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Cómo montar un
laboratorio de Patología
Molecular
ENRIQUE DE ALAVA
UNIVERSIDAD DE SALAMANCA-CSIC
Motivaciones
• Casi 5000 enfermedades tienen una base genética conocida
• Alta sensibilidad y especificidad de la mayoría de tests= utilidad diagnóstica
• Potencialidad para la automatización y la estandarización
• Cada vez hay más técnicas y kits disponibles (infecciosos y cáncer)
• Se combina fácil con la morfología
• Los precios están cayendo
•Papel en el diagnóstico clínico
•Para qué lo queremos (cartera de servicios)
•Diseño
•Gestión económica
•Dos herramientas logísticas de apoyo
•Aspectos legales
•Políticas de calidad
Cómo montar un laboratorio de
Patología Molecular
•Papel en el diagnóstico clínico
•Para qué lo queremos (cartera de servicios)
•Diseño
•Gestión económica
•Dos herramientas logísticas de apoyo
•Aspectos legales
•Políticas de calidad
Cómo montar un laboratorio de
Patología Molecular
Papel en el diagnóstico clínico
Integración
• Diagnóstico
• Cáncer
• Enfermedades infecciosas
• Enfermedades de fuerte base genética
• Inmunología clínica
• Patología Forense
• Investigación
Papel del laboratorio de Patología
Molecular
JANO
Problemática concreta en
PM Diagnóstica
Enf. genéticas
Aspectos éticos
Repercusiones familiares
Requerimiento de CI específico
Datos de carácter personal / familiar
Complejidad en el riesgo / beneficio
Enf. oncológicas
Muchos tipos de entidades
Muchos tipos de muestras
• Parafina, congelado, SP, otros
Integración de disciplinas
Enf. infecciosas
Gran volumen de determinaciones
Plataformas tecnológicas automatizadas
Alto costo de los kits comerciales
Tests de cuantificación
¿Qué hace falta en un laboratorio de
Patología Molecular Diagnóstica?
Integración Experiencia médica, científica y
técnica
Recursos Instalaciones, equipos y personal
Habilidades Organización, administración,
gestión, comunicación
•Papel en el diagnóstico clínico
•Para qué lo queremos (cartera de servicios)
•Diseño
•Gestión económica
•Dos herramientas logísticas de apoyo
•Aspectos legales
•Políticas de calidad
Cómo montar un laboratorio de
Patología Molecular
Cartera de servicios. ¿Cuál?
Necesidad clínica.
Requerimientos institucionales
Competencia del laboratorio:
Capacidad tecnológica
Experiencia
Viabilidad económica: Análisis de costes
Centros de referencia
•Papel en el diagnóstico clínico
•Para qué lo queremos (cartera de servicios)
•Diseño
•Gestión económica
•Dos herramientas logísticas de apoyo
•Aspectos legales
•Políticas de calidad
Cómo montar un laboratorio de
Patología Molecular
Diseño del laboratorio
Instalaciones
Equipamiento
Personal
Mejor integración
Ahorro en fungible (30%), equipos,
espacio y personal
Laboratorio de Patología Molecular
Hospital Patología Microbiología Hematología Microbiología Otros
Cortesía Dr. M. Morente
– Área pre-PCR (Zona limpia o área de preamplificación)
• Recepción de muestras, Extracción de ácidos nucleicos y Preparación de las
reacciones de PCR (cabina + UV)
– Área post-PCR (Zona sucia o área de post-amplificación)
• Amplificación por PCR, Análisis de productos
– El ideal: diferentes habitaciones con:
• Flujo de aire separado (filtros en el área pre-PCR)
• Diferentes presiones ( Positiva en la pre-, negativa en la post-)
• Al menos, separarlas lo más posible y cuidar el trafico de personas.
– Área neutra:
• Preparación de reactivos ( o duplicar para cada área)
• Proceso de datos (también válido en el área post-PCR)
Separación física de las áreas pre-
PCR y post-PCR
Separación física de las áreas pre-
PCR y post-PCR
– Duplicar equipos, pipetas, etc. No pasar de post- a pre-
– Agua destilada estéril para reactivos y soluciones
– Reactivos estériles o esterilizados
• Excepto primers, dNTPs y enzimas.
– Alicuotar reactivos
– Controles negativos y negativos
– Extremar las medidas de precaución en el manejo de la muestra
primaria.
– Guantes, cuchillas desechables, etc.
– Pipetear adecuadamente
– LIMPIEZA (Alcohol, …)
Sentido común
Equipamiento
• Depende de la cartera de servicios
• A menudo está diseñado o fabricado para
investigación
• Necesita un plan de mantenimiento
• Asegurarse del servicio post-venta
Equipamiento
El equipamiento pequeño es
tan importante como los
grandes equipos
Por ejemplo: calibración de
pipetas, etc.
Ojo a los
detalles
Equipamiento
Extracción de ác. nucleicos
PCR
Post PCR
Hibridación
Equipamiento
Extracción de ác. nucleicos
PCR
Post PCR
Hibridación
Manual
Termociclador
Electroforesis
Placa caliente
Equipamiento
Manual
Termociclador
Electroforesis
Placa caliente
Plataformas informáticas:
– Software de gestión
– Software de producción (licencias)
– Base de datos con datos personales... LOPD
Equipamiento
• Seleccionar al personal
• Capacitar al personal
– Legal
– Funcional
– Calidad
• Fidelizar al personal
Cómo poner a punto un nuevo
método diagnóstico
1. Antes de comenzar
• Considerar la necesidad clínica, el coste, la facilidad y los beneficios esperables de la prueba antes de invertir el tiempo necesario para diseñarla
• Seleccionar la técnica más adecuada
• Volumen de casos
• ¿Realizarla o derivarla?
2. Diseñar el método
• Seleccionar muestras referencia
(controles) positivos y negativos
• Reactivos que hace falta reconstituir o
adquirir
• Calibrar o programar los aparatos
• Formar al personal
3. Validar el método
• A través de un grupo de muestras de
características conocidas respecto al
parámetro que se va a medir.
• Calcular sensibilidad /especificidad
4. Ya se puede usar…
• Debe haber protocolo escrito para el
personal implicado
• Debe haber un formulario para la
realización de informes
• Explicar indicaciones de la prueba a los
clínicos que las van a solicitar (‘usuarios’)
5. Métodos diagnósticos ya
validados
• Sistemas para monitorizar variaciones entre lotes de un mismo reactivo.
• Establecer en qué tiempo debe quedar informada una prueba.
• Sistema para evaluar resultados discordantes con parámetros clínicos relevantes.
•Papel en el diagnóstico clínico
•Para qué lo queremos (cartera de servicios)
•Diseño
•Gestión económica
•Dos herramientas logísticas de apoyo
•Aspectos legales
•Políticas de calidad
Cómo montar un laboratorio de
Patología Molecular
•Papel en el diagnóstico clínico
•Para qué lo queremos (cartera de servicios)
•Diseño
•Gestión económica
•Dos herramientas logísticas de apoyo
•Aspectos legales
•Políticas de calidad
Cómo montar un laboratorio de
Patología Molecular
Dos herramientas logísticas
de apoyo
Para el diagnóstico
Y la investigación
Análisis de imagen
(=confianza en los números)
BIOBANK
-An establishment that manages
-A collection of biological samples-
-Plus clinical information
-Organized as a service
-With a clear design, and quality ethical criteria
-For biomedical research.
BIOBANK
-An establishment that manages
-A collection of biological samples-
-Plus clinical information
-Organized as a service
-With a clear design, and quality ethical criteria
-For biomedical research
-and diagnosis.
Clinical/image data
Biopsy/excision/cytology
Gross examination
Paraffin
-embedded
tissue
Diagnosis Banking
Frozen
tissue/cells
RT-PCR
FISH
EM H&E,
IHC FISH
cell culture
Take for
EM or
Metaphase
cytogenetics
-omics
Cell suspensions
1. From liquid tumors
2. From solid tumors
Cell Preservation
Slow freezing and
Quick unfreezing
Current situation (October 2007)
• Regional:
– Castilla y León
– Cataluña
– Andalucía
– Asturias
• CNIO:
– 24 Centers in 9 CCAA.
– Madrid
– Canarias
– Galicia
• Other networks.
Blood is an
excellent
source of DNA
National DNA Bank
Biobanks: Research and Diagnosis
PATIENT
SAMPLE BIOBANK MOLECULAR
ANALYSIS
LABORATORY
EXPERIMENTAL
RESULTS
DIAGNOSTIC &
THERAPEUTICS
MARKERS
TRANSLATIONAL
RESEARCH
MOLECULAR
PROFILING
•Papel en el diagnóstico clínico
•Para qué lo queremos (cartera de servicios)
•Diseño
•Gestión económica
•Dos herramientas logísticas de apoyo
•Aspectos legales
•Políticas de calidad
Cómo montar un laboratorio de
Patología Molecular
Legislación de referencia
Dx Genético
Dx Patológico Ley 14/2007 de Investigación
Biomédica
Ley 41/2002 de Autonomía del
paciente
Ley Orgánica 15/1999 de
Protección de datos de carácter
personal -LOPD
Desarrollos autonómicos
Bioseguridad, instalaciones, transporte de muestras, laboral
Legislación de referencia
Ley 14/2007 de Investigación
Biomédica
Dx Genético
Dx Patológico
Artículos 44 - 57 … Análisis genéticos
“Análisis genético”: procedimiento destinado a
detectar la presencia, ausencia o variantes de
uno o varios segmentos de material genético, lo
cual incluye las pruebas indirectas para detectar
un producto génico o un metabolito específico
que sea indicativo ante todo de un cambio
genético determinado. (Artículo 3)
•Papel en el diagnóstico clínico
•Para qué lo queremos (cartera de servicios)
•Diseño
•Gestión económica
•Dos herramientas logísticas de apoyo
•Aspectos legales
•Políticas de calidad
Cómo montar un laboratorio de
Patología Molecular
POBRE BUENA EXCELENTE
“Grado en el que un conjunto de características
inherentes de un producto, proceso o sistema CUMPLE
con los requisitos”
1. CALIDAD Calidad. Definiciones
“SISTEMA DE GESTIÓN para dirigir y
controlar una organización con respecto a
la CALIDAD”
“Parte del Sistema General de Gestión de una organización
que pretende garantizar la CALIDAD de los productos y/o
servicios suministrados”
2. SISTEMA GESTIÓN CALIDAD Gestión de calidad. Definiciones
Objetivo de calidad en PM
• Ofrecer diagnósticos reproducibles y
fiables
• Mejora continua de las actividades del
laboratorio
• No necesariamente la certificación
– Personal cualificado
– Normativa de calidad
Mejora de la calidad
• Conjunto de procedimientos para mejorar
la fiabilidad
– Evaluación de la calidad de los resultados
– Comunicación óptima de los resultados
– Capacitación y formación del personal
– Resolución de problemas
Para tener en cuenta al implantar
un sistema de gestión de calidad
• Una herramienta para mejorar nuestra gestión
• Nuestra labor es que la herramienta funcione y que la gestión mejore
• Un sistema mal diseñado generalmente entorpece la labor diaria, especialmente cuando sólo se busca la certificación.
Dos preguntas
• ¿Qué razones nos llevan a implantar un
sistema de gestión de calidad?
• ¿Qué referencias, o modelo de gestión,
necesitamos para lograr nuestros
objetivos?
Gestión de la información
• Almacenamiento en el sistema informático
• Alimentación ininterrumpida
• Volcado de información a sistemas
nuevos
• Sistema integral de información del
laboratorio (Instrumentos, aplicación de
gestión de AP, idem del BT, etc.)
Ley Orgánica de protección de
datos de carácter personal (LOPD)
• Seguridad de los datos (Art. 9)
• Deber de secreto (Art.10)
• Acceso de los datos por cuenta de terceros (Art. 12)
• Derechos de las personas: acceso, rectificación,
cancelación y oposición (Arts. 15 y 16)
• Creación, modificación o supresión de ficheros.
Notificación e inscripción registral (Arts. 20, 25 y 26)
Cumplir la LOPD puede significar
• redacción de documentos de seguridad
• funciones y obligaciones del personal
• registros de incidencias,
• control de acceso, identificación y autenticación,
• gestión de soportes, gestión de copias de
respaldo
• medidas para el control de acceso físico al
laboratorio, etc.
¿Consentimiento informado?
• Para cualquier análisis genético
• Consentimiento explícito y escrito
• Consentimiento para determinaciones
concretas
• Anteproyecto de Ley sobre pruebas
genéticas y biobancos
Control de riesgos laborales
• Bioseguridad muestras recibidas
• No exposición a agentes infecciosos (no comer, beber o almacenar comida)
• No pipetear con la boca
• Protección (guantes, bata, mascarillas).
• Campanas de extracción adecuadas,
• …
Auditoría interna de los resultados
Dos preguntas
• ¿Qué razones nos llevan a implantar un
sistema de gestión de calidad?
• ¿Qué referencias, o modelo de gestión,
necesitamos para lograr nuestros
objetivos?
LABORATORIO DE PATOLOGÍA MOLECULAR
SISTEMA DE GESTIÓN DE LA CALIDAD
NORMA ISO 9001:2000
Ha decidido implantar …
Según los requisitos …
Y pretende lograr la … CALIDAD TOTAL
CERTIFICACIÓN/ACREDITACIÓN DEL
LABORATORIO
P
C D
A CICLO DE DEMING
•Plan
•Do
•Check
•Act
2. SISTEMA GESTIÓN CALIDAD
Mejora Continua
Gestión de calidad
NORMA ISO 9001:2000
¿Qué no es y qué es ISO 9001:2000?
No es un texto de ley.
No es un texto que imponga los medios aplicables para
el cumplimiento de sus requisitos.
No es un texto que exija la implantación de un
sistema documental complejo y difícil de gestionar.
Es un instrumento de adhesión voluntaria.
Es un texto aplicable a cualquier tipo de organización
independientemente de cual sea su tamaño y su grado
de implantación en el mundo.
Es un texto que exige compromisos.
La norma ISO 9001:2000
• Es de aplicación a cualquier tipo de organización.
• Proporciona un modelo de gestión de calidad. Su implantación es un medio para demostrar que se proporcionan de forma coherente productos que satisfacen los requisitos del cliente y los reglamentarios aplicables.
• El reconocimiento a este modelo de gestión es la certificación, que se obtendrá por parte de las empresas registradoras (certificadoras) que son autorizadas por ENAC para llevar a cabo esta actividad.
La norma UNE-EN-ISO/IEC 17025
• Es de aplicación a los laboratorios de ensayo y calibración (químicos, generalmente no clínicos).
• Basada en el esquema de la norma ISO 9001, es el medio para garantizar la competencia técnica de las actividades de ensayo y/o calibración.
• El cumplimiento de los requisitos de esta norma implica el cumplimiento de los requisitos de la norma ISO 9001, pero no viceversa. Da por tanto un paso más que la anterior para el caso de los laboratorios.
• El reconocimiento a esta norma es la acreditación, que se obtiene por parte de ENAC.
La norma UNE-EN-ISO 15189
• Es de aplicación a los laboratorios diagnósticos (p.ej. de análisis clínicos)
• Proporciona los requisitos particulares relativos a la competencia técnica y calidad de los análisis que proporcionan información para el diagnóstico, prevención, o tratamiento de enfermedades en los seres humanos.
• Este sistema implica el cumplimiento del modelo ISO 9001 (pero no al revés)
• El sistema implantado según esta norma es acreditado por ENAC.
•Papel en el diagnóstico clínico
•Para qué lo queremos (cartera de servicios)
•Diseño
•Gestión económica
•Dos herramientas logísticas de apoyo
•Aspectos legales
•Políticas de calidad
Cómo montar un laboratorio de
Patología Molecular
Lab. PMD-BT
Teresa Hernández
Verónica Iglesias
Montse Arroyo
Susana Fraile
NEO-BNADN
Juan Manuel Sánchez
Lab. PMS
Ana Pastora Otero
Ana Sofía Martins
Carlos Mackintosh
Daniel Osuna
David Herrero
Gemma Caballero
José Luis Ordóñez
Juan Madoz
Victoria Sevillano
Universidad de Salamanca