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TESIS DOCTORAL
NUEVAS APORTACIONES AL CONOCIMIENTO FARMACOLGICODEL CAMO INDIANO
Mara Isabel FernndezCalvo
UNIVERSIDAD COMPLUTENSEDE MADRIDFACULTAD DE FARMACIA
DEPARTAMENTO DE FARMACOLOGA
1995
Lo que sesabedoblasuvalor si al mismotiempose tieneel de
confesarlo que no sesabe,puesast lo quese sabe, estlibre
de la sospechaque recaesobre el que quiere hacer creer que
sabelo que no sabe.
Schopznhauw~
D. Angel Maria Villar dcl Fresno, Catedrtico y Director dcl l)cpartiuncnto dc
Farmacologa
La pmsenc Tuis Doctoral ha sido financiada por unaBoca dc Formacin de Personal Investigador dc laUniversidad Complutense do Madrid.
Al finalizar estetrabajo,quiero expresarini mssinceroagradecimientoatodoslosque
de algunaforma han intervenidoen l.
Al ProfesorDonAngel MaraVillar del Fresno,quiencomoDirectordel Departamentode Farmacologa,me acogi haceya cinco aos,primero parala realizacinde la Tesinade
Licenciatura,y despuspara la de estaTesisDoctoral; graciaspor su direcciny apoyohastael ltimo momento.
A la ProfesoraDoila M0 Pilar Martnez1-londuvilla, codirectorade la Tesis, por
habermeintroducidoy orientadoen el campode la investigacin.Duranteestosaos,muchasson las cosasquede ti he aprendido;graciassobretodo por tu confianzay estimulocontinuo.
Mi reconocimientoa Don Luis DomnguezArqus,Jefedel ServiciodeRestriccinde
Estupefacientesdel Ministerio de Sanidady Consumo,por sus atencionesy amabilidad.
Al Servicio de AnatomaPatolgicadel Hospital Provincial de vila, especialmenteal Dr. LpezBravo, por su colaboracine inestimableayuda.
A Carmen,mi amigay compaeradetrabajoentodo estetiempo;por todoslos buenos
y malosmomentosque hemoscompartido.Tu amistades el mejor fruto obtenido.
1-lago extensivo mi agradecimientoa todos los miembros del DepartamentodeFarmacologa,porquecada uno de vosotros habis contribuido en este trabajo. Pero mirecuerdoes especialpara aquellosquelo habisseguidoy sufrido de cerca: a Jessy a mis
conipafierosde mdulo,graciaspor soportarme.
A todaini familia, por vuestraayuday comprensin;graciaspor saberentenderel pocotiempo que os he dedicado
A lodos vosotros.
ABREVIATURAS
ACTH HormonaadrenocorticotropaAMPe Adenosinmonofosfatocclico
CBD CannabidiolCBN CannabinolDL0 Dosis letal ODL50 Dosis letal 50
DL100 Dosis letal 100DM111 DimetilbeptilpiranoFSH Hormona folculo estimulante
i.p. intraperitoneali.v. intravenosaLII Hormona luteinizanteMEP Mximo efectoposiblePRL ProlactinaSNC SistemaNerviosoCentral
TIIC TetrahidrocannabinolTRH 1-lormonatiroidea
NDICE
Cannabis ha sido empleadoen todo el mundo con distintos
propsitos, y poseeuna larga historia caracterizadapor su
utilidad, e~fica o nociva, dependiendodelpuntode vista,..
NDICE
INTRODUCCIN Y JUSTWICACION
REVISIN BIBLIOGRFICA DE CANNABIS SATI VA
11.1.- ALGUNOS DATOS HISTRICOS
11.2.- ASPECTOSLEGALES
11.3.- PREPARACIONESDE CANNABIS
11.4.- ESTUDIOSBOTNICOS
11.4.1.- I-IABITAT
11.4.2.- DESCRIPCIN
11.4.3.- TAXONOMA
11,4.4.- CLASIFICACIN SEGN LA COMPOSICINQ
11.5.- PRINCIPIOSACTIVOS: LOS CANNABINOIDES
11.5.1.- GENERALIDADES
11.5.2.- ESTRUCTURAQUMICA
11,5.3.- PROPIEDADESFSICO-QUMICAS
11.5.4.- RELACIN ESTRUCTURA-ACTIVIDAD
11.5.5.- FARMACOCIINTICA* Absorcin y distribucin* Metabolismoy eliminacin
11.5.6.- MECANISMOS DE ACCIN
11.6.-FARMA
11,6.1.-
11.6.2.-
11.6.3.-
3
3
7
9
UIMICA
12
2
/2
13
4
16
l6
16
9
19
222223
24* Interaccionesinespecficascon membranasbiolgicas 24* Interaccionesespecficascon membranasbiolgicas* Alteracionesenzimticas* Alteracionesen la sntesisde prostaglandinas* Alteracionesdel metabolismomacromolecular* Interaccincon hormonasesteroideas* El receptorcannabinoide
COLOGA GENERAL
EFECTOSPSICOACTIVOS
EFECTOSSOBREEL SISTEMA CARDIOVASCULAR
EFECTOSSOBREEL SISTEMA RESPIRATORIO
252526272727
34
34
36
36
.1
1
INDICE
EFECTOSSOBRESIST. REPRODUCTORY ENDOCRINO
EFECTOSSOBRESISTEMASNEUROQUIMICOS
EFECTOSSOBRELA INGESTA
EFECTOS SOBRELA TEMPERATURA CORPORAL
EFECTOSSOBREEL SISTEMA INMUNITARIO
EFECTOSSOBREEL FETO Y EL RECIN NACIDO
POSIBLESUSOSTERAPUTICOS* Uso en glaucoma* Antiasmtico* Anticonvulsivante* Accin antiemtica* Actividad analgsica* Accin antiinflamatoria* Tratamientoen los espasmos* Accin sedante* Otras accionesteraputicas
TOLERANCIA
DEPENDENCIA
musculares
37
38
39
39
40
40
4/41424243
4344454546
11.6.13.-EXPERIMENTACIN ANIMAL: EFECTOS
COMPORTAMIENTO
11.7.- DOSIS LETAL 50 (flj~
11.8.- TEST FARMACOLGICOSPARA EL ESTUDIO DE LOS
CANNABINOIDES
PARTE EXPERIMENTAL
111.1,-ANIMALES DE EXPERIMENTACIN
111.2.-PREPARCINDE LAS MUESTRAS Y TRATAMIENTOS
111.3.-DOSIS LETAL 50
111.3.1.-MATERIALES Y MTODOS
111.3.2.-RESULTADOS
111.3.3.-DISCUSIN DE LOS RESULTADOS
46
47
11.6.4.-
11.6.5.-
11.6.6.-
11.6.7.-
11.6.8.-
11,6.9.-
11.6.10
11.6.11.-
11,6,12.-
SOBREEL48
49
50
.51
5/
.5-
.54
54
.54
58
u
INDICE
111.4.-ESTUDIO ANATOMOPATOLGICO 59
111.4.1.- MATERIALES Y MTODOS .59
111.4.2,- RESULTADOS 61
111.4,3.- DISCUSIN DE LOS RESULTADOS 66
111.5.-BATERA FARMACOLGICA PARA CANNABINOIDES 67
111.5.1.- ANLISIS ESTADSTICO 67
111.5,2.- MATERIALES Y MTODOS 67
DESARROLLOEXPERIMENTAL 74
A.- Curvadosis/efectodelhashisl ,,,,..,.,.... 75
A.l.- RESULTADOS 76
A.2.- DISCUSINDE LOS RESULTADOS .. 84
B.- Efecto delTetraliiclrocannabinol,.,,,,.,.. 87
B.- RESULTADOS 88
B,2,- DISCUSIN DE LOS RESULTADOS ..,,,, 92
C.- Efectos dcl Cannabidioly Cannabinol 95
Cl.- RESULTADOS ..,.,.,.,..,.,,.,..,,, 96
C.2.- DISCUSIN DE LOS RESULTADOS ,.,...... loo
D.- Estudio del posibleefectode los otros componentesde la resmade (annabis /02
Dl,- RESULTADOS os
D.2.- DISCUSIN DE LOS RESULTADOS 110
E.- Potenciacino inhibicin del efecto
INTRODUCCIN Y .IIJSTIFICACIN
Para los agricultoresCannabisescosechadefibra;...
INTRODUCCIN Y JUSTIFICACIN
Cannabissadva es una de las drogas ms tradicionalesen el trfico ilegal. Elimportanteincrementoexperimentadoen lasltimas dcadaspor el consumodc los derivados
del Cannabis(que se concentrafundamentalmenteen los pasesoccidentales),as como el
conocimientoms profundo de sus efectos psicotrpicos y orgnicos, ha originado la
proliferacinde datosexperimentalesencaminadosno slamentea su estudioanalticosino
tambina su proyeccinen teraputicay mecanismode accinde sus principios activos.
Entre las drogasque son objeto de uso indebido, y por lo tanto, de trfico ilfeito, es
indudablwncnteel (i7annabis la nica quegeneralmenteno contieneadulterantesy iiicanieflte
en alguna ce suspreparaciones,comocl aceitede hashish,se detectanalgunasimpurezasquesuelenser otrosconstituyentesdcl (Jannabiso residuosde los disolventesde la extraccin,Noobstante, en casos contados se han detectadoalgunas adulteracionescon otras plantas,especialmenteen la marihuana.Por otro lado, existengrandesplantacionesde Camoindiano
destinadasa la obtencindc Libra textil, puespresentanbaja proporcinde principios activos,
Sin embargo,muchasde estasplantaciones,paralelamenteenmascarancultivos con flueslucrativos, destinadosa la extraccin de su resma, por ser variedadescon una riqueza
importanteen sustanciaspsicoactivas;por ello, toda aportacincientfica al estudioanalticode las nuestrasdecomisadas,puedefacilitar su identificacin y clasificacin dc las mismacomodroga o textil.
i)esde el punto de vista teraputico, esta planta fue en la antiguedaduna de lasempleadaspara paliar muchasy muy diversasafecciones,como veremos en las pginasdcclicada.s a los cIatoshistricosde Cannabis.Actualmenteseconocenderivadossintticosde
Los cannabinoidesempleadosen la terapia antiemticay para el glaucoma,y se estnrealizando importantes avances en el campo ce los analgsicos.Esto, junto con el
descubrimientodel receptorpara cannabinoidesy de la existenciade posibles ligandosendgenosparadicho receptor,ha situadocii la cima de la investigacincientficaa estetipo
de compuestos.
Por todo lo expuestoanteriormente,en la primeraetapade estetrabajoexperimental,nos propusimosevaluarlos diferentesmtodosanalticoseromatogrficosparaidentificar de
unamanerarpidala presenciade compuestospsicoaetivosen tina muestrade camo.Dichoestudioconcluy con la lectura ce dos Tesinasdc Licenciaturasbasadasen mtodos de
1
IN~IROflUCCIN Y JUSTIrICACIN
cromatogarfiaen capa fina (TLC) (Fernndez,1993) y cron1atograflade alta resolucin(HPLC) (Recuenco,1993),
Ahora nos proponenios completar esos trabajos con un estudio puramentefarmacolgico, empleandodiferentes ensayossobre animal de laboratorio que permiten
caracterizarunasustanciacomo cannabimimtica.
Los objetivosprincipaleshacialos queseencaminesteproyectofueronlos siguientes:
* Revisinbibliogrfica de la especiedesdeel punto de vista botnico,fitoqufinico y
farmacolgico.
* Determinacinde la toxicidad agudadel Jiashishmedianteel empleode la DL50.
* Estudio anatomopatolgicode los rganosafectadostras la intoxicacin,
* Puestaa puntocte los diferentestcstfarmacolgicosparael estudiode camiabinoides.
* Establccin.iientode Ja curva dosis/efectode la resina.
* Ensayoce diversasmuestrasde resma de Cannabissal/va(hashish)condiferencias
en su composicin.
* Comparacindel efecto farmacolgicomostradotras la administracinde dichas
imiestra, con el que sc presentatras la administracin de cannabinoidespuros
enpkadoscomo patrones.
* Potenciacino inhibicin de los efectosde los diferentesprincipios activostrasujia
administracinconjunta.
2
REVISIN BIBLIOGRFICA DE CANNABIS SATI VA
para los mdicosdel siglopasadoera unapanacea,ypara
los mdicosde hoy en da, un enigma;...
REVISIN BIBLIOGRFICA DE CANNABISSATI VA
11.1.- ALGUNOS DATOS HISTRICOS
La historia de Cannabisse remontaaproximadamentea 5000 aNosatrs.El testimonioms antiguo de queel hombrehayahechousode la marihuanaesunadescripcinde la droga
en un compendiode medicinachino,cl herbolariodel emperadorShenNung, quedatadel ao2737 a. de C. El camo,se mencionaya en el 1200 a. de C. comofuente de fibra textil, y
la pi~iiuerti referenciahistrica a cerca dc sus propiedadesmedicinalesse encuentraen elantiguo tratado lhaivaveda en el ao 1000 a. de C.(Singh el al., 1981). Otros datos
relacionadoscon estadrogaaparecenen documentosasiriosde unos 800 aosa. de C. Porltimo, en un tratado chino de medicinadel siglo U d. de C. se cita al cannabispor suspropiedadesnarcticas,
Segnel Iii. Royle, el calmantedel dolor ~Nepentede Homero)queHelenaofreceTelmacoen honor ce Menelao, puedeser Cannabis;segnse narra,Flelenaconsigueesta
plantapor medio ce una mujer egipciade Tebas.Dioscridesrecomiendala hierbaen formade cataplasmapara las inflamacionesy tumores,PaulusAeginetadicequelas semillastienen
propiedadescarminativasy desecantes,y el zumo de la planta frescaes til parael dolor y
obstruccionesde odo (Millspaugh, 1974).
Muchasson las alusionesy mencioneshistricasque relacionanestadrogaconhechos
cotidianos.Inclusoen tiemposantiguos,la marihuanafue temade prdigacontroversiasocial:estabanlos queadvertanquela plantadel camoorillaba el caminodel infierno, y los que
pensabanque conduca al Paraso.As en la era china pre-cristiana, se considerabalamariluianacomo libertador del pecado.Ms tardelos Chinosla proclamancomo la planta
donadora
REVISIN BIBLIOGRFICA DE cklNN,IBIssAnva
precisamentedel uso que hacanlas tribus dirigidas por Rasan,derivandoposteriormentede
ella el trmino asesino(hashishin).
Herodoto denomin a la planta Kpvaf3tvg ~pepogal conocer que los Traciosobtenanunaclasede tejido de ella. Cuentaque la semilla de Cannabis se usabapara losbaosde vapor en los ritos funerariosde los escitas,y sehanencontradograbadoscii vasijasde bronceprocedentesde estascivilizaciones(Kettenes-vanDenbosch,1978).
Hemosvisto cmoestaplantaseempleabade unaforna u otraen todo el Medio Este;as, erabien conocidapor asirios, egipcios,escitas,hindesy griegos.Sin embargono se
encuentranindicacionesclarasde que fuerautilizada por los antiguosJud!os. De hecho,elAntiguo Testamentomencionamuy pocas drogas; incluso el opio, una medicina de altareputacinen la antiguedad,no apareceen la Biblia. Cales la raznpor la queun libro que
detalla muchosaspectosde la vida, sagradosy profanos,no mencionedrogascomo opio yCannabis?
Los Asirios utilizaban (annabis en sus ritos religiosos (como drogaque induceal
xtasis) y como una droga medicinal (principalmente en lo que hoy denominamosenfermedadesneurolgicasy psiquitricas).Por otro lado, durante ciertosperodosde la
historia, el comerciode Judeadependide Asiria; el impactocultural-religiosode la cortedeNnive (ciudad cruenta,llena de mentirasy robo), penetrno slamenteen la clasereal y
prestigiosade Jerusaln,sino tambinen las clases bajas. Se puede asumirque bajo estas
condiciones,las drogasasirias fueran conocidasy utilizadas, por lo menosentre la clasedirigente, tanto como herramientapara ritos religiososcomo de medicina.Despusde lamuertedel rey asirioAshurbanipal(669-626a.C.),el reinadohedonisticode Asiriadesaparecicon rapidezde la historia. El rey judo Josiah(628 a.C.), durantecuyo reinadoresurgieronysereescribieronalgunosde los libros del Antiguo Testamento,hizoeliminar rpidamentetoca
la influenciapaganade las costumbresreligiosasy de la vidajuda. El hashish,smbolode larelajadamoral asiria, debi ser prohibido. Todo esto se ajustaal fondo histrico, y a lasnecesidadespolticas de un estado Judo independientey su rey. Esto explica la extraa
ausenciadevocabloscomoCannabisy opio en los libros sagradosjudos(Mechoulanca al.,1991).
4
REVISIN flILILIoGRFICA 1113 (AANAUISSflYIA
Cabela posibilidad,sin embargo,que en una instanciael antiguotrmino(Jannabisseamexcionadoen la Biblia. Es probableque pannag, un producto inidentificado, exportadodesdeJudeaa Tiro y mencionadopor el profetaEzekiel (5, 22), fuera de hecho Cannabis.
Probablementeel vocablo hebreo pannag fuera una de las denominacionesoriginales,ensnscrito bhanga y en persabang. En hebreoy en otras lenguasorientales,slamentelascoisonant.esbrmanla basede tina palabra;las letras p y b frecuentementese intercambian.El trmino pannag,posiblemente,sufri una mettesisen sirio Cqunnappa),y rabeclsico
(kuinab), llegando al final a Cannabis en griego.
As, cl empleo dc Cannabisse fue extendiendodesdeChina hasta India, Luego aEuropa Meridional y al Nortede Africa, y desdeall, haciael ao 1800, a EuropaOccidental,
por inediade las tropasdcl ejrcito de Napolenque volva de la campalThde Egipto.
El intersdel valor teraputicode (Jannabisen el Oeste,sc despertporel documento
escrito de un cirujano irlands, OShaughnessy,en 1842 (Fornukong el al,, 1989). Estecirujano,empleabala drogaparatratardistintasafecciones,comoespasmosmusculares,alivio
del dolor, convulsionesdcl ttanos,rabia,reumatismoy epilepsia.Su uso en medicinase fueextendiendopor el rest.o de Europa y Amrica para combatir una amplia variediad deproblemas,que iban desdelas convulsionesy los calambresmenstruales,hastala amigdalitis,migraasy dolor ce cabeza.Tambin de utiliz para aumentarlas contraccionesuterinasy
reducir los doloresen el parto.
Trasestagrandifusin,el hctvhishsetso ce modaen los crculosartsticosy literarios(le mitad del siglo pasado.Moreau de Tours public uos estudiosmuy detalladosen 1845,
y tambindescribieronlos efectosde la drogaen relatosllenos de colorido, figuras literariascomoGautier(1843)y l3audelaire(1858).stos,junto a Dumasy Balzac,se reunanbajo el
signo del Club desJ-laschischinsen Paris durante1840-1860.
Sn La primeramitad del siglo XX, los preparadosde Cannabisfuerondisminuyendo,y su uso medicinal prcticamentedesapareci.As, fue retirado de la Farmacopeade Gran
Bretaaen 1932 y de la estadounidenseen 1942. Unos aosmstarde, en 1950, desaparecede Ja lista del ndex Merck, Sin embargo, en la Farmacopeaindia sigui hasta 1966
(Eormukongci al., 1989). El interspor sus propiedadesteraputicasha dado lugar en la
actualidad,a la sntesisde derivadosdel TILO (principio activomayoritariode la planta)con
.5
REVISIN BIBLIOGRFICA DE (MN,VAI)IS SA TI YA
un hituro proinetedor. 1kw desgracia,desde finales de los aos 50, este inters por la,nariliuala no ha sido slo ~ las posibilidadesteraputicas,sino por el aspectonarcticode
la ~lroga.Actualmente.< unpiuhis y susderivados,son objetosdeun trfico ilcito considerabley esisteun elevadonumerodc personas,principalmentejvenes,que lo consumen.
6
ti
fj 4
11.2.- ~~>E bis a~ y 344 dcl vigente Cdigo Penal. En efreto, podemos ittleer testuoltiienle
los que mnuaaovleren. .Aave.rrcfravn e> /rilsmna el consumo ilegal ch drogas rxIcca.z nuap trdfica olas pose~ma con este ltimo fi,& uritaceWIgUeIeM cena u penas dr prixldaa nwaaor. y multes eh .10.1MW u 140icas u djbndan enftw menores de dieciocho afiaten ee,n gros thwvntr.t agaaidneks aasiliuuvs o usualUerinalenw penlteackaflot cuando el cailpiable perteneciese a sana 4orgenulzeaclOn que taniwa~a Consta ./hteilieh&I dljhandtrlu.w. os! casen cuando ka cantidad poukha para traficar flaere chnc Sones inspfle&l.D SI los tEcleas eanfrfle*ts./laVNfl ralbados por jaculto tiro ejusaclomsrlo pblico con absaso de sea pre*sle>sa. se e inqiern.hJ. asdsnaas. les penes eh lnhubili&acidn especial. l.a sancin y sus depemllentes. En los casos dc enrenwgnavee&sdy cuesaaele los lwdaew raso avealfleselt&w en enaslleclmiento pblico. ose trate eh los Jefes, adminIstrados: ovswenwae fin eA anata aus>ssnhewttla drclkenl esunquc Iberas peuvkahneate.
wvisn rnBLtoclitM~CA ml eANMUIISUflVA
11.3.- lREPAIIACI(>NEH DE =IY.&Iflt
En general. en el trfico ilcito C ~urnablses una drogo que se suele presentar de las tresfonuas siguientes Ubaez. 1990):
- corno productos herbceos (marihuana). TradIcIonalmente se cree que solamente lassuinidodes floridas y con mito contienen cantidades apreciables de compuestos peicoactivos.La presentacin de la inaribuano. como veremos ms abcjo,esvariadsimadependiendo de laregin dc procedencio de la muestra. Los productos herbceos pueden contenerentre un 0,5-5% de Ii It.
- Productos de resIno (hushfrh). La It3cnica empleada para la obtencin de la resino variatambin en funcin de la zona, siendo Las ms frecuentes el frotar la planta entre las manoso contra una superficie de goma o la cual se adbiere la resino. Tambin puede pulverizarse lamateria berhcca. para despus exponer el polvo al sol derritindose la resma que luego esfcilmente moldeado. 1.0 resino
REVISIN BmDLIOURAFICA tW CANNARIS SAflIA
* En lurquin:
- lq/iorum. Son extractosacuososdc la planta,adicionadosde otrasplantasaromticasy ti lrodistacas.
* Em A frie a del Norte:
KW en Marruecosy Argelia. Son las sumidadesfloridas femeninasdel
cinio, redtic 1 dii ti polvo grosero.
Thkrar. en lYmnez. S.n las suinidadestroceadas,tamizadas,y presemitadas
en Iormiia de p~qtietes.
* 1 ja Mjico y el Sur de 1 jstudos liii idos:
farlluana. Probablemente,el origen ce este vocablo provengade la fraseaztecaMi lunuII unu. que posteriormemilehubieraderivadoen su pronunciacinal trmino
actual. 1ambie3n se conocecomo pat y .
* (Jiraspreparacionesson:
iIaxhtvI liquido o Aceitetic Marihuana,mucha insactivo.
- Jilvrur. resmapura de la droga.
- >awanwsk,drogo almizclada,para pistachos,almendras...
1
pi
j 10~0itnvistw DIDUOORAPICA DE nftMWSMflVA
11.4.- ESVIJI)l() IAQINJ.CQ
11.4.1. 1 IIIITAT1~
(unnahis sai/va es originario de las zonas templadas de Asia, extendindose su cultivohacia China. India. Persia. Se supone que la planta entr en Europa durante el periodo ~Romano. establecindose despus por todos las zonas templadas del globo.
(rece sin di Licultad tanto en sitios desrticos como en tierras cultivadas, lo que ha .i 1facilitado su expansin. Florece en Julio y Agosto. 1
El verdadero camo indiano, que posee propiedades narcticas, crece a una altitud 1superior a 1800 mu. prim~eipalmentc cmx el Tibet e Himalaya. Estas variedades no presentan itt
gram~des diferencias botnicos con las que crecen a bajos niveles de altitud, pero la variacin iI~en la cornposicii qumica es notable. 1111
iii
11.4.2. l)ESCRIIClN
Sc trata tic una planta anual, herbcea, diolca de gran talle, que alcanza desde 1 hasta3 mn de altura. Presento tallo erecto y estriado, lofloso en la base, simple o escasamentemmi ficado, y con una corteza interna fibrosa y viscosa.
1 ~lcamo posee luijas aserradas compuestas. siendo las inferiores opuestas, con 5-7foliolos lanceolados y las superiores alternas, sencillas o con 3 segmentos; dc color verdeoscuro por el lwz, plidas y vellosas por el envs, presentan peciolos largos, finos yestipuLados.
l,as flores masculinas estn constituidas por racimos axilares o paniculas, con 5 spalosovales, ms o nenes separados y vellosos; 5 estambres opuestos aL cliz, con filamentosCOrtos, iguales entre si y colgantes, y largas anteras.
Las inflorescencias femeninas son cimas compactas y espigadas. Son las flores ssilesy con una brctea folicea cada una de ollas; cliz simple y nervado, spalos hirsutos y con
.
la
REVISIN ltIBIIOCIRFICA DE CANNtIflIS.~ATIVI
lbrma de corazn;ovario con un slo vulo recto y orttropo; estilo poco evidente y 2estigmasalargadosque sobresalendel perianto.
1 U fruto de C tu,nahhvswira es un aquenioglandular, casi esfrico,envueltopor los
spalos:pericarpomembranoso,i midehiscente,pero fcilmenteseparablemediantepresinentre
las dos valvas.
l>oi altmino. It sean1 Itt es ovoidea, list y dic color marrnveteado;un slo embrin
curvado,oleagi[tosoy con C5CL151) itlbtimtieii
11.4.3.- lAXONUMIA
Muchas son Las clasificacionestaxonmicasa las que se ha sometidoesta planta a
travstic la historia: autoresqueconsideranunasolaespeciedentrodel gneroCannabis,otrosque consideramdosespecies,y hastaaquellosqueson partidariosde unagrancantidaddc ellas
en 1X tei a de su orl gengeogrti Co.
Nosotros,en estecaso,hemosadoptado(como ya lo hicimosen los estudiosanalticos
croinatogrleos que cuni miaron con la presentacince la Tesinace Licenciatura;Fernndez,1993) la clasiflcncinescogidaporSniall y Cronquist(Sinaly Cronquist,3976).Estosautores
presentan( annabis salivo como la niCh especiedel gnero.A su vez, dicha especieposeetos subespecies,en funcin del potencial ce toxicidadce ~tsprincipios activos.As, el gntpo
de ilaatas que poseemt una elevada concemtracincte sustanciasnarcticaspertenecena(cuinabis voltio subsp. indica y aquellascuya toxicidac es limitada se agntpanbajo la
subespecieC annabissahic subsp.salivo y sonutilizadaspara la obtencince fibra textil yaceite. (ada una de las subespeciespresentaademsdios variedadesbotnicas, que se
idemiti llena por su crecimientosalvajo o bien ce ctmltivos: var. sal/va y var. sponlanea sonrespectivamentelas variedadescultivaday natural de la subsp.saliva, y la var. indica y var.
ka/risa,iea, de la sxibsp. hu/ca.
13
REVISIN UBLIOGRARCA DI! eropxicIa
IgykalcxCannahinuccae
REVISIN BIBLIOGRFICA Dli < ANNARIS LUnA
AYTilo + ORN1 fl1 serti
consideradacomo ( ~nnal>Lv ti pu droga (fenotipo 1); si p~ el contrario es
REVISIN IIIBlIOGRUICA DE (ANVAhlS SAflJA
11.5.- pRINCIPIOS ACTI VOS: LOS CANNABINOIDES
11.5.1. (.1ENERAI,il)AI)hS
l.as distintaspreparacionesde ( annabis vea/vadebensupoderpsicoactivoa una serie(le principios activosv>rcseltesen la plantay que globalmentesedenominancannabinoides.Se han descritohasta426 componentesdistintos, (le los cualesmsde 60 son cannabinoides(l)ewey. 1 >86). Estosprincipiosactivosseencuentranen cualquierace laspartesde la planta,si bien, la mayo: concentracin(le el los a parece en las inflorescencias,De todos los
cannabnoidesconocidos,el (~)At letruhidrocannabinol(&THC) es cl principal componente
pscoacti yo desdeel purti (le vista farmacolgico.
Otroscannabinoidespresentesen cantidadesapreciables,aunquecon menoractividad
arniacoigca.son el ( )\tletrallidrocannabinol(A8THO), el cannabidiol (CBD) y el
cannabinol
__________________________________________ REVISIN BIBI.IOORFIcA DE (7ANNAIIISXATIIA
los cannabnoidesnaburMesPoseendos centros quirales en C6a y C lOa en la
coiIguraeion(/flfl~~ siendolas tbrmnas() 20 vecesmsactivasque las formasQQ.
Aparecenahorarepresentadaslas estructurasde los cuatrocmmabinojdesde nuestro
inters y mayoritariosde ( cmnahtv.
A9-TETRAHDROGANNABINOL
17
REVISIN flIflt.IOGRFICA DE CANNABISSA?! VA
CANNABIDIOL
OH
AHO
CANNABINOL
OH
Ja
REVISiN BIBLIoURPICA 013 (A Nt/A JIS SA TI VA
11.5.3. PROIIEI )AUES IISICOQUMiCAS
Son los cannabnoidesy la mayorade susmetabolitoscompuestosaltamentelipfilos
y de Ntia solubilidad en solucionesacuosas.Concretamente,49TI-IC es un componenteresinico, insolubleen aguacon un valor dic PKft ).
11.5.4.- RBI .ACIN ISlRUCItRA-ACTIVIDAD
Aunluc hoy daestmsquedemostradala existenciadel receptorparacannabinoides,no esttotalmenteclarosi estereceptoresel nicoresponsablede todaslas accionescentrales
mediadaspor dichoscompuestos.Con la sntesiscenumerososanlogosdel KlHC, la grancantidadtic experimentosrealizados,tanto en hombrecomo en animalesde laboratorio,y el
desarrollo tic progrtunasinformticos y tcnicasdic anlisistridimensional(Thomasel al,,1991), se han podido establecerlos requisitosestructuralesnecesariostiara que una molculaconservesu accinean:iabimimticti
- El A~Fl (2 y el Ml1IC incluyenen suestructurauna cadenalatera)aliftica enel ~1 ce tipo ~entlo.Su desaparicinproduceprdidace la actividad,pero su modificacin
puediepotenciara.As, el nmerominino dic tomosde carbonoha de ser de tres (Razdan,1 86). Sin embargo, incrementandosu longitud en siete tomosy ramificndola con dos
gruposmetilos, sc potenciasu accin;se obtienenas los ])imetilheptil (DM1-!) anlogosdel48 y A>ilC, que handemostradoser muy activos(Martin el al,, 1991).
1!2
REVISIN BIIILIOORPICA DE (X]NNABJSSAZflA
000%
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1 ,evoinnt nido1
HO
It
OH
(.P-55,94(>
4~ 1R2V181014UnuoGnAvicDE cnewsunva
11.5.5.- l:ARMACUCINTICAy
El hombre suele consumir las preparaciones de Cannabis fUmadas en forma de .~cigarrillo o un pipo. El estudio lbrmacocintico de los cannabinoides tras su introduccin en :1kel organismo por esta vio dc administracin, se hace muy complejo, pues intervienen AL.:
.4
numerosos factores diflcilmentc controlables. Entre ellos se encuentra la variabilidad de lacomposicin de cada drogo: La proporcin de A-THC en la planta oscila entre un 0,3% y msdel 3%. y si se troto de la resino (hashish), supera 0110%. Adems existax ctoresconcernientes a la turma de IXimar ci cigarrillo (tiempo de retencin del aliento, volumeninhalado...). Poro complicar an ms el estudio, junto con el ATHC coexisten otros muchoscannabinoides que tuodilicati notablemente la farmacocintica del compuesto.
ViSin embargo. asumiendo que cl THC es el mayoritario y principal componente U 1k~ 1i~responsabledc la actividad. nos Liniltaremos a describir los parmetros farmacocinticos de
dicho compuesto. 1j~%1,~ ~i{4,
En general. son los cannabinoidos un grupo de compuestos bidrtbbos que suifen unarpida absorcin, redistribucin y almacananlento en tejido adiposo, producindoseposteriormente una liberacin lenta, y ntantenLndose niveles plasmticos durante largosperodos de tiempo. Esto explico la ausencIa de un sndrome agudo de abstinencia tras suretirada (Agurel cl al.. 1986).
Conio el AVIHC es insoluble en agua, las nicas vas de administracin utilizadas por ittel hombre para su consumo son lo inLutiatoria y la ingestin. SI bien, para experimentacin kanimal, adems de culos dos vas, se emplean La endovenosa (kv.) y la intraperitoneal (i.p.).No hay duda que Lo va cIa administracin escogida ea otro dc los factores condicionantes quenodilicon la farnioccindtica. t
jj
ji* Absorcin y distribucl6n
lrae< uno administracin inhalatoria o intravenosa, se produce una rpida absorcin, con
una elevacin dc los niveles plasmticos muy rpida y similar en ambos casos (mximo enunos quince minutos). Tratndose dc una administracin oral, comparativamente se alcanzanniveles plasmticos ms bajos, encontrndose el mximo al cabo de una o dos horas tras la
22
1~ 1
,,.1II
RBVtSt&4 DIBLOGIL&PICA DEC4N8.IWMflVA :
:,
ingesta. l)cspus. en seguida se produce una disminucin progresiva, aprecindose unfenmeno dc redistribucin; cl TI C sc une en un 77% a protenas plasmticas, principalmentea lipoproteinas. Esta elevada unin proteica explicarla el porqu6 slo tina pequefla proporcin 1dc TlIC pasa al sistema nervioso controL.
it
.41 .a elevada liposolubilidad del compuesto, y la existencia de ~Jfl r~~~icl4j0 a U,avs de II 1
la circulacin entero-heptica. se correspondecon una tambinelevada vida media. As, tras
tonto en liumatios como en ratones. disporndose hasta los 7-8 das en cl perro. Efectivamente,uno sola administracin. sc observa una vida mediaplasmtica que oscila entre las 20.30hel perfil grfico de los niveles plasmticos del AtTHC puede interpretarse considerando la Yintervencin dc 3 4 compartimentos durante su distribucin en el organismo (modelo .
>1
multiconportimcntal).lino gran porto del THC plasmtico (70%) es captado fUndamentalmentepor el tejido adiposo. encontrndose concentraciones muy elevadas del compuesto en pulmn ~
I~ fy rin a las pocos horas dc su administracin, para redistribuirse y acumularse en dasposteriores. cii bazo y tejido adiposo principalmente (Hunt y Jons, 1980). 1>
4 ~,r
.5,1
U1~auvImN BIBLIOGRFICA DII % de la dosis administrada. En los consumidores no habituales losnietabolitos pueden detectarse e~ orine entre los 2 y los 10 das siguientes al ltimo cigarrillofumado. 1 ~nlos consumidores crnicos, se pueden detectar incluso despus de cuatro semanasde la inhalocin or otro lodo, son Lgicas las comparaciones que algunos autores han hechoentre los cminabinoides y los anestsicos locales debido a la elevada lipofihia de ambos tipos
24
y
RLiVISIN BIBLIOGRFICA DE (ANNA1118 8477YA
de cOmIfllCStOS. no obstante,actualmenteestahiptesisquedadesechada,ya que los estudiosde interaccin del II 10 a membranasbiolgicasrealizadospor Seemane: al? en 1972,
muestranuna unin it) vecesmenorde la necesariaparaque un compuestocumpla la reglade Meyer-Overtonque curacteizaa los ifirmacos anestsicos.Por tanto, se concluyequeaunqueel A~ll It seacapazde producir ligerasperturbacionesen la membranacelular que
provocanalteracionesen cl comportamiento,no son lo suficientementeprofundascomopara
producir unestesia.
* lnteraceiontSespecificascon ncxnbranasbiolgicas
~xistentambinestudiosque sugierenque los cannabinoidesinteraccionende una
maneraespecilicacon los componenteslipidicos de las membraiascelulares,Estoserelaciona
con la uo.liiieucin dcl efectosobre la membranacuandose altera ligeramentela nolculatic un cunnabinoide.l.os componentesce la membranaque podran interaccionarcon los
cannabnoidesson ntmcrosos:colesterol,lecitina, distintos fostolfpidos... Podrfaser que los
cannahinoidesformarancomplejoscon los fosfolpidos siendoreguladoeste procesopor Lapresenciadel colesterol.Adems existenestudiosque demuestranque tras el consumode
...annal,is, se produceuna alteracin en la concentracince los fosfolipidos en plaquetas,eritrocitos,plasmay leucocitos( Kalofontis cf al., 1980).
* MteraelonesCfl?.iIfltiCBS
.08 cannabinoidesson capacesce inhibir un grannmerode sistemasenzimticos.Engeneral,pareceserqueestainhibicin ocurre a travsde un mecanismode accinffiespeclfico.Resultamosa continuacinlos enzimasinhibidos msimportantes:
sc/u~asu 1 >1/o.v/uta,va (ATPasa)
Las alteracionessobre la actividad dc la ATPasaconlevaimplicacionesen la mayorade los
proccso~ biolgicosdebidoa la energaproducidatras la hidrlisis del ATP. Se sabequeloscannabinoidesinhiben todaslas ATI>asnsconocidas,de cualquiertejido y especie,amuy bajas
concentraciones,pero hasta cl nioment(> no se ha encontradouna clara relacin entre
PorCenttUe de i tui ibicin eizimticay psiconctividad.
25
e
4
.3
1WV1810W DIBUOORAFICA DE ~40MOMM1Z4
.Id~,gU; < Vclas y 14>./udfrxvrusa
Estudios real izados en los ltimos silos muestran que los efectos producidos por el TilO ~compuestos relacionados sobre los sistemas enzimticos que participan en el recambio delAMPe dependen de La dosis. el tejido y de la concentracin y tipo del cannabinoide empleado.Todos estas variables, asociados al carcter bifsico de las respuestas de los cannabinoides,hocen muy dilicil conocer perfectamente el papeL que desempea el AMPc en las acciones dedichos compuestos. En este sentido, los cannabinoides no ejercen ningn efecto sobre lafostbdiesterasn. sino que producen una alteracin en la actividad enzimtica de la adenilatociclasa. Parece ser cIne existe tan efecto dosis-dependiente sobre esta enzima; as, a bajas [ 1
ti
concentraciones se producirla mo inhibicin de la adenilato ciclasa debido a una interaccinespeel fleo del cannubinoide a un receptor (Howlett, 1937). Por el contrario, a concentraciones que como resultado provoca un Incremento en la si ntesis del cidoaraquidnico; como punto flnal de lo cascada, y dependiendo del tejido, la conversin delcido araquidnico o las diferentes prostaglandnas, se ver estimulada o inhibida. Adems,Evons vi aL en 1987, demuestraui que ciertos componentes no cannabinoicos de la marihuanason inhibidores dc la Ido-oxlgenasa, mientras que los cannabinoides, adems de inhibfr estaenzima, inhiben tambin la Llpoxlgenasa.
26
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~14
.3
uwstw DIDUOGLUICA Dli
RE VISIN BIuI.IOGRFICA DR (ANNARISSAflJ
la primeraidentheacinsatisllictoriadel sitio ce unin ce un cannabinoideen tejido
cerebral,sc realiz mediantela utilizacinde un anlogosintticosolubley psicoactivo,el 5
trinCtilflhI1()fliO~AHlII( ( Nyc cf aL, 1985). Este sitio cte unincon alta afinidad, saturable
y rcvcrsiNc. se encon!tuba distribuido pat todo el cerebro,principalmenteen hipocampo,csttiado y mdula espinal. Sin embargo,al ensayarotros cannabinoides,no seencontrunaclara correlacinentre la afinidad dc cadauno de ellos y su potenciapsicoactiva,por lo que
se piensaque dicho sitio ce unin no media los erectosisicoactivosde los cannabinoides.
1 lowlett, en 984, demuestraqueel AtIflC inhibia la actividadde la adenilatociclasa
dc una Cormadosisilependientescdemostrqueestainhibicin no eradebidaa unaalteracininespecifleade la membrana,puesno se producaen todos los tipos de clulas ensayadas..Adems esta inhibicin estabaregulada por cationes divalentes como Mg2~ y Mi? y
nucctidosce guanina.Dos aosmstarde,el grupo ce lowlett demuestraque la inhibicintic la adeni lato cielasa requera,adems,ce la presenciade la protenaO~ ya queel efectosepoda bloquearmecimite ti bosilucin de sta inducidapor la toxinaperiusiss(Hewlett el al?
1 98(fl. lodo esto,junto con La existenciace unacorrelacinde las propiedadesanalgsicasdeuna serie de compuestoscannubinoidesno clsicosque inhiban la actividadde la adenilato
cielasaPi iilru (1 lowlett ci aL, 1987), condgjoa la formulacin de un modelo de receptor
cannabinoide(Devaneti al., 1988). Con estosestudiosse lleg al disefio de cannabinoidessintticos, siendo por ejemplo el CI>55,940, uno de los ms usadoscorno ligando en los
ensayosde hindingy que poseeun perfil farmacolgicosimilar al del t9THC.
1 ~i 1 MU), el equipo de Matsuda, mientras buscabangenes relacionadoscon losreceptoresde la sustanciad,clon un gen que luego result ser el del receptor cecannabnoides.Bste gen codificabaparaun receptoracopladoa la adenilatociclasa.Es unaprotena de membranade 476 aminocidos.con 7 dominios hidrofbicosy varios grupos
sensiblesa g ieosiInc i.
Una vez caracterizadoel receptorcannabinoidey clasificado dentro del grupo dereceptoresqueseencuentranacopladosa la protenaG, Howlett y Houstonhandemostradoentu.io ce sus ltimosensayos,quedicho receptorsiguemanteniendosu funcionalidadaunque
se encuentreseparadode la membranacelular, hecho que se ha comprobadomediante la
solubilizacindel receptorcunnabinoideutilizando un detergente;una vez solubilizado,se
28
4 ~4f~~aIJ
REVISIN IIIIILIOOI4FICA DE (ANNA BIS SAltVA
comprobmediantetknicasde lnelingque conservabasualtaafinidadde interaccincon los
ligandos(1 louston y 1 lowlett, 1 992).
Recientemente,utilizando un anlogocannabimimticomuy potentey solubleen agua,
cl XV 55,2122. se ha demostradoque los cannabinoidesproducenuna inhibicin potente,
reversibley estcreoespque se une a GTP, que es sensiblea la toxina
e independientedel metabolismodel AMPo, Por lo tanto, la inhibicin de los canalestic calcio de ti pu N podra disminuir la excitabilidad y la liberacindel neurotransmisor,ya
queel calcio es un segundomensajeromuy Frecuentoen la transmisinneuronal.Esto podraexplicar alguno de los efectospsicoactivosce los cannabinoides.
Pura conocer la localizacin y ti istrbucin del receptor,se han empleadoen estos
ltimos aos tcnicasmuy sensiblesdc autorradiograflae hibridacin in si/it, siendo los
mdinligandos msusados:los propios cannabinoiciesnaturales(311&THC), cannabinokiesclsicossintticoscomolos l)imetilheptil anlogos(3HtiOLI-&THCI)MH) (Thomase/al?,1992), cannabinoidessintticosno clsicos(U~Clt55,94O) (flerkenha.mcf aL, 1989) y aril
alquil indoles.como cl ~Vin55,2122(Jansencl al?, 1992). Sorprendentemente,estereceptorha resultadoser uno de los cne se encuentranen mayor densidaden cerebro,y adems,est
presenteen toca la escalavertebrada,El patrn ce distribucinse conservaadmirablemente.Las zonasce anisalta densidadse encuentraen los ncleosde proyeccinde los ganglios
basales(globus pali/das, .vubxtcauianiga pcuw reileala/cO, en el hipocampoy en cerebelo.Otras zonas con tambin alta densidadtic receptoresson el bulbo olfatorio, el cauclacio
putamen latera! y el ncleo entopeduncular.Las regiones que preset~tat~ una densidadreceptorialmoderada,pertenecenprincipalmentea las capas y VI del corlex cerebral. La
mdulaespinaly el troncocerebral,prcticamentecarecende receptorescannabinoides,En elhipotlamo,destacael reaprepticamedial,el hipotlamolateral y los ncleosveitromedial
y paraventricular.Un la hipfisis existo un nmeromuy bajo de receptores.
Cuandoscestatuaen paralelola distribucince los receptorescannabinoidesconotrostipos de receptores,encontramosque se observauna relacinentrelos doparninrgicosy los
cannabinoicos,y concretamentecon los receptoresD- 1. Ambos estnacopladosfuertementea la adenilatociclasa,siendoel receptorcannabinoicleinhibidor y el receptorDl, activador
29
~t/,1ti
REVISIN BIBLIOGRFICA DE (ANNA BIS SAIiIA
(MailICUX el aL. 1992). lambinse ha demostradola coexistenciade receptoresgabargicoscon receptorescannabinoicosen cerebelo,que podraser una explicacinde la disminucinde la coordinaci~nmotora quese produceen el hombrey en los animalesde experimentacin
tias la ~itlmili ist raen tIc TI U (Mackie cf aL, 1992).
Afortunadamente,seestableceun alto gradode correlacinentrelas localizacionesdel
receptorcamabinoide,la afinidad tic los ligandosal receptor,y la produccinde efectosti
1q10. 1 ~stose observempicandouna amplia gamace cannabinoidesnaturales,metabolitos,
derivadossintticosclsicosy no clsicos,derivadoshalogenados,etc. (Comptomel al?, 1992):
- As, la disminucinde la actividadespontneaacompaadade un respuestaexageradaalos
reflejos protlueitlt>s ti baJasdosis,y la catalepsiaa dosisaltas,son productode la localizacinde los receptorescannabinoicosen los gangliosbasalesy el cortexcerebral,
1 .a ataxia, puedeestarrelacionadacon la presencia
REVISIN LIIBLIOGRIZICA DII (ANNABt~SAlKI
existetambinrepresentacindel receptorcannabinoideen reasperifricas.As, pocodespusde tiLle se cloriart~ el 41211 tILle codificaba al receptorunido a protenaO de los cannabinoides,
se Vio que no slo se expresabaen el cerebro,sino tambinen los testculos,aunqueen unosiveles muy bajos ((irard el al,, 1991). En 1992 Kaminski el al?, encuentranunaelevada
unin especficace distintos radioligandos cannabinoidesa sitios de unin en clulasesplnicastic ratn. Estoshalhugosapoyabanla hiptesisce que la inmunosupresincausadapor e es un segundomensajeroimportanteparala activacinde loslinfocitos. Elbctivamcnte.los ltimos estudiosrealizadosal respectomuestranresultadosde
la expresindcl receptorcannabinoideen bazo,amgdalasy leucocitosde sangreperifrica,
siendolos linfocitos II las clulasque presentanmayor proporcince expresin,si bien 16vecesmenora la recogidaen SNC (llonnboulaci al?, 1993). Por ltimo, recientementese ha
donadoun gen((XS) paraun receptortic cannabinoides,queno se expresaen cerebro,peros en los macrlhgostic la zonamarginal del bazo.Todavano estclaro,pero hay evidenciaspara creerque sc tinta ce un receptorque traducesu seal a travs de una protena0, en
respuestaa la tnin ce un ligando endgeno.Adems,curiosamenteesel cannabinol(CBN)el cannabinoidequepresentauna mayorahaidadporestereceptorquepor el receptorcerebral.
l.n un iXtaro no muy lej Lino, probablementese distingan dos tipos ce receptorescecannabinoides:uno responsable(le las accionescentrales(GB 1) y otro de las perifricas(CB2)
(N4unro el
REVISIN BIBLIOORFICA DR GANNABISSAIYIA
f~~nacolgicOstpicosde dichoscompuestos(Fride y Mechoulam,1993>. La identificacin
dc la anandilinida como iii ligando potencial para el receptor cannabinoidereafirnia laimportanciabiolgica de las amidasde cidosgrasosy susderivados,Actualmentedos son
las posibles vas dc Ibrmacin de este ligando endgeno: la condensacindel cidoaraquidnico con euuxolwnida, o bien a partir de un precursor (Naraquidonil
fosfatidiletanOlamidflt tras la accin de la fosfodiesterasa(Di Marzo el aL, 1994). Laintervencindc la ruta metablicadel cido araquidnicoconel sistemacanabinoideesmsque evitiente trasunaaccinenzimticaescalonada,seproducirandiferentescompuestosqueen parte podranactuara travs dcl receptorcannabinoide.De hecho,ya se han identificado
en cerebro de cerdo, otros dos derivados del cido araquidnico que son capacesde
interaccionar con el receptor cannabinoide: La ilornoylinolcniletatolamicla y laI)ocosmtct raen ctanclamida (1 lanus el al?, 1993). Ms recientemente,se ha aisladoen el
intestino dc perro otra sustanciacapaz de reaccionar con el receptor cannabinoide,elArmquidonil2gIiceVoI (Ramos, 1994); esto demuestraque la anandamidano es el nico
representantedc estosposiblesmediadoresneuronales,y quecabela posibilidadde queexista
una gran diversidaddc efectosmoduladorespor parte de ellos.
coNtIc*11t*IpI
KIiZiiuiZiiI2hiiSiil0i. ~jjjjjjj~jjjjjjjjjjjt4nCHaCHic*lHomo-yIlnalcnicianowda
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CONHCHaCf%GI O
7,10,13. 16.tkcsIcVCcflIItIAflOLNWidfi 2-Aroquldonil glicerol
32
~
REVISIN BIBLIOGRPICA DE CANPM 1118 SA7IIA
Por ltimo, en los ltimos mesesse ha obtenido mediante sntesis, el primer
antagonistaselectivoy activo por va oral (le receptorcentralde cannabinoides.Sinembargo,
no presclita afinidad por el receptorcannabinlicoperifrico. El 8R141716A,compuestoderivado dcl pitwnl, antagonizatodos los efectos farmacolgicosy comportamentales
atribuidosa los cannabinoicies(RinaldiCarmona
4.1,1
A ,,t
REVIsIN nmuoanM~c& Dii nMWMISMflVA 4$ ---e
1.6.- flR&L&L31LQUL~QKNfla
1a lbrmacologla de los cannabinoides est caracterizada por la multiplicidad de etbctos, 1
siendo debidos principalmente a su accin sobre el SMC; es de esperar por ello, que la mayoradc los efectos sc produ?cim a nivel do la inervacin del rgano ms que en el rgano en s. 3
l,os cwitmbiuoidcs producen diversos efectos comportamenales, fisiolgicos y tirar,nacolgicos tanto en el hombro como en animales de experimentacin, dependiendo niclaramente dc la va de administmcin. Para facilitar el estudio, la mayora dc los jIexperinientos sc encucntraw~ fundamentalmente basados ea el principal componentepaicoactivoaislado dc Cannchix scflhiu, el AVille, y por lo tanto, en la mayorade los casos haremosreferencia a este compuesto.Daremos en primerlugarun ligero repaso sobrelos efectosqueproduce dicho compuesto en el ser humano, continuandocon los que se observan en ~44~experimentacin animal, para concluir con las aplicacionesteraputicas posibles. 1
11k. 1. EFIWTOS PSIC()ACUIVOS .11~
l..os erectos que puede producir el consumo de Cannabk en el hombre son muy 4complejos. Los efectos subjetivos que experimentan los individuos incluyen: excitacin ydisociacin de ideas, aumento de los sentidos, errores en la apreciacin del tiempo y espacio,alteracin de las emociones, ideas ruas e Ilusiones, Impulsos irresistibles> espejismos yalucinaciones. Se ha comprobado que estos elbctos varan de unos Individuos a otros entbnci~ de la dosis, va de administracin, la experiencia y expectacin del sujeto y lavulnerabilidad individual a ciertos efectos paicotxicos. Adems, los niveles plasmticos del Al11K! dependen tunihii3n de la tdenica del fumador, del contenido en cannabinoides de lamuestra y de la proporcin alterada durante la pirlisis, en la cual se producen tambin otros Itcompuestos que pueden agudizarlos efectos o aumentar la toxicidad a largo plazo. ~
Tras el consumo do esta drogo, los efectos comienzan con un periodo inicial de euforia 44o /dgh, que ha sido descrito como une sensacin de bienestar y felicidad, que va seguidofrecuentemente por un estado do somnolencia o sedacin, Por un aumento de la dosis o ~ h,Consumo repetido, sc producen hiperestesies sensoriales y distorsiones en la percepcin 1sensorial en cuanto a forma, distancia, color, etc.
4
341
anfwamuoaaAmc ce caNALIaM&0VA
Adems. sc produce un deterioro de las funciones cognoscitivas, incluyendo:
alteraciones de la nwmoria, disminucin del aprendizaje, disminucin de la percepcin y dela atencin. En aquellos casos en que adems el individuo padece un sndrome depresivo, elconsumo crnico de esta drogo puede provocar estados de psicosis agudas y Pnico> con fiuses y
4 4 . 4
de ansiedad intensa Aboad( y Martin, 1992).
A dosis ya muy elevadas o o largo plazo en consumidores crnicos, se puededesarrollar estados de delrium y una psicosis txica aguda, acompafiad.a de despersonalizacin,prdida de la percepcin interior, para finalmente desencadenar un sndrome amotivacionol. IrMathew y sus colaboradores, en un estudio reciente realizado sobre un grupo dc 35 voluntariosque rutunron cigarrillos dc mariluuana que contenan dosis bojas y altas de THC, demuestranque el grado de despersonalizacin y de desintegracin es proporcional a la dosis, y que elefecto mximo se produce a los 30 minutos tras la inhalacin, volviendo el sujeto a su estado 4,normal a los 12Qiiproduca un descanso en la respuesta agresiva. Sin embargo, en un estudio realizado en el alio93 se observa un aumento de la agresividad de los su~Jetos durante las horas siguientes a lainhalacin de marihuana (Cherek ci al., 1993). Estas diferencias se explican por la diferenteva de adndnistracin utilizada en los primeros estudios (oral e intramuscular) y en ste ltimo(inlualacin).
xI
35 4 4
O
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REVISIN BIBLICORAPICA DR CAHMdAUMUVA
Numerosos autores apoyan la hiptesis de que existen dos grandes grupos decanrnbiioides uno de ellos lirmado por cannabinoides que producen depresinconiparttltflental acompaada de un componente estimulante, siendo el A-THC el compuestomodelo. El otro grupo, encabezado por el CBD y 013W, lo constituyen cannabinoides queproducen tanibin depresin del SMC, pero sin componente estimulante (Dewey, 1986).
:: 4
11.6.2.- ~~~c,os SOBRE El. SISTEMA CARDIOVAScULAR
1 .os erectos de los cannabinoides a este nivel son mucho ms mareados en animales deexperimentacin que en el l~ombre. e incluso se pueden manifestar efectos opuestos. Estperibetamente demostrado que la administracin aguda de TIlO produce taquicardia sinusal.Cuando la drogo es inhalada, la taquicardia aparece a los 5 minutos, teniendo una duracinde nproxlmadatnum~te 30 minutos: en cambio, cuando es administrada por vi a oral, existe una 4relacin temporal entre esa taquicardia y los efectos subjetivos (Hoilister, 1986). 1
A dosis bajas y mediante inhalacin, en general no se aprecian cambios en la presinsangunea, peri> a dosis elevadas aparece hipotensin ortosttica y sensacin de vrtigo, as jcomo una disminucin de la velocidad del riego sanguneo cerebral (Mathew el aL, 1992). Losestudios realizados sobre esto tema concluyen en general que los mltiples efectos producidossobre cl aparato cardiovascular so deben a una depresin del centro vasomotor y a una accincardionceleradora.
Y11.6.3.- IWIXCIOS S
1:4
t4
si e:REVISIN DIDLIOORAPICA DR fl4NM4IW srn
Adems como efectos negativos que sc pueden producir a largo pazo por un consumo
crnico se encuentra la bronquitis crnica, laringitis catarral, irritacin bronquial, ronquera eincluso cambios en lo mucosa con metoplasia y alteraciones precancerosas.
ti
11.6.4.- EEECIC)S SOBRE El. SISiEMA REPRODUCTOR Y ENDOCRINO4
t)csde la antiguedad se ha relacionado la marihuana con el incremento de la actividad~
sexual. Este poder que se atribuye al tannubis se justifica como consecuencia de su efecto 1desinhibitorio, anwtndose tIc la mente del consumidor todos los tabees. ,:
l,.os cannabinoides estn implicados em~ muchas de las alteraciones de la funcin sexual 4,y de otras litaciones endocrinas. Tanto cl -THC como gran parte de sus anlogos, tienen 4>t~electos sobre el sistema reproductor masculino y femenino. 4 4
En algunos cosos existen controversias, pero la mayora de los estudios muestran una ,disminucin en la secrecin de la hormona folculo estimulante (PSE) y de la hormonaluteinizante
1
-II
EvutdamuaaMncAir aAwMTffA
11.6.5.- EIIW.f< >S S( )IIRE SISTEMAS NEUROQUIMICOS
(han parte dc los efectos que sobre el 8140 producen los cannabinoides se pueden explicar por los alteraciones que son capaces de provocar sobre distintos sistemasacurotransmisores. Vamos a ir viendo qu ocurre con cada uno de ellos,
1$
* AcetilcOliflul
El Atli It y sus derivados disminuyen cl recambio de acetilcolina al mismo tiempo que producen un incremento de su concentracin en hipocampo, principalmente. Existe adems 1una relacin entre las dosis que originan este efecto y la aparicin de alteraciones en elconiportanliento. lanibin se eleva en otras regiones, pero en menor grado, como en el cortex, , Atmtriado y protuberancia. El incremento de los niveles de acetilcolina no va acompaflado de 1una inhibicin del enzima occtilcolinesterasa. Este efecto se demostr recientemente en un , 1estudio tOro sobre rgano aislado, en concreto sobre conductos deferentes y plexos mesentricos de cobaya (lkrtwce e: aL. 1992).
it
* Sorotonna
la administracin crnica de cutnablnoides causa efectos biffislcos sobre la sntesis deeste neurotransmisor: comienza con un incremento significativo del contenido cerebral deserotonma, concretamente, son cl hipotlamo y el cerebelo las zonas ms afectadas,observndose paralelamente. una depresin del comportamiento animal. Seguidamente, se produce mm Ibse estiniulatoria, que se relaciona con una disminucin de la serotonina en lasrespectivas reas cerebrales (Dewey. 1986). :
* Dopamina
1La exposicin aguda dc A-THC en animales de experimentacin causa un descenso 14
de las concentraciones cerebrales de dopamina; por el contrario, el tratamiento crnico, llevaconsigo a un aumento de su recambio y sntesis. Respecto a la relacin con el efecto sobre el comportamiento iminiul. hay que decir que, Igualmente que lo que ocurria en el caso de laserotonina, sc observa un efecto bifsico, pero a la Inversa; el descenso del contenido
E
38
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1
1DmLIOORAnCA DR
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Ri3VI5IH DIBUOORAFICA DR CANM4BD W7E4 1.1
En los estudios desarrollados por Wenger, administrando THC a ratas prefiadas, se haobservado iue las cras nacen con un peso menor, estando tambin disminuido el peso de lasgnadas. As mismo, se produce lina disminucin en el contenido del neuropptido Y (NPY)en cl lipotlaniti. Con todo ollo, tras la administracin crnica de THC a dosis bajas duranteel r~ 5ifl%~flS~%SSt se pniuwx una inhibIcin transitoria del desarrollo del eje hipotlamo- 1:,pituitario-gonadal. con los consiguientes cambios en el sistema neuroendocrino (Wenger et aL,1991).
11.6.1()Sllil.ES lISOS TERAI>IJiiCOS 44it
Durante ntuclios siglos, crnnublx se us para paliar diferentes enfermedades, pero a Uprincipios del siglo pasado sc produjo una verdadera explosin de su potencial teraputico. As .41sc utilizaba en el tratamieto del ttanos, en los desrdenes convulsivos, en neurlgias,migraas, disnenorrea. insomnio senil, depresin y gonorrea, as como en las adicciones al
II
apio. Tanbin se us par estimular el apetito y aliviar el dolor y la ansiedad en pacientes ~4 terminales dc cncer. Sin embargo, con la llegada de la hrmacologa moderna y eldescubrimiento dc muchos otros frmacos ms efectivos en estas enfermedades, el entusiasmopor incluyendo la instilacin en el ojo, que han confirmado este efecto y que ha resultado ser tan
4!
Ir,.I4
te
.4 IItuvmIOw UmLIOOItAFIcA DII no manifieste efectos pslcoactivos marcados y su actividad 1:9anticonvulsivante, lince que las investigaciones se dirijan por este camino (Martin, 1986).
1
42stu
44
14
RBVISItd DmLIOOBAPICA netenues&ow~* Accin antieinticit
A principios de los aos 70 so pudo comprobar que los pacientes con terapia anticancerost presentaban menos sntomas de vmitos y nauseas sin previamente hablan limado niariltuano. Pocos aos despus sc ensay la administracin de THC a pacientes queestaban recibiendo cisplatino, obtenindose una accin antiemtica superior a la de la Aclorperazino. siendo tuis e lectivo en pacientes jvenes que en ancianos. Sin embargo en
siensayos clnicos posteriores, muchos de los pacientes tratados con THC experimentaron efectospsicoestimulantes. as conti sedacin, somnolencia, hipotensin ortosttica, visin borrosa,disfliria y conlXLniIt mental. Debido al desarrollo de estos sntomas centTales, se sintetiz underivado del AVIl 1(7, la Nabilona. el cual pareca tener un gran margen entre su accin 444antiemtica y los efectos eut~ricos. La Nabilona result ser ms elbotiva como antiemtico que 1? ~i.la proclorpentziita. puro no estaba exenta de efectos secundarios que Incluan sequedad de 45,haca, alteraciones en la coordinacin, una ligera bajada de la presin arterial y mareos. ElLevonuntradol y el IIRL 4664 son tambin otros dos derivados sintticos del THC quenuestnu~ electo antiemtico sin eli~ctos colaterales ulvo por la disforia.
a
El posible mecanismo de accin por el cual Cannabis evita la emesis no est bienestablecido. Muchas son las hiptesis que intentan explicarlo, basndose la mayora de ellas 4en la interaccin de los cannabinoicles con otros sistemas neuroquinilcos que actan sobre elcentro del vmito. 1* Actividad analgsIca
r
Marihuana, hashish y otras preparaciones del Cannabis se han usado a travs de lossiglos para aliviar el dolor. Desde finales de los aRos 60 muchos son los ensayos rrarmacolgicos que se hicieron al respecto. mostrndose una gran variabilidad de resultados 4$;que ponan en wurc dicho la accin analgsica de esta droga; incluso pruebas realizadas engrupos ce personas voluntarias no reflejaron efecto analgsico sino todo lo contrario (Hill itat~ 1973). Sin embargo, precisamente estudiando la potencia analgsica de distintoscompuestos cannabinidlcos no clsicos que inhiban la adenilato ciclan, se propuso por Yprimera vcz un modelo del receptor cannabinoide {owlett it aL, 1987).
43
REVISIN BIflt,IOGIIFICA DF LA NNA DX SA?iIkI
las drogasuntinociceptivaspuedenproducir sus efectosbloqueandolas sefialesdc
seflsflciflhl de doloren centrosespecleosdel cerebro,interrumpiendola transmisinascendente
a nivel de la mdulaespinal.o bien en ambosniveles,supraespmaly espinal.Puesbien, trasla administracin de Atll It: y el potente canriabinoide sinttico CP55940, por va
endovetiosae iiitrtteettl a ratas intactas y ratas espinalizadas,se ha comprobadoque loscannabnoidesejercen su eketo antinociceptivo tanto a nivel espinal como supraespinal(l.ichtman y Maril ti. 1991). .os sitios de unin para los cannabinoidesen la mdulaespinal
se encuentranen la sustanea gelatinosa,que es un rea implicada en la transmisinde lassealesde nocicepcin(1lerkenbamci aL, 1990).
1:1 erectoundxociceptivodependeen granmedidace la vta de administracindel &TI it:, siendolas vasendovenosae intratecal las quereflejan unamayor potenciaanalgsica,y la subcutneae ntrnperitoneul.las rutasde dminisracinmenoseficaces(Smith y Martin,
1992). Otro Ibetor lXidamental es el estructuralobservndoseuna estrecharelacin entrelaactivdad analgsicay la estercosclectvidad(Martin, 1985).
Poruit tui lacIo, actualmenteseestnrealizandonumerososestudiosparaintentardesvelarla posible interaccindel sistemaopiodecon el sistemacannabinoide,As, se ha demostrado
queel efectoanalgsicode la monita administradapor va intratecal(it.) sepotenciacon elpretratamientode cannubinoides(Welch y Stevens,992), Sabersi los cannabinoidesy losopndesuctuanen sitios tic unin distintoso similaresesalgo quetodavaestpor determinar,
Puedeser que la interaccinde ambos sistemasse produzcapor efecto modulador de los
cannabinoidessobre el sistemaopinide (Vayssecf aL, 1987), o bien por que ambosactenactivando sistemasdc neuroetctoresen la clula; lo cierto es que existen importantes
evidenciasque muestranuna vez msla complicacindel sistemacannabinoide.
* Accin ini tUn1amtul orn
Existe una considerablediscrepanciaentre los distintos autoressobre el efecto queproducen los cannabinoidesa este nivel. Algunos estudiosrealizados en los aflos 70 han
demostrado que el A>-IiIC es unas vcinte veces ms potente que la aspirina y
aproximadamenteel dobleque la hidrocortisonaen el test del edemainducidopor carrageninacii ratas. ()tros tiutores ~ cl contrarionieganque CannabL~poseadichaaccin como lo handemostradosusexperimentos.Pareceserque la diferenciaentrelos resultadosde irnos y otros
4
1,4.3 4
RUVtSIH nmuoanAp,eADE CWtS SA??VA
estriba en la va de administracin y el vehculo empleado. Sin embargo, en 1986 Evaus e/ aL, . t 4demostraron la implicacin de algunos componentes del Cannabis en los enzimas queintervicnetl en la cascada del cido araquidnico, inhibiendo la lipoxigenasa y la ciclo-oxigenasa. y estimulando la lbsfolipasa A2, con lo que se demuestra la accin antiinflamatoriade dichos componentes.
* TratamIento en los espasmos nusculafts 1
MJIr~1~Antiguamente los enfermos con problemas en la espina dorsal trataban los espasmos 1
musculares limando (
1
REVisw nrnuocntkqc os aauwss, vivo:
.4
Accin antit~ipcrtensiva Accin antibacteriana
31 4A....;Afl antimroluica 33LP. s.4,
1 - liso en migraa Posible uso para combatir el insomnio Estimulantes del apetito.
.3.
El mayor problema en la bsqueda de agentes teraputicos derivados del Cannabis, esla consecucin de compuestos que tengan acciones teraputicas a dosis menores que las queproducen efectos adversos, Por otra parte, la elevada liposolubilidad de estos compuestos lespermite distribuirse por el SMC a dosis razonables; por ello, hasta que no se consiga unaapropiada selectividad farmacolgica, la terapia con cannabinoldes seguir siendo muy ik;restringida. t11.6.11. TOI.IiRANC.IA
Como es subido, la tolerancia es un estado de adaptacin caracterizado pordisminucin dc la respuesta a la misma cantidad de una droga determinada
REVISIN IMULIOGRFICA DF GAMiAHIS SAflIA
Entre los estudiosrealizadossobre humanospara ver la tolerancia de esta droga,
destacamOslos realizadospor ionesy ltenowitz sobreun grupo de 12 hombresvoluntariosynormales.duranteun periododc 30 das, qte ingeran210 mg/dacte =TI-IC,Jonesencontr
que los sujetoscan uderuntesa los eRetossubjetivosy al incrementodel pulso, normalmenteasociadoal hbito de fumar marihuana.Sorprendentemente,a pesarde las grandesdosis dell It: empleadas.no encontrefectossubjetivospsicodlicosy observunarelativabradicardiadurantecl curso tIc la administracincrnica de THC. Adems,demuestraun ligero gradode
dependenciafisica y sndromede abstinencia,puesdentro de las 6 horas siguientesa la
retiradasbita de la droga, se produjo tin (tumento en la actividad, irritabilidad, insomnio einquietud.
11.6.1% l)l.~PENl)ENt:lA
Entre muchosmdicosy psiclogosscha extendidoel errorde que la habiluacin, en
cl xciii tic; dc dcpcnclench/Lvica copnhinadacon sinioznasde abstinencia,es el principalcriterio por el que debevulorarseel daflo potencialde unadrogaparae] individuo, 1-Lay una
lneadivisoria muy sutil entrela dependenciafsica y la psquica.La funcinpsicolgicatienetambin basestisiolgicasy bioquimicus~el deseodc satisfaccininmediataes un poderosofactor de refuerzo psicolgico. Por Otro lado, no se desarrolla dependenciafsica con
estimulantesdel SNt: como la cocana,que se sabeque provocaen el individuo uno de los
tipos ms esclaviziidoresdc Ihrmaeodcpendeneia.La dependenciade unadrogano depende,por tanto, slo ce la capacidadde sta para producir sntomas de abstinencia. Lalarmacodependenciaobedecefundamentalmentea la interaccinentreun sujetoy unamolcula
biol~gieumcnteactiva que provocaplacery el posteriordeseocrecientede refuerzorepetido.
Esta interaccin lleva a un comportamientode bsquedade la droga o dependenciaen elcomportamiento.Sobre esta base,resulta engaosoclasificar la marihuanacomouna drogablanda que no cren dependencia.
Auntueen los consumidoresde (anncdssedesarrollatolerancia,no apareceningunadependenciafsica significativaque se puedaidentificarporsntomasde abstinenciaanlogos
a los que presentula heronay el alcohol. Los sntomasobservadostras la interrupcindel
consumointensoson relativamenteleves~ la prdidade apetito,el insomnioy la irritabilidad
son bien tolerados, peo est comprobadoque el Ciannabis puede crear un estado de
47
343;,
5 .a DL,, expresa la toxicidad aguda de un producto, al indicar la dosis que matara al50% de la poblacin en estudio cuando se adtninistra por una va especfica. Por ello> siempredebe relerirse a un animal de experimentacin y a una va de administracin en concreto.
It .34df.!!Son numerosos los mtodos propuestos para la determinacin de la DL,,, pero todos .j4!
mantienen una lnea similar en cl desarrollo de la experiencia. Nosotros hemos optado por el itt~ itmtodo propuesto por leed y Muench en 1938, Comiste en administrar dosis crecientes del ~
producto en estudio, siguiendo una progresin geonvSlrica de razn 2, partIendo de la dosismxima que no mata a ningn ratn (l)L
REVISIN Bhi3I,IOGRFJcA DE (NNAhJSSAifl
11.8.- Th$ISI FARM.ACQL=.2.Q.W==j>ARA EL ESTUDIO DE LOS CANNABINOIDES
\tll IY produceuna caractersticarespuestapsicotrpicaen los hombresy una gran
variedat de alteracionescomouamcntulesespecficasen los animalesdc experimentacin
(Comptonrl cii., 3 QQ 1 Y
Parael estudiofarmacolgicotic los cannabinoidessehanescogido,debidoal complejo
esPectrotic eltetoscue P~~fl dichoscompuestos,una seriede pruebasexperimentalesque
pennitel reconoceruatt sustancia como cannabimimtica siemprey cuandocumpla con el
patrn farmacolgicoestableeido.
Presentamosaqul, de una forma somera,Los ensayosfarmacolgicosmshabituales
recogidosen la lteraltra cientlea encaminadosa conoceralgo msa cercade los efectos
producidos ras cl consumode la marihuana, as como mara el desarrollo de derivados
sinWtcoscon fines erap&utieos.
1 ~ntrelos tes Iirmacolgicosms uf i [izldosen los ltimos aosy realizadossobreun nial entero, eabca lestuearlos siguientes:
* Ataxia estticaen perros.
* \3 teraei n del eoni porttu uicato en nonos.* Accin antconvti Is xaate, en rutas.* Est(mulo tlscrmativo, en rulas.
* Y un espectrodc respuestasIurmacolgcasen ratn, quees nico para estetipo de drogas,
Y que comprende: 1 lipoterinin
(atalepsia i\ctvidad l w aiotri i.
- AnalgesiaII i perexetal i idad e lii ncrreflcx i a.
Paranuestroestudiohemosescogidolas pruebasqueserealizansobreratnpor serunanimal de fcil unncj< y que aportan a lbrmaein suficiente, Cada uno de ellos serdesarrolladoen el apartadoMIERIA.Sy MTODOS del presenteestudio.
50
PARTE EXPERIMENTAL
pctc los eonxt,?lUi
II.1.
PARTE EXPERI ENTAL :1:
[.apune expcrinwntol de este trabajo, se basa en la determinacin de los efectos 2bnnacolgiCO%de diversasititiesIras de resinode Cannabis, quepresentandiferentegradodeoMurcz y por lo iant~ direrente composicin. con el fin de evaluar la importanciade loscannabiiuidCS en dichos efectos. El estudio comienza con la determInacin de la DL~ yandilsis onotuno.pUtOlMiC(1 dc los rganos afecado8 tras la intoxicacIn; se continua con lacomparacin de erectos entrela resino entera y los dIferentes cannabinoides puros, empleadoscomo patrones. osE cuino cus un estudio de potenciacln-inhibicin de efecto tras laadminisItOCifl coIlitIflttI de dichos principios activos.
A contituaciii pusatmntis o desarrollar cada uno de los bloques en los que se divide eltrabi~o e~perimnetal de esta Tesis Doctoral. En cada uno do ellos aparecen los materiales ylos distintos nitutlos enpleadw.. as como los resultados obtenidos y una discusin de los jimismos. JI
111.1.- ANILIJJ.21 UM EXPKItIMENTACIN Til,os aninales uiilitadon en los diferentes oxporlmonlos fueron ratones
PARTE EXPERIMENTAL
Parael anlisisfarmacolgicoescogimosel empleode la tesinade Cannabis(hashish)
y no de la ilunta entera(nhtrihaat por ser la primera msrica en cannabinoidesy ser
realmenteel productode ( annabismsempleadopor los consumidores.Sc utilizan por tanto,diferentes niUeSIrtIS de rCsiIm tic ( annahtv, COU una composicin en cannabinoidesmuy
di furente cHive ellasY CjUC U cWlii timietn S~ detalla en la siguientetabla:
~n ir~ HIO (~%) CBN (gV.> ]1.i~ 8.028 0,817
13.701 1.272
i, lo? 8,801 1,010
298 ?,~l1~ 6,065 1,583
tIl1I 13,951 1,011
7,80) 5.295 8,468
1,1.11 9,150 0,873
e.U Ikn 0,715 0,242
tM,1tl 3 355 2,887
Purasimplificar el nmerode muestras,de las aqu recogidasse emplearon,en los
distintosexperimentos,sietede ellas,que fueronescogidasen funcinde sucomposicin.Las
dos restantes sc despreciaron,bien nr la escasezdel producto, o bien por poseerCaractersticasmuy similaresa algunade lasseleccionadas.Ademsempleandola frmula de]Fenotipo propuestapor (irlid, podemosclasificardichasmuestrasen resinasde tipo droga,
o resinasde tip.> textiL; cuandocl cocientesea>1, se incluir la muestradentrodel fenotipo
1 (tipo droga); cuandocl cocientesea4, perteneceral fenotipo II (tipo textil).
)dY~fl(>tL~O A9THC + ORNCBD
En funcin dc todo cs.o,la clasificacinquedaracomo sigue:
52
PARTE EXPERIMENTAL
N~ ~II FMIItA (.UtLLiNIt PENOTII() (IIIO)
II 217 1 eDROGAl
211.2 2,21 8 (DROGA)
281 II (IFXLIL.)
MIs 11,10 8 ,, se Ibrman lotes co chozanimales,como sedescribeen el mtodo.
Paralelamenteen todos los casos,seestableceun lote control al que se le administraunienmenteel vehculo aceitede ssamo(0,2 mi).
53
PARTE EXPERIMENTAL
111.3.- P=flilSLIYI%% 59
111.3.1. MAIFRIAI VS y MEIO1fl4
la 01, hemosescogidosel mtodopropuestopor Reed
y Muenehpara la determinac1Cm dc la 1)1 ~. Un cl apartadocorrespondientece la REVI SIN131131.1( )( IR All (A sedescribedcciii ladanentela tcnica,
Debido a la gran variedad en la composicince las diferentes muestrasa estudiar,
decidimos rcalintr la dctcrmnacinde la D1~> de tres muestrasce resma,que poseyerandiferente composicin en cannnl.inoidcs. 1.11 escasacantidad de resma disponible hizo
imposible la ticterLil macjn tic la 1)1 ~, tic cada una de las muestrasque luego iban a serensayadas.escogindoscpor ello, tres muestrasci iferentes que fueran lo suficientemente
representativas1con unu proporcin tic canLiabinoidesmuy baja, intermediaaltay muy alta,
obtenindoseas, una gan lo ibrnacinacercade la toxicidad agudadel (annabis,
111.3.2. RESI II l.AI)t )S
* RESINA 642
Presentacii su composicinun 0.745%dc TilO, 0,615%de CBD y 0,242%de CBN.lista muestra Wc escogidapor su b~j a proporcinen cannabinoides.
Despusde varias pruebas.sc consigui establecerla dosis mxima que no mata aningn~lIiiIflLil(Dl , 1 g/kgt A partir de sta,sc administrandosiscrecientesque siguenunaprogresingeomtricade 2, hastanlcanvwaquelladosisque mataatodoslos animalesdel lote
Por tamo, empIcamos4 lotes de 10 animales, a los que se les administr,respectivamente,4
PARTE IRXPERIML3NTAI
(0,2n1l/rntn)~tras la experienciapudimoscomprobarla ausenciade toxicidad del aceitedc
ssamO.1 II la siguienteUbla aparecenreflejadoslos resultadosobtenidos:
DOSIS N NI \ MtEIUCW
ACUMUIAI)OS
VIVOS
ACUMULADOS
TOTAL
LNEA=
16
% MORTALIDAD
u u lo 0 16 0
2 lO ( l 6 6 2 50
lO 8 Id 2 tG 87,5
8 lO lo 0 24 0 24 lOO
MMI IdA II >5
VVIVL>S
DLtiO RESINA 642
N HAlO NF:$
t 0
lo
O
O
0 1 ~ 121
MUI~ 1TO5 VI /OA
En la gr~flca podemosapreciarque la Dlt50 en ostecasoes de 2glkg.
55
4 ~
tal 4 ti a 9 10Dosis (g/lcg)
MTODO RBED-MUENCII
PARTE EXLERIMENTAI
* WSINA 588
Usta resma presentaun ~>,150% de 1l It, 3,l4l0/o de CBD y un 0,873% de CJ3N.
ConsidCIW1Io5dichamuestrapor pO5CCl unaproporcinconsiderablede los principiosactivos.
Se establecicomo 1)I,~. (>~5gfkg y 1~IcM). 2glkg, Por tanto,en estecasodistribuimos
los animalesen tres lotes, a los que se les adn~inistr 0,5; 1 y 2g/kg respectivamente.Losresultados,sc represetitan a Co it i nuacln:
~o~5gAg
M \ MtI~IClOSA(t IMUIAt)OS
VIVOSACUMULADOS
TOTALLNEA
% MORTALIDAD
(.5 lO 1> lO 1) 16 6 0
lO 4 6 1 6 lO 40
2 lo O 5
v-vIvts
DL5O IUSSINA 588
DL. jttUii
-
3DOSIS (g/kg)
Mirona fiED.MUBNCH
En estecaso la Dl .~, resultaser 1,13 g/kg
56
N HAT
1-.
o 2
1 vivo 1
PARrE EXPERIMENTAL
* RESINA 452/1 1
Por ltimo, la terceramuestraescogidapresentabaunagran riquezade TI-IC 13,951%
al mismo tiempo que una considerablecantidadde CBD (7,7330/o)y un 1,011%de CBN. De
la mismamanerasedeterni no la mx madosisa la cualningn animalnueve,siendoen esteeas~dc 0,25g/kg.y Qg/kg la dOSiS a la que muerentodos. As, establecimoscuatrolotes de
(hezaLlimales cadauno, a los que se les administrrespectivamente0,25; 5,0; 1 y 2g/kg. Eneste caso los resultadosfueron los si~iuientes:
00515
g/k~
>4i~
fl
lO
NI V MIUUUI0S
AtIIMUIADOS
VIVOS
ACUMULADOS
TOTAL
LNEA
% MORTALDAD
0>~ LI 0 0 6 6 0
0,5 0 6 7 14,3
lo 5 5 5 II 54,5
2 0wn
1(8
PARTL~ EXPIARIMENTAI
111.3.3.- 1)156FSION 1 )E 1< >8 RESIII :lV\DOS
En todos loscasossc demuestrala inocuidaddel vehculoempleado(aceitedc ssamo),
al nenoscii la conceitsaeion tt iii ,ada.
Vistos los resultadosde la determinacindc la DL5 para las tres resinasdiferentes,
podeluosobservartuc la dosis letal 51 .< es tic O,Q2g/kg, demostrndoseque el THC no es slo el principal
responsablede los eketosdel hwdLvh. sino tambincte su poteicial txico. No obstante,clebeniosseflalar que pese a la elevadapopociii ce I1lC presenteen la resma, podemos
considerardicha droga como atxica en cuantoa la letalidadque produce (observandolasDI%>), lo cual no mdca que no seanociva ~ra la saltd.
58
1
PaTn ExPmWU4TAL :
111.4.- ES1LIDIO ANlOM(>PATOL ICO
11.4.1, MAlERIAI ES Y MTOI >
PARlE BXPUUMliNTAL
InclusIn en parafina.Esta etapa sc realiz mediante un Procesador de Tejidos pn inclusin (Tissue Teck
de AMES), y consta tIc las etapas siguientes:
a.- l)esliidrntilcii, empleando una escala creciente de alcoholes, desde alcohol de 70hasta lOt).b. Aclarado, con 1 listolcmnon~. jie. Parafino.
* Fornaclfl de bloques de parafin.Este proceso se realiza sobre una Consola Histolgica (TissueTeck II AMES).
MIn..ntnn.L& I5I~S ~VEE4S
Se obtienen cortes (entre 5 y 7 it) de los tejidos escogidos, mediante el empleo de unlicrotonio rotatorio (l,Iill 1512).
Tineln hIstol6glca (Tcnica lionudoxIlIna-EoslniO.Los cortes se recogen sobre portaobjetos recubiertos de albumino gllcerlnlzada, para
perfecta adhesin, y se someten u los siguientes pasos para su tincin:
u.- Despurolinintciii (ilistolemon~).b.- Relidratnein. con escala creciente de alcoholes, hasta agua.c.- Ilematoxllina dc Crnzzi. De 7 a 10 minutos.d.- Agua corriente.o.- Eosina. Dc 1 a 2 minutos.1.- fleshidrutacin en escala creciente dc alcoholes.g.- Tras dos pasos dc uistolcon~, se montan los cortes con cubre objetos empleandoresma Eukitt.
Microscopia.Para la observacin microscpica de los cortes realizados empleamos un
otonicroscopio ptico de campo claro (NIKON HPX), que permite fotografiar los cortes deis tejidas seleccionados.
60
PARTE EXPBRRAIMTAL
.4.2.- RESIII.lAIflN
Con tcnicas dc inclusin en lmrafinn sc obtuvieron, cortes histolgicos de cerebro,linn, corazn. hgado. niln, suprarrenales y ovario, que posteriormente se tifieron con
1 fl estudio l~istolgico de los rganos, mostr una congesttn en todos ellos, siendo stenico signo comn (Microlhtograflu 1, 2 y 3 ). A nivel cerebral, renal, suprarrenal y de
tono es cl nico signo patolgico. sin que exista relacin con el tiempo de evolucin.
l.os pulmones presentan congestin desde el primer momento del estudio (6 horas).ls tarde. y basta el momento dc su muerto, los lesIones aumentan cusl y cuantItativamente,esentando en primer lugar edema, que generalmente es de tipo focal y limitndose a~quetIosreas difusamente repartidas. A lo largo de la evolucin estas zonas pueden ser algo.ds importantes. pcrb en ningn momento sc constituye como un edema pulmonar masivo,4icrothtogmlln 4). A los tbnmenos de edema descritos, se suman ms tarde hemorragiastra-olveolar0i ocasionales.
Ita cl hEgodo. o las 6 horas dcl iratomiento, se observan junto con la congestin yatodo, uno lipcrplasia discreto de las clulas de
IARIIi EXtI3RIMENIAI.
111.4.3. 1)15(1SIN 1W lOS RESI ll:lV\tJoS
1 osanimalescontrol examinados(tratamientoconaceitede ssamoy sin tratamiento)
ijo mostraronalteracioneshistolgicasei los cortesanalizados,
1 oscambiosobservadosa nivel pulmonarexpuestosanteriormente,se identificana los
descritosclsicamentecono los inicialesdc la congestinpulmonarpor insuficienciacardiaca
(Contran.Kumar y Robbins,1900). 131 estasissanguneoevolucionarpidamenteaedema,queen primer lugar se localizo en las vas respiratorias.Los capilaresalveolaresaparecenrepletosdc sange~la rotura de estoscapihites puede producirpequeashemorragiasintraalveolares,y posteriormente,la fragmentaciny tagoctosisce restosdc hemates,provocala aparicin
en la zonade nacrtagoscargadosdc hemosiderina.
plcomorsmohepatoeltario y nuclear, las clulas binucleadas,las mitosis y la
hiperpasiae hipertroiia de las clulasdc Kupffer, son cambiosreactivosinespecficosdelhgadoy sc producende Formaautomticaantemltiples tipos de agresin,comoinfecciones
virales (virus 1 lerpessiniplex, virus de las Hepatitis, etc,), txicos (alcohol, tetraelorurode
carbono1ti oacetamida, ziclovudino. etc).
La presenciade clulasbinucleadasy ce mitosisocasionalestienenmenossignificadocii los animalesjvenes,como en nuestromodelo experimental,pero si tenemosen cuentaelesto de las alteracionesobservadasa las que con frecuenciase asocian,podra considerarsecomo ut cambio inducido cxperimentaltiwnte.
1 a tumelaccinturbia y la degeneracinplumosa por hiperpasiamitocondrial,sehan
descrito como signosmorfolgicosce lesin incipientede la hepatopataalcohlicahumana.lambinpuedenobservarsepor la accince otros txicos, como el AL (Ziciovudina), ysicmprecomolesin incipiente,Estaslesionessuelenser reversiblesa la retiradadel txico,
y en casocontrario,con frecuenciaevolucionano se sustituyenpor fenmenoscte esteatosis,
En nuestrocasono liemos observadofenmenosce estetipo ( Lpez Bravo, A. Comunicacinpersonal).
66
=~ ~
PAR1L! EXPERIM[!NtAt
111.5.- JIATERIA FARMACOLGICA PARA CANNAI3INOIDES
Como hemosavanzadoanteriortuente,en este trabajo nos centramosen las pruebas
~~wniacOlgictt5para cannabinoidesmsutilizadas,empleandocomo animal de laboratorioel
ratn.
Pasamosa desarrollarlos materialesy el mtodoempleadosen cadauna de ellas.
111.5.1. ANAl ISIS BSTAI)ISlICO
1 os valoresobtenidosen los diferentesensayosrealizados,se sometierona un anlisis
estadsticoen el ttte se obtuvieron la media, el error estndury en el que se contrast la
hiptesisdc normalIdtid i tt rapobncinna1.
Al tratarsetic resultadosque seguanunadistribucin tiormal, seatalizaronusandoel
lcst patamtrico1 de Studenl,para comparardos tinicos gruposexperimentales(control y
pral)lctna. en cadacaso).
1 a cotuparacin entre mltiples grupos se realiz medianteanlisis de varianza,aplicandoel lest ce NunmanKeutv.
En todos los casosse adoptcl intervalodc confianzadel 95% (probabilidadde errormenor dc (),05) y del 99% < probabi1 idad de error menor ce 0,01),
111.5.2.-MAIiiRIAI,ES Y MTODOS
* WMPERAltIRA CORPORAL: HIPOTERMIA
En cl Itombre sano It temperaturacorporal se mantienealrededorde los 37 0C,ndepcndientemetuedcl ambienteexterno,esdecireshomotermo.Sin embargo,los animales
poiquiloterniosson aquellos en los que su temperaturavaracot las condicionesexternas(Gttyton, 1990). Tal es cl caso dc los ratones, animales empleadoscii este trabajo deexperimentacin.l.a temperaturacorporalnormalmediade estosanitnalesoscilaentrelos 35,5
y los 36,5 Q.
67
-~
tAI&It EXPERINtEN1AI.
Con el fin de dismituir la gran cantidadtic factoresexternosquepuedeninfluir sobre
los valoresde temperaturabasaltic esteanimal de experimentacin,semantienealos ratonesaisladosen unas condicionesiuubicntales constantes.As mismo, la influencia del ritmo
circadiano la sido Di iii tu izada realizando las pruebasSietuprea la mismahora del da.
Paraucdir la temperaturacorporalce los animalesce experimentacinempleamosuna
sonda rectal (VSI 400) acopladau un termmetrodigital crnliRTEc P6
Se realini unamcdida inmediatamenteantesde la administracinde la resmao patrn,
y otra entre61)QQ miautosdespusdc dicha administracin.La difrenciaen0C entrelas des
medidasse comparacot la de un grupo control que se defitie corno cero y el resultadoseexpresacomo ( ch. 7 lipoh.nnia.
M (C0) 2
* TI2ST DE LA INMOVILII)Al) EN EL ANILLO: CATALEPSIA
El est de la inmovilidad en el anillo, permiteevaluar el gradode catalepsiaque escapazdc provocat un fl~rmneo trassu administracinen un animalde laboratorio.En estecaso,obtenemoscl porccntxie tic 1 tiempototal (11t2 e! ratnpermanececompletamenteinmvil sobreun anillo horizontal.
El mtodo,descritopor Pertweeen 1972 y qte originariamenterecibeel nombre ce
11w ru~g us, continuaen actualidady esuno ce los mtodosmsempleadosparavalorar lacatalepsia. Nosotros hemos realizado el mismo tcst de Pcrtwee con unas ligerasmodiheaciones.
El aparatoconstace un aro metlicohorizontal ce 5,5 cm de dimetro,unido a unSoporte que lo mantienea 16 cm del suelo, Cada ratn se coloca sobre el aro durante5
IlliIltttOs. Duranteesteperiodo.secontabilizael tiempo en segundosqueel animal permanecetotalmente inmvil. Este valor se divide entre 300 segundosy se multiplica por 100,
obtenindoseas cl Indice tic utnovillilod.
68
a
PARTE EXPERtMENTAL
t%INMQVELXDAD = x 100LT
u Tiempo (segutidos)de pctmaneticiainmvil.t1: Tiempo total (segundos)que dura la prueba.
Se consideracomocriteriode inmovilidadala ausenciadetodomovimientovoluntario,
exceptolos movimientosasociadosa la respiraciti.La ausenciade movimientosdel hocico
y bigotes es tina buetiareferenciade inmovilidad, haciendoel anlisismsobjetivo.
Si un ratn permanecesobreel anillo al menos2,5 minutossin caerseo escaparsede
l, se da por tinalizada la pruebaconsiderandocomo tiempo total esos2,5 minutos(150 segundos).
Por el contrario, si un animal se escapao cae del anillo dentro de los 2,5 primerosminutos, sevuelve a eoloca.tsobreel anillo durantetres minutosms. En estecasoel indicesc calculacontabilizandola sumace los tiemposqueha estadosobreel anillo antesy despusde caerse.Si un ratn se caems dc 5 vecesconsecutivasen los primeros 2,5 minutos, se
despreciael resultadoy quedaexcluido del anlisis de ciatos, Parareducir la incidenciadeescapes,siempresedebecolocar el ratnsobreel anillo de espaldasal puntopor el quese uneal soportevertical.
Un animal to tratado con drogas que produzcancatalepsia,lo msnormal es que
pernatezcaactivo y curioseandoel entorno,a vecesescapndosedel anillo por salto, cada,o ms irecuentemente,bajandoa travsdel tubo vertical quesoportaal anillo.
Sin embargo, los animales tratados con drogas catalpticasy en concreto concannabinoides,poseenuna actividad exploratoriainterrumpidapor perodosen los quecesan
todos Los movimientosvoluntariosdel rabo, tronco, extremidades,hocicoy bigotes Durante
este periodo de inmovilidad, el ratn adoptaposicionesextraas,siendouna de las msfrecuentes,el tendersea lo largo del anillo, sujetndose~nicamentCpor laspatastraserasy lasdelanteras;en esta situacin,sueleocurrir que su vientre gradualmentese vaya combando,
69
PARlE BXPERIMBNTAL
siendo cada vez ms inestable su posicin. d retorno a su actividad normal ocurre solamentesi cl animal termitial por caer del itijlo, aunque tambin puede ser que el propio ratn percibael inminente peligro y eomi ello recupere su estado normal. Por supuesto si el experimentadortoca su cuerpo o sc produce algn ruido lo suficientemente fuerte, el periodo de inmovilidadsc quebranta. 1k ah que el experimento deba realizarse en una habitacin no solamenteooinrntnda. sino twuibin aislada dc todo ruido externo, y siempre debe ser llevada a cabo porcl nlisntO experimentador.
Se considera que un producto produce catalepsia cuando se obtienen valores del Indicede inmovilidad superior al 20%
Aquellos rrmuncos que don ndicos comprendidos entre un 15-20% probablementeposeen efecto sedante no especifico, pero no catalptico (Compton of aL, 1991).
tCAMP AlBERTO: ACTIVII)AI) MOTORA
En un campo abierto con unos dimensiones de 30x30 cm, dividido en 12 cuadrados deigual tamaflo, sc evala la actividad horizontal y la actividad vertical de los ratones (lride yMccboulam. 9~>3)
l.a locomocin (actividad horizontal) so valoro por el nfimero de cuadrados cruzadosdurante U minutos inniediataniente despus de introducir al animal en el interior del campoabierto.
Al mnisnio tiempo se contabilizo cl nmero de veces que el animal se eleva sobre laspatos traseras (actividad vertical).
En condiciones normales, un animal sin tratamiento alguno, presentar una actividadhorizontal y vertical propios do estos animales, que se manifiesta con la exploracin de cadarincn del campo por porto del ratn. Por el contrario, los animales tratados con derivados deCannaNs, en funcin de la dosis como ya veremos en los resultados, manifestarn bien unamarcado bipoactividad ggo vertical como horizontal
PARTE EXPERIMENTAL
* ANTINOCICEPCIN
La nocicepcines el mecanismopor el cual los estmulosnocivosson percibidosenla periferia y transmitidosal sistemanerviosocentral.
El efectoanalgsicoproducidopor (annabisy susderivadosesun efecto central,y
corno ya vimos en la revisin bibliogrfica ocurre por mecanismosespinalescomosupraespinales.
Por ello, parael estudiode la actividadanalgsicade estoscompuestoshemosoptadopor dos mtodostrmicosparaprovocarel estmulodolorosocuantificabley que son muyempleadosen experimentaci.nanimal para estoscasos:Test de la Placa calientey el Testdel foco calorfico. Se evala as la capacidadque poseenlos productosa ensayardeclistuinuir la percepcinde esteestmulodoloroso
Analgesmetrode la placa caliente(HotpUne).
El mtodoactual se basaen el original establecidopor Jansseny Jageneauen 1958.
El estmulodolorosoen estecasoseprovocapor mediode un AnalgesmetroHot Plate
DS-37 Socrel (PANLAB, S.L.), que consta de una plancha metlica termostatizadaelctricamentea 54,50,20C, rodeadapor un cilindro de 19,5 cm de dimetroy 13 cm dealtura, queaseguraque el animal permanezcasobre dichaplacaduranteel ensayo.Adems,disponedeun cronmetroque sefialael tiempo en segutidostranscurridodesdequese sitael ratn sobrela placa,hastaque acusael dolor.
En esteensayo,consideramoscomo primer umbral dolorosoel momentoen que elanimalselamelasextremidadesdelanteras,y, comosegundoumbral, el instanteen quedichoanimal se lame las extremidadestraseras,siendomsvalorableel segundo,puesseevita la
posibilidadde confusin con el acicalamientonormal de los roedores Consideramoscornotiempomximode permanenciasobrela placa(cut-ofj), 30 segundosparael primer caso y 45segundosparael segundo;a partir de entonces,el animal es retirado de la planchay se
consideracomo cl 100% del efecto analgsico(Harrisy Pierson,1963).
7
PARTE BXPUIM4TAL
.os resultados se exprcsu~ como el % del Mximoanalgesia, que viene determinado por la frmula siguiente:
%flRPr~
Efreto Posible (%MPE) o % de
x 100cuto!! -
lp: Tiempo de lotencia dcl animal problema.tc: Tiempo medio dc lateado de los animales control.cutqO 30 seg.
PARTE EXPERIMENTAL
La siguientetabla nos muestrala relacinexistenteentreintensidadcalorifiacay tiempo de
exposicin:
1 (seg) T n,Asin,uCC) Y 1 nLiliWfl(0)
75 so 30
[0 25 60
20 75 80 50
30 >200 lOO
La coladel animal es colocadasobreunaranura, tapandounaclula fotoelctrica.Sehaceincidir el calor radiantesobre la cola y cuando el animal respondeal dolor, la retirti,
momento en el cual el foco incide directamentesobre la clula fotoelctrica,parndoseelcronmetro-
En este caso para evitar el dao tisular, hemosempleado siempre la intensidadcalorfica media, y se consideracomo tiempo mximo de incidenciao cw-off 10 segundos;a partir de entoncessi todavano ha respondidoel animal, se retira considerndoseel 100%
del efectoa
