecnicas disponibles en Espantildea del sector delos transformados vegetalesrdquo (2006) uacuteltimo accesoAbril 2015

bull Yu Y Hu J Miyaguchi Y Bai X Du Y Lin BPeptides (2006) 27 2950-2956

bull Zarei M Ebrahimpour A Abdul-Hamid A AnwarF Abu Bakar F Food Res Int (2014) 62 726-734

bull Zhu Z Qiu N Yi J Eur Food Res Technol (2010)231 13-19

22

NOTICIAS DE LA SECyTA

XV REUNIOacuteN CIENTIacuteFICA DE LA SOCIEDAD ESPANtildeOLADE CROMATOGRAFIacuteA Y TEacuteCNICAS AFINES (SECyTA2015)

El Instituto Universitario de Plaguicidas y Aguas(IUPA) de la Universitat Jaume I (UJI) de Castelloacutentiene el placer de organizar la XV Reunioacuten Cientiacutefica

de la Sociedad Espantildeola de Cromatografiacutea y

Teacutecnicas Afines (SECyTA2015) conjuntamente conla VII Reunioacuten Nacional de la Sociedad Espantildeola

de Espectrometriacutea de Masas (SEEM2015) en unevento uacutenico que se celebraraacute del 27 al 30 de octubrede 2015 en Castelloacuten de la Plana

SEDE

Universitat Jaume I (UJI)Av de Vicent Sos Baynat sn12071 Castelloacute de la Plana

Programa Cientiacutefico

El programa cientiacutefico presentaraacute los uacuteltimosdesarrollos en teacutecnicas analiacuteticas de espectrometriacutea demasas de separacioacuten cromatograacutefica y afines asiacutecomo sus muacuteltiples acoplamientos y aplicaciones Lareunioacuten combinada estaacute estructurada en cuatro diacuteascon conferencias plenarias invitadas y comunicacio-nes orales (incluyendo una sesioacuten para joacutevenes investi-gadores) asiacute como sesiones de poacutesteres discusioacutenflash de poacutesteres seleccionados y exposicioacuten comer-cial Las sesiones incluiraacuten contenidos teoacutericos e ins-trumentales acoplamientos teacutecnicas oacutemicas asiacute comonuevos tratamientos de muestra y sus aplicacionespara el anaacutelisis cliacutenico farmaceacuteutico medioambientaly de alimentos entre otras

Comiteacute Organizador

Juan Vicente Sancho Llopis Universitat Jaume I deCastelloacute (Chair)Joaquiacuten Beltra Arandes Universitat Jaume I deCastelloacute (Co-Chair)Esteban Abad Holgado Institut de DiagnogravesticAmbiental i Estudis de lrsquoAigua (CSIC)Jordi Diacuteaz Ferrero Instituto Quiacutemico de SarriagraveUniversitat Ramoacuten LlullMariacutea Joseacute Gonzaacutelez Carlos Instituto de QuiacutemicaOrgaacutenica General (CSIC)Beleacuten Goacutemara Moreno Instituto de Quiacutemica OrgaacutenicaGeneral (CSIC)Maria Ibaacutentildeez Martiacutenez Universitat Jaume I de Castelloacute

Francisco Loacutepez Benet Universitat Jaume I deCastelloacuteEncarnacioacuten Moyano Morcillo Universitat deBarcelonaElena Pitarch Arquimbau Universitat Jaume I deCastelloacuteTagravenia Portoleacutes Nicolau Universitat Jaume I deCastelloacuteAntoni Francesc Roig i Navarro Universitat Jaume Ide CastelloacuteRoque Serrano Gallego Universitat Jaume I deCastelloacuteJuan Soleacute Ribalta HiTIC SARosa Ventura Alemany Institut Hospital del MardrsquoInvestigacions Megravediques (IMIM)

Comiteacute Cientiacutefico

Esteban Abad Holgado Institut de DiagnogravesticAmbiental i Estudis de lrsquoAigua (CSIC)Joaquiacuten Beltran Arandes Universitat Jaume I deCastelloacuteJordi Diacuteaz Ferrero Instituto Quiacutemico de SarriagraveUniversitat Ramoacuten LlullAna Mordf Garciacutea Campantildea Universidad de GranadaMariacutea Joseacute Gonzaacutelez Carlos Instituto de QuiacutemicaOrgaacutenica General (CSIC)Beleacuten Goacutemara Moreno Instituto de Quiacutemica OrgaacutenicaGeneral (CSIC)Joan Grimalt Obrador Institut de DiagnogravesticAmbiental i Estudis de lrsquoAigua (CSIC)Feacutelix Hernaacutendez Hernaacutendez Universitat Jaume I deCastelloacuteElena Ibaacutentildeez Ezequiel Instituto de Investigacioacuten enCiencias de la Alimentacioacuten (CSIC)Begontildea Jimeacutenez Luque Instituto de Quiacutemica OrgaacutenicaGeneral (CSIC)Encarnacioacuten Moyano Morcillo Universitat deBarcelonaYolanda Picoacute Garciacutea Universitat de ValegravenciaJuan Vicente Sancho Llopis Universitat Jaume I deCastelloacuteFco Javier Santos Vicente Universitat de BarcelonaMordf Luz Sanz Murias Instituto de Quiacutemica OrgaacutenicaGeneral (CSIC)Rosa Ventura Alemany Institut Hospital del MardrsquoInvestigacions Megravediques (IMIM)

24

INFORMACIONES

Conferenciantes invitados

- Dr Facundo M Fernaacutendez

Georgia Institute of Technology Atlanta (USA)- Dr Pablo Martiacutenez-Lozano Sinues

ETH Zurich (Switzerland)- Prof Dr Jana Hajslova

Institute of Chemical Technology Prague (CzechRepublic)

- Prof Coral Barbas

University of CEU San Pablo Madrid (Spain)- Prof Dr Paola Dugo

University of Messina Messina (Italy)- Dr Joseacute Manuel Florecircncio Nogueira

University of Lisboa Lisbon (Portugal)- Dr Eric Reiner

University of Toronto Toronto (Canada)-Prof Dr Feacutelix Hernaacutendez

University Jaume I Castelloacuten (Spain)

Premios

XI Edicioacuten de los Premios Joseacute Antonio GarciacuteaDomiacutenguez patrocinados por BRUKER Los premiostienen por objeto reconocer el meacuterito cientiacutefico de lascomunicaciones sobre Cromatografiacutea y sus TeacutecnicasAfines tanto orales como poacutester presentadas por joacuteve-nes investigadores en la XV Reunioacuten Cientiacutefica de laSociedad Espantildeola de Cromatografiacutea y TeacutecnicasAfines (SECyTA) que se celebraraacute en Castelloacuten de laPlana del 27 al 30 de octubre de 2015 Estos Premiosquieren honrar la memoria del Dr Joseacute Antonio GarciacuteaDomiacutenguez investigador del Instituto de Quiacutemica-Fiacutesica Rocasolano (CSIC) pionero de la cromatogra-fiacutea de gases en Espantildea y uno de los fundadores delGrupo de Cromatografiacutea y Teacutecnicas Afines (GCTAactualmente SECyTA)

El Premio en esta edicioacuten estaraacute compuesto por lossiguientes galardones

bull Premio a la mejor comunicacioacuten oral (800 euros)bull Premio a la segunda mejor comunicacioacuten oral

(600 euros)bull Premio al mejor cartel (400 euros)bull Premio al segundo mejor cartel (300 euros)

Las bases de los premios se pueden encontrar enhttpwwwsecytaseem2015compremios-secyta

Becas

Los joacutevenes investigadores que quieran solicitar becadeben hacerlo seguacuten los formularios y requisitos estable-cidos por la Sociedad (httpwwwsecyta seem2015combecas-secyta) Aquellos joacutevenes investigadores quesoliciten beca deberaacuten realizar el pago de la inscrip-cioacuten como cualquier otro participante La solicitudjunto con la documentacioacuten requerida debe enviarse ala secretaria de la SECyTA secretariasecytagmailcom

Para maacutes informacioacuten contactar con la secretaria de laSECyTA

Fechas clave

1 de abril de 2015

Apertura enviacuteo de comunicaciones e inscripcioacuten on-line

12 de julio de 2015

Fecha liacutemite enviacuteo de comunicaciones (Fecha liacutemiteenviacuteo de comunicaciones extendida hasta el 12 dejulio de 2015)

31 de julio de 2015

Comunicacioacuten aceptacioacuten presentacioacuten (oralpoacutesterflashpoacutester)

Fecha liacutemite inscripcioacuten con cuota reducida

Fecha liacutemite solicitud becas para estudiantes

18 de septiembre de 2015

Enviacuteo de comunicaciones de uacuteltima hora que puedenser incluidas como poacutester en el Programa Final

27 de octubre de 2015

SECyTA-SEEM2015 en Castelloacuten de la Plana

25


NUEVOS SOCIOS DE LA SECYTA

1774Aacutevila Muntildeoz MoacutenicaCalle Alfonso VIII 7 bloque 6 4ordmC28806 ALCALAacute DE HENARES (MADRID)

1775Pacheco Fernaacutendez Mordf IdairaCamino Guanche - La Florida 2538331 LA OROTAVA (SANTA CRUZ DE TENERIFE)

1776Escobar Arnanz JuanDepartamento de Anaacutelisis Instrumental y QuiacutemicaAmbientalIQOG CSICJuan de la Cierva 328006 MADRID

1777Lorenzo Martiacutenez MariacuteaC La Reina 8803160 ALMORADIacute (ALICANTE)

1778Carmona Martiacutenez EricCarrer Lluis Vives 8 - 1846960 ALDAIA (VALENCIA)

1779Gil Solsona RubeacutenNovelda 8 1ordm12006 CASTELLOacuteN DE LA PLANA

1781Garlito Molina BorjaMadre Vedruna 22 3ordmC12005 CASTELLOacuteN DE LA PLANA

1782Pitarch Motelloacuten JorgeAv Hermanos Bou 23 7ordm 1312003 CASTELLOacuteN DE LA PLANA

Queridos lectores

Os seguimos animando a que participeacuteis en la seccioacuten

de ldquoCuriosidades Analiacuteticasrdquo enviaacutendonos algunos

problemas que se os hayan presentado en vuestro

trabajo del diacutea a diacutea

Os recordamos que el objetivo principal es que todos

veamos los problemas que pueden surgir con la

Cromatografiacutea y que no nos sorprendamos de si nos

ocurre algo similar

El Comiteacute Editorial

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Chromatography Data System

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28

IN MEMORIAM PROF CLAIRE VIDAL-MADJAR

En enero de este antildeo fallecioacute en Pariacutes la ProfesoraClaire VIDAL-MADJAR (El Cairo 1941) Los que tuvi-mos la suerte de colaborar con ella sentimos que ademaacutesde perder a una cientiacutefica extraordinaria hemos perdidouna gran amiga Claire VIDAL MADJAR es un de lasgrandes figuras de la cromatografiacutea y sus trabajos sobre lateoriacutea y los aspectos fundamentales de la adsorcioacuten yabsorcioacuten en cromatografiacutea de gas-soacutelido y de gas-liacutequi-do asiacute como la modelizacioacuten del comportamiento croma-tograacutefico nos han ayudado a comprender la influencia delos diferentes paraacutemetros que intervienen en la separa-cioacuten cromatograacutefica de los compuestos quiacutemicos

Empezoacute su carrera cientiacutefica en la EacutecolePolytechnique de Pariacutes (1961) bajo la direccioacuten del ProfG Guiochon llevando a cabo estudios pioneros en cro-matografiacutea gas-soacutelido sobre la interaccioacuten de gases yvapores sobre negro de carboacuten grafitizado y sobre com-puestos orgaacutenicos cristalinos (diferentes tipos de ftalocia-ninas) adsorbidos sobre este material Su intereacutes en lasposibilidades de la cromatografiacutea para los estudios fiacutesico-quiacutemicos de interaccioacuten molecular le llevoacute a hacer unaestancia con el Profesor AV Kiselev (Moscuacute Academiade Ciencias de la USSR) Una buena parte de su investi-gacioacuten cientiacutefica en los antildeos que siguieron (1965-1980)estuvo dedicada a poner de manifiesto el potencial de lacromatografiacutea gas-soacutelido como herramienta de precisioacutenpara medir en condiciones de bajo recubrimiento super-ficial paraacutemetros termodinaacutemicos de adsorcioacuten de gasesy compuestos orgaacutenicos sobre adsorbentes Estos traba-jos continuaron con otros dedicados a la determinacioacutende isotermas y cineacuteticas de adsorcioacuten-desorcioacuten de com-puestos orgaacutenicos sobre fases estacionarias utilizandomecaacutenica estadiacutestica y modelos de la forma de los picoscromatograacuteficos

Desde el antildeo 1986 hasta su jubilacioacuten en 2006 conti-nuoacute su investigacioacuten en el Laboratorio de Investigacioacutensobre Poliacutemeros (LRP CNRS Thiais) bajo la supervi-sioacuten del profesor Bernard Seacutebille

Durante este uacuteltimo periodo continuoacute con los estu-dios de modelizacioacuten de las cineacuteticas e isotermas de sor-cioacuten sobre el desarrollo de fases estacionarias para HPLC(fases macromoleculares de fase inversa con la superficiemodificada con poliacutemeros bioloacutegicos y las sintetizadas apartir de la fijacioacuten de los hexanoferrocianatos a soportesde siacutelicepoliacutemero) en la separacioacuten de proteiacutenas porelectroforesis capilar (EC) y en los uacuteltimos antildeos amplioacuteel campo de sus investigaciones al conocimiento en lacomposicioacuten de la materia orgaacutenica de los aerosoles de laatmosfera de Titaacuten el mayor sateacutelite de Saturno y a laseparacioacuten de compuestos halogenados responsables delagujero de la capa de ozono en la Tierra de los que algu-nos resultados han sido publicados en revistas tan presti-giosas como Nature

Siempre tuvo gran nuacutemero de colaboraciones conotros grupos de investigacioacuten nacionales y extranjerosPero sin duda las colaboraciones con el grupo espantildeol delDepartamento de Anaacutelisis Instrumental y QuiacutemicaAmbiental (AIQA) del IQOG (CSIC) fueron las maacutes pro-longadas Sus colaboraciones con este grupo espantildeolcomenzaron en el antildeo 1985 cuando la Dra Mariacutea JoseacuteGonzaacutelez realizoacute una estancia postdoctoral de dos antildeosen la Eacutecole Polytechnique (Palaiseau) bajo su direccioacutenA partir de 1986 las colaboraciones se establecieron bajoel marco de proyectos de cooperacioacuten CSIC y CNRS quese prolongaron hasta su jubilacioacuten en el antildeo 2006Durante este periodo colaboroacute con varios investigadoresdel departamento AIQA los Drs Mariacutea Joseacute GonzaacutelezJoseacute Carlos Diez Masa Mercedes de Frutos y BegontildeaJimeacutenez todos ellos muy relacionados con la SECyTA

La Dra Vidal-Madjar era una persona admirable conuna mente privilegiada Hablar con ella sobre ciencia erasumamente enriquecedor por sus continuas ideas brillan-tes pero sobre todo por su caraacutecter y su forma de ser Porsu humildad y su buen hacer pasoacute por la vida sin casihacerse notar Pero los que la hemos conocido a fondosabemos que ha sido una cientiacutefica de excelencia En susestancias anuales en Espantildea a lo largo de casi dos deacuteca-das la hemos visto disfrutar tanto de las investigacionesque realizaacutebamos como de nuestra cultura en sus diferen-tes manifestaciones a las que asistiacuteamos al caer la tarde(exposiciones teatro conciertoshellip)

Gracias Claire por todos los momentos que nos hasdado y hemos compartido contigo Nos unimos al dolorde su familia y a la gran cantidad de amigos de laSECyTA que cosechoacute durante su vida Descanse en paz

Joseacute Carlos Diez Masa y Mariacutea Joseacute Gonzaacutelez


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CALENDARIO DE ACTIVIDADES

1 HPLC 2015 42nd International Symposium on

High Performance Liquid Phase Separations

and Related Techniques

21 - 25 Junio de 2015Ginebra (Suiza)

Symposium Chair Prof Geacuterard HopfgartnerCongress Secretariat Symporg SARue Rousseau 30CH-1201 Geneve Switzerlandhplc2015symporgchhttpwwwhplc2015-genevaorg

2 CNIC 2015 16th International Congress of the

National Center for Scientific Research

22 - 26 Junio de 2015La Habana (Cuba)

Presidenta Comiteacute OrganizadorBlanca Rosa Hung Llamoscongreso2015cniceducuhttpwwwcongresocnic2015sldcu

3 RDPA 2015 Recent Developments in Pharma-

ceutical Analysis

28 Junio - 1 Julio de 2015Perugia (Italia)

Chair Benedetto Natalinirdpa2015chimfarmunipgithttprdpa2015chimfarmunipgit

4 Metabolomics 2015 11th Official Annual Meeting

of the International Metabolomics Society

29 Junio - 2 Julio de 2015San Francisco California (EEUU)httpwwwmetabolomics2015org

5 21st ISSS 21st International Symposium on

Separation Sciences

30 Junio - 3 Julio de 2015Liubliana (Eslovenia)

SecretariacuteaNational Institute of Chemistry Laboratory for Food Chemistryinfoisss2015si httpwwwisss2015si

6 I3S 2015 4th International Symposium on Sensor

Science

13 - 15 Julio de 2015Basilea Suiza

httpsciforumnetconferenceI3S2015

7 PREP 2015 28th International Symposium on

Preparative and Process Chromatography

26 - 29 Julio de 2015Filadelfia Pensilvania (EEUU)

Chair Giorgio CartaHonorary Chair Georges GuiochonMs Janet Cunningham (PREP SymposiumExhibit Manager)wwwLinkedIncominBarrEnterprisesjanetbarrconferencescomhttpwwwprepsymposiumorg

8 ITP 2015 22nd International Symposium

on Electro- and Liquid Phase-Separation

Techniques 8th Nordic Separation Science

(NoSSS) symposium

30 Agosto - 3 Septiembre de 2015Helsinki (Finlandia)

Chair and co-chair Prof Marja-Liisa Riekkola andProf Heli Sireacutenhttpwwwhelsinkifiitp2015

9 Analytica 2015 6th International Conference

and Exhibition on Analytical and Bioanalytical

Techniques

1 - 3 Septiembre de 2015Valencia (Espantildea)

Organizado por OMICS GroupSecretariacuteaanalyticaconferenceseriesnethttpanalytical-bioanalyticalpharmaceuticalconferencescom indexphp

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gases tecnologiacuteas y servicios para

la industria y la salud Gracias a

su capacidad de innovacioacuten a la

proximidad con sus clientes y a las

relaciones a largo plazo impulsa el

progreso de la industria

El producto la instalacioacuten y los servicios

que su laboratorio necesita

31


10 XVIII EUROANALYSIS 18th European

Conference on Analytical Chemistry

6 - 10 Septiembre 2015 Burdeos (Francia)

Conference Co-chairs Philippe Garrigues y ChristianRolandohttpwwweuroanalysis2015com

11 IMA 2015 9th International Conference on

Instrumental Methods of Analysis-Modern

Trends and Applications

20 - 24 Septiembre de 2015Kalamata (Grecia)

ChairpersonsProfs John Kapolos y Maria Ochsenkuumlhn-Petropoulouima2015teikalgrhttpwwwima2015teikalgr

12 EUROFOODCHEM XVIII

13 - 16 Octubre de 2015Madrid (Espantildea)

Conference chair Juana Friacuteashttpeurofoodchemxviiimadrid2015comindexasp

13 SECyTA 2015 XV Reunioacuten Cientiacutefica de la

SECyTA y VII Reunioacuten Nacional de la SEEM

27-30 Octubre 2015 Castelloacuten (Espantildea)

Co-chairmenJuan Vicente Sancho y Joaquiacuten Beltraacuten ArandesUniversitat Jaume I de Castelloacutehttpwwwsecytaseem2015com

14 RAFA 2015 7th Recent Advances in Food

Analysis

3 - 6 Noviembre de 2015Praga (Repuacuteblica Checa)

Prof Dr Jana Hajslova (chair) and Prof Dr MichelNielen (co-chair)httpwwwrafa2015eu

15 31st Montreux Symposium on LC-MS

4 - 6 Noviembre de 2015Berliacuten (Alemania)

Conference ChairProf Dr Michael W LinscheidHumboldt-Universitaumlt zu BerlinDepartment of ChemistryLaboratory of Analytical Chemistryemail analytikchemiehu-berlindehttpwwwlcms-montreux2015de

32

ARTIacuteCULOS DE INTEREacuteS

ESPECTROMETRIacuteA DE MASAS EN TAacuteNDEMCON ANALIZADORES MINIATURIZADOS YPORTAacuteTILES

La espectrometriacutea de masas en taacutendem (MSn) suponela seleccioacuten de un ion precursor su fragmentacioacuten y elanaacutelisis de los iones producto de la fragmentacioacuten Deesta manera se mejoran la selectividad y la sensibilidaden comparacioacuten con analizadores de masas maacutes senci-llos Esto es asiacute porque los mecanismos de fragmenta-cioacuten son caracteriacutesticos de una moleacutecula o una clase demoleacuteculas especiacutefica y porque en los procesos de selec-cioacuten de iones se descartan componentes de la matriz de lamuestra que de otra manera contribuiriacutean al aumentodel ruido quiacutemico

Existen dos modos de trabajo en espectrometriacutea demasas en taacutendem En el trabajo con ldquomasas en el espa-ciordquo como el que se realiza en los triples cuadrupolos laseleccioacuten del ion precursor su fragmentacioacuten y el anaacuteli-sis de los iones producto se lleva a cabo en subsistemasseparados Trabajando con ldquomasas en el tiempordquo elmismo proceso se lleva a cabo como una secuencia den-tro de una uacutenica trampa de iones

Los espectroacutemetros de masas en taacutendem modernosson capaces de alcanzar liacutemites de deteccioacuten muy bajospero son equipos muy voluminosos caros y consumenmucha energiacutea Sin embargo existen muchas aplicacio-nes importantes que no requieren tanta sensibilidadcomo la proporcionada por los espectroacutemetros modernosy que pueden potencialmente llevarse a cabo con anali-zadores maacutes pequentildeos y portaacutetiles Algunas de estas apli-caciones son el diagnoacutestico de determinadas enfermeda-des la monitorizacioacuten medioambiental la seguridad ali-mentaria la deteccioacuten de pesticidas la deteccioacuten de dro-gas o aplicaciones relacionadas con la seguridad cuida-dana

A continuacioacuten se resentildean tres trabajos recientes conanalizadores de masas en taacutendem miniaturizados y portaacute-tiles En dos de ellos se emplean trampas de iones minia-turizadas y en el tercero se describe el primer estudiopublicado hasta la fecha sobre un triple cuadrupolominiaturizado

ldquoMini 12 miniature mass spectrometer for clinicaland other applications - Introduction and characteri-zationrdquoLinfan Li Tsung-Chi Chen Yue Ren Paul I HendricksR Graham Cooks Zheng OuyangAnalytical Chemistry 2014 86 2909minus2916

En este trabajo se presenta un analizador de masasminiaturizado de sobremesa llamado por sus autoresldquoMini 12rdquo El equipo cuenta con una trampa de ioneslineal y una interfaz de ionizacioacuten a presioacuten atmosfeacutericadiscontinua (DAPI por sus siglas en ingleacutes) Es un proto-tipo de espectroacutemetro de masas para anaacutelisis dirigido ypara ejecutar aplicaciones ldquopoint-of-carerdquo que son aqueacute-llas que se llevan a cabo cerca o en el mismo lugar dondese desarrolla el intereacutes cientiacutefico de la aplicacioacuten comopudiera ser un paciente en su domicilio Los principalesobjetivos de este trabajo eran construir un equipo capazde realizar anaacutelisis directo de muestras sin pretratamien-to de las mismas y que pudiera ser utilizado por personalsin experiencia

El ldquoMini 12rdquo pesa 25 kg y mide 50 x 56 x 42 cmConsume menos de 100 W de energiacutea y puede trabajarconectado a la red eleacutectrica o alimentado por bateriacuteasTiene una pantalla taacutectil mediante la cual el usuario finalpuede manejar el equipo a traveacutes de una interfaz simplifi-cada y de faacutecil manejo Con el fin de minimizar la necesi-dad de intervencioacuten humana los autores han desarrolla-do un sistema de anaacutelisis y procesamiento de datos auto-maacutetico Cuando el cartucho de muestra se inserta en elequipo este lee el coacutedigo de barras que lleva informa-cioacuten sobre el tipo de muestra los compuestos diana elmeacutetodo de escaneo de masas y la recta de calibradoalmacenada en la base de datos para la cuantificacioacuten enbase a la relacioacuten analitopatroacuten interno A la vez el coacutedi-go de barras se usa para buscar las instrucciones para elanaacutelisis de los compuestos diana Por uacuteltimo se genera uninforme automaacuteticamente sin que el usuario tenga queinterpretar el espectro de masas

El equipo puede trabajar en cuatro modos de ioniza-cioacuten ionizacioacuten por nano-electrospray ionizacioacuten quiacute-mica a presioacuten atmosfeacuterica ionizacioacuten por spray enpapel e ionizacioacuten por spray en papel de extraccioacutenEntre ellas la ionizacioacuten por spray en papel tiene unaimportante aplicacioacuten en anaacutelisis ldquopoint-of-carerdquo por lospropios usuarios en sus domicilios Para el anaacutelisis desangre por ejemplo primero se toma la muestra de san-gre en un capilar y se transfiere a un papel acabado enpunta que se coloca dentro de un cartucho impreso porimpresioacuten 3D Una vez colocado dicho cartucho dentrodel equipo el papel se seca y posteriormente se impregnapor spray con un disolvente (metanol) Finalmente al

INFORMACIOacuteN BIBLIOGRAacuteFICA

33


aplicar un voltaje de 43 kV sobre el sustrato de papel seproduce la ionizacioacuten y el spray en la punta del papel

Los autores llevaron a cabo experimentos de masasen taacutendem hasta MS5 alcanzando liacutemites de deteccioacuten de75 ng mL-1 para determinados faacutermacos en sangreAsimismo se demostroacute el potencial del equipo para elanaacutelisis de muestras de sangre muestras medioambien-tales o alimentos sin tratar como es el caso del anaacutelisisdirecto de piel de naranja en busca de fungicidas con elmeacutetodo de ionizacioacuten por spray en papel utilizando lapropia piel de la fruta como sustrato para la ionizacioacuten

ldquoAutonomous in situ analysis and real-time chemicaldetection using a backpack miniature mass spectro-meter concept instrumentation development andperformancerdquoPaul I Hendricks Jon K Dalgleish Jacob T ShelleyMatthew A Kirleis Matthew T McNicholas Linfan LiTsung-Chi Chen Chien-Hsun Chen Jason S DuncanFrank Boudreau Robert J Noll John P DentonTimothy A Roach Zheng Ouyang R Graham CooksAnalytical Chemistry 2014 86 2900minus2908

Con el fin de realizar anaacutelisis quiacutemicos in situ losautores de este trabajo construyeron un espectroacutemetro demasas portaacutetil con forma de mochila conectada a una pis-tola de anaacutelisis El objetivo del disentildeo de este equipo esque el analista pueda acercarse a la zona de intereacutes y conla pistola realizar el muestreo en la superficie y la ioniza-cioacuten de los analitos

El equipo pesa un total de 12 kg y consume unamedia de 65 W de energiacutea La mochila mide 305 cm times295 cm times 125 cm y pesa 10 kg y estaacute conectada median-te un tubo de acero inoxidable a la pistola de aluminioque mide 12 cm times 75 cm times 85 cm y pesa 2 kg Lamochila integra todo el sistema de vaciacuteo una pequentildeabala de He la fuente de plasma las bateriacuteas y un ordena-dor con pantalla taacutectil La pistola incluye el analizador demasas la interfaz DAPI y la sonda de plasma En elmodo de trabajo con bateriacuteas el equipo puede utilizarsedurante 15 h Tambieacuten cuenta con una interfaz de usua-rio simplificada para que sea posible que personas sinexperiencia usen el equipo faacutecilmente

La fuente de ionizacioacuten y muestreo del equipo seencuentra en el componente con forma de pistola y tieneforma de cono Dicho cono aloja la sonda de plasma debaja temperatura y tiene una presioacuten positiva de He Elplasma junto con el He como gas de descarga permite laionizacioacuten de compuestos en superficies que estaacuten muyproacuteximas al cono de ionizacioacuten De esta manera lasespecies ioacutenicas reactivas entran en contacto con la zonade muestreo y anaacutelisis ionizando los componentes de lamuestra Y cuando la vaacutelvula DAPI se activa los anali-tos son transferidos al analizador de masas

Los autores muestran en este trabajo el potencial delprototipo para la deteccioacuten de agentes de guerra quiacutemicadrogas ilegales y explosivos a nivel de nanogramos rea-lizando experimentos de masas en taacutendem hasta MS3

ldquoA microelectromechanical systems-enabled minia-ture triple quadrupole mass spectrometerrdquoSteven Wright Andrew Malcolm Christopher WrightShane OrsquoPrey Edward Crichton Neil Dash Richard WMoseley Wojciech Zaczek Peter Edwards Richard JFussell Richard R A SymsAnalytical Chemistry 2015 87 3115minus3122

Los autores de este uacuteltimo trabajo presentan el quehasta la fecha de escritura de esta resentildea es el primeranalizador de masas con triple cuadrupolo miniaturiza-do Y es que por caracteriacutesticas de disentildeo las trampas deiones son maacutes faacutecilmente miniaturizables que los triplescuadrupolos por ser estos uacuteltimos una sucesioacuten en elespacio de varios componentes

El analizador de masas desarrollado en este trabajomide tan solo 24 cm desde las lentes ioacutenicas hasta eldetector Q0 y Q2 tienen un disentildeo similar y actuacutean comoguiacuteas de iones de 2 cm de largo cada uno Q1 y Q3 sontambieacuten similares en disentildeo y actuacutean como filtros demasas de 53 cm de largo Los iones se generan en unafuente ioacutenica de microspray de bajo voltaje

Como la ionizacioacuten a presioacuten atmosfeacuterica estaacute limita-da por la cantidad de gas en la fuente y por los iones queentran en el vaciacuteo del sistema la miniaturizacioacuten de lafuente tiene una repercusioacuten directa en los liacutemites dedeteccioacuten De igual manera ocurre en la celda de colisioacutendonde se aloja el Q2 Sin embargo a pesar de las reduci-das dimensiones del equipo la celda de colisioacuten frag-mentoacute eficientemente los iones precursores cuando lapresioacuten de gas (Ar) se incrementoacute draacutesticamente Elresultado fueron unos espectros de masas muy similaresa los obtenidos con equipos convencionales

Aunque los espectroacutemetros de masas son capaces detrabajar con muestras mediante anaacutelisis directo sin teacutecni-cas de separacioacuten previa (como es el caso de los dos traba-jos anteriores) la mayoriacutea de los meacutetodos actuales inclu-yen una fase de separacioacuten previa al anaacutelisis de masas Eneste caso los autores acoplaron con eacutexito el triple cuadru-polo miniaturizado a un equipo de HPLC convencional ylo utilizaron para la separacioacuten y deteccioacuten de verapamilousado en medicina para el tratamiento de la hipertensioacutenangina de pecho trastornos del ritmo cardiacuteaco y para losdolores de cabeza Como ejemplo de posible aplicacioacuten decampo se analizaron manzanas en busca de pesticidascon un liacutemite de deteccioacuten de 10 ng mL-1

Jorge SaacuteizInstituto de Quiacutemica Orgaacutenica General IQOG-CSIC

34

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35

LA ALTA RESOLUCIOacuteN DE MASA ES ESENCIAL

PARA UNA IDENTIFICACIOacuteN Y DETECCIOacuteN DE

COMPUESTOS CON LA MAacuteXIMA CONFIANZA

D Fco Javier RodriacuteguezEspecialista de ventas en cromatografiacuteaThermo Fisher Scientific

Los laboratorios tanto de investigacioacuten como de anaacute-lisis de rutina se encuentran con una presioacuten mayor cadadiacutea para producir resultados en menos tiempo mientrasse mantienen altos niveles de confianza en los resultadosLa mayoriacutea de los ensayos se basan en aproximaciones decuantificacioacuten dirigida empleando tanto cromatografiacuteade gases (GC) como cromatografiacutea liacutequida (LC) acopladaa espectrometriacutea de masas (MS) de triple cuadrupoloEstas teacutecnicas cubren el amplio rango de familias quiacutemi-cas que deben ser analizadas a los niveles solicitados desensibilidad y selectividad Sin embargo estaacuten limitadosa los compuestos que se encuentran en la lista de adquisi-cioacuten y requieren una cuidadosa optimizacioacuten de los paraacute-metros de adquisicioacuten para cada compuesto La espectro-metriacutea de masas de alta resolucioacuten en modo full scanempleando la tecnologiacutea Orbitrap proporciona la solu-cioacuten a

bull La demanda de cuantificacioacuten e identificacioacuten de unnuacutemero cada vez mayor de compuestos en un mismoanaacutelisis

bull El anaacutelisis retrospectivo de las muestras muchotiempo despueacutes de su adquisicioacuten

bull La identificacioacuten y la elucidacioacuten de la composicioacutenquiacutemica y la estructura de compuestos desconoci-dos

Hasta ahora la tecnologiacutea de espectrometriacutea de masasde alta resolucioacuten Orbitrap soacutelo ha estado disponible conLC y ha demostrado ser una teacutecnica de un alto valor analiacute-tico La tecnologiacutea de espectrometriacutea de masas Orbitrapha sido ahora acoplada a GC en el nuevo sistema QExactivetradeGC el cual es un hiacutebrido de cuadrupolo conanalizador Orbitrap La nueva configuracioacuten de sobreme-sa de un espectroacutemetro de masas hiacutebrido cuadrupolo-Orbitrap abre nuevas posibilidades para los compuestos

que son analizables por GC Los siguientes ejemplosresaltan los beneficios de la MS de alta resolucioacuten acopla-da a GC

El impacto de la resolucioacuten de masa en la selectividad

para anaacutelisis dirigidos

Los experimentos de masa exacta en alta resolucioacuten(HRAM) tiacutepicamente comprenden el anaacutelisis en modofull scan de una muestra y para el anaacutelisis de moleacuteculaspequentildeas el rango de barrido suele ser de 50 ndash 1000 DaLa tecnologiacutea Orbitrap proporciona la selectividad nece-saria para resolver los compuestos seleccionados deotros compuestos o de los iones de la matriz que tenganmasa similar Para el anaacutelisis dirigido de nuestros com-puestos la masa exacta del ioacuten diagnoacutestico es extraiacuteda enuna estrecha ventana de extraccioacuten (tiacutepicamente lt 5ppm) Esta ventana estrecha soacutelo es posible cuando elinstrumento proporciona suficiente exactitud de masapara lo cual un alto poder de resolucioacuten de masa es esen-cial

Sin embargo cuando dos perfiles de masa se superpo-nen el perfil de masa que se mide es la suma de los dosperfiles individuales La superposicioacuten resulta en unaasignacioacuten incorrecta de la masa del compuesto buscadoVamos a poner unos ejemplos de anaacutelisis de pesticidas enextractos vegetales El problema se muestra en la Figura1 donde un extracto QuEChERS de puerro en acetonitri-lo es analizado cuatro veces a un poder de resolucioacuten de15K 30K 60K y 120K (mz 200)

El espectro de masas muestra el pesticida chlorpro-pham (mz 12701833) y un ioacuten de fondo de la matriz auna masa similar creando una interferencia Se consigueuna excelente exactitud de masa para el chlorpropham a60K y a 120K resolviendo el ioacuten praacutecticamente hastaliacutenea base Sin embargo a 15K y a 30K el chlorprophamno fue suficientemente resuelto de la interferencia lo queresultoacute en una pobre asignacioacuten de la masa exacta A 15Kla exactitud de masa estaba afectada de modo significati-vo con un valor de diferencia de masa de 1592 ppm Bajoel criterio tiacutepico de identificacioacuten en screening de com-puestos de una diferencia de masa lt 5 ppm e incluso bajouna tolerancia amplia de 10 ppm esta diferencia de masahabriacutea resultado en un falso negativo (no detectado) paraeste pesticida Este ejemplo claramente demuestra que unmiacutenimo poder de resolucioacuten es necesario Dicho poder deresolucioacuten depende de la complejidad de la muestra ana-lizada y de la concentracioacuten de ambos el analito y lasinterferencias

NOTA TEacuteCNICA

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NOVEDADES TEacuteCNICAS

Figura 1 Efecto del poder de resolucioacuten en la exactitud de masa de un analito en una matriz Los perfiles de masa del chlor-propham a 10 ngg en puerro son adquiridos a resolucioacuten 15K 30K 60K y 120K La interferencia de matriz a 15K y a 30Kproduce una diferencia de masa maacutes alta de la esperada El chlorpropham se resuelve a 60K y 120K con una mejora en laexactitud de masa Bajo el criterio normal de screening este pesticida no habriacutea sido detectado (falso negativo)


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Manteniendo la sensibilidad en alta resolucioacuten

Con otros tipos de tecnologiacuteas GC-MS el incrementode la resolucioacuten de masa resulta en una disminucioacuten de latransmisioacuten de los iones por el analizador Consecuente-mente la sensibilidad de las medidas puede verse afecta-da Para una cuantificacioacuten y screening de compuestos abajas concentraciones en matrices complejas es esencialmantener la sensibilidad del instrumento mientras se tra-baja a un alto poder de resolucioacuten En la Figura 1 sedemostroacute la necesidad de una alta resolucioacuten Es esencialtambieacuten mantener la sensibilidad a los modos de altaresolucioacuten de 60K y 120K El sistema Q Exactive GC nopierde intensidad de sentildeal al incrementar la resolucioacutendel modo que siacute ocurre en otros tipos de espectroacutemetrosde masas En la Figura 2 se muestra un ejemplo de trespesticidas (chlorbenzilate fipronil y pendimethalin) y lasrespuestas correspondientes a las aacutereas de pico a una con-centracioacuten de 10 ngg en extractos QuEChERS de zana-horia en acetonitrilo Los extractos se analizaron en losmodos de resolucioacuten 15 60 y 120K en full scan Las aacutereasabsolutas de pico se mantuvieron en los distintos modosde resolucioacuten Esta consistencia proporciona la resolu-cioacuten de masa superior necesaria para obtener una exce-lente exactitud de masa sin sacrificar la sensibilidad

Alta resolucioacuten para la identificacioacuten de compuestos

desconocidos

Una de las ventajas de trabajar en modo full scan conexactitud de masa es que los datos pueden ser interroga-dos retrospectivamente y los picos potencialmente desco-nocidos pueden ser identificados La exactitud de masade un ioacuten permite proponer una composicioacuten elementalbasada en la medida de su masa exacta y en la distribu-cioacuten isotoacutepica El nuacutemero de posibles foacutermulas quiacutemicasque obtenemos estaacute basado en los elementos que propo-nemos en el calculador de foacutermulas y en la calidad de losdatos espectrales Las medidas en alta resolucioacuten con unaexactitud sub 1 ppm aceleran el proceso de identificacioacutenreduciendo el nuacutemero de foacutermulas propuestas a una canti-dad manejable Este proceso queda ilustrado en la Figura3 donde un ioacuten de masa 30410058 es procesado con elcalculador de foacutermula elemental y los hits fueron calcula-dos teniendo en cuenta los siguientes elementos Carboacuten1-50 Hidroacutegeno 1-50 Oxiacutegeno 1-20 Nitroacutegeno 1-20Foacutesforo 1-10 y Azufre 1-10

Se emplearon diferentes tolerancias de masa desde05 a 10 ppm para sugerir la posible foacutermula El nuacutemerode hits aparece en la Figura 3 Como era de esperar amayor tolerancia mayor es el nuacutemero de posibles foacutermu-las propuestas Por ejemplo a 10 ppm se proponen 60

posibles hits Incluso a una tolerancia relativamente bajade 3 ppm 20 foacutermulas elementales se ajustan al criterioseleccionadoSin embargo con la exactitud de masa sub-ppm esperadadel sistema Q Exactive GC el nuacutemero queda limitado ados foacutermulas a 05 ppm La primera foacutermula sugeridapara esta masa es C12H21O3N2PS con un error de masa de03 ppm y cuando se busca esta foacutermula en la base dedatos on-line ChemSpider el top hit coincide con el pesti-cida diazinon Esta identificacioacuten puede confirmarse pos-teriormente con la investigacioacuten de los iones fragmentocomparando los datos con libreriacuteas espectrales de unmodo sencillo ya que los datos estaacuten adquiridos con unafuente de ionizacioacuten por impacto electroacutenico (EI)

Conclusiones

Con un ultra-alto poder de resolucioacuten en rutina y unaconsistente exactitud de masa sub-ppm el espectroacutemetrode masas Q Exactive GC de Thermo Scientific es unaherramienta de laboratorio uacutenica de aplicacioacuten para des-cubrimiento de compuestos screening cuantificacioacutenidentificacioacuten de compuestos y para aplicaciones de elu-cidacioacuten estructural

La resolucioacuten de masas de al menos 60000 FWHM (amz 200) es necesaria de modo rutinario para resolvertodos los compuestos de los iones interferentes de lamatriz o de iones de masa similar Esta resolucioacuten esesencial para la identificacioacuten con confianza de nuestroscompuestos

El sistema Q Exactive GC proporciona alta sensibilidaden matrices complejas y muy importante la sensibilidadse mantiene en todos los modos de resolucioacuten empleados(15 ndash 120K)

Una exactitud de masa excelente sub-ppm acelera laidentificacioacuten de picos desconocidos permitiendo el usode tolerancias de masa muy estrechas

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Figura 2 Chlorbenzilate fipronil y pendimethalin en un extracto QhEChERS de zanahoria a una concentracioacuten de 10 nggmostrando las respuestas de aacuterea de pico obtenidas a resolucioacuten 15 60 y 120K FWHM (mz 200) La sensibilidad se mantie-ne a lo largo de los distintos modos de resolucioacuten tanto para los compuestos que producen una alta como una baja respuestaUn miacutenimo de 12 scanspico se mantiene

Figura 3 Nuacutemero de composiciones elementales sugeridas para la mz 30410058 con diferentes tolerancias de masa apli-cadas Arriba se muestra los dos hits obtenidos a 05 ppm


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BRUKER GC-APCI-QTOF ULTRA ALTA RESO-

LUCIOacuteN ACOPLADA A CROMATOGRAFIacuteA DE

GASES

Los espectroacutemetros de masas con capacidad de ultraalta resolucioacuten y masa exacta UHR-QTOF ya son unarealidad en la mayoriacutea de laboratorios de cromatografiacutea yMS Pero todaviacutea la inmensa mayoriacutea de configuracionesestaacuten disentildeadas para la infusioacuten directa o el acoplamientoa UHPLC mayoritariamente a traveacutes de fuentes de ioniza-cioacuten tipo ESI

Por otro lado la Cromatografiacutea de Gases sigue pre-sente con un campo amplio de aplicacioacuten pero en lamayoriacutea de casos sin poder ofrecer las ventajas de selecti-vidad de Ultra alta resolucioacuten y masa exacta

Por ello Bruker que lleva desde hace tiempo ofre-ciendo soluciones de acoplamiento a GC de sus QTOF hapresentado un nuevo disentildeo de acoplamiento entre loscromatoacutegrafos de Gases Bruker 456 y los sistemas QTOFCompact e Impact II De esa forma podremos combinarla alta capacidad de separacioacuten del GC con las prestacio-nes de un espectroacutemetro de masas de ultra alta resolucioacuten

El campo de aplicacioacuten de esta configuracioacuten GC-APCI-QTOF es muy amplio desde aplicaciones metabo-loacutemicas donde es fundamental incorporar la fraccioacutenvolaacutetil y semivolaacutetil que podemos separar maacutes eficaz-mente por GC hasta nuevas aplicaciones en campos eintereacutes como Dioxinas Furanos y PCBs plaguicidasexplosivos Hidrocarburos Policiacuteclicos Aromaacuteticos(PAHs) y un largo etceacutetera de compuestos de intereacutesmedioambiental agroalimentario y toxicoloacutegico

Bruker es el uacutenico fabricante que ofrece la solucioacutenintegrada con equipamiento propio (tanto GC comoQTOF) y por tanto un uacutenico interlocutor a la hora de laintegracioacuten y puesta en marcha El nuevo sistema disponede una liacutenea de transferencia flexible incorporada en lafuente APCI Apollo II que permite un acoplamiento maacuteseficaz y sencillo con el GC Los resultados ofrecen unamayor sensibilidad y resolucioacuten cromatograacutefica facili-tando la instalacioacuten sencilla y versaacutetil estableciendo unnuevo estaacutendar en el anaacutelisis de GC ndash alta resolucioacuten

Tal es la eficacia de dichos sistemas que ya se consi-deran como una excelente alternativa a la renovacioacuten deespectroacutemetros antiguos tipo EI o FAB El sistema GC-APCI-QTOF ofrece una excelente alternativa total auto-matizacioacuten y en general mejor resolucioacuten y precisioacuten demasas gracias al sistema UHR-QTOF siendo una alterna-tiva muy eficaz para el anaacutelisis espectroscoacutepico claacutesico

El nuevo disentildeo de interfase ademaacutes permite la faacutecilreconfiguracioacuten del sistema para conectar un UHPLC o

Bruker Chemical Analysis

40


infusioacuten directa de liacutequidos por ESI En minutos su siste-ma pueda estar reconfigurado y funcionando De esamanera se mejora la productividad y versatilidad del sis-tema UHR-QTOF

Finalmente que todos los componentes provengan delmismo suministrador garantiza una total compatibilidadde software y hardware un coste competitivo y coacutemo noun excelente soporte y servicio teacutecnicoSi tiene intereacutes en informacioacuten adicional sobre el sistemaBruker GC-APCI-QTOF no dude en ponerse en contactocon nosotros para ampliar la informacioacuten teacutecnica del sis-tema o en la web wwwbrukercom

Bruker Appnote lcms102 Analysis of EnvironmentalSamples with a Novel Atmospheric Pressure GC SourceCoupled to High-Resolution TOF-MS Analysis

Bruker Espantildeola SAParque Empresarial Rivas FuturaC Marie Curie 5 Edificio Alfa28521 Rivas-VaciamadridMadrid - SpainTel 91 4994634 4080Fax 91 656 62 37Info-bcad-spainbrukercom

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IZASA SCIENTIFIC PRESENTA I-SERIES DE

SHIMADZU CORPORATION LA GAMA DE SIS-

TEMAS COMPACTOS DE HPLC

Esta nueva serie mejora la productividad con la capa-cidad de poder trabajar desde su pantalla taacutectil lo que lehace ser un dispositivo inteligente y permite si se deseatrabajar sin necesidad de disponer de un PC

La gama i-Series se compone de dos sistemas Nexera-i que proporcionan anaacutelisis con ultra alta velocidad ydos Prominence-i con velocidad convencional y altaEstos sistemas permiten su control ademaacutes de por siacute mis-mos desde un dispositivo inteligente tableta o ldquosmart-phonerdquo por medio del Modo de ComunicacioacutenInteractivo (ICM) recientemente desarrollado Ofrecenpor tanto un entorno operativo intuitivo que permite quecualquier persona pueda analizar muestras faacutecilmenteTienen automatizacioacuten total desde el inicio hasta la para-da despueacutes del anaacutelisis Asimismo disponen de una fun-cioacuten de acceso directo que permite a varios operadoresintroducir muestras en cualquier momento para lograr unflujo de trabajo maacutes eficiente Los meacutetodos de anaacutelisiscreados en sistemas HPLC ya existentes incluidos siste-mas no Shimadzu se pueden transferir faacutecilmente a la i-Series Es ideal para cualquier tipo de laboratorio I+Dcontrol de calidad y pruebas de seguridad asiacute como encampos tales como el farmaceacuteutico quiacutemico de la ali-mentacioacuten y del medio ambiente

iquestQueacute nos proporciona

bull Innovador Sistema de trabajo para un entorno deLaboratorio Avanzado

Su Modo de Comunicacioacuten Interactivo (ICM) permi-te a los usuarios iniciar un anaacutelisis con un miacutenimo deacciones y la adquisicioacuten de datos se sincroniza con elsoftware de PC LabSolutions Asimismo los analistaspueden usar un dispositivo inteligente tableta o smart-phone para comenzar un anaacutelisis y seguir de forma remo-ta el estado del sistema y sus cromatogramas sin tener queutilizar ninguacuten software especial Asiacute se obtiene un faacutecilacceso al sistema independientemente de su zona de tra-bajo por ejemplo el equipo se puede instalar bajo unacampana si se han de analizar ingredientes farmaceacuteuticosaltamente activos

bull Maacutexima fiabilidad y estabilidad

El doble control de temperatura en detectores y celdasde flujo ofrece una excelente estabilidad de la liacutenea debase asegurando datos fiables no afectados por fluctua-cioacuten de la temperatura ambiente Permite la inyeccioacutendirecta de muestras altamente concentradas sin dilucioacutenahorrando asiacute trabajo en el proceso incluso cuando lainyeccioacuten de voluacutemenes es ultra-baja 1μL o menos ofre-ce un anaacutelisis de alta precisioacuten con una repetibilidad en elvolumen de inyeccioacuten del 1 o menos El ciclo de inyec-cioacuten se ha reducido a la mitad del de su antecesor el LC-2010 reduciendo el anaacutelisis en maacutes de 47 minutos al ana-lizar por ejemplo 384 muestras en cuatro placas de 96pocillos

bull Intuitivo Trabajo maacutes sencillo

Los sistemas i-Series tienen pantallas taacutectiles LCD encolor de 7 pulgadas con interfaz graacutefica de usuario quepermite a usuarios sin experiencia poder controlar intuiti-vamente el sistema Muestra el estado del sistema y el

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cromatograma en tiempo real el software de aplicacioacutende PC LabSolutions emplea ademaacutes el mismo disentildeo quela pantalla de los i-Series Tambieacuten emplean una funcioacutende comprobacioacuten del sistema que confirma los consumi-bles utilizados y guiacutea la sustitucioacuten de piezas con el fin deahorrar costes de mantenimiento

bull Inteligente Interfaz inteligente para un trabajo efi-ciente

La i-Series ofrece completa automatizacioacuten del anaacuteli-sis de rutina Todas las operaciones se pueden automati-zar desde el inicio anaacutelisis de muestras salida del infor-me y parada Esto mejora la fiabilidad y estabilidad deanaacutelisis Ademaacutes la alimentacioacuten del instrumento sepuede parar automaacuteticamente al acabar el trabajo aho-rrando hasta un 95 el consumo de electricidadFinalmente es de notar la sencilla transferencia de meacuteto-dos de HPLC de otros proveedores a los sistemas deShimadzu

Sobre Izasa Scientific

Con maacutes de 40 antildeos de experiencia y vocacioacuten de ser-vicio a la comunidad cientiacutefica Izasa Scientific se haposicionado como el principal proveedor de solucionesglobales para nuestros clientes en Espantildea y Portugal

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ESPECTROacuteMETRO DE MASAS DE TIEMPO DE

VUELO DE ALTA RESOLUCIOacuteN PEGASUS GC

HRT 4D

La maacutes reciente innovacioacuten de LECO en el campo dela Ciencia de la Separacioacuten es el sistema deEspectrometriacutea de Masas Pegasus GC-HRT 4D que pro-porciona una capacidad sin precedentes en el estudio demuestras complejas y la identificacioacuten de un mayornuacutemero de analitos y de componentes desconocidos conla maacutexima confianza

El sistema Pegasus GC-HRT 4D combina la capaci-dad del sistema GCxGC con el mayor rendimiento delsistema de espectrometriacutea de masas de tiempo de vuelo

Con una precision de masas de 1 ppm y una capacidadpotencial de picos al menos dos veces mayor que cual-quier Espectroacutemetro de Masas el sistema Pegasus GC-HRT 4D es la solucioacuten para ganar la batalla de la coelu-cioacuten y analizar las maacutes complejas muestras

Otros hechos como la generacioacuten de iones pseudo-moleculares mediante la ionizacioacuten quiacutemica tiempos deretencioacuten coincidentes distribucioacuten isotoacutepica y masaexacta de los fragmentos permiten conseguir una identi-ficacioacuten segura

Beneficios

Cromatografiacutea de Gases de dos dimensiones

El modulador quadjet de doble etapa y el hornosecundario estaacuten instalados dentro del horno primario delcromatoacutegrafo de gases El control del muestreador delcromatoacutegrafo de gases del modulador teacutermico GCxGCde Leco y del sistema Pegasus TOF MS estaacuten completa-mente integrados en el software ChromaTOF-HRT desdeun unico ordenador

Analizador de masas TOF con trayectoria de vuelo

plegada (FFP) patentada

Novedoso tiempo de vuelo que mantiene los paquetesde iones focalizados mejor que los enfoques estaacutendares ypor tanto el sistema no es susceptible a que la doble ace-leracioacuten ortogonal disperse el haz inicial y por tanto sefocalizan maacutes iones en la regioacuten del TOF

Fuente de ionizacioacuten quiacutemica

Permite ahorrar tiempo y esfuerzo identificando compues-tos desconocidos de una forma maacutes sencilla y con maacutesconfianza en el proceso de comparacioacuten con la libreriacutea

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La fuente de ionizacioacuten quiacutemica (HR-CI) del sistemaPegasus GC-HRT 4D permite a los usuarios acceder a lainformacioacuten en alta resolucioacuten de iones pseudo-molecu-lares con una precisioacuten de masas y alta resolucioacuten hastaahora no alcanzadas

El sistema Pegasus GC-HRT 4D dispone de las dosfuentes de ionizacioacuten impacto electroacutenico (EI) e ioniza-cioacuten quiacutemica (CI) proporcionando la opcioacuten de compara-cioacuten de espectros claacutesicos con la libreriacutea (EI) y la conser-vacioacuten del ion molecular (CI)

El sistema Pegasus GC-HRT y la fuente HR-CI propor-cionan conjuntamente un completo paquete de alta produc-tividadinformacioacuten del anaacutelisis de la muestra con una reso-lucioacuten de hasta 50000 FWHM una precisioacuten de masasinferior a 1 ppm y una velocidad de adquisicioacuten de hasta200 espectrossegundo todo ello con medidas de abundan-cia isotoacutepica de alta integridad para facilitar la informacioacuteny alta seguridad en la identificacioacuten del analito

El sistema Pegasus GC-HRT 4D de LECO ofrece la maacuteseficiente y completa separacioacuten cromatograacutefica GCxGCacoplado con el sistema TOFMS de mayor eficacia

Estos avances tecnoloacutegicos conjuntamente con elsoftware ChromaTOF-HRTreg de LECO y el sistema dedeconvolucioacuten en alta resolucioacutentrade (HRDtrade) permitenobtener maacutes partido de los datos en alta resolucioacuten utili-zados conjuntamente con la libreriacutea NIST y las libreriacuteasde Masa Exacta

Caracteriacutesiticas

bull High Resolution Deconvolution (HRDtrade) Decon-voluciona e identifica los analitos maacutes importantesen matrices complejas

bull Fuentes HR-EI and HR-CI Ofrecen mayor flexibili-dad

bull La tecnologiacutea Folded Flight Pathreg (FFPreg) patentadapor LECO no soacutelo proporciona alta resolucioacuten ysensibilidad sino tambieacuten mayor focalizacioacuten com-parado con la dispersioacuten del TOF estaacutendar lo quepermite condiciones iniciales maacutes amplias

bull KADASreg Sistema patentado de adquisicioacuten dedatos basado en las estadiacutesticas de iones que reduceel ruido dramaacuteticamente asegura la masa exacta ydisminuye el tamantildeo del fichero

bull ChromaTOF-HRT Software de LECO disentildeadoespecialmente para HRT y GCxGC que antildeade capa-cidades cualitativas y cuantitativas a un sistema dedatos sencillo de utilizar

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150E satisfacen las necesidades de agua purifica-

da de uno o varios analizadores cliacutenicos de gran

rendimiento

bull La exclusiva tecnologiacutea Elixreg de electrodesioniza-

cioacuten y la innovadora tecnologiacutea ERAtrade aseguran

agua de calidad constante con costes de funciona-

miento bajos y predecibles

bull La posibilidad de conexioacuten remota permite un

nivel sin precedentes de servicio para maximizar

el tiempo de funcionamiento del analizador

Merck Millipore la divisioacuten de Ciencias de la Vida deMerck ha anunciado el lanzamiento de sus sistemas depurificacioacuten de agua AFSreg 40E 80E 120E y 150EEstos nuevos sistemas se han desarrollado para propor-cionar a los laboratorios cliacutenicos una solucioacuten econoacutemicay fiable de purificacioacuten de agua para voluacutemenes diariosde agua de hasta 3000 L

Los sistemas AFSreg 16D0E 80E 120E y 150Eemplean dos potentes tecnologiacuteas para producir agua decalidad que cumpla la norma de Agua de grado reactivopara laboratorios cliacutenicos del Clinical and LaboratoryStandards Institutreg (CLSIreg) La probada tecnologiacutea devanguardia Elixreg de electrodesionizacioacuten (EDI) asegurauna calidad constante del agua con costes de funciona-miento bajos y predecibles mientras que la exclusiva tec-nologiacutea ERAtrade (Evolutive Reject Adjustment) tiene encuenta la calidad del agua de alimentacioacuten para optimizarde forma automaacutetica su recuperacioacuten y reducir los costesde consumo de agua

Como indica John Sweeney Director de la Unidad denegocio Lab Solutions de Merck Millipore laquolos directo-res de los laboratorios biomeacutedicos estaacuten bajo constante

45


presioacuten para evitar los periodos de parada de los analiza-dores cliacutenicosrdquo Y explica ldquoel agua es el reactivo liacutequidoutilizado con maacutes frecuencia en los analizadores cliacutenicosy para los laboratorios donde se manejan miles de mues-tras al diacutea la eleccioacuten del sistema de purificacioacuten de aguaes fundamental para proporcionar agua purificada de altacalidad y un funcionamiento fluidoraquo Nuestros sistemasAFSreg 40E 80E 120E y 150E incorporan las tecnologiacuteasmaacutes recientes para un rendimiento robusto y fiableNuestro objetivo es contribuir a que los laboratorios bio-meacutedicos sean maacutes productivos y estos sistemas AFSreg

hacen exactamente eso

Los sistemas AFSreg 40E 80E 120E y 150E ofrecentambieacuten a los usuarios una potente supervisioacuten en tiemporeal las 24 horas del diacutea los 7 diacuteas de la semana y controlremoto de sus sistemas de purificacioacuten de agua asiacute comouna nueva generacioacuten de servicios mejorados Estascaracteriacutesticas de supervisioacuten avanzadas junto con unnivel de servicio sin precedentes contribuyen tambieacuten amaximizar el tiempo de funcionamiento del analizador

Los sistemas han sido disentildeados para proporcionar undiagnoacutestico remoto raacutepido y preciso y ofrecer un servicioproactivo con el fin de evitar periodos de parada El servi-cio se inicia con un anaacutelisis del agua de alimentacioacuten rea-lizado por un ingeniero certificado del servicio teacutecnico deMerck Millipore antes de la instalacioacuten del sistemaLuego con el tiempo los usuarios pueden asegurar elmejor mantenimiento de su sistema de purificacioacuten deagua AFSreg E con un plan de mantenimiento WatercarePact personalizado

Con su nueva gran pantalla taacutectil el sistema estaacute dise-ntildeado para un funcionamiento intuitivo y para dar apoyo alusuario con faacuteciles instrucciones paso a paso durante elmantenimiento sistemaacutetico Nunca ha sido maacutes faacutecilinteraccionar con el sistema de purificacioacuten de agua Parauna mayor flexibilidad tambieacuten puede accederse a lainterfaz del sistema desde otro lugar usando un PC unatableta o un teleacutefono inteligente a traveacutes de un navegador

Portaacutetil y personalizable la nueva gama estaacute disentildeadapara hacer el mejor uso del espacio del laboratorio Lossistemas compactos y silenciosos estaacuten montados sobreruedas y pueden desplazarse por el laboratorio o a otraubicacioacuten dependiendo de los requisitos del laboratorio

Los usuarios del sistema AFSreg E pueden elegir entreuna serie de opciones y accesorios para satisfacer susrequisitos especiacuteficos como son entre otros un monitorde carbono orgaacutenico total (TOC) en liacutenea una opcioacuten dedesgasificacioacuten y una vaacutelvula de muestreo sanitario

Si desea maacutes informacioacuten visitewwwmerckmilliporecomAFSE-large

Sobre Merck Millipore

Merck Millipore es la divisioacuten de Ciencias de la Vidade Merck y ofrece una amplia gama de innovadores y efi-cientes productos servicios y relaciones comerciales quepermiten el eacutexito de nuestros clientes en investigacioacutendesarrollo y produccioacuten de terapias biotecnoloacutegicas y far-maceacuteuticas Merck Millipore auacutena todos sus esfuerzos enla apertura de nuevos campos cientiacuteficos y de ingenieriacuteay como uno de los tres principales inversores en I+D de laindustria de herramientas en ciencias de la vida actuacuteacomo socio estrateacutegico para los clientes contribuyendo alavance de las ciencias bioloacutegicas Con sede central enBillerica (Massachussetts EEUU) la divisioacuten cuentacon maacutes de 10000 empleados opera en 66 paiacuteses y haobtenido unos ingresos de 2600 millones de euros en2013 Merck Millipore se conoce como EMD Milliporeen los Estados Unidos y Canadaacute

Sobre Merck

Merck es una empresa liacuteder en productos de alta tec-nologiacutea innovadores y de maacutexima calidad en los sectoresfarmaceacuteutico y quiacutemico Con sus cuatro divisionesMerck Serono Consumer Health Performance Materialsy Merck Millipore Merck generoacute unos ingresos totalesde 11100 millones de euros en 2013 En torno a 39000empleados de Merck trabajan en 66 paiacuteses para mejorar lacalidad de vida de los pacientes impulsar el eacutexito de losclientes y contribuir a satisfacer los retos mundialesMerck es la empresa farmaceacuteutica y quiacutemica maacutes antiguadel mundo desde 1668 la empresa se ha diferenciado porla innovacioacuten el eacutexito comercial y el emprendimientoresponsable Poseyendo aproximadamente el 70 por cien-to de los intereses la fundacioacuten familiar sigue siendo lapropietaria mayoritaria de la empresa en la actualidadMerck Darmstadt Alemania es propietario de los dere-chos mundiales del nombre y la marca Merck Las uacutenicasexcepciones son Canadaacute y los Estados Unidos deNorteameacuterica donde la empresa se conoce como EMD

Millipore la marca M AFS y Elix son marcas regis-tradas y ERA es una marca comercial de MerckKGaA Todas las demaacutes marcas comerciales son propie-dad de sus respectivos propietarios

Contacto Jill DeCosteTfo +1 978 715 4670Correo electroacutenicojilldecosteemdmilliporecom

46


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Dichas columnas Vertex Plus AX ofrecen compresioacutenaxial de HPLC preparativa que proporciona una mayordurabilidad y estaacuten disponibles a partir de 16 mm hastalos 50 mm de diaacutemetro interior con longitudes que vandesde los 30 mm pasando por 150 mm hasta 250 mm

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COLUMNAS ACE Y ACE-EXCEL EXPLORANDO

LA SELECTIVIDAD EN FASES C18 MODIFICA-

DAS

Las fases C18 fueron unas de las primeras fases dis-ponibles dentro de la cromatografiacutea en fase inversa A diacuteade hoy siguen siendo las columnas maacutes populares y utili-zadas en la mayoriacutea de las separaciones de HPLC Eseeacutexito de las fases C18 es debido fundamentalmente a laestabilidad que ofrecen las largas cadenas alquiacutelicasfrente a las cortas cadenas alquiacutelicas propias de fases C3-CN o C6-PH que son maacutes vulnerables frente al pH o latemperatura

Sin embargo debido precisamente a esa alta hidrofo-bicidad las fases C18 presentan ciertas carencias en elanaacutelisis de compuestos polares como pueden ser pocaretencioacuten incompatibilidades con fases moacuteviles altamen-te acuosas asiacute como limitaciones a la hora de discernirentre compuestos hidrofoacutebicamente muy similares

Por todo ello se hace deseable y apremiante aunar lascaracteriacutesticas propias de las fases C18 con las ventajasque ofrecen esas otras fases unidas a cadenas alquiacutelicas

maacutes cortas esto es las fenilo las PFP las CN e inclusoamidas cuyas caracteriacutesticas en teacuterminos de robustez noson tan deseables como las C18 pero que sin embargoofrecen otros mecanismos de interaccioacuten dando al ana-lista nuevas opciones en lo que a desarrollo de meacutetodos serefiere

En el disentildeo de esas nuevas fases se deben por tantotener en cuenta las caracteriacutesticas propias y maacutes desea-bles de las C18 con los muacuteltiples mecanismos de interac-cioacuten que ofrecen los anillos aromaacuteticos los PFP o eldipolo del grupo ciano yo la selectividad de los gruposamida Una vez resuelto esto el siguiente paso seraacute coacutemoseleccionar la fase maacutes adecuada para nuestro anaacutelisispor fase inversa con la base de la hidrofobididad del C18y las posibles selectividades teniendo en cuenta que elque predomine un tipo de mecanismo u otro vendraacutedeterminado tanto por las propiedades fiacutesico-quiacutemicas delos analitos como de las condiciones cromatograacuteficasaplicadas

No se debe perder de vista que el objetivo deseado esconseguir la separacioacuten entre los picos en cuestioacuten conuna resolucioacuten adecuada (15-2) y a su vez conseguir unmeacutetodo raacutepido reproducible y robusto

Con esa idea ACT ha desarrollado durante los uacutelti-mos antildeos variacuteas fases complementarias yo alternativasal C18 convencional con el propoacutesito descrito anterior-mente Fruto de esas necesidades disentildeoacute y lanzoacute exito-samente diversas fases que unifican cadenas alquiacutelicaslargas y diversos ligandos que arrojan diferentes selecti-vidades

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Como se puede deducir estas nuevas fases ACE pue-den exhibir muacuteltiples mecanismos de interaccioacuten Fase

De todo ello se puede concluir que columnas condiversas selectividades derivadas de muacuteltiples mecanis-mos de interaccioacuten pueden ser efectivas como punto departida para el desarrollo de meacutetodos para mejoras yomodificaciones de los meacutetodos ya existentes cuando serequiere un cambio en la selectividad y como estrategiade desarrollo de meacutetodos ya que se pueden probar variasfases en diferentes condiciones de pH temperaturamodificacioacuten de componente orgaacutenico etchellip

Maacutes informacioacuten enwwwace-hplccomwwwsymtacominfosymtacom

1 ARTIacuteCULOS CIENTIacuteFICOS

CTA publica artiacuteculos relacionados con teacutecnicas analiacuteticas (de separacioacuten de identificacioacuten etc) bien sobreinvestigaciones en las propias teacutecnicas o sobre aplicaciones de las mismas Los autores de los artiacuteculos recibiraacuten unacompensacioacuten econoacutemica (300 euros) por cada artiacuteculo publicado en CTA

1) Para publicar artiacuteculos en CTA no es necesario ser socio de la SECyTA

2) El idioma de la revista y por tanto de publicacioacuten de los artiacuteculos es el castellano

3) Los artiacuteculos pueden ser de los siguientes tiposa) Trabajos originales de investigacioacutenb) Revisiones bibliograacuteficas c) Artiacuteculos de divulgacioacutend) Series monograacuteficas

Los trabajos deberaacuten estar escritos a doble espacio con un tamantildeo de fuente de 10 oacute 12 pt y cada paacutegina deberaacuteir numerada El tamantildeo de los trabajos estaraacute comprendido entre 10 y 30 hojas (DIN A4) incluidas tablas figurasy bibliografiacutea y deberaacuten enviarse por e-mail a cualquiera de las siguientes direcciones mlsanziqogcsicesjaviermorenocsices acsoriaiqogcsices

Los trabajos de investigacioacuten no deberaacuten haberse publicado previamente Antes de su publicacioacuten todos los trabajos seraacutenrevisados por especialistas en el tema quienes juzgaraacuten la conveniencia de su publicacioacuten o propondraacuten a los autores lasmodificaciones oportunas

Tiacutetulo Deberaacute ser conciso y que refleje el tema del trabajo A continuacioacuten se citaraacute el nombre de los autores con ladireccioacuten completa de cada uno de ellos incluyeacutendose tambieacuten el correo electroacutenico y teleacutefono del autor al que deberaacuteremitirse la correspondencia

Resumen De 100 a 150 palabras reflejando de forma clara y concisa el propoacutesito y los resultados maacutes relevantes delartiacuteculo Para los trabajos originales de investigacioacuten el texto principal seguiraacute el formato tradicional IntroduccioacutenMateriales y Meacutetodos Resultados y Discusioacuten Conclusiones y Bibliografiacutea

Bibliografiacutea Las referencias bibliograacuteficas apareceraacuten en el texto entre pareacutentesis con el apellido de los autores y el antildeo(Bianco y Edwards 2008) Si son maacutes de dos autores se citaraacute el apellido del primero seguido por ldquoy colrdquo y el antildeo depublicacioacuten (Garciacutea-Peacuterez y col 2007) Si se citan varias referencias juntas se separaraacuten por punto y coma (Smith y col1980 Brit y col 1985) Al final del artiacuteculo las refererencias seraacuten ordenadas por orden alfabeacutetico con el siguienteformato

1) Hirota T Ohki K Kawagishi R Kajimoto Y Mizuno S Hypertens Res (2007) 30 489-496

2) Venter J C ldquoThe Emission of Sulfur to the Remote Atmosphererdquo en The Biogeochemical Cycling of Sulfur andNitrogen (JN Galloway et al Eds) D Reidel Publishing Co Dordrech Holland (1985) p 346

Tablas Se enviaraacuten con un breve encabezamiento y numeradas seguacuten el orden de aparicioacuten en el texto

Figuras Se enviaraacuten en un archivo diferente separadas y numeradas por orden de aparicioacuten en el texto Las leyendasdeberaacuten ser incluidas al final del artiacuteculo a continuacioacuten de la bibliografiacutea

NORMAS GENERALES DE PUBLICACIOacuteN

2 INFORMACIOacuteN BIBLIOGRAacuteFICA - ARTIacuteCULOS DE INTEREacuteS

En esta seccioacuten se incluye una revisioacuten de tres artiacuteculos recientes y de diferentes autores sobre un tema de intereacutes dentrodel aacutembito de la Cromatografiacutea y Teacutecnicas Afines Estas contribuciones seraacuten remuneradas con 75 euros

3 NOVEDADES TEacuteCNICAS

Las empresas colaboradoras de la SECyTA disponen en cada nuacutemero de una paacutegina gratuita para informar sobre lasnovedades de sus productos La extensioacuten maacutexima de los originales seraacute 3 DIN A4 mecanografiados a doble espaciopudieacutendose incluir algunos graacuteficos y fotografiacuteas en blanco y negro (no maacutes de tres) Deberaacuten remitirse a la redaccioacuten deCTA con anterioridad a los diacuteas 1 de mayo (para el primer nuacutemero) y 1 de noviembre (para el segundo)

4 OTRAS SECCIONES

CTA agradeceraacute toda la informacioacuten que reciba de sus lectores sobre asuntos de intereacutes general dentro del campo de lacromatografiacutea y teacutecnicas afines (cursos conferencias congresos ofertas de trabajo informes sobre el trabajo de gruposespantildeoles y extranjeros resentildeas de libros o cualquier tipo de colaboracioacuten)

A su vez CTA publicaraacute en la medida de lo posible respuestas de especialistas a todas aquellas cuestiones concretas queformulen los lectores en relacioacuten con sus problemas en el laboratorio o con asuntos relacionados en general con lacromatografiacutea y teacutecnicas afines


CONDICIONES PARA LA CONCESIOacuteN DE AYUDAS PARA LAASISTENCIA A CONGRESOS REUNIONES DE CARAacuteCTER

NACIONAL E INTERNACIONAL (aprobadas por la Junta de Gobiernode la SECyTA en sesioacuten celebrada el 31 de enero de 2013)

1 Requisitos generales para optar a una beca concedida por la SECyTA

11 Ser miembro de la SECyTA 12 Encontrarse en una de las siguientes opciones

121 realizando la tesis doctoral o un trabajo de investigacioacuten de maacutester o equivalente en un centro de investigacioacuten122 en una etapa post-doctoral en un centro de investigacioacuten dentro de los 2 antildeos posteriores a la lectura de la

tesis doctoral y tener una antiguumledad como socio de la SECyTA de al menos 2 antildeos13 No ser miembro de la plantilla laboral permanente del centro de investigacioacuten

2 Requisitos adicionales para la asistencia a las Reuniones Cientiacuteficas de la SECyTA

21 Se podraacuten conceder un maacuteximo de 2 becas por investigador seacutenior (socio de la SECyTA) inscrito en la Reunioacuten22 Soacutelo se podraacute solicitar una ayuda por comunicacioacuten presentada en la Reunioacuten

3 Requisitos adicionales para la asistencia a Reuniones yo Congresos Internacionales

31 Encontrarse en una de las siguientes opciones311 realizando la tesis doctoral o trabajo de investigacioacuten de maacutester o equivalente (como miacutenimo en su segundo

antildeo) en un centro de investigacioacuten y tener una antiguumledad miacutenima como socio dela SECyTA de 1 antildeo312 en una etapa post-doctoral en un centro de investigacioacuten dentro de los 2 antildeos posteriores a la lectura de la

tesis doctoral y tener una antiguumledad como socio de la SECyTA de al menos 2 antildeos32 No haber disfrutado de otra beca semejante concedida por la SECyTA durante la realizacioacuten del trabajo de

investigacioacuten33 Se establece la necesidad de que se trate de congresos relacionados con el fin de la SECyTA o bien que la SECyTA

figure como colaboradora o coorganizadora del Congreso34 El solicitante al que se le conceda la ayuda contrae la obligacioacuten de elaborar un informe (en ingleacutes) sobre el

Congreso para su publicacioacuten en el Boletiacuten y en la paacutegina web de la Sociedad Si se conceden maacutes de una beca parala asistencia a un mismo congreso se podraacute elaborar el informe de forma conjunta

35 Tener aceptada una comunicacioacuten (oral o poacutester) en el congreso para el que se solicita la beca

4 Requisitos adicionales para la asistencia a Reuniones yo Congresos patrocinados por la SECyTA

41 Ser miembro de la SECyTA con una antiguumledad superior a 1 antildeo42 No haber disfrutado de otra beca semejante en el mismo antildeo natural43 El solicitante al que se le conceda la ayuda contrae la obligacioacuten de elaborar un informe (en ingleacutes) sobre el

Congreso para su publicacioacuten en el Boletiacuten y en la Paacutegina Web de la Sociedad Si se conceden maacutes de una becapara la asistencia a un mismo congreso se podraacute elaborar el informe de forma conjunta


La solicitud junto con la documentacioacuten requerida debe enviarse a la SECRETARIacuteA de la SECyTADra Beleacuten GoacutemaraDepartamento de Anaacutelisis Instrumental y Quiacutemica AmbientalInstituto de Quiacutemica Orgaacutenica General CSICJuan de la Cierva 3 28006-Madrid (Espantildea)Tel 91-5618806 (ext 385) Fax 91-5644853 e-mail secretariasecytagmailcom

Para maacutes informacioacuten sobre las becas para la asistencia a congresos y para acceder a los documentos necesarios consultarla paacutegina web de la SECyTA

NORMATIVA DE CONCESIOacuteN DE AYUDAS PARA

LA ASISTENCIA A CONGRESOS YO REUNIONES

Si desea hacerse socio de la SECyTA rellene y enviacutee el siguiente boletiacuten de inscripcioacuten acompantildeadode la correspondiente autorizacioacuten bancaria aDra Beleacuten GoacutemaraDepartamento de Anaacutelisis Instrumental y Quiacutemica AmbientalInstituto de Quiacutemica Orgaacutenica General CSICJuan de la Cierva 328006-Madrid (Spain)Tel 91-5618806 (ext 385)Fax 91-5644853e-mail secretariasecytagmailcom

Cuota anual 30 euro

bull Sentildeale la casilla correspondiente a la direccioacuten en la que desea recibir la correspondenciabull Puede efectuar el pago de la cuota del primer antildeo mediante cheque bancario (adjuntaacutendolo a esta solicitud)mediante cheque bancario (adjuntaacutendolo a esta solicitud) o mediante ingresotransferencia a la CuentaCorriente del Banco BBVA ES13 0182 4162 2702 0153 0059 (Sociedad Espantildeola de Cromatografiacutea yTeacutecnicas Afines) Debe figurar en el ingreso o transferencia ldquoALTA SECYTA + nombre y primer apellidodel Sociordquo

bull iquestAutoriza a incluir su correo electroacutenico en la paacutegina Web de la SECyTA SIacute NO(Tache lo que NO proceda)

bull iquestAutoriza incluir sus datos de contacto en la seccioacuten ldquoNuevos Sociosrdquo del Boletiacuten de la SECyTA SIacute NO(Tache lo que NO proceda)

SOCIEDAD ESPANtildeOLA DE CROMATOGRAFIacuteA Y TEacuteCNICAS AFINES

HOJA DE INSCRIPCIOacuteN

Apellidos Nombre DNI Domicilio particularCalle Nuacutem Municipio ProvinciaCoacutedigo postal Teleacutefono Correo electroacutenico Industria u organizacioacuten Calle Nuacutem Municipio ProvinciaCoacutedigo postal Teleacutefono FAX Correo electroacutenico

DATOS BANCARIOS

BancoCaja de Ahorros Sucursal Direccioacuten CiudadD Con domicilio en Y con IBAN ES_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _

en esta Sucursal ruega a usted se digne dar las oacuterdenes oportunas para que con cargo a dicha cuenta seanabonados los recibos de mi cuota anual de socio que les seraacuten presentados al cobro por la SociedadEspantildeola de Cromatografiacutea y Teacutecnicas AfinesAtentamente le saluda

En adede 20

Firma

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requieren el alto rendimiento del Xevo TQ-S con la tecnologiacutea

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Instant Expertisetrade Integridad Espectral en todo el rango desde moleacuteculas de masa bajas hasta proteinas intactas

Fidelidad Isotoacutepica para la determinacioacuten definitiva de la foacutermula molecular

1

IacuteNDICE

2 EDITORIAL



























EDITORIAL

2

3


RESUMEN


1 INTRODUCCIOacuteN







CTA Vol 36 (1) 2015

ARTIacuteCULO


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TARIA



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6 CONCLUSIONES





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ARTIacuteCULO


AGRADECIMIENTOS


7 BIBLIOGRAFIacuteA


































21















































22







SEDE









24

INFORMACIONES






- Prof Coral Barbas






Premios






Becas



Fechas clave

1 de abril de 2015


12 de julio de 2015


31 de julio de 2015








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Queridos lectores








ocurre algo similar











Mass Spectrometry










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014 T

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in GC-MS

A new chapter

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ceutical Analysis







Separation Sciences




Science










(NoSSS) symposium





Techniques
















certificadas

















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Analysis






32












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PROTECTORAS

ASOCIADAS



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NOTA TEacuteCNICA

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desconocidos




Conclusiones





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GASES









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Izasascientificcom


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HRT 4D





Beneficios








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rendimiento











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Sobre Merck




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PRODUCTOS KNAUER


raacutepida















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DAS








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4 OTRAS SECCIONES





























Cuota anual 30 euro







DATOS BANCARIOS



En adede 20

Firma





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IacuteNDICE

2 EDITORIAL



























EDITORIAL

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RESUMEN


1 INTRODUCCIOacuteN







CTA Vol 36 (1) 2015

ARTIacuteCULO


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ARTIacuteCULO







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TARIA



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ARTIacuteCULO


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6 CONCLUSIONES





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ARTIacuteCULO


AGRADECIMIENTOS


7 BIBLIOGRAFIacuteA


































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SEDE









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INFORMACIONES






- Prof Coral Barbas






Premios






Becas



Fechas clave

1 de abril de 2015


12 de julio de 2015


31 de julio de 2015








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Queridos lectores








ocurre algo similar











Mass Spectrometry










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Separation Sciences




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Analysis






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EDITORIAL

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RESUMEN


1 INTRODUCCIOacuteN







CTA Vol 36 (1) 2015

ARTIacuteCULO


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AGRADECIMIENTOS


7 BIBLIOGRAFIacuteA


































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SEDE









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INFORMACIONES






- Prof Coral Barbas






Premios






Becas



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1 de abril de 2015


12 de julio de 2015


31 de julio de 2015








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GASES









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BOLETÍN DE LA SECYT A V O L UMEN 36 NÚM.1 (2015) W W W