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INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL CENTRO DE DESARROLLO DE PRODUCTOS BIÓTICOS
LABORATORIO DE NUTRICIÓN Y ALIMENTOS FUNCIONALES
INFORME TÉCNICO FINAL
EVALUACIÓN DE LA BIODISPONIBILIDAD DE HIERRO HEMO (APROFER 1000 ®) EN CERDOS EN
CRECIMIENTO
Director del Proyecto: Dr. Adrián Guillermo Quintero Gutiérrez Participantes: Dra. Guillermina González Rosendo Lic. Nut. Jonathán Sánchez Muñoz
Junio de 2007
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1. INTRODUCCIÓN El presente documento constituye el informe técnico final del proyecto: Evaluación
de la biodisponibilidad de hierro hemo a partir de productos enriquecidos con el
metal, en cerdos en crecimiento que se envía a la Empresa APC – Europe y a la
Universidad Autónoma de Barcelona (UAB), se ha realizado por solicitud expresa
de dichas instituciones y con base en los convenios establecidos. En el
documento se manejan indistintamente los términos hierro hemo y AproFer
1000®.
En primer lugar se mencionan los objetivos, tanto el general, como los
específicos. Más adelante se detalla la metodología seguida, el informe se plantea
tanto para el desarrollo del relleno para galletas, como para la evaluación de la
biodisponibilidad del hierro hemo en cerdos en crecimiento. Se presenta el
protocolo de evaluación de biodisponiblidad de AproFer 1000®, tomando como
modelo al cerdo y comparando su eficacia contra el sulfato ferroso. Finalmente se
presentan los resultados y discusión, conclusiones, las referencias bibliográficas
pertinentes y los anexos generados por el mismo.
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2. OBJETIVOS 2.1 OBJETIVO GENERAL Desarrollar un relleno con hierro hemo (AproFer 1000®), para galletas y evaluar su
biodisponibilidad en cerdas en etapa de crecimiento.
2.2. OBJETIVOS ESPECÍFICOS 2.2.1. Desarrollo del relleno para galletas
Desarrollar la fórmula del relleno para galletas enriquecido con hierro hemo.
Realizar la evaluación química, microbiológica, y de vida útil de las galletas
con relleno de hierro hemo. 2.2.2. Evaluación de la biodisponibilidad del hierro hemo en cerdas
Formar aleatoriamente dos grupos experimentales de cerdas.
Administrar la suplementación con hierro a cada uno de los grupos de estudio.
Evaluar periódicamente y al final, el comportamiento del peso y del perfil
férrico hematológico de las cerdas.
Evaluar los efectos de la suplementación con hierro, mediante la comparación de los resultados obtenidos en cada grupo experimental.
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3. MATERIALES Y MÉTODOS 3.1 DESARROLLO DEL RELLENO PARA GALLETAS
Concepto
Se diseñó un producto con un máximo contenido de hierro altamente
biodisponible; y con un elevado porcentaje de proteínas de buena calidad
biológica; con alta viscosidad, que fuese fácilmente untable; con color, sabor y
olor de chocolate; sin embargo, ya no se aplicó a dos galletas para formar un
sándwich por la cantidad extra de energía que se aportaría por las galletas a cada
cerdo en crecimiento en su evaluación preclínica (Castañedo, 1998, Fors, 1999).
Formulación e ingredientes del relleno para galletas:
La formulación del relleno se hizo en las instalaciones de la Empresa Bimbo, por
lo cual, los datos son de divulgación restringida.
La información previa para los especialistas de Bimbo fue la que se ensayó
previamente en la Universidad Autónoma de Barcelona y en el CeProBi, en la que
inicialmente se evaluaron varios ingredientes y formulaciones (hidrocoloides, entre
ellos); a partir de la cual, Bimbo, desarrolló la formulación definitiva, ajustando las
cantidades de los ingredientes básicos, a la vez que evaluaron algunos aditivos
colorantes, hasta conseguir las características óptimas del producto.
3.2 FACTORES INTRÍNSECOS DEL PRODUCTO 3.2.1 ANÁLISIS DE COMPOSICIÓN
Se realizaron análisis químicos proximales y microbiológicos, así como la
determinación de hierro. Según las técnicas y equipos que a continuación se
describen:
ANÁLISIS QUÍMICO PROXIMAL
Determinación de proteína total
El contenido proteico de las muestras, se determinó estimando el nitrógeno total
por el método de Kjeldahl. Para hacer esta determinación, se usó la batería de
digestión y destilación Kjeldahl marca Lab Con Co. Destilador Büchi 323, el
5
destilador UNIT Marca Büchi, con base en la técnica 920.105 de la AOAC (AOAC
1990).
Determinación de grasas
Se determinaron grasas libres gravimétricamente, tras la extracción de la misma
por el método Soxhlet, para lo que se utilizó el equipo de extracción del mismo
nombre marca Selecta Precis-Bar. Se realizó en base en la técnica 920. 39C de la
AOAC (AOAC 1990) .
Determinación de hidratos de carbono
El contenido de éstos se obtuvo por diferencia: se suman los otros componentes y
el restante hasta llegar a 100, es el valor de hidratos de carbono.
Determinación de cenizas
Se realizó por el método de calcinación con una mufla Furnace 6000 Marca
Thermolyne. Se realizó de acuerdo con la técnica 08-01 de la AACC (AACC 2000)
ANÁLISIS MICROBIOLÓGICOS
Se realizó control microbiológico al producto final, procurando que cumpliera con
lo establecido en las normas microbiológicas aplicables al producto; los métodos
utilizados, fueron los establecidos en las Normas Oficiales Mexicanas: NOM-092-
1994, NOM-113-SSAI, NOM-113-1994, NOM-111-1994 Y NOM-145-1995.
TABLA 1. RECUENTOS MICROBIOLÓGICOS MÁXIMOS PERMITIDOS
Microorganismos NOM-147-SSA1-1996
Límite máximo UFC/g Galletas/relleno Galletas
Mesófilos aerobios 5000 3000 Coliformes totales 20 <10 Mohos 50 20 Levaduras 50 20
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Toma de Muestras Las muestras se tomaron asépticamente de tres productos: hierro hemo en polvo
y relleno con hierro hemo al 16%.
Mesófilos aerobios (NOM-092-SSA1-1994)
Se determinó la Cuenta Total Bacteriana (mesófilos aerobios); las muestras
fueron incubadas en placas de agar a una temperatura de 35 ± 2° C durante 48
horas.
Coliformes totales y fecales. (NOM-113-SSA1-1994) Se consideran microorganismos indicadores y se utilizan como tales para señalar
la calidad sanitaria de alimentos procesados. Suelen usarse como índice de
contaminación fecal por su frecuencia en heces. Niveles altos indican elaboración
poco higiénica o contaminación posterior a su elaboración, o ambas cosas. Para
su investigación se usó agar Rojo Violeta Bilis y Caldo Lauril Sulfato de Sodio,
respectivamente. Ambos se incubaron a 35 ± 1° C durante 24 ± 2 horas
Mohos y levaduras. (NOM-111-SSA-1994) La contaminación fúngica en los alimentos no sólo provoca su deterioro, sino que
también producen micotoxinas en productos vegetales, que pueden producir
intoxicaciones o alergias en la población. Las levaduras, en cambio, sólo tienen
significado desde el punto de vista de la alteración. Para la investigación de
mohos y levaduras se usó el medio de cultivo papa dextrosa durante 5 días a 25 ±
1° C.
Salmonella spp. (NOM-114-SSA1-1994) Salmonella spp es un género bacteriano, perteneciente a la familia
Enterobacteriaceae, integrado por gérmenes de forma bacilar, no esporulados,
habitualmente móviles, gram negativos, aerobios-anaerobios facultativos,
fermentan la glucosa con producción de gas, no fermentan la lactosa, reducen
nitratos a nitritos y son citocromo-oxidasa negativos.
Para la determinación de salmonela se siguió el método establecido en la NOM-
114-SSA1-1994.
3.3 FACTORES EXTRÍNSECOS DEL PRODUCTO 3.3.1 TEMPERATURA
La mezcla de ingredientes del relleno se realizó a temperatura ambiente (25 -
35ºC), cuando la mezcla no se utilizó de inmediato ésta se conservó en
refrigeración a 4°C.
3.3.2 ENVASADO
Para el envasado del relleno utilizado en la evaluación con cerdas, se procuró un
envase que permitiera la pérdida de grasa extra del producto y que impidiera la
adherencia entre éste y el propio envase, por lo cual se usaron bolsas de papel de
baja densidad y de calidad alimentaria (Figura 1).
Fig. 1 Relleno envasado
3.3.3 EXPECTATIVAS DE VIDA ÚTIL Se estableció que el relleno permaneciera al menos 3 meses en buenas
condiciones para su consumo por las cerdas.
Expectativas de consumo Como se ha mencionado, se plantea que este relleno sea apto para suplementar
la alimentación de cerdas con la finalidad de evaluar la biodisponibilidad de hierro
hemo.
7
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3.4 EVALUACIÓN DE LA BIODISPONIBILIDAD DEL HIERRO HEMO EN CERDAS Se desarrolló un ensayo experimental con dos grupos de suplementación, cada
uno de los cuales consumió una fuente diferente de hierro. El grupo suplementado
con hierro hemo estuvo integrado por 11 cerdas y el de sulfato ferroso por 13.
Ambos grupos recibieron el esquema normal de alimentación según su desarrollo:
preiniciador, iniciador, crecimiento y desarrollo con la característica de que todos
fueron diseñados con bajocontenido de hierro (Anexo 1), a continuación se
presenta la diferente fuente de hierro que recibió cada uno de los grupos
estudiados.
a) Hierro hemo. Este grupo consumió relleno sabor chocolate adicionado con
hierro hemo al 16% de AproFer 1000®.
b) Sulfato ferroso. Este grupo consumió relleno sabor chocolate adicionado
con sulfato ferroso al 20%.
3.4.1 SUSTANCIA EVALUADA Y DE REFERENCIA Hierro hemo (AproFer 1000®) Es un concentrado de hierro hemo natural, obtenido a través de la digestión y
separación de la fracción rica en hierro de hemoglobina porcina elaborado en
APC- Europe S.A. en Granollers, España.
Este producto se empleó adicionado al relleno que se administró a los cerdos. El
relleno que se utilizó para la elaboración del relleno correspondió al lote número
06GFH001 que contiene el 1.07% de hierro y el 83.4% de proteínas. Otras
características del relleno son, su inocuidad microbiológica y su bajo contenido de
metales pesados contaminantes, entre otras.
Sulfato ferroso Es la sustancia de referencia; es una sal ferrosa cuyo contenido de hierro
elemental es del 20%. Es el estándar de referencia porque es la sal ferrosa más
estudiada: aunque su biodisponibilidad es baja, es aceptable y normalmente se
adiciona a los correctores del alimento para cerdos.
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Dosis y ruta de administración Tanto el hierro hemo, como el sulfato ferroso, se administraron por vía oral. El
procedimiento que se siguió para su administración fue el siguiente:
a) Relleno enriquecido con hierro hemo. Se fragmentó en trozos y se
administró todos los días a primera hora de la mañana, antes de que los
cerdos consumieran su alimento.
b) Relleno enriquecido con sulfato ferroso. Se fragmentó en trozos y se
administró todos los días a primera hora de la mañana, antes de que los
cerdos consumieran su alimento.
La dosis de hierro aportada se calculó de acuerdo a la edad y peso del animal.
3.4.2 Sistema experimental Justificación de la especie Para realizar la evaluación de la biodisponibilidad de hierro, se eligió al cerdo
como modelo, porque su fisiología en general y a excepción de los primates no
humanos, es la que más se parece a la del hombre, especialmente la digestiva.
Su patrón de crecimiento y maduración es similar al de los niños y los procesos
bioquímicos del hierro, son similares a los del humano (NRC, 1998; Pérez, 1999;
Swindle, 1994; Calabrese, 1991; Gad, 1992; Pond, 1981).
Actualmente, el uso de animales de experimentación para estudiar
biodisponibilidad, es el que presenta menos inconvenientes técnicos y reporta
mejores resultados.
Número de animales y caracterización del sistema.
El cálculo de tamaño de muestra para el ensayo se realizó mediante el software
PC-SIZE CONSULTANT, versiones 1.01 y 2.13 (Dallal 1990), a partir de los
siguientes datos:
α = 0.05 (Doménech, 2001).
10
β = 0.20. Potencia de la prueba = 80%
Desviación típica = 0,65
Se tomaron en consideración las desviaciones típicas de la concentración de
hemoglobina (g/dl) informadas por varios autores, para distintas razas de cerdos y
para estudios en humanos (Walter, 1993; Monge,1996; Maugenet, 1997; Thorn,
2000; Underwood, 1999).
Diferencia = 1,0 g/dl (Doménech, 2001).
Razón de grupos 1 : 1
Se realizó el cálculo para comparación de dos medias independientes y se obtuvo
el resultado de n = 8 cerdos para cada grupo, a los cuales se les sumó el 30%,
por las probables pérdidas que pudieran ocurrir, lo que hizo un total de 11 por
cada grupo.
Se emplearon 9 cerdas comunes (Sus scrofa domesticus) que se inseminaron con
semen de cerdo York, entre el 14 y el 16 de septiembre de 2005; los lechones
empezaron a nacer entre el 8 y 10 de enero de 2006, sólo se eligieron hembras.
Al inicio del estudio tenían una edad promedio de 10 semanas y un peso
promedio de 14 kg. No se les administró hierro dextrano al nacimiento con la
intención de producir una ligera deficiencia de hierro, que permitiera observar
mejor la tendencia del efecto de la suplementación con ambas fuentes de hierro.
El resto de los cuidados al nacimiento y durante todo su desarrollo fue el que se
sigue normalmente con los cerdos.
Condiciones de mantenimiento y alimentación Las cerdas fueron colocadas en jaulas individuales a fin de controlar su consumo
de alimento; las jaulas cuentan con un sistema automático de bebida de agua.
La ubicación y construcción de las jaulas permitió condiciones adecuadas para la
limpieza diaria (Figura 2).
Las cerdas se ubicaron como se presenta en el anexo 2.
Fig. 2 Distribución de las cerdas en la granja.
Se dispuso de una bodega en la granja para almacenar el alimento y el material
clínico. La alimentación se proporcionó individualmente 1 vez al día, hasta
consumir la cantidad asignada.
Procedimientos a realizar con los animales Los animales estudiados recibieron todos los cuidados necesarios de rutina desde
su nacimiento, la única diferencia con el manejo normal a los cerdos, consistió en
que el alimento que se administró fue diseñado bajo en hierro y entre los grupos
la diferencia fue el agente con el que fueron suplementados. La aplicación de
vitaminas A, D y E se hizo a los 2 días de nacidos y se les aplicó desparasitante a
los 46 días; posteriormente se repitió la administración de todos ellos cuando los
cerdos alcanzaron un peso de 60 kg (Anexo 3).
Identificación
Se realizó a través del marcaje con aretes numerados que fueron colocados en la
oreja derecha (Figura 3).
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Fig. 3 Cerda con arete de identificación
Aleatorización
Mediante asignación aleatoria se formaron los dos grupos de cerdos.
Controles periódicos
Diariamente se realizó observación a los cerdos y se registró en un formato de
supervisión (Anexo 4), el peso se determinó cada quince días con báscula
electrónica, 0 -150 kg, precisión de 100g, marca Torrey, hecha en México (Anexo
5). Toma de muestras en vivo Cada quince días se tomaron muestras de sangre de la vena cava (Morton, 1993),
(Figura 4); para lo cual los cerdos fueron previamente tranquilizados con
azaperona (Sural®), por vía intramuscular, en las dosis recomendadas por el
fabricante (Productos Farmacéuticos, S.A de C.V). Posteriormente, se captaron 7
ml de sangre en tubos con heparina como anticoagulante. Las muestras fueron
transportadas de la granja porcina al laboratorio, en un recipiente cerrado y
térmico, con hielo en su interior.
12
Fig. 4 Toma de muestras de sangre de la vena cava.
Una vez en el laboratorio, las muestras se dividieron en dos tubos para su
posterior utillización: un tubo se emplearía para realizar la determinación de
biometría hemática completa (Celly 70) y el otro para hacer las mediciones de
hierro sérico y ferritina (Spin lab). Para éstas últimas determinaciones se dejaron
reposar 40 minutos a temperatura ambiente, posteriormente se centrifugaron a
4000 RPM durante 6 minutos, en el suero así obtenido se hicieron las mediciones
de hierro sérico y ferritina. Para las determinaciones hematológicas, se
homogeneizaron las muestras y se procedió a medir en el equipo
correspondiente.
Determinaciones de laboratorio Las concentraciones hematológicas (hemoglobina, recuento de glóbulos rojos,
hematocrito e índices eritrocitarios), se determinaron con el analizador de
hematología automatizado Celly 70 serie A -221 de Chronolab (Francia) (Figura
5).
Las determinaciones bioquímicas (ferritina sérica, hierro sérico y transferrina), se
realizaron con un analizador semiautomatizado para química clínica y
turbidimetría Spinlab serie 5-5312 (España) (Figura 5).
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Fig. 5 Equipos de laboratorio para determinaciones clínicas
Al término de las 16 semanas de suplementación se realizó la última extracción
de sangre y una semana más tarde fueron sacrificados para realizar las
determinaciones de hierro en hígado y músculo, además se realizaron cortes de
diversos músculos en todas las cerdas para hacer mediciones de pH, las cuales
se realizaron 45 minutos después del sacrificio con un potenciómetro Oakton serie
510 de Eutech Instruments (Figura 6).
Fig. 6 Determinación de pH en la granja.
Estos cortes fueron transportados en un recipiente cerrado y térmico, con hielo en
su interior para que a las 4 horas post mortem, se realizaran los estudios de color
con el Analizador COLOR MATE-TM, de Milton Roy Company..
14
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3.5 CAPTURA DE LA INFORMACIÓN Se realizó un registro de datos del seguimiento de los cerdos que incluyó: control
de peso, consumo de alimento, aplicación de medicamentos (incluidos los
tranquilizantes) y observaciones del estado de salud de los animales.
Se registraron los valores iniciales y posteriormente cada 15 días, se midió el
peso y hicieron las determinaciones hematológicas en los cerdos, durante un
período de 4 meses.
Para capturar la información anterior, se diseñó una base de datos con el software
Excell.
Análisis estadístico
Se realizó análisis descriptivo e inferencial, mediante análisis pareado en los
valores iniciales contra los finales y análisis de variancia entre los resultados de
los dos grupos. Los cálculos se realizaron con el programa estadístico SPSS®
versión 10.
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4. RESULTADOS Y DISCUSIÓN 4.1. DESARROLLO DEL RELLENO ENRIQUECIDO CON HIERRO HEMO. Se decidió diseñar este producto: relleno enriquecido con hierro, como una
respuesta a las elevadas prevalencias de anemia en la población mexicana
(ENSANUT, 2006), y porque se considera que la fortificación de alimentos es la
mejor alternativa para solucionar la deficiencia de hierro (Hurrel, 2002). Para lo
cual se decidió retomar los datos obtenidos en la Universidad Autónoma de
Barcelona (Quintero, 2003), para la elaboración de un relleno de chocolate para
galletas, ya que con este vehículo, el color, olor y sabor del hierro hemo, se oculta
mejor.
Los rellenos para ambos grupos de cerdos fueron envasados en bolsas de papel,
las cuales permitieron retener exceso de grasa del producto, se logró que el
relleno almacenado en condiciones ambientales (temperaturas de 20 a 40º C),
alcanzara una vida útil de menos 3 meses.
A continuación se presenta la formulación final del relleno sabor chocolate a
evaluar en los cerdos.
TABLA 2. INGREDIENTES DEL RELLENO ADMINISTRADO A
ANIMALES DE EXPERIMENTACIÓN
Ingredientes
Azúcar
Grasa vegetal
Huevo
Leche descremada en polvo
Jarabe de maíz de alta fructosa
Sal refinada
Agentes leudantes (bicarbonato de sodio y bicarbonato de amonio)
Ésteres de ácido diacetil tartárico
Vitaminas E, C, A, B1, B2, B3, B6, B12, ácido fólico, zinc y yodo
Saborizante artificial
Benzoato de sodio (como conservador)
Hierro hemo Sulfato ferroso
Proceso:
Para la elaboración del relleno (crema), se mezclaron todos los ingredientes
mencionados en el cuadro anterior, no se dan más detalles del proceso de
elaboración porque esto fue realizado en Bimbo y la información aquí presentada
es la autorizada por la empresa.
Fig. 7 Relleno adicionado con AproFer 1000 ®
4.2 CARACTERIZACIÓN DEL RELLENO ENRIQUECIDO CON HIERRO HEMO Composición química En la siguiente tabla (3), se observa la composición química del relleno con hierro
hemo y del Aprofer 1000®. Es notorio que el relleno con hierro hemo, además de
un alto contenido de hierro hemo (1176 mg/kg), tiene también una importante
cantidad de proteína (9.3 g).
TABLA 3. COMPOSICIÓN QUÍMICA DEL RELLENO ENRIQUECIDO CON HIERRO HEMO Y DEL APROFER 1000®
Cantidad Composición
Relleno / hemo 16% Aprofer 1000® Energía, kcal 535.5 406.4 Proteínas, g 9.3 98.7 Grasas, g 26.7 1.3 H. de C, g 64.0 0.0 Cenizas, g 2.2 7.8 Humedad, % 0.6 2.2 Hierro, mg/kg 1176.0 1247.9
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Análisis microbiológicos En la tabla 4, se muestran los promedios de los resultados obtenidos en los
análisis microbiológicos realizados al Aprofer 1000 ® y al relleno enriquecido con
éste. Es posible observar que la norma consultada, aplicable en nuestro país
(NOM-147-SSA1-1996), sólo establece los valores permitidos para mesófilos
aerobios, coliformes totales, mohos y levaduras; tanto para galletas con relleno
(que son los valores que utilizamos), como para galletas solas; de esta manera,
queda establecido que los rellenos analizados están dentro de los valores
permitidos respecto a coliformes totales y a mohos; sin embargo, el valor de
levaduras encontrado es superior a lo que establece la norma; esto indica posible
contaminación al manipular las muestras antes de enviarse al laboratorio, como
se analizó el producto completo es difícil determinar si la presencia de levaduras
fue en las galletas o en el relleno. Los productos analizados no contienen
Salmonella.
TABLA 4. PROMEDIOS DE LAS CUENTAS DE UNIDADES FORMADORAS DE COLONIAS DE MICROORGANISMOS DEL APROFER 1000 (R) Y EL RELLENO CON HIERRO HEMO.
Muestras Cuenta total bacteriana
ufc/g
Coliformes totales Ufc/g
Coliformes fecales ufc/g
Mohos ufc/g
Levaduras ufc/g
Salmonella spp ufc/g
AproFer 1000®
<10
<10
<10
<10
<10
Ausente Relleno con hierro hemo
14000
(valor estimado)
<10
<10
10
<10
Ausente
Valores permitidos por la NOM-147-SSA1-1996 en galletas con relleno (límite máximo UFC/g) Coliformes totales: 20 Mohos: 50 Levaduras: 50
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Contenido de hierro Se realizó la determinación de hierro en el relleno normal (es decir, sin adición
de hierro) y a los productos destinados a la etapa de evaluación de la
biodisponibilidad de hierro en cerdas. Los resultados se muestran en la tabla 5.
TABLA 5. CONTENIDO DE HIERRO EN DIVERSOS PRODUCTOS
Producto Contenido Fe (mg/kg) Relleno normal 31 Relleno Fe hemo 16 % 1176 Relleno sulfato ferroso 1640
Puede observarse una diferencia importante aproximadamente de 500 mg más
en el producto adicionado con sulfato ferroso.
En la tabla 6, se muestra la cantidad de relleno que consumieron las cerdas de
acuerdo a su peso a lo largo del estudio, a la vez que se muestra el contenido
de hierro en cada una de esas raciones. Es posible observar que hay un ajuste
en la cantidad de relleno a partir de que la cerdas pesaron 50 kg o más, esto
debido a que el contenido real de hierro en el producto no era semejante en
ambos rellenos a pesar de que el cálculo teórico indicaba que deberían ser
similares; sin embargo, al realizar las determinaciones de hierro se encontraron
diferencias, que son mostradas en la tabla 5, pero a partir de este momento las
cerdas empezaron a recibir en ambos grupos la misma cantidad de hierro y así
hasta concluir el estudio.
TABLA 6.CANTIDAD DE HIERRO ADMINISTRADO EN EL RELLENO
A LAS LECHONAS A LO LARGO DEL ESTUDIO
Peso cerdos Cantidad de relleno
Hierro hemo 1176mg/kg
Sulfato ferroso 1640 mg/1000g
Menos de 50 kg 70 g (82 mg Fe) 70 (115 mg Fe) ≥ 50 kg 210 g (247 mg Fe) 151 (247 mg Fe)
Evaluación sensorial del relleno Debido a que el relleno se administraría a animales de experimentación se
decidió no tomar en consideración su sabor y así, estar en libertad de aumentar
la cantidad de Aprofer aportado por ración (16%) y asegurar el consumo total
del hierro, ya que con un porcentaje menor, obligaría a dar cantidades de
relleno muy grandes en relación con el tamaño de las lechonas. La evaluación
sensorial se aplicó para los productos a administrar en población humana.
4.3.Evaluación de la biodisponibilidad de hierro hemo
Se estudiaron 24 cerdos hembras asignados aleatoriamente a 2 grupos: 13 al
conjunto de cerdos que recibió relleno sabor chocolate adicionado con sulfato
ferroso y 11 al grupo que recibió relleno con Aprofer 1000 ®. En la tabla 7, se
observan algunas características del grupo total de cerdos, en ella, es posible
observar que los valores de hematocrito, VCM y CMH están por abajo del límite
inferior del rango de normalidad; es decir, se logró causar cierta anemia en las
cerdas del estudio, aunque definitivamente los valores de los almacenes
(ferritina) no se afectaron.
TABLA 7. CARACTERÍSTICAS HEMATOLÓGICAS Y GENERALES DEL GRUPO TOTAL DE LECHONAS AL INICIO DEL ESTUDIO
(PROMEDIO Y DESVIACIÓN TÍPICA, DT)
Característica Valor Normal1
Edad, semanas 10 - Peso, kg 15.6 (2.7) - R. Eritrocitos, M/μl 7.8 (5.0) 5-7 Hemoglobina, g/dl 12.7 (1.1) 9-13 Hematocrito, % 34.5 (3.7) 36-43 VCM, fl 44.5 (3.2) 52-62 CMH, pgl 16.5 (2.4) 17-24 CCMH, g/dl 37.2 (3.0) 29-34 Fe Sérico, μ/dl 146.6(79.8) 172±60 Ferritina, μg/L 210.9 (92.8) 10-200 R. Leucocitos, k /μl 16.8 (4.2) 11-22 R. Plaquetas, k /μl 427.5 (222.6) 200-500 Linfocitos % 72.8 (8.0) 35-75
1 Aiello, 2000.
21
En la tabla 8, es posible observar las características de cada uno de los grupos,
al inicio del estudio, las diferencias que se observan entre los grupos en ningún
caso son estadísticamente significativas, lo que puede indicar que la única
diferencia que hubo entre ambos grupos fue el tipo de suplemento que
recibieron; es decir, en el momento que se inició el estudio, los grupos eran
similares.
TABLA 8. PESO Y CARACTERÍSTICAS HEMATOLÓGICAS DE LAS LECHONAS, SEGÚN GRUPO DE ESTUDIO (PROMEDIO Y DT)
Grupos de estudio1 Característica
AproFer 1000® Sulfato Peso, kg 16.6 (2.4) 14.6 (3.1) R. Eritrocitos, M/μl 8.0 (0.9) 7.6 (1.1) Hemoglobina, g/dl 13.2 ((1.0) 12.3 (1.2) Hematocrito, % 35.7 (3.6) 33.3 (3.8) VCM, fl 45.0 (4.6) 44.0 (4.6) CMH, pgl 16.6 (1.3) 16.5 (3.6) CCMH, g/dl 36.9 (1.6) 37.3 (4.4) Fe Sérico, μ/dl 108.8 (44.2) 92.2 (35.7) Ferritina sérica μg/L 243.9 (104.3) 177.7 (81.2) R. Leucocitos, k /μl 17.9 (3.9) 15.7 (4.4) R. Plaquetas, k /μl 442.5 (173.7) 412.4 (136.0) Linfocitos % 74.6 (5.0) 71.1 (11.1)
1 Las diferencias no fueron estadísticamente significativas en ningún caso. p>0.05.
Como se observa en la tabla 9, los cerdos de ambos grupos tuvieron una
ganancia de peso semejante, por lo que podría decirse que los cerdos del
grupo que consumió AproFer 1000® se comportaron igual que los del grupo que
fue suplementado con sulfato ferroso; a pesar de que el peso inicial del grupo
sulfato fue menor en 2 kg al final la ganancia fue similar a la del grupo hemo.
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TABLA 9. INCREMENTO DE PESOS DE LAS CERDAS, SEGÚN GRUPO DE ESTUDIO (PROMEDIO Y DT)
Peso kg Grupo de
estudio1
Inicial Final
Incremento2
AproFer 1000® 16.6 (2.4) 105.4 (8.3) 88.8 Sulfato 14.6 (3.1) 103.5 (6.6) 88.9
1 Diferencias estadísticamente significativas. p<0,05.
Como era de esperarse, debido a la anemia que se produjo en las cerdas al
inicio del estudio; éste, inicio con valores de hierro bajos y al final del mismo
(Tabla 10), prácticamente todas las variables relacionadas con el estado del
hierro, se encuentran aumentadas, a excepción de la Concentración Media de
Hemoglobina (CMH), la diferencia en el resto de las variables es
estadísticamente significativa, por lo que puede pensarse que el incremento es
real y no debido al azar. Sólo se observó decremento en la Concentración
Corpuscular Media de Hemoglobina y en ferritina; sin embargo, la desviación
típica de ésta al final fue menor.
TABLA 10. CARACTERÍSTICAS DE LAS CERDAS AL INICIO Y AL FINAL DEL ESTUDIO (PROMEDIO Y DT).
Promedios Característica
Inicial Final Edad, semanas 10 32 Peso, kg 15.6 (2.7) 104.4 (7.45)1
R. Eritrocitos, 106/μl 7.8 (5.0) 8.4 (0.8)1
Hemoglobina, g/dl 12.7 (1.1) 14.1 (0.9)1 Hematocrito, % 34.5 (3.7) 39.8 (0.8)1 VCM, fl 44.5 (3.2) 47.4 (2.4)1 CMH, pgl 16.5 (2.4) 16.8 (0.9)2
CCMH, g/dl 37.2 (3.0) 35.4 (0.6)1 Fe Sérico, μ/dl 100.5 (40.0) 135.9 (21.6)1 Ferritina sérica μg/L 210.9 (92.8) 163.7 (19.4)1
1 Diferencia estadísticamente significativa p<0,05. 2 Diferencia estadísticamente no significativa p>0,05.
Al analizar el comportamiento inicial y final de los indicadores del estado del
hierro por grupos de estudio, se observa que en el grupo de cerdas que
23
recibieron suplementación con AproFer 1000® (Tabla 11), hubo un decremento en
los mismos indicadores que en el grupo total de cerdas, además de una ligera
disminución de la Concentración Media de Hemoglobina (CMH), se advierte
que este valor además permanece fuera del rango considerado normal.
TABLA 11. CARACTERÍSTICAS DEL GRUPO SUPLEMENTADO CON APROFER 1000®, AL INICIO Y AL FINAL DEL ESTUDIO
(PROMEDIO Y DT)
Promedios Característica Inicial Final
Peso, kg 16.6 (2.4) 105.4 (8.3)1 R. Eritrocitos, 106/μl 8.0 (0.9) 8.9 (1.0)1 Hemoglobina, g/dl 13.2 ((1.0) 14.6 (0.9)1 Hematocrito, % 35.7 (3.6) 41.7 (3.1)1 VCM, fl 45.0 (4.6) 47.0 (2.8)1 CMH, pgl 16.6 (1.3) 16.4 (1.1)2
CCMH, g/dl 36.9 (1.6) 35.0 (0.6)1 Fe Sérico, μ/dl 108.8 (44.2) 150.5 (30.2)1 Ferritina μg/L 243.9 (104.3) 173.5 (17.6)1
1 Diferencia estadísticamente significativa p<0,05. 2 Diferencia estadísticamente no significativa p>0,05.
En el grupo que recibió sulfato ferroso (Tabla 12) permanecen disminuidos los
mismos indicadores que en el grupo total de cerdos y con los mismos valores
de significancia.
TABLA 12. CARACTERÍSTICAS DEL GRUPO SUPLEMENTADO CON SULFATO FERROSO AL INICIO
Y AL FINAL DEL ESTUDIO (PROMEDIO Y DT) Promedios Característica
Inicial Final Peso, kg 14.6 (3.1) 103.5 (6.6)1
R. Eritrocitos, 106/μl 7.6 (1.1) 7.9 (0.6)1
Hemoglobina, g/dl 12.3 (1.2) 13.6 (0.9)1
Hematocrito, % 33.3 (3.8) 38.0 (2.8)1
VCM, fl 44.0 (4.6) 47.8 (1.9)1
CMH, pgl 16.5 (3.6) 17.1 (0.8)2
CCMH, g/dl 37.3 (4.4) 35.7 (0.7)1
Fe Sérico, μ/dl 92.2 (35.7) 121.2 (13.0)1
Ferritina μg/L 177.7 (81.2) 153.8 (21.3)1
1 Diferencia estadísticamente significativa p<0,05. 2 Diferencia estadísticamente no significativa p>0,05.
24
Lo observado en las dos tablas anteriores nos podría indicar un
comportamiento similar en los grupos suplementados respecto a valores
basales contra finales, con lo que se descarta una posible influencia del tipo de
hierro suplementado en los valores totales encontrados en la tabla 10.
Para obtener una visión más completa del comportamiento de los parámetros
estudiados por grupo de suplementación, se hizo una descripción de cada uno
de ellos en las tablas siguientes.
En la tabla 13, se observa que el peso de ambos grupos de cerdos fue
semejante al inicio y al final del estudio; es decir, no se observó ventaja del
grupo que consumió hierro hemo, como ocurrió en el estudio realizado en
España por este mismo grupo de investigación, quizá por ser una raza distinta
y porque aquellos presentaron un gran sensibilidad al Síndrome de Estrés
Porcino (Quintero 2003) .
TABLA 13. PESO (KG) INICIAL Y FINAL, POR GRUPO DE SUPLEMENTACIÓN (PROMEDIO Y DT)
Grupo de estudio Inicial Final Diferencia1
AproFer 1000® 16.6 (2.4) 105.4 (8.3)1 88.8 Sulfato 14.6 (3.1) 103.5 (6.6)1 88.9
1 Diferencia estadísticamente significativa p<0,05.
Sin embargo, algunos índices sanguíneos como es el caso de los eritrocitos,
aumentaron más en el grupo de cerdos que fueron suplementados con AproFer
1000®, que los que tomaron sulfato ferroso y la diferencia entre los valores
iniciales y finales fue estadísticamente significativa (tabla 14).
25
TABLA 14. RECUENTO DE ERITROCITOS (106/ΜL) INICIAL Y FINAL, POR GRUPO DE SUPLEMENTACIÓN (PROMEDIO Y DT)
Grupo de estudio Inicial Final Diferencia1
AproFer 1000® 8.0 (0.9) 8.9 (1.0) 0.9 Sulfato 7.6 (1.1) 7.9 (06) 0.3
1 Diferencia estadísticamente significativa p<0,05.
De la misma manera, fue mayor el incremento de la hemoglobina y del
hematocrito, en el grupo de estudio que en el de referencia y las diferencias
son estadísticamente significativas (tablas 15 y 16).
TABLA 15. CONCENTRACIÓN DE HEMOGLOBINA (G/DL) INICIAL Y FINAL, SEGÚN GRUPO DE SUPLEMENTACIÓN (PROMEDIO Y DT)
Grupo de estudio Inicial Final Diferencia1
AproFer 1000® 13.2 (1.0) 14.6 (0.9) 1.4 Sulfato 12.3 (1.2) 13.5 (0.9) 1.2
1 Diferencia estadísticamente significativa p<0,05.
TABLA 16. HEMATOCRITO (%) INICIAL Y FINAL, SEGÚN GRUPO DE SUPLEMENTACIÓN (PROMEDIO Y DT)
Grupo de estudio Inicial Final Diferencia1
AproFer 1000® 35.7 (3.6) 41.7 (3.1) 6.0 Sulfato 33.3 (3.8) 38.0 (2.8) 4.7
1 Diferencia estadísticamente significativa p<0,05.
Como se observa, tanto los eritrocitos, como la hemoglobina y el hematocrito
fueron mayores en el grupo de cerdas que consumió AproFer 1000®, y las
diferencias en todos los casos son estadísticamente significativas, esto nos
sugiere mejoría en el hierro funcionante, debida seguramente a la mayor
biodisponibilidad del hierro hemo.
No ocurrió lo mismo en el VCM (tabla 17), que presentó valores mayores en el
grupo que consumió sulfato ferroso y la diferencia fue estadísticamente
significativa; y aunque los valores de ambos grupos se encuentran ligeramente
abajo de la referencia, puede hablarse de valores normales (McKenzie, 1991).
26
Algo parecido sucede con los valores de la CCMH (tabla 18), esto porque
desde el inicio los valores de ambos grupos estaban ligeramente por arriba de
la referencia, y al finalizar el estudio la diferencia con ésta era menor, lo que
puede hablarnos también de valores normales. El valor de la CMH fue mayor
en el grupo que fue suplementado con sulfato ferroso (tabla 19); sin embargo,
las diferencias no fueron estadísticamente significativas; por otro lado, los
valores de ambos grupos están dentro del parámetro normal.
A partir de los valores de estos parámetros (VCM, CCMH y CMH), se puede
decir que el grupo que consumió AproFer 1000®, se comportó igual que el que
consumió el estándar de oro (sulfato ferroso).
TABLA 17. VOLUMEN CORPUSCULAR MEDIO (FL) INICIAL Y FINAL, SEGÚN GRUPO DE SUPLEMENTACIÓN (PROMEDIO Y DT)
Grupo de estudio Inicial Final Diferencia1
AproFer 1000® 44.9 (1.9) 47.0 (2.8) 2.1 Sulfato 44.0 (4.6) 47.8 (1.9) 3.8
1 Diferencia estadísticamente significativa p<0,05.
TABLA 18. CONCENTRACIÓN CORPUSCULAR MEDIA DE HEMOGLOBINA (G/DL) INICIAL Y FINAL, SEGÚN GRUPO DE
SUPLEMENTACIÓN (PROMEDIO Y DT)
Grupo de estudio Inicial Final Diferencia1
AproFer 1000® 36.9 (1.6) 35.0 (0.6) -1.9 Sulfato 37.3 (4.4) 35.7 (0.7) -1.6
1 Diferencia estadísticamente significativa p<0,05.
TABLA 19. CONCENTRACIÓN MEDIA DE HEMOGLOBINA (PG/L) INICIAL Y FINAL, SEGÚN GRUPO DE SUPLEMENTACIÓN (PROMEDIO Y DT)
Grupo de estudio Inicial Final Diferencia1
AproFer 1000® 16.6 (1.3) 16.4 (1.1) -0.2 Sulfato 16.6 (3.6) 17.1 (0.8) 0.5
1 Diferencia estadísticamente no significativa p>0,05.
27
Sin embargo, la concentración de hierro sérico fue predominantemente mayor
en el grupo que consumió AproFer 1000®, y esta diferencia fue
estadísticamente significativa. (tabla 20). Cabe mencionar que este dato es
diferente al reportado por Quintero en 2003, en que los valores de hierro sérico
presentaron un decremento, esto se había explicado como un proceso natural
al aumentar la edad (Thorn, 2000), pero en este estudio encontramos que si
hubo aumento en ambos grupos, siendo aún mayor en el grupo de interés, esto
nos indica que hay mayor cantidad de hierro circulando en el cuerpo, aunque
en realidad los almacenes de hierro (ferritina) no aumentaron (tabla 20).
TABLA 20. CONCENTRACIÓN DE HIERRO SÉRICO (Μ/DL) INICIAL Y FINAL, SEGÚN GRUPO DE SUPLEMENTACIÓN (PROMEDIO Y DT)
Grupo de estudio Inicial Final Diferencia1
AproFer 1000® 108.8 (44.2) 150.6 (30.2) 41.8 Sulfato 92.2 (35.7) 121.2 (13.0) 29.0
1 Diferencia estadísticamente significativa p<0,05.
El comportamiento de la concentración de ferritina de ambos grupos, presentó
una disminución al final del estudio y estas diferencias también fueron
estadísticamente significativas (Tabla 21); sin embargo, los valores de cada
uno de los grupos están incluidos dentro del rango de la normalidad.
TABLA 21. CONCENTRACIÓN DE FERRITINA SÉRICA (Μ/DL) INICIAL Y FINAL, SEGÚN GRUPO DE SUPLEMENTACIÓN (PROMEDIO Y DT)
Grupo de estudio Inicial Final Diferencia1
Hemo 243.9 (104.3) 173.5 (17.6) - 70.4 Sulfato 177.7 (81.2) 153.8 (21.3) - 23.9
1 Diferencia estadísticamente significativa p<0,05.
En la tabla 22 se muestran los hallazgos encontrados en la exploración de las
concentraciones de hierro, una vez sacrificados los animales, se observa
ventaja en el grupo de animales que tomó Aprofer 1000®,en comparación con
28
29
los que ingirieron sulfato ferroso; tanto por el hierro encontrado en los
compartimentos, como en el porcentaje de absorción del mismo, todo esto en
relación al promedio de hierro consumido por cada uno de los grupos. A pesar
de que el grupo de sulfato ferroso consumió un 2.1% más de hierro, los
hallazgos no fueron en su favor. La ventaja en el porcentaje de absorción del
hierro hemo es aún mayor de 13.32 contra 10.14 en el grupo sulfato.
TABLA 22. CANTIDAD DE HIERRO DE LOS COMPARTIMENTOS Y PORCENTAJE DE ABSORCIÓN DE HIERRO EN RELACIÓN AL CONSUMIDO
Cantidad de hierro. Mg Grupos de
estudio Hemoglobina Funcionante
Hígado Reservas
Sangre Circulante
Total Consumido
Porcentaje de
Absorción
Sulfato Ferroso 4754.24 879.56 1.25 5635.05 55624 10.14
Aprofer 1000 5207.31 908.17 1.59 6116.76 54496 11.22*
*Más 2.1% que es el porcentaje de sulfato consumido en mayor cantidad por ese grupo da un total de 13.32.
Una vez sacrificados los animales, se realizaron cortes a diferentes músculos a los
que se les midió el pH, los resultados se presentan en la tabla 23, en ella es
posible observar que en los tres cortes el pH fue ligeramente más alcalino, en la
carne de cerdas que fueron suplementadas con AproFer 1000®, en promedio 6.44
contra 6.62; lo cual podría indicarnos una mejor calidad de la carne de los cerdos
que recibieron hierro hemo.
TABLA 23. MEDICIÓN DE PH EN DIFERENTES CORTES DE MÚSCULOS (CARNE) DE LAS CERDAS
Corte Sulfato ferroso AproFer 1000 ®
Longisimus dorsis 6.38 (0.33) 6.76 (0.32) Pulpa 6.49 (0.31) 6.55 (0.19)
Contrapulpa 6.47 (0.27) 6.55 (0.20)
A los cortes de los diversos músculos se les realizó también medición del color; en
la tabla 24 se observa; según el sistema de Hunter (Aguilera, 1997) que las carnes
de las cerdas suplementadas con hierro hemo fueron un poco menos luminosas
(parámetro “L”); en cuanto al parámetro “a” fueron similares, posicionadas a la
misma distancia entre el rojo y el verde; pero en el parámetro “b” la carne de
cerdas suplementadas con AproFer 1000®, presentó una ligera tendencia hacía el
color azul, lo que indica un color más oscuro que el obtenido en la carne de cerdas
suplementadas con sulfato ferroso. Estos hechos podrían significar un color
ligeramente más oscuro en los tejidos (carne) de cerdas suplementadas con hierro
hemo, derivado probablemente del mayor contenido de hierro.
31
TABLA 24. MEDICIÓN DE COLOR EN DIFERENTES CORTES DE MÚSCULOS (CARNE) DE LAS CERDAS
L a b Cortes
Sulfato F Aprofer Sulfato F Aprofer Sulfato F Aprofer Lomo 45.6 (3.7) 43.6 (1.3) 0.9 (0,4) 1.5 (0.7) 4.3 (0.4) 4.2 (0.8) Pulpa 41.1 (2.0) 40.8 (2.3) 1.6 (1.1) 0.7 (1.6) 4.8 (0.6) 4.3 (0.5
Contrapulpa 43.6 (2.7) 41.9 (1.3) 0.8 (0.5) 0.7 (0.7) 4.8 (6.4) 5.1 (0.3) Promedio 43.4 (2.8) 42.1 (1.6) 1.1 (0.7) 1.1 (1.0) 4.6 (2.5) 4.5 (0.5)
32
5. CONCLUSIONES Fue posible obtener un relleno adecuado para suplementar a las cerdas; sin
embargo, este relleno no se adicionó a galletas tipo sándwich, para no
proporcionar energía en exceso a los cerdos, ya que su requerimiento energético
se completaba con su dieta y el relleno venía siendo un consumo extra.
El producto obtenido tiene una buena calidad nutricional que fue determinada, de
acuerdo a la metodología establecida. La calidad microbiológica fue la que
establecen las normas mexicanas para el producto en cuestión. La vida útil del
relleno fue de más de 4 meses, lo que permitió que el tiempo de almacenamiento
no afectara su calidad inicial y cuando se suministró a los cerdos estaba en
perfectas condiciones.
En el ámbito de la evaluación de la biodisponibilidad del hierro hemo en cerdas,
puede decirse que la especie elegida, el procedimiento seguido para formar los
grupos y la cantidad de animales en cada uno de ellos, permitió que los resultados
obtenidos sean confiables y precisos.
Por otro lado, la mejor forma de evaluar la biodisponibilidad de un nutriente es a
través de estudios in vivo, aunque al representar dificultades para su realización y
por el costo de los mismos, es difícil realizarlos; sin embargo, en este caso pudo
realizarse y con buenos resultados ya que permitió observar de manera clara la
ventaja en la absorción de la fuente de hierro de estudio (hierro hemo), en
comparación con la sustancia de referencia (sulfato ferroso) y que además es
considerada el estándar de oro para evaluaciones de hierro.
Los resultados obtenidos, en conjunto, ponen de manifiesto que la utilización del
AproFer 1000® puede ser superior al uso de sulfato ferroso, en la suplementación
de este mineral a poblaciones en riesgo de padecer anemia ya que los valores en
33
sangre así lo demuestran y esto queda de manifiesto al observar el porcentaje de
absorción del AproFer 1000, respecto al de sulfato ferroso.
34
6. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS 1. Aguilera JM. Temas en Tecnología de Alimentos. Vol. I. Mexico D. F.
CYTED- IPN 1997: 261-288. 2. Aiello SE, Mays A. Guía de referencias en el manual Merk de veterinaria.
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para regímenes especiales. Rev Cub Aliment Nutr 1998;(2):120-4. 5. Dallal GE. PC-SIZE Consultant. A program for sample size determinations.
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hipótesis: Pruebas de significación y pruebas de hipótesis. Barcelona Editorial Signo 2001:39.
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evaluación de su biodisponibilidad, para la prevención y corrección de la deficiencia de hierro (tesis doctoral)Barcelona:Universidad de Barcelona;2003
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35
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21. Walter T, Dalman PR, Pizarro F, Velozo L, Peña G, Bartholmey SJ, et al. Effectiveness of iron-fortified infant cereal in prevention of iron deficiency anemia. Pediatrics 1993;(5):976-82.
36
6. ANEXOS ANEXO 1
ESPECIFICACIONES DEL ALIMENTO BAJO EN HIERRO ADMINISTRADO A CERDAS FOLAPSA Cont. Neto 40 kg PRESENTACIÓN PELLET FOLECHON 3 TERMINADO Reg. SAGAR No. A-0226-004 Alimento para cerdos de 15 kg., a los 30 kg., de peso dar a liber acceso.
ANÁLISIS GARANTIZADO PARÁMETROS En 100 gr de muestra (%)
Proteína 20.0 min. Humedad 10.0 max. Cenizas 7.0 min
Grasa cruda 5.5 max Fibra cruda 3.0 max
E.L.N. 55.0 min
INGREDIENTES:
Granos molidos, pasta de oleaginosas, harina de pescado, leche en polvo, suero dulce de leche seco, grasa vegetal estabilizada, levadura de cerveza, fosfato de calcio (mono básico y di básico), carbonato de calcio, cloruro de sodio, sales de hierro, manganeso, cobre, yodo, zinc, selenio, antioxidante, vitaminas A, D3,E,K y complejo B hidrosoluble, riboflavina, ácido pantoténico, niacina, tiamina, ácido fólico, biotina, colina, metionina, lisina, treonina, saborizante y medicamento antidarreico y desparasitante.
Consulte al médico Veterinario Zootecnista RECOMENDACIÓN:
Para cerdos de 15 kg a los 30 kg., de peso dar a libre acceso
Alimento Consumo por etapa kg
Peso del cerdo kg Días de alimento acumulado
FOLECHOON-3
26.0 15.0 – 30.0 23 – 72
Fecha de elaboración 18 enero 2006 Lote No. Hecho en México
Elaborado por FOLAP, S.A. de C.V. Blvd.. Lázaro Cárdenas No. 1109 Tels 01 (352)522 05 08 y 522 13 50
Col Santa Fe La Piedad, Michoacán C.P. 59370
37
ANEXO 2
DISTRIBUCIÓN DE CERDOS EN LA GRANJA
8
8 7
7 6
6 5
5 4
4
3
3 2
2 1
1
9
9 10
10 11
11
12
12 13
22 14
23 15
24 22
31
21
30 20
29 19
28 18
27 17
26 16
25 23
32
24
33 25
34 26
35 27
36 28
37 29
38 30
39
38
Sulfato ferroso Hierro hemo
ANEXO 3 REGISTRO DE MEDICAMENTOS APLICADOS
Medicamento Fecha Motivo Dosis Prescripción Observaciones
39
ANEXO 4 SUPERVISIÓN DIARIA A CERDOS
No. Cerdo Alimento Pelo Piel Heces Comportamiento Observaciones 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38
Fecha___________ Hora______________ 39
40
ANEXO 5 FORMATO DE CAPTURA DEL PESO DE CERDOS
FECHA_____________
IDENTIFICACIÓN PESO OBSERVACIONES 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39
