Clonación de genes

Acosta Mendez Edith DanielaCastillo Lora Eduardo Saul

Guerrero Ramirez Cintia AnaidIbarra Arellano Miguel Angel

Hernandez Jimenez Jenifer Lizbeth

Introducción

• La clonación de genes de bacterias y eucariontes «inferiores», como la levadura, es mas fácil que la clonación de genes de organismos superiores.

• Muchos de los primeros genes en clonarse fueron los que ya se han estudiado ampliamente como lac y trp.

Clonacion por Selección Directa

• Este proceso puede utilizarse para aislar genes específicos, EL DNA se digiere con una enzima de restricción. Este DNA cromosómico total puede unirse por ligación a un vector adecuado(clonacion rápida).

• Así el gen trpE se purifica y clona a partir de los muchos miles de otros genes y fragmentos de ADN que hay en el digerido cromosómico total.

Clonación de genes de organismos superiores

• Como no existían metodos para clonar genes de organismos superiores se desarrollo un método mas indirecto, muchos procedimientos se basan en el hecho de que los organismos superiores están diferenciados y algunos genes solo se expresan en pocos tejidos, en un alto nivel (10 al 30% de la proteína celular total)

• El ARNm puede ser purificado después quedara heterogéneo por que se habrán purificado muchos tipos distintos de ARNm y es muy difícil separa uno de otro

• Este principio solo se aplica al mensajero por que el ARN en general no puede clonarse. Debido a que es de una sola hebra y no es sustrato para enzimas de restricción eso puede superarse si se hacen copias de ADN del ARNm conocido como ADNc( complementario) y una vez sintetizado los fragmentos de ADN se pueden ligar a los extremos ahora se llamaran adaptadores y sin diseñados para tener un sitio particular para una enzima de restricción, de modo que el cDNA pueda clonarse fácilmente a un vector.

Hibridación de colonias

• Esta es una técnica eficaz para identificar, entre miles de colonias de bacterias, cualquier colonia que contenga secuencias de DNA complementarias a otro DNA o RNA ya purificado o sintetizado.

• Para el banco de cDNA aislado el único DNA complementario disponible es el cDNA mismo, que no es exactamente homogéneo

• Durante su síntesis este se hace radioactivo permitiéndonos usarlo como sonda.

Traducción in vitro del mRNA purificado

• Esta técnica muestra cuales proteínas pueden sintetizarse a partir de los diferentes mRNA. Entre estas se encuentra la proteína del gen de interés que puede identificarse con facilidad en un gel de poliacrilamida.

• Si el mRNA se mezcla con DNA purificado del plásmido de uno de los clones de cDNA , entonces el cDNA se hibridizara con el mRNA a partir del cual se sintetizo.

• El DNA del plásmido solo se hibridizara a un tipo de mRNA por que provino de un clon

• Esta estrategia funciona muy bien para los mRNA que son abundantes en un tipo de tejido especifico. Un buen ejemplo , y uno de los primeros cDNA eucariotes aislados, es el del mRNA de de la b-globina en mamiferos

Clonacion Genomica

• Una vez que se ha aislado el cDNA de un gen particular es relativamente sencillo clonar el gen cromosómico y este se conoce como clon genómico. El DNA cromosómico total se aísla y se purifica de cualquier tejido del organismo . A continuacion el DNA se corta en fragmentos de tamaño regular con enzimas de restriccion, se liga a un vector adecuado y se transforma en e.coli.

Gracias por su atención• Y ríanse un poco