43
45 CAPITULO VII RESULTADOS Y DISCUSIÓN 7.1 Concentraciones mínimas inhibitorias individuales de los antimicrobianos En la Tabla 7.1 se muestran las concentraciones mínimas inhibitorias (CMI) de los diferentes antimicrobianos para Aspergillus parasiticus en agar papa dextrosa con una actividad de agua de 0.99 y pH de 3.5. Estas concentraciones fueron las concentraciones más bajas en las que no se detectó crecimiento del moho después de 25 días de incubación a 30°C. Tabla 7.1 Concentraciones mínimas inhibitorias de los antimicrobianos seleccionados para Aspergillus parasiticus en agar papa dextrosa con un pH de 3.5 y una actividad de agua de 0.99 Antimicrobiano Concentración mínima inhibitoria (ppm) Timol 400 Eugenol 600 Carvacrol 300 Sorbato de potasio 400

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45

CAPITULO VII

RESULTADOS Y DISCUSIÓN

7.1 Concentraciones mínimas inhibitorias individuales de los

antimicrobianos

En la Tabla 7.1 se muestran las concentraciones mínimas inhibitorias

(CMI) de los diferentes antimicrobianos para Aspergillus parasiticus en agar

papa dextrosa con una actividad de agua de 0.99 y pH de 3.5. Estas

concentraciones fueron las concentraciones más bajas en las que no se

detectó crecimiento del moho después de 25 días de incubación a 30°C.

Tabla 7.1 Concentraciones mínimas inhibitorias de los antimicrobianos

seleccionados para Aspergillus parasiticus en agar papa dextrosa con

un pH de 3.5 y una actividad de agua de 0.99

Antimicrobiano Concentración mínima

inhibitoria (ppm)

Timol 400

Eugenol 600

Carvacrol 300

Sorbato de potasio 400

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46

Estos resultados se obtuvieron por triplicado, y fueron las mismas

concentraciones que las reportadas por López-Malo (2000) para Aspergillus

flavus.

La Figura 7.1 muestra las los sistemas con las concentraciones

mínimas inhibitorias encontradas, además de las concentraciones más

cercanas a estas para cada agente antimicrobiano probado.

Dependiendo del agente antimicrobiano añadido en el medio, fue

mayor o menor la concentración necesaria para inhibir al moho. El eugenol

fue el antimicrobiano de origen natural del cual se necesitó mayor

concentración para observar una inhibición del Aspergillus parasiticus

(600ppm), mientras que el carvacrol fue el que requirió una menor cantidad

(300ppm). El timol y el sorbato de potasio requirieron también

concentraciones relativamente bajas (400ppm)

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47

Figura 7.1 Cajas Petri con 100ppm menos que las concentraciones mínimas inhibitorias

individuales (CMI), las CMI, y 100ppm más que las CMI en agar papa dextrosa con pH

de 3.5 y actividad de agua de 0.99 después de 720 horas (30 días) de haber sido

inoculadas con Aspergillus parasiticus.

Sorbato de potasio

300ppm 400ppm 500ppm

Eugenol

400ppm 500ppm 600ppm

Timol

300ppm 400ppm 500ppm

Carvacrol

200ppm 300ppm 400ppm

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48

El timol (5-metil-2-1-metiletilfenol) es un compuesto con un amplio

espectro de actividad antimicrobiana que se obtiene de diferentes especias,

principalmente de la vainilla y del orégano. El aceite esencial del orégano

contiene aproximadamente 50% de timol, y también se encuentra en

grandes cantidades en el tomillo y en la ajedrea. El carvacrol también se

extrae de especias, principalmente del tomillo y de la albahaca. Conner y

Beuchat (1984) probaron a los aceites esenciales del orégano, del tomillo y

de la ajedrea con 13 tipos de mohos y levaduras, y los clasificaron como

unos de los aceites con mayor capacidad de inhibición para el crecimiento

de hongos.

El eugenol (2-metoxi-4-2-propenilfenol) es uno de los principales

constituyentes de los aceites esenciales de clavo, de pimienta y de jamaica,

y su actividad antimicrobiana también es considerable. Bullerman et al.

(1994) reportó que el aceite de clavo 0.025% inhibió la producción de toxinas

de Aspergillus parasiticus y en concentraciones mayores inhibió su

crecimiento (Sofos et al., 1998)

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49

7.2 Concentraciones fraccionales inhibitorias de los

antimicrobianos utilizados en las mezclas

En las Tablas 7.2 a 7.13 se encuentran los resultados de las mezclas

analizadas, y se muestra donde creció (C) y donde no creció (NC) el moho,

así como las concentraciones fraccionales inhibitorias (CFI) de cada

antimicrobiano y el índice CFI (CFI index) de la mezcla al tiempo máximo en

donde no hubo crecimiento.

7.2.1 Mezcla sorbato de potasio - eugenol - timol

Los resultados para las mezclas ternarias probadas para la

combinación sorbato de potasio, eugenol y timol, según el modelo de

Berenbaum et al. (1983) para probar su eficiencia en Aspergillus parasiticus

se muestran en las Tablas 7.2 y 7.3, así como en las Figuras 7.2 y 7.3.

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50

Tabla 7.2 Crecimiento y concentraciones fraccionales inhibitorias (CFI) e índice

CFI de la mezcla ternaria de sorbato de potasio, eugenol y timol sobre el

crecimiento de Aspergillus parasiticus a una actividad de agua de 0.99 ajustada

con sacarosa y pH de 3.5 ajustado con ácido clorhídrico en agar papa dextrosa,

después de 720 horas (30 días) de incubación

Sorbato

de

potasio

(ppm)

Eugenol

(ppm)

Timol

(ppm)

Creci-

miento a

720 hrs.

CFI

Sorbato

de

potasio

CFI

Eugenol CFI Timol CFIindex

400 0 0 NC 1.00 0.00 0.00 1.00

0 600 0 NC 0.00 1.00 0.00 1.00

0 0 400 NC 0.00 0.00 1.00 1.00

0 300 200 NC 0.00 0.50 0.50 1.00

200 0 200 NC 0.50 0.00 0.50 1.00

200 300 0 NC 0.50 0.50 0.00 1.00

132 198 132 NC 0.33 0.33 0.33 0.99

68 102 68 C

68 102 268 NC 0.17 0.17 0.67 1.01

268 102 68 NC 0.67 0.17 0.17 1.01

68 402 68 NC 0.17 0.67 0.17 1.01

32 48 132 C

132 48 32 C

32 198 32 C

NC: No creció; C: Creció

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51

Figura 7.2 Imágenes del modelo de Berenbaum et al. (1983) con los agentes sorbato

de potasio (KS), eugenol (E) y timol (T) en concentración fraccional con respecto a su

mínima inhibitoria individual sobre Aspergillus parasiticus después de 10, 20 y 720

horas (30 días) de haber sido inoculado

Día 10 Día 20 Día 30

KS (1)

E (1)

T (1)

E (0.5) + T (0.5)

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52

Figura 7.2 Continuación KS (0.5) + T (0.5)

KS (0.5) + E (0.5)

KS (0.33) + E (0.33) + T (0.33)

KS (0.17) + E (0.17) + T (0.17)

KS (0.17) + E (0.17) + T (0.67)

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53

Figura 7.2 Continuación KS (0.67) + E (0.17) + T (0.17)

KS (0.17) + E (0.67) + T (0.17)

KS (0.08) + E (0.08) + T (0.33)

KS (0.33) + E (0.08) + T (0.08)

KS (0.08) + E (0.33) + T (0.08)

( )=Fracción de la concentración mínima inhibitoria utilizada.

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54

Figura 7.3 Gráfica de crecimiento (tiempo contra diámetro) de

Aspergillus parasiticus en los sistemas modelo con las mezclas

ternarias formadas por sorbato de potasio, eugenol y timol.

0

0.2

0.4

0.6

0.8

1

1.2

1.4

1.6

0 100 200 300 400 500 600 700Tiempo (h)

Diá

met

ro (c

m)

Sorbato 68ppm, Eugenol 102ppm, Timol 68ppmSorbato 32ppm, Eugenol 48ppm, Timol 132ppmSorbato 132ppm, Eugenol 48ppm, Timol 32ppmSorbato 32ppm, Eugenol 198ppm, Timol 32ppm

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55

Tabla 7.3 Constantes de regresión lineal del crecimiento del diámetro de

colonias de Aspergillus parasiticus en centímetros hasta sobrepasar los 1.5cm

con respecto al tiempo en horas después de ser inoculado en medios de cultivo

sólidos (agar papa-dextrosa) con pH de 3.5 y aw de 0.99 y con la mezcla

ternaria de sorbato de potasio, eugenol y timol.

Concentración de cada

antimicrobianos (ppm) Regresión lineal

Sorbato de

Potasio Eugenol Timol m b R2

68 102 68 0.006 -0.675 0.971

32 48 132 0.004 -0.714 0.971

132 48 32 0.018 -0.050 0.990

32 198 32 0.004 -0.475 0.981

m=pendiente

b=intercepto

R=coeficiente de correlación

7.2.2 Mezcla sorbato de potasio - carvacrol - timol

Los resultados para las mezclas ternarias probadas para la

combinación sorbato de potasio, carvacrol y timol, según el modelo de

Berenbaum et al. (1983) para probar su eficiencia en Aspergillus parasiticus

se muestran en las Tablas 7.4 y 7.5, así como en las Figuras 7.4 y 7.5.

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56

Tabla 7.4 Crecimiento y concentraciones fraccionales inhibitorias (CFI) e índice

CFI de la mezcla ternaria de sorbato de potasio, carvacrol y timol sobre el

crecimiento de Aspergillus parasiticus a una actividad de agua de 0.99 ajustada

con sacarosa y pH de 3.5 ajustado con ácido clorhídrico en agar papa dextrosa,

después de 720 horas (30 días) de incubación

Sorbato de

potasio (ppm)

Carvacrol (ppm)

Timol (ppm)

Creci-

miento a

720 hrs.

CFI

Sorbato

de

potasio

CFI

Carvacrol CFI Timol CFIindex

400 0 0 NC 1.00 0.00 0.00 1.00

0 300 0 NC 0.00 1.00 0.00 1.00

0 0 400 NC 0.00 0.00 1.00 1.00

0 150 200 NC 0.00 0.50 0.50 1.00

200 0 200 NC 0.50 0.00 0.50 1.00

200 150 0 NC 0.50 0.50 0.00 1.00

132 99 132 NC 0.33 0.33 0.33 0.99

68 51 68 C

68 51 268 NC 0.17 0.17 0.67 1.01

268 51 68 NC 0.67 0.17 0.17 1.01

68 201 68 NC 0.17 0.67 0.17 1.01

32 24 132 NC 0.08 0.08 0.33 .49

132 24 32 C

32 99 32 C NC: No creció; C: Creció

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57

Figura 7.4 Imágenes del modelo de Berenbaum et al. (1983) con los agentes sorbato

de potasio (KS), carvacrol (C) y timol (T) en concentración fraccional con respecto a su

mínima inhibitoria individual sobre Aspergillus parasiticus después de 10, 20 y 720

horas (30 días) de haber sido inoculado

Día 10 Día 20 Día 30

KS (1)

C (1)

T (1)

C (0.5) + T (0.5)

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58

Figura 7.4 Continuación. KS (0.5) + T (0.5)

KS (0.5) + C (0.5)

KS (0.33) + C (0.33) + T (0.33)

KS (0.17) + C (0.17) + T (0.17)

KS (0.17) + C (0.17) + T (0.67)

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59

Figura 7.4 Continuación. KS (0.67) + C (0.17) + T (0.17)

KS (0.17) + C (0.67) + T (0.17)

KS (0.08) + C (0.08) + T (0.33)

KS (0.33) + C (0.08) + T (0.08)

KS (0.08) + C (0.33) + T (0.08)

( )=Fracción de la concentración mínima inhibitoria utilizada.

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60

Figura 7.5 Gráfica de crecimiento (tiempo contra diámetro) de

Aspergillus parasiticus en los sistemas modelo con las mezclas

ternarias formadas por sorbato de potasio, carvacrol y timol.

0

0.2

0.4

0.6

0.8

1

1.2

1.4

1.6

0 100 200 300 400 500 600Tiempo (h)

Diá

met

ro (c

m)

Sorbato 68ppm, Carvacrol 51ppm, Timol 68ppmSorbato 132ppm, Carvacrol 24ppm, Timol 32ppmSorbato 32ppm, Carvacrol 99ppm, Timol 32ppm

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61

Tabla 7.5 Constantes de regresión lineal del crecimiento del diámetro (cm) de

colonias de Aspergillus parasiticus con respecto al tiempo (h) después de ser

inoculado en medios de cultivo sólidos (agar papa-dextrosa) con pH de 3.5 y

aw de 0.99 y con la mezcla ternaria de sorbato de potasio, carvacrol y timol.

Concentración de cada

antimicrobianos (ppm) Regresión lineal

Sorbato

de Potasio Carvacrol Timol m b R2

68 51 68 0.005 -0.820 0.993

132 24 32 0.007 -0.732 0.991

32 99 32 0.007 -1.250 0.991

m=pendiente

b=intercepto

R=coeficiente de correlación

7.2.3 Mezcla sorbato de potasio - eugenol - carvacrol

Los resultados para las mezclas ternarias probadas para la

combinación sorbato de potasio, eugenol y carvacrol, según el modelo de

Berenbaum et al. (1983) para probar la eficiencia en Aspergillus parasiticus

se muestran en las Tablas 7.6-7.7, así como en las Figuras 7.6 y 7.7.

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62

Tabla 7.6 Crecimiento y concentraciones fraccionales inhibitorias (CFI) e índice

CFI de la mezcla ternaria de sorbato de potasio, eugenol y carvacrol sobre el

crecimiento de Aspergillus parasiticus a una actividad de agua de 0.99 ajustada

con sacarosa y pH de 3.5 ajustado con ácido clorhídrico en agar papa dextrosa,

después de 720 horas (30 días) de incubación

Sorbato

de

potasio

(ppm)

Eugenol

(ppm)

Carvacrol

(ppm)

Creci-

miento a

720 hrs.

CFI

Sorbato

de

potasio

CFI

Eugenol

CFI

CarvacrolCFIindex

400 0 0 NC 1.00 0.00 0.00 1.00

0 600 0 NC 0.00 1.00 0.00 1.00

0 0 300 NC 0.00 0.00 1.00 1.00

0 300 150 NC 0.00 0.50 0.50 1.00

200 0 150 NC 0.50 0.00 0.50 1.00

200 300 0 NC 0.50 0.50 0.00 1.00

132 198 99 NC 0.33 0.33 0.33 0.99

68 102 51 C

68 102 201 NC 0.17 0.17 0.67 1.01

268 102 51 NC 0.67 0.17 0.17 1.01

68 402 51 NC 0.17 0.67 0.17 1.01

32 48 99 C

132 48 24 C

32 198 24 C

NC: No creció; C: Creció

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63

Figura 7.6 Imágenes del modelo de Berenbaum et al. (1983) con los agentes sorbato

de potasio (KS), eugenol (E) y carvacrol (C) en concentración fraccional con respecto a

su mínima inhibitoria individual sobre Aspergillus parasiticus después de 10, 20 y 720

horas (30 días) de haber sido inoculado

Día 10 Día 20 Día 30

KS (1)

E (1)

C (1)

E (0.5) + C (0.5)

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64

Figura 7.6 Continuación KS (0.5) + C (0.5)

KS (0.5) + E (0.5)

KS (0.33) + E (0.33) + C (0.33)

KS (0.17) + E (0.17) + C (0.17)

KS (0.17) + E (0.17) + C (0.67)

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65

Figura 7.6 Continuación KS (0.67) + E (0.17) + C (0.17)

KS (0.17) + E (0.67) + C (0.17)

KS (0.08) + E (0.08) + C (0.33)

KS (0.33) + E (0.08) + C (0.08)

KS (0.08) + E (0.33) + C (0.08)

( )=Fracción de la concentración mínima inhibitoria utilizada.

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66

Figura 7.7 Gráfica de crecimiento (tiempo contra diámetro) de

Aspergillus parasiticus en los sistemas modelo con las mezclas

ternarias formadas por sorbato de potasio, eugenol y carvacrol.

0

0.2

0.4

0.6

0.8

1

1.2

1.4

1.6

0 100 200 300 400 500 600 700

Tiempo (h)

Diá

met

ro (c

m)

Sorbato 68ppm, Eugenol 102ppm, Carvacrol 51ppmSorbato 32ppm, Eugenol 48ppm, Carvacrol 24ppmSorbato 132ppm, Eugenol 48pm, Carvacrol 24ppmSorbato32 ppm, Eugenol 198ppm, Carvacrol 24ppm

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67

Tabla 7.7 Constantes de regresión lineal del crecimiento del diámetro (cm)

colonias de Aspergillus parasiticus con respecto al tiempo (h) después de ser

inoculado en medios de cultivo sólidos (agar papa-dextrosa) con pH de 3.5 y

aw de 0.99 y con la mezcla ternaria de sorbato de potasio, eugenol y carvacrol.

Concentración de cada

antimicrobianos (ppm) Regresión lineal

Sorbato

de Potasio Eugenol Carvacrol m b R2

68 102 51 0.005 -0.412 0.997

32 48 99 0.009 -1.690 0.998

132 48 24 0.007 -0.380 0.985

32 198 24 0.003 -0.324 0.920

m=pendiente

b=intercepto

R=coeficiente de correlación

7.2.4 Mezcla timol - eugenol - carvacrol

Los resultados para las mezclas ternarias probadas para la combinación

timol, eugenol y carvacrol, según el modelo de Berenbaum et al. (1983) para

probar la eficiencia en Aspergillus parasiticus se muestran en las Tablas 7.8

y 7.9, así como en las Figuras 7.8 y 7.9

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68

Tabla 7.8 Crecimiento y concentraciones fraccionales inhibitorias (CFI) e índice

CFI de la mezcla ternaria de timol, eugenol y carvacrol sobre el crecimiento de

Aspergillus parasiticus a una actividad de agua de 0.99 ajustada con sacarosa y

pH de 3.5 ajustado con ácido clorhídrico en agar papa dextrosa, después de 720

horas (30 días) de incubación

Timol

(ppm)

Eugenol

(ppm)

Carvacrol

(ppm)

Creci-

miento a

720 hrs.

CFI TimolCFI

Eugenol

CFI

CarvacrolCFIindex

400 0 0 NC 1.00 0.00 0.00 1.00

0 600 0 NC 0.00 1.00 0.00 1.00

0 0 300 NC 0.00 0.00 1.00 1.00

0 300 150 NC 0.00 0.50 0.50 1.00

200 0 150 NC 0.50 0.00 0.50 1.00

200 300 0 NC 0.50 0.50 0.00 1.00

132 198 99 NC 0.33 0.33 0.33 0.99

68 102 51 C

68 102 201 NC 0.17 0.17 0.67 1.01

268 102 51 NC 0.67 0.17 0.17 1.01

68 402 51 NC 0.17 0.67 0.17 1.01

32 48 99 C

132 48 24 C

32 198 24 C

NC: No creció; C: Creció

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69

Figura 7.8 Imágenes del modelo de Berenbaum et al. (1983) con los agentes timol (T),

eugenol (E) y carvacrol (C) en concentración fraccional con respecto a su mínima

inhibitoria individual sobre Aspergillus parasiticus después de 10, 20 y 720 horas (30

días) de haber sido inoculado

Día 10 Día 20 Día 30

T (1)

E (1)

C (1)

E (0.5) + C (0.5)

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70

Figura 7.8 Continuación T (0.5) + C (0.5)

T (0.5) + E (0.5)

T (0.33) + E (0.33) + C (0.33)

T (0.17) + E (0.17) + C (0.17)

T (0.17) + E (0.17) + C (0.67)

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71

Figura 7.8 Continuación T (0.67) + E (0.17) + C (0.17)

T (0.17) + E (0.67) + C (0.17)

T (0.08) + E (0.08) + C (0.33)

T (0.33) + E (0.08) + C (0.08)

T (0.08) + E (0.33) + C (0.08)

( )=Fracción de la concentración mínima inhibitoria utilizada.

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72

Figura 7.9 Gráfica de crecimiento (tiempo contra diámetro) de Aspergillus

parasiticus en los sistemas modelo con las mezclas ternarias formadas por

timol, eugenol y carvacrol.

0

0.2

0.4

0.6

0.8

1

1.2

1.4

1.6

0 100 200 300 400 500 600 700

Tiempo (h)

Diá

met

ro (c

m)

Timol 68ppm, Eugenol 102ppm, Carvacrol 51ppmTimol 32ppm, Eugenol 48ppm, Carvacrol 99ppmTimol 132ppm, Eugenol 48ppm, Carvacrol 24ppmTimol 32ppm, Eugenol 198ppm, Carvacrol 24ppm

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73

Tabla 7.9 Constantes de regresión lineal del crecimiento del diámetro (cm) de

colonias de Aspergillus parasiticus con respecto al tiempo (h) después de ser

inoculado en medios de cultivo sólidos (agar papa-dextrosa) con pH de 3.5 y

aw de 0.99 y con la mezcla ternaria de timol, eugenol y carvacrol.

Concentración de cada

antimicrobianos (ppm) Regresión lineal

Timol Eugenol Carvacrol m b R2

68 102 51 0.004 -0.631 0.947

32 48 99 0.006 -0.775 0.996

132 48 24 0.003 -0.631 0.982

32 198 24 0.004 -0.431 0.989

m=pendiente

b=intercepto

R=coeficiente de correlación

7.2.5 Mezcla sorbato de potasio - timol - eugenol - carvacrol

Los resultados para las mezclas cuaternarias probadas para la combinación

Sorbato de potasio, timol, eugenol y carvacrol, según el modelo de

Berenbaum et al. (1983) para probar la eficiencia en Aspergillus parasiticus

se muestran en las Tablas 7.10 y 7.11, así como en las Figuras 7.10 y 7.11.

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74

Tabla 7.10 Crecimiento y concentraciones fraccionales inhibitorias (CFI) e

índice CFI de la mezcla cuaternaria de sorbato de potasio, timol, eugenol y

carvacrol sobre el crecimiento de Aspergillus parasiticus a una actividad de

agua de 0.99 ajustada con sacarosa y pH de 3.5 ajustado con ácido clorhídrico

en agar papa dextrosa, después de 720 horas (30 días) de incubación

Sorba-

to de

potasio

(ppm)

Timol

(ppm)

Euge-

nol

(ppm)

Carva-

crol

(ppm)

Creci-

miento

a 720

hrs.

CFI

Sorba-

to de

potasio

CFI

Timol

CFI

Euge-

nol

CFI

Carva-

crol

CFIindex

400 0 0 0 NC 1 0 0 0 1.00

0 400 0 0 NC 0 1 0 0 1.00

0 0 600 0 NC 0 0 1 0 1.00

0 0 0 300 NC 0 0 0 1 1.00

200 200 0 0 NC 0.5 0.5 0 0 1.00

200 0 300 0 NC 0.5 0 0.5 0 1.00

200 0 0 150 NC 0.5 0 0 0.5 1.00

0 200 300 0 NC 0 0.5 0.5 0 1.00

0 200 0 150 NC 0 0.5 0 0.5 1.00

0 0 300 150 NC 0 0 0.5 0.5 1.00

132 132 198 0 NC 0.33 0.33 0.33 0 0.99

132 132 0 99 NC 0.33 0.33 0 0.33 0.99

132 0 198 99 NC 0.33 0 0.33 0.33 0.99

0 132 198 99 NC 0 0.33 0.33 0.33 0.99

100 100 150 75 NC 0.25 0.25 0.25 0.25 1.00

252 52 78 39 NC 0.63 0.13 0.13 0.13 1.02

52 252 78 39 NC 0.13 0.63 0.13 0.13 1.02

52 52 378 39 NC 0.13 0.13 0.63 0.13 1.02

52 52 78 189 NC 0.13 0.13 0.13 0.63 1.02

52 52 78 39 C

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75

Tabla 7.10 Continuación

100 32 48 24 C

32 100 48 24 C

32 32 150 24 C

32 32 48 75 C

100 48 36 18 C

100 24 78 18 C

100 24 36 39 C

52 100 36 18 C

52 24 150 18 C

52 24 36 75 C

24 100 78 18 C

24 100 36 39 C

24 52 150 18 C

24 52 36 75 C

24 24 150 39 C

24 24 78 75 C

NC: No creció; C: Creció

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76

Figura 7.10 Imágenes del modelo de Berenbaum et al. (1983) con los agentes sorbato

de potasio (KS), Timol (T), eugenol (E) y carvacrol (C) en concentración fraccional con

respecto a su mínima inhibitoria individual sobre Aspergillus parasiticus después de 10,

20 y 720 horas (30 días) de haber sido inoculado

Día 10 Día 20 Día 30

KS (1)

T (1)

E (1)

C (1)

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77

Figura 7.10 Continuación KS (0.5) + T (0.5)

KS (0.5) + E (0.5)

KS (0.5) + C (0.5)

T (0.5) + E (0.5)

T (0.5) + C (0.5)

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78

Figura 7.10 Continuación E (0.5) + C (0.5)

KS (0.33) + T (0.33) + E (0.33)

KS (0.33) + T (0.33) + C (0.33)

KS (0.33) + E (0.33) + C (0.33)

T (0.33) + E (0.33) + C (0.33)

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79

Figura 7.10 Continuación KS (0.25) + T (0.25) + E (0.25) + C (0.25)

KS (0.625) + T (0.125) + E (0.125) + C (0.125)

KS (0.125) + T (0.625) + E (0.125) + C (0.125)

KS (0.125) + T (0.125) + E (0.625) + C (0.125)

KS (0.125) + T (0.125) + E (0.125) + C (0.625)

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80

Figura 7.10 Continuación KS (0.125) + T (0.125) + E (0.125) + C (0.125)

KS (0.25) + T (0.0833) + E (0.0833) + C (0.0833)

KS (0.0833) + T (0.25) + E (0.0833) + C (0.0833)

KS (0.0833) + T (0.0833) + E (0.25) + C (0.0833)

KS (0.0833) + T (0.0833) + E (0.0833) + C (0.25)

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81

Figura 7.10 Continuación KS (0.25) + T (0.125) + E (0.0625) + C (0.0625)

KS (0.25) + T (0.0625) + E (0.125) + C (0.0625)

KS (0.25) + T (0.0625) + E (0.0625) + C (0.125)

KS (0.125) + T (0.25) + E (0.0625) + C (0.0625)

KS (0.125) + T (0.0625) + E (0.25) + C (0.0625)

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82

Figura 7.10 Continuación KS (0.125) + T (0.0625) + E (0.0625) + C (0.25)

KS (0.0625) + T (0.25) + E (0.125) + C (0.0625)

KS (0.0625) + T (0.25) + E (0.0625) + C (0.125)

KS (0.0625) + T (0.125) + E (0.25) + C (0.0625)

KS (0.0625) + T (0.125) + E (0.0625) + C (0.25)

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83

( )=Fracción de la concentración mínima inhibitoria utilizada.

Figura 7.10 Continuación KS (0.0625) + T (0.0625) + E (0.25) + C (0.125)

KS (0.0625) + T (0.0625) + E (0.125) + C (0.25)

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84

Figura 7.11 Gráfica de crecimiento (tiempo contra diámetro) de

Aspergillus parasiticus en los sistemas modelo con las mezclas

cuaternarias formadas por sorbato de potasio, timol, eugenol y

carvacrol.

0

0.2

0.4

0.6

0.8

1

1.2

1.4

1.6

0 100 200 300 400 500 600 700

Tiempo (h)

Diám

etro

(cm

)

Sorbato 52 ppm, Timol 52 ppm, Eugenol 78 ppm, Carvacrol 39 ppmSorbato 100 ppm, Timol 32 ppm, Eugenol 48 ppm, Carvacrol 24 ppmSorbato 32 ppm, Timol 100 ppm, Eugenol 48 ppm, Carvacrol 24 ppmSorbato 32 ppm, Timol 32 ppm, Eugenol 150 ppm, Carvacrol 24 ppmSorbato 32 ppm, Timol 32 ppm, Eugenol 48 ppm, Carvacrol 75 ppmSorbato 100 ppm, Timol 48 ppm, Eugenol 36 ppm, Carvacrol 18 ppmSorbato 100 ppm, Timol 24 ppm, Eugenol 78 ppm, Carvacrol 18 ppmSorbato 100 ppm, Timol 24 ppm, Eugenol 36 ppm, Carvacrol 39 ppmSorbato 52 ppm, Timol 100 ppm, Eugenol 36 ppm, Carvacrol 18 ppmSorbato 52 ppm, Timol 24 ppm, Eugenol 150 ppm, Carvacrol 18 ppmSorbato 52 ppm, Timol 24 ppm, Eugenol 36 ppm, Carvacrol 75 ppmSorbato 24 ppm, Timol 100 ppm, Eugenol 78 ppm, Carvacrol 18 ppmSorbato 24 ppm, Timol 100 ppm, Eugenol 36 ppm, Carvacrol 39 ppmSorbato 24 ppm, Timol 52 ppm, Eugenol 150 ppm, Carvacrol 18 ppmSorbato 24 ppm, Timol 52 ppm, Eugenol 36 ppm, Carvacrol 75 ppmSorbato 24 ppm, Timol 24 ppm, Eugenol 150 ppm, Carvacrol 39 ppmSorbato 24 ppm, Timol 24 ppm, Eugenol 78 ppm, Carvacrol 75 ppm

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85

Tabla 7.11 Constantes de regresión lineal del crecimiento del diámetro (cm) de

colonias de Aspergillus parasiticus con respecto al tiempo (h) después de ser

inoculado en medios de cultivo sólidos (agar papa-dextrosa) con pH de 3.5 y

aw de0.99 y con la mezcla cuaternaria de sorbato de potasio, timol, eugenol y

carvacrol.

Concentración de cada antimicrobianos (ppm) Regresión lineal

Sorbato de

potasio Timol Eugenol Carvacrol m b R2

52 52 78 39 0.007 -0.983 0.976

100 32 48 24 0.005 -0.540 0.993

32 100 48 24 0.006 -2.178 0.986

32 32 150 24 0.009 -3.523 0.992

32 32 48 75 0.005 -0.611 0.956

100 48 36 18 0.007 -1.054 0.985

100 24 78 18 0.007 -1.008 0.986

100 24 36 39 0.006 -0.586 0.978

52 100 36 18 0.006 -2.053 0.938

52 24 150 18 0.006 -1.645 0.960

52 24 36 75 0.005 -0.873 0.988

24 100 78 18 0.004 -0.964 0.989

24 100 36 39 0.004 -0.776 0.991

24 52 150 18 0.004 -0.828 0.958

24 52 36 75 0.004 -0.992 0.982

24 24 150 39 0.004 -0.822 0.973

24 24 78 75 0.005 -0.214 0.980

m=pendiente

b=intercepto

R=coeficiente de correlación

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86

Los resultados anteriores muestran que todas las mezclas probadas

tuvieron efecto aditivo (CFIindex =1), sin embargo sólo una mezcla mostró un

efecto sinérgico para inhibir a Aspergillus parasiticus. Esta mezcla fue

Sorbato 32ppm -Carvacrol 24ppm-Timol 132 ppm, la cual tiene un índice ce

concentración fraccional inhibitoria de 049. Sin embargo existieron mezclas

tanto ternarias como cuaternarias que retardaron considerablemente el

crecimiento del microorganismo. Algunas mezclas ternarias lograron retardar

el crecimiento hasta por aproximadamente 240 h. Estas se muestran en la

Tabla 7.12. Hubo 3 mezclas cuaternarias que lograron retardar el

crecimiento hasta por 432 h. Estas mezclas se muestran en la Tabla 7.13.

Tabla 7.12. Regresiones lineales de las mezclas ternarias que por más

tiempo (240 hrs) retardaron el crecimiento de A. parasiticus

Sorbato Eugenol Timol Carvacrol m b R2

32 48 132 - 0.004 -0.714 0.971

32 - 132 99 0.007 -1.250 0.991

32 48 - 99 0.009 -1.690 0.998

- 102 68 51 0.004 -0.631 0.974

- 48 132 24 0.003 -0.631 0.982

m=pendiente

b=intercepto

R=coeficiente de correlación

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87

Tabla 7.13 Regresiones lineales de las mezclas cuaternarias que por más

tiempo (432 hrs) retardaron el crecimiento de A. parasiticus

Sorbato Eugenol Timol Carvacrol m b R2

32 100 48 24 0.006 -2.178 0.986

32 32 150 24 0.009 -3.523 0.992

52 100 36 18 0.006 -2.053 0.938

m=pendiente

b=intercepto

R=coeficiente de correlación

Las mezclas ternarias estudiadas ya se habían probado para

Aspergillus flavus, en donde mostraron sinergismo, ya que muchas si

inhibieron al microorganismo durante 30 días (León, 2002).