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Clasificacin de los mtodos cromatogrficos en columna(4)
Cromatografa lquido slido:
permeacin en geles
Principios: Se basa en los diferentes tamaos de
las molculas cuando pasan a travs de una columna rellena con un
gel
Poros del gel
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Clasificacin de los mtodos cromatogrficos en columna(5)lquido
slido: Cromatografa por afinidad
La separacin depende de la interaccin reversible de las molculas
con el ligando especfico que se encuentra en la fase
estacionaria
Las molculas del analito se distribuyen entre un lquido (fase
mvil) y una superficie enlazada (fase estacionaria)
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Equipo de cromatografa lquida
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Depsito de fase mvil:
Generalmente estn equipados con contienen uno o ms depsitos de
500 ml para el solvente. A menudo se incluyen accesorios para
eliminar os gases disueltos y partculas es suspensin. Pues los
gases producen dispersin en las bandas y las partculas interfieren
con el funcionamiento del detector.
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Sistema de bombeo: Las exigencias que deben cumplir las
bombas
que se utilizan en cromatografa de lquidos son:
posibilidad de presin de hasta 480 atm, salida libre de
pulsaciones, caudales entre 0,1 y 10 ml/min, reproducibilidad de
caudales de 0,5% resistencia a la corrosin debida a los
solventes.
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Sistema de inyeccin Se puede inyectar la muestra mediante
una jeringa a travs de un diafragma, pero este sistema no es muy
reproducible. Otro sistema es usar dispositivos con un bucle de
bombeo que inyecta la muestra directamente en la cabeza de la
columna.
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Columnas: se construyen generalmente con tubos de acero
inoxidable, a veces de vidrio de paredes resistentes a presiones
menores de 48 atm. Tiene una longitud de 10 a 30 cm y un dimetro de
4 a 10 mm. Los empaquetamientos tpicos de columna son de un tamao
de partcula de 5 a 10m. Tienen generalmente 40000 a 60000
platos/m.
Tambin existen microcolumnas que tienen un dimetro de 1 a 4,6 mm
y una longitud de 3 a 7 cm, con empaquetamientos de 3 a 5 m y
tienen 100000 platos/m, son ms ventajosas por su rapidez y bajo
consumo de solvente. Los empaquetamientos pueden ser de slice,
almina, partculas de polmeros porosos que se recubre con una fina
pelcula orgnica que se una qumica o fsicamente a la superficie.
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Detectores: no hay detectores universales, como en
cromatografa gaseosa, el sistema de deteccin depende de la
naturaleza de la muestra.
Los ms empleados:UV-visible Indice de refraccin Florescencia
InfrarrojoAmperomtrico conductimtrico
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Aplicaciones
Conservantes antioxidantes Carbohidratos en bebidas Ismeros de
carotenoides Flavonoides y fenoles Lpidos Surfactantes no inicos
Nutrientes liposolubes
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Cromatografa plana
Papel poroso o capa delgada de slido poroso activo y la fase
mvil lquida asciende por capilaridad o desciende por gravedad
mantenindose el sistema dentro de una cmara cerrada Capa fina
Papel
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Cromatografa en lecho abiertoCapa fina
Fase estacionaria es una capa o pelcula de milmetros de espesor.
Formada por partculas unidas a una placa o soporte (aluminio,
vidrio o plstico)
Una ventaja de esta tcnica es que permite analizar diversas
muestras y estndares en forma simultnea.
Para muestras difciles de resolver se puede trabajar en sentido
perpendicular: desarrollo bidimensional
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Cromatografa en lecho abiertoCapa fina
El anlisis cualitativo se es el factor de retencin o ndice de
retencin
solventedelfrentealorigendelciadismanchalaaorigendelciadisRf
tan
tan==
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Cromatografa en lecho abiertoCapa fina
Los valores de Rf dependen de la composicin de la fase
estacionaria, temperatura, compuestos. Por lo general se corren
estndares sobre la misma placa para facilitar la identificacin.
Se usan reveladores para identificar
Clasificacin de los mtodos cromatogrficos en columna(4)
Cromatografa lquido slido:permeacin en gelesClasificacin de los
mtodos cromatogrficos en columna (5)lquido slido: Cromatografa por
afinidadEquipo de cromatografa lquidaDepsito de fase mvil:Sistema
de bombeo:Sistema de
inyeccinColumnas:Detectores:AplicacionesCromatografa
planaCromatografa en lecho abierto Capa finaCromatografa en lecho
abierto Capa finaCromatografa en lecho abierto Capa fina
