CNPq UFAL UNIVERSIDADE FEDERAL DE ALAGOAS PRÓ … · Cada orientador só poderá solicitar, no máximo, 2 bolsas, de acordo com o Edital 2010-2011, e também, solicitar o cadastro

CNPq

UFAL

UNIVERSIDADE FEDERAL DE ALAGOAS PRÓ-REITORIA DE PESQUISA E PÓS-GRADUAÇÃO

COORDENAÇÃO DE PESQUISA

PROGRAMA INSTITUCIONAL DE BOLSAS DE INICIAÇÃO CIENTÍFICA

2010 – 2011

CNPq – UFAL - FAPEAL

TÍTULO DO PROJETO DE PESQUISA

Investigação das atividades antidiarréica e espasmolítica de plantas das famílias Solanaceae, Annonaceae e Euphorbiaceae

ORIENTADOR(A) COORDENADOR DO PROJETO:

FABIANA DE ANDRADE CAVALCANTE OLIVEIRA

UNIDADE ACADÊMICA Instituto de Ciências Biológicas e da Saúde

LOCAL DE EXECUÇÃO Laboratório de Fisiologia e Farmacologia Funcionais

FONTES DE FINANCIAMENTO

DATA DE INÍCIO: 01/08/2010 DATA DA CONCLUSÃO: 31/07/2011

GRANDE ÁREA DO CONHECIMENTO (CNPq):

Ciências Biológicas

ÁREA DO CONHECIMENTO (CNPq): Farmacologia

SUBÁREA DO CONHECIMENTO (CNPq): Farmacologia Geral

ESPECIALIDADE DO CONHECIMENTO (CNPq):

Farmacologia do Músculo Liso

NOME DO GRUPO DE PESQUISA no CNPq

Modelos Fisiológicos e Farmacológicos para o Estudo em Células Nervosas, Musculares e Cardíacas; e Grupo de Estudos em Plantas Medicinais – GEPLAM

É renovação de Projeto? SIM No total, quantas bolsas são solicitadas nesse projeto? DUAS No total, quantos colaboradores são solicitados no projeto? DOIS

Categoria Nome do

Orientador Bolsa 01 Bolsa 02 Estudantes

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Orientador Coordenador do Projeto

Fabiana de Andrade Cavalcante Oliveira

SIM SIM CNPq

NÃO SIM SIM FAPEAL NÃO 02 (DOIS)

Orientador 01

Orientador 02

Orientador 03

Orientador 04

Orientador 05

* preencher com: SIM ou NÃO ** preencher com: CNPq, UFAL ou FAPEAL *** preencher com: 01 ou 02

Cada orientador só poderá solicitar, no máximo, 2 bolsas, de acordo com o Edital 2010-2011, e também, solicitar o cadastro de até 2 colaboradores, explicitando, em ambos os casos a ordem de prioridade dos estudantes candidatos. Orientador Nome do orientador Nome do candidato à

bolsa 01 Nome do Candidato à bolsa 02

Nome do colaborador 01 Nome do colaborador 02

Orientador Coordenador do Projeto

Fabiana de Andrade Cavalcante Oliveira

LUCIANA OLIVEIRA LIMA

ANNE DAYSE SOARES DA SILVA

KAROLINE DE MELO E SILVA

JOSÉ CLEMENTINO NETO

Orientador 01

Orientador 02

Orientador 03

Orientador 04

Orientador 05

Em caso de projeto financiado pelo CNPq, FAPEAL, BNB ou instituição congênere, favor anexar aqui a cópia digital do termo de aprovação/concessão.

RESUMO

As plantas têm sido utilizadas como medicinais por milhares de anos, inicialmente eram utilizadas na forma de drogas cruas, tinturas, chás, pós e outras formulações. Em uma história mais recente, o uso das plantas como medicinais envolve o isolamento de compostos ativos, começando com o da morfina do ópio no século XIX. Atualmente, estima-se que aproximadamente 420.000 espécies existem na natureza. O Brasil é o país que possui a maior floresta tropical e, também, a maior diversidade vegetal do mundo, contando com mais de 55.000 espécies catalogadas de um total estimado entre 350.000 e 550.000. Com sua enorme biodiversidade apresenta-se com grande potencial para a descoberta de princípios ativos. O uso de plantas medicinais com atividade terapêutica tornou-se uma prioridade na área das Ciências Farmacêuticas buscando, cada vez mais, o crescimento e o aperfeiçoamento de técnicas e recursos humanos especializados que possam colaborar com as pesquisas para a descoberta de drogas capazes de contribuir para o tratamento e cura de doenças que acometem a nossa população. De maneira geral drogas espasmolíticas são aquelas que reduzem o tônus dos músculos lisos quer inibindo a sua contração ou induzindo o seu relaxamento. Há um grande interesse em se investigar drogas obtidas diretamente de plantas ou seus derivados que atuem na musculatura lisa. O reino vegetal apresenta-se subdividido em várias famílias e entre essas merecem destaques as famílias Solanaceae, Annonaceae e Euphorbiaceae que são objetos de estudo deste projeto. A família Solanaceae se destaca no nordeste do Brasil, pela utilização de várias espécies na alimentação humana, por exemplo, a batatinha (Solanum tuberosum L.), o tomate (Solanum lycopersicum L.), a berinjela (Solanum melongena L.) e a pimenta malagueta (Capsicum frutescens L.); e também como produtoras de drogas de interesse farmacológico, por exemplo a atropina (Atropa belladonna L.), a nicotina (Nicotiana tabacum L.). A família Annonaceae possui distribuição pantropical com cerca de 2.300 espécies, distribuídas em 120 gêneros. No Brasil, a família encontra-se bem representada com 26 gêneros e aproximadamente 260 espécies distribuídas nas florestas atlânticas e amazônicas, dentre estes gêneros escolhemos como objeto de estudo deste Projeto o gênero Rollinia. Já a família Euphorbiaceae é uma das mais extensas famílias de fanerógamos compreendendo cerca de 300 gêneros e 7600 espécies. É uma família cosmopolita, porém com especial afinidade pelas regiões tropical e subtropical do globo. Nela, destaca-se o gênero Croton, como seu segundo maior representante. Várias espécies destas famílias são utilizadas na medicina popular para o tratamento de diarréias e disenterias ou como antiespasmódicas, entre outros. De acordo com o levantamento bibliográfico realizado no Chemical Abstract, NAPRALERT (NAtural PRoducts ALERT), e vários sites de busca, verificou-se que as espécies escolhidas não apresentam estudo com atividades antidiarréica nem tão pouco espasmolítica. Com isso, o grande objetivo deste projeto é investigar a toxicidade aguda, além das atividades antidiarréica e espasmolítica de vários extratos obtidos das famílias Solanaceae, Annonaceae e Euphorbiaceae, entre eles os extratos brutos e suas frações obtidos de Solanum stramonifolium Jacq., Solanum decompositiflorum Sendtn., Rollinia leptopetala R. E. Fries e Croton echioides Baill. baseado no fato de que várias espécies dessas Famílias apresentam atividade antidiarréica e espasmolítica. Para os experimentos in vivo serão utilizados camundongos que serão divididos em grupos (n = 6) e tratados com solução salina, óleo de rícino, carvão ativado, loperamida, atropina, e os extratos e frações para assim tentarmos verificar um possível efeito antidiarréico. Já em experimentos in vitro, os órgãos isolados serão mantidos em condições experimentais apropriadas e estimulados por agentes contráteis de acoplamento eletromecânico e farmacomecânico, e as potências relaxantes das substâncias a serem testadas serão avaliadas pela determinação dos valores da concentração do extrato que produz 50 % de seu efeito máximo (CE50) e da Concentração de uma substância capaz inibir 50 % do efeito máximo de um agonista (CI50) na ausência e na presença de vários bloqueadores ou antagonistas farmacológicos. Este projeto tem a finalidade ulterior de orientar os colaboradores da Fitoquímica no sentido de isolar com mais segurança os princípios ativos responsáveis pelos efeitos observados a partir da monitoração dos extratos em estudo. Uma vez que estes princípios ativos sejam isolados e identificados, poderão ser estudados mais detalhadamente do ponto de vista de seus mecanismos de ações antidiarréica e espasmolítica.

INTRODUÇÃO

Nos últimos anos verifica-se um grande avanço científico envolvendo os estudos químicos e farmacológicos de plantas medicinais que visam obter novos compostos com propriedades terapêuticas, e com baixo potencial toxicológico.

Os produtos naturais são utilizados pela humanidade desde tempos imemoriais. A busca por alívio e cura de doenças pela ingestão de ervas e folhas talvez tenha sido uma das primeiras formas de utilização dos produtos naturais. A história do desenvolvimento das civilizações Oriental e Ocidental é rica em exemplos da utilização de recursos naturais na medicina, no controle de pragas e em mecanismos de defesa. A medicina tradicional chinesa desenvolveu-se com tal grandiosidade e eficiência que até muitas espécies e preparados vegetais medicinais são estudados na busca pelo entendimento de seu mecanismo de ação e no isolamento de princípios ativos (VIEGAS-JR; BOLZANI; BARREIRO, 2006).

Entre os diversos exemplos de substâncias oriundas de plantas podem-se mencionar a vincristina e a vimblastina, alcalóides isolados de Vinca rosea utilizados como agentes antitumorais; a forscolina, um diterpeno obtido de Coleus barbatus, que apresenta promissores efeitos contra hipertensão arterial, glaucoma, asma e certos tumores; a artemisinina, presente em Artemisia annua, que exerce potente atividade antimalárica; o diterpeno taxol, isolado de plantas do gênero Taxus, constituindo-se numa grande esperança para pessoas portadoras de câncer de ovário e de pulmão; a digoxina e a digitonina, glicosídios cardiotônicos obtidos da Digitalis, usados para insuficiência cardíaca; a pilocarpina isolada de Pilocarpus spp. (jaborandi), usada como miótico e no tratamento do glaucoma, todos considerados indispensáveis para o tratamento de doenças e que servem de matéria-prima para a síntese de novos fármacos (FOGLIO et al., 2006). Além da escopolamina e da atropina, isoladas inicialmente de Atropa belladona, que apresentam atividade antiespasmódica (BROWN; TAYLOR, 2006).

A escolha da planta para estudo químico e farmacológico baseada em seu uso na medicina popular é um dos meios que podem conduzir à descoberta de novos medicamentos ou de substâncias que possam servir de ferramentas farmacológicas ou como modelos para a síntese de novos fármacos. A necessidade de estimular pesquisas sobre plantas brasileiras, com vista à descoberta de substâncias com atividades fisiológicas, já se tornou evidente no meio científico brasileiro e no exterior. Este interesse tem sido mais expressivo em relação à flora nacional, devido à grande variedade de espécies e às mais diversas propriedades que muitas delas apresentam.

O músculo liso é o principal tipo de músculo que controla a maioria dos sistemas de órgãos ocos do corpo. A regulação/desregulação da contração do músculo desempenha um papel integral em muitos processos fisiológicos/patológicos. O interesse em investigar plantas com atividade sobre a musculatura lisa reside no fato de que substâncias espasmolíticas têm uma vasta aplicação em vários processos fisiopatológicos como asma, angina, hipertensão, trabalho de parto, disfunção erétil, espasmos intestinais ou uterinos, diarréias, disenterias, entre outros. Além disso, como os mecanismos de contração e relaxamento muscular envolvem mobilizações de íons Ca2+ e este íon medeia grande parte das ações das drogas no nosso organismo, o modelo do músculo liso se apresenta como meio relativamente simples para se investigar mecanismos de ação de substâncias que envolvem a sinalização do Ca2+.

A diarréia pode ser causada por um aumento da carga osmótica dentro do intestino; secreção excessiva de água e eletrólitos no lúmen do intestino; exsudação de proteínas e de fluido da mucosa; e alteração da motilidade intestinal resultando em trânsito rápido. Existem também várias etiologias, como vírus, bactérias, parasitas, intoxicação alimentar ou medicamentos, que podem conduzir a diarréia (ESTRADA-SOTO et al., 2007).

Nas vigências anteriores deste projeto, observou-se que vários extratos de Solanaceae, Annonaceae e Euphorbiaceae apresentaram uma atividade antidiarréica significante, com baixa ou nenhuma toxicidade em camundogos, além de alguns apresentarem atividade espasmolítica. Com isso, resolveu-se continuar com o estudo de mecanismo de ação antidiarréico, além de iniciar uma avaliação da atividade espasmolítica com outros extratos dessas famílias em íleo isolado de cobaia. Diante dessas premissas, o presente projeto tem como objetivos principais: 1) investigar uma possível atividade tóxica dos extratos brutos obtidos de Solanum stramonifolium Jacq., Solanum decompositiflorum Sendtn, Rollinia leptopetala R. E. Fries e de Croton echioides Baill.; 2) avaliar a atividade antidiarréica em camundongos, e 3) espasmolítica em íleo de cobaia; além de 4) elucidar o mecanismo de ação antidiarréico e espasmolítico desses extratos.

REVISÃO DE LITERATURA

A diarréia é uma das principais causas de mortalidade e morbidade em todo o mundo, sendo mais

comum em crianças, e caracteriza-se pelo seu aparecimento abrupto. É importante ressaltar que a diarréia atinge pessoas de qualquer faixa etária, mas é na infância que pode causar maior mortalidade. Ela é a terceira causa mais comum de doenças em crianças dos países em desenvolvimento, e é responsável por cerca de um terço de todas as hospitalizações entre os menores de cinco anos (SOUZA, 2000).

O espasmo é caracterizado por uma contração muscular, que pode ser revertida quando se impede alguma etapa do processo contrátil. No músculo liso um aumento na [Ca2+]i é a causa primária para a produção da contração. O cálcio é um importante segundo mensageiro que desempenha um papel essencial a uma grande variedade de processos biológicos, incluindo a regulação enzimática, expressão gênica, tráfego de proteína, proliferação celular, apoptose, e a coordenação do acoplamento excitação-contração do músculo (PAN; MA, 2003).

A natureza de forma geral tem produzido a maioria das substâncias orgânicas conhecidas. Entretanto, é o reino vegetal que tem contribuído de forma mais significativa para o fornecimento de substâncias úteis ao tratamento de doenças que acometem os seres humanos (PHILLIPSON; ANDERSON, 1989).

No Brasil estão presentes várias famílias de Angiospermas, dentre elas destacam-se a Solanaceae A. L. Jussieu que compreende 106 gêneros (OLMSTEAD et al., 1999) e 2.300 espécies, com distribuição cosmopolita, tendo a América do Sul como um dos principais centros de diversidade e endemismo (HUNZIKER, 2001). A mesma possui importância econômica, tanto por suas espécies serem utilizadas na alimentação humana, por exemplo, a batatinha (Solanum tuberosum L.), o tomate (Solanum lycopersicum L.), a berinjela (Solanum melongena L.) e a pimenta malagueta (Capsicum frutescens L.), bem como por serem fornecedoras de matéria-prima para produção de drogas de interesse farmacológico ou toxicológico, como a atropina (Atropa belladonna L.), a nicotina (Nicotiana tabacum L.), entre outras (AGRA, 2000).

O gênero Solanum L. é o mais representativo de Solanaceae, com cerca de 1400 espécies (BOHS, 2005), habitando regiões tropicais e subtropicais do mundo. No Nordeste do Brasil, Solanum está representado por cerca de 80 espécies, incluindo 20 que são endêmicas desta região, como Solanum paraibanum Agra, Solanum diamantinense Agra e Solanum jabrense Agra & Nee. No Brasil, muitas espécies de Solanum são conhecidas popularmente como “jurubeba” e usadas na medicina popular, principalmente na região Nordeste, para o tratamento de disfunções hepáticas e renais, inflamações, sífilis, úlceras externas, tuberculose, anemias (AGRA, 2000), e para o tratamento de doenças que envolvem a musculatura lisa, como por exemplo: Solanum americanum (HOPE; MASSEY; FOURNIER, 1993) e Solanum melongena (ZARGARI, 1992) são utilizadas para o tratamento da asma; Solanum dasyphyllum (COUNE; DENOEL, 1975) e Solanum incanum (HEDBERG et al., 1983) são utilizadas como antidiarréicas e a espécie Solanum pseudocapsicum (DHAR et al., 1973) é utilizada como antiespasmódica.

Neste gênero há uma grande ocorrência de metabólitos secundários, como flavonas, flavonóis e seus glicosídios (SILVA et al., 2003), assim como uma diversidade de saponinas esteroidais e glicoalcalóides de importância na resistência natural destas plantas contra muitas pestes (FERREIRA et al., 1996). Os metabólitos secundários têm sido extensivamente estudados devido, principalmente, às atividades biológicas apresentadas por muitas espécies.

Algumas espécies de Solanum são conhecidas por apresentarem efeito espasmolítico, como exemplo, Solanum dulcamara L. (BOYD, 1928), Solanum melongena L. (SHUM; CHIU, 1991), Solanum agrarium Sendtner, Solanum stipulaceum Roem. & Schult (SANTOS et al., 2003), Solanum jabrense Agra & Nee (CAVALCANTE, 2001), Solanum asterophorum Mart. (OLIVEIRA et al., 2006), Solanum paludosum L. (SILVA, 2005), Solanum asperum (COSTA, 2006; CORREIA, 2007; GARCIA, 2007) e Solanum paraibanum Agra (SILVA, 2007).

Desde 2004 a nossa equipe de pesquisa vem demonstrando o efeito de várias espécies de Solanum com atividade antidiarréica e sobre músculos lisos. Em vigências anteriores demonstramos o efeito espasmolítico de extratos obtidos de Solanum paraibanum Agra, Solanum asperum Rich., Solanum paludosum Moric. e Solanum asterophorum Mart. Diante disto, direcionamos essa fase do projeto para a

investigação de possíveis efeitos tóxico, antidiarréico e espasmolítico dos extratos brutos e/ou suas frações obtidos de Solanum stramonifolium e Solanum decompositiflorum.

Solanum stramonifolium Jacq. é um arbusto perene que mede até 3 metros de altura e é encontrado em bordas de mata e com comportamento de espécie pioneira (BEZERRA; MACHADO, 2003). Essa espécie é bastante conhecida, pois é frequentemente encontrada em terrenos baldios. Sua distribuição vai desde o norte da bacia amazônica, da Colômbia e Peru até as Guianas e no norte do Brasil (MARTINS; FIGUEIREDO, 1998), seus frutos são comestíveis (MURAKAMI et al., 1995) e suas raízes são utilizadas para constipação (BHANDARY; CHANDRASHEKAR; KAVERIAPPA, 1995).

A família Annonaceae possui distribuição pantropical com cerca de 2.300 espécies, distribuídas em 120 gêneros (SANTOS; SALATINO, 2000; MASS et al., 2001). No Brasil, a família encontra-se bem representada com 26 gêneros e aproximadamente 260 espécies distribuídas nas florestas atlânticas e amazônicas sendo que todos os gêneros têm ocorrência registrada na Amazônia (BARROSO, 1978; MASS et al., 2001). Vários membros desta família possuem um papel marcante e de grande interesse na composição da vegetação Brasileira. Sendo conhecidos pelos seus frutos comestíveis e medicinais (CORREA, 1984). Dentre estes gêneros escolhemos como objeto de estudo deste Projeto o gênero Rollinia.

O gênero Rollinia é constituído por 65 espécies, que ocorre, principalmente, na América do Sul e por poucas espécies no México, Caribe e América Central (LEBOEUF et al., 1982). Várias atividades biológicas têm sido evidenciadas com espécies do gênero Rollinia como atividade antitumoral e citotóxica (DABRAH; SNEDEN, 1983).

A espécie escolhida nesta etapa do estudo foi Rollinia leptopetala R. E. Fries que está distribuída geograficamente no Brasil pelos estados de Ceará, Paraíba, Piauí, Bahia, Minas Gerais e Rio de Janeiro, na região de vegetação de caatinga em altitudes de até mil metros, sendo caracterizada como uma planta endêmica por ocorrer em determinadas regiões. Apresenta-se como arbusto ou árvore, pois pode atingir até nove metros de altura. É conhecida popularmente no Brasil como “pinha brava”, “araticum”, “bananinha” e “pereiro” (MAAS; VESTRA, 1992). Na medicina popular é utilizada na região do cariri paraibano como digestiva (AGRA et al., 2007).

Já a família Euphorbiaceae é uma das mais extensas famílias de fanerógamos compreendendo cerca de 300 gêneros e 7600 espécies. É uma família cosmopolita, porém com especial afinidade pelas regiões tropical e subtropical do globo, principalmente da América e África (CRONQUIST, 1981), com hábito heterogêneo, onde se incluem árvores, arbustos, ervas e trepadeiras. Nela, destaca-se o gênero Croton, como seu segundo maior representante (FARNSWORTH et al., 1969), compreendendo 750 a 800 espécies de distribuição neotropical (JUDD et al., 1999). No Brasil ocorrem 72 gêneros e cerca de 1100 espécies, de hábito e habitat diferentes, e difundidas em todos os tipos de vegetação (BARROSO, 1991).

O gênero Croton abrange um número considerável de espécies no mundo, 750 a 1000 (WEBSTER, 1994), das quais 400 são reportadas na América tropical e subtropical. Na região Amazônica, especialmente na Bolívia, Brasil, Colômbia, Equador e Peru, é conhecido como “sangue-de-grado” ou “sangue-de-drago”. Algumas espécies são venenosas, apresentando glândulas na base das folhas e geralmente com exsudação de látex. Várias espécies de Croton têm sido empregadas na medicina popular em diversas doenças, como: diarréias, úlceras intestinais e estomacais, faringites, vírus da herpes, hemorróidas, brotoeja entre outras (PERSINO-PURDUE et al., 1979).

No Brasil já foram relatados efeitos vasorelaxantes para Croton nepetifolius Baill. (LAHLOU; LEAL-CARDOSO; MAGALHÃES, 2000). Croton cajucara Benth. (sacaca, sacaquinha, cajussara) é utilizada na medicina popular na região norte do Brasil para diversas finalidades, entre elas: antidiarréica, antiinflamatória, tratamento do diabetes, inflamação do fígado, rins e bexiga e para baixar o teor de colesterol no sangue (ICHIBARA et al., 1992).

Na vigência anterior deste projeto verificou-se que Croton grewioides Baill. apresenta uma marcante atividade antidiarréica. Com isso resolvemos iniciar o estudo com Croton echioides Baill.

Croton echioides é um arbusto e está restrita ao semiárido brasileiro, crescendo em vegetação de caantiga (Alagoas, Bahia, Ceará, Minas Gerais, Paraíba, Pernambuco, Piauí, Rio Grande do Norte), cerrado (Piauí) e em áreas transicionais de caatinga-cerrado (Piauí) (SILVA; SALES; CARNEIRO-TORRES, 2009).

OBJETIVOS

GERAL:

Contribuir para o estudo farmacológico das famílias Solanaceae, Annonaceae e Euphorbiaceae,

em particular dos gêneros Solanum, Rollinia e Croton, com a finalidade ulterior de descobrir drogas

potencialmente terapêuticas, ou que sirvam de ferramentas farmacológicas para o melhor entendimento

dos processos fisiopatológicos envolvendo a musculatura lisa.

ESPECÍFICOS:

Avaliar o potencial citotóxico dos extratos etanólicos brutos de Solanum stramonifolium Jacq.(SS-

EtOH), Solanum decompositiflorum Sendtn (SD-EtOH), Rollinia leptopetala R. E. Fries (RL-EtOH) e

Croton echioides Baill. (CE-EtOH) e/ou de suas frações em eritrócitos de rato;

Estabelecer a toxicidade aguda através da determinação da dose que mata 50 % dos animais

testados, dose letal (DL50) dos extratos SS-EtOH, SD-EtOH, RL-EtOH e CE-EtOH e/ou de suas frações

em camundongos;

Investigar os efeitos dos extratos SS-EtOH, SD-EtOH, RL-EtOH e CE-EtOH e/ou de suas frações

em modelo de diarréia induzida por óleo de rícino em camundongos;

Avaliar o efeito dos extratos SS-EtOH, SD-EtOH, RL-EtOH e CE-EtOH e/ou de suas frações no

trânsito gastrintestinal de camundongos;

Analisar o efeito dos extratos SS-EtOH, SD-EtOH, RL-EtOH e CE-EtOH e/ou de suas frações

sobre o conteúdo intestinal de camundongos;

Inquirir o efeito espasmolítico e/ou espasmogênico dos extratos SS-EtOH, SD-EtOH, RL-EtOH e

CE-EtOH e/ou de suas frações em íleo de cobaia;

Elucidar possíveis mecanismos de ações antidiarréica e espasmolítica dos extratos SS-EtOH,

SD-EtOH, RL-EtOH e CE-EtOH e/ou de suas frações.

METODOLOGIA

Este Projeto será desenvolvido no Laboratório de Fisiologia e Farmacologia Funcionais do ICBS/UFAL.

Serão utilizados ratos Wistar (Rattus norvegicus), pesando entre 250-350 g, camundongums swiss (Mus

muscullus) pesando entre 25-35g e cobaias (Cavia porcellus) de ambos os sexos (350-500 g), todos

provenientes do Biotério Central da UFAL. Antes dos experimentos os animais serão mantidos sob

rigoroso controle alimentar com uma dieta balanceada a base de ração tipo “pellets” com livre acesso a

água, com ventilação e temperatura (22 ± 1 °C) controladas. Todos os experimentos serão realizados no

período de 08h00 as 18h00. Os procedimentos experimentais foram submetidos e aprovados pelo Comitê

de Ética em Pesquisa (CEP) da UFAL (parecer n° 010489/2009-15), e todos seguem as normas

estabelecidas na Lei nº 11.794, de 8/10/08 que estabelece procedimentos para o uso científico de animais.

Drogas a serem avaliadas: extrato etanólico bruto obtido dos frutos maduros, verdes, raízes e partes

aéreas de Solanum stramonifolium; extrato etanólico bruto obtido das raízes e das partes aéreas de S.

decompositiflorum; extrato etanólico obtido das cascas do caule de Croton echioides e extrato etanólico

bruto obtido do caule de Rollinia leptopetala, todos serão cedidos pelos colaboradores da área de

Fitoquímica, Dra. Tania Maria S. da Silva (UFRPE), Dr. Josean F. Tavares e Dr. Marcelo S. da Silva,

ambos da UFPB.

1 Avaliação Toxicológica: Efeito dos extratos SS-EtOH, SD-EtOH, RL-EtOH e CE-EtOH e/ou de

suas frações em eritrócitos de rato

Esse procedimento seguirá a metodologia descrita por Rangel et al. (1997). Os ratos pesando entre 200 e

300 g serão mantidos em jejum por um período de 12 horas, tendo acesso à água ad libitum antes do

início dos experimentos. Após este período uma amostra de sangue será coletada, misturada a uma

solução de NaCl (0,9 %) e CaCl2 (10 mM) e centrifugada a 5000 rpm durante 3 minutos para obtenção

dos eritrócitos. Separadamente, os extratos serão adicionados a suspensão de eritrócitos em várias

concentrações e em preparações diferentes. O controle negativo será montado com suspensão de

eritrócitos mais NaCl e CaCl2 (0 % de hemólise) e o controle positivo com suspensão de eritrócitos mais

100 µL de Triton X-100 1 % (100 % de hemólise). A hemólise será quantificada por espectrofotometria a

540 nm e expressa em percentagem.

2 Triagem Farmacológica Comportamental e Determinação da DL50 dos Extratos SS-EtOH,

SD-EtOH, RL-EtOH e CE-EtOH e/ou de suas Frações em Camundongos:

Este procedimento seguirá a metodologia descrita por Almeida et al. (1999), onde serão utilizados 10

camundongos, sendo 5 machos e 5 fêmeas, que após jejum de 12 horas, serão tratados com solução salina

0,9% (10 mL/kg) mais cremofor ou extratos tanto por via oral (v.o.) como por via intraperitoneal (i.p.).

Os animais serão ainda avaliados por 24, 48 e 72 horas com a finalidade de verificar se haverá alguma

morte e assim determinar a DL50 dos extratos.

3 Avaliação da Atividade Antidiarréica dos Extratos SS-EtOH, SD-EtOH, RL-EtOH E CE-EtOH

e/ou de suas Frações em Camundongos

3.1 Diarréia induzida por óleo de rícino em camundongos: será utilizado o método descrito por

Awouters et al. (1978). Os camundongos, em jejum de 12 horas, serão divididos em grupos (n = 6) e

tratados com solução salina mais cremofor (10 mL/kg), loperamida (10 mg/Kg), extratos (várias doses).

Após 30 min de tratamento, será administrado 0,4 mL de óleo de rícino, agente indutor da diarréia, por

via oral. Após este período, será realizada a contagem do número de bolos fecais e observado a

consistência dos bolos fecais por até 4 horas, classificando-os de acordo com a consistência.

3.2 Trânsito intestinal normal em camundongos: será utilizado o método descrito por Rao et al.

(1997). Onde os camundongos (jejum de 12 horas) serão divididos em grupos (n = 6) e tratados com

solução salina mais cremofor (10 mL/kg), atropina (2 mg/Kg) e extratos (várias doses). Após 30

minutos, será administrado 0,01 mL/grama de animal de carvão ativado (5 %) em goma arábica (0,5 %) e

os animais eutanasiados por deslocamento cervical, 30 minutos após a administração do carvão ativado.

A cavidade abdominal será aberta e o intestino delgado removido. Será determinado o comprimento total

do intestino delgado de cada animal e a distância percorrida pelo marcador. Os resultados serão expressos

em porcentagem da distância percorrida pelo marcador em relação ao comprimento total do intestino.

3.3 Acúmulo de fluido intestinal induzido por óleo de rícino em camundongos: este método será

realizado como descrito por Dicarlo et al. (1994). Os camundongos (jejum 24 horas e livre acesso a água)

serão tratados com solução salina 0,9% 10 mL/kg mais cremofor e os extratos (várias doses) através de

gavagem. Após 30 minutos, será administrado 2 mL de óleo de rícino/animal. Após 30 minutos da

administração do óleo, os camundongos serão eutanasiados, onde o pequeno intestino será dissecado,

sendo expulso o conteúdo em uma proveta para medir o volume do fluido. Os valores de DE50 serão

calculados por regressão não linear.

4 Investigação do Efeito Espasmolítico dos Extratos SS-EtOH, SD-EtOH, RL-EtOH e CE-EtOH

e/ou de suas Frações em Íleo Isolado de Cobaia: será utilizado o método descrito por Daniel et al.

(2001). Os extratos serão pré-incubados por 15 minutos em preparações diferentes, e em várias

concentrações, e a inibição da contração induzida por 10-6 M de carbacol ou de histamina será avaliada

por comparação das respostas antes (100 %) e após a adição da droga-teste à cuba. A CI50 será calculada

por regressão não linear. Os extratos também serão adicionados de maneira cumulativa sobre o

componente tônico induzido por 40 mM de KCl ou 10-6 M de carbacol ou histamina em preparações

diferentes, e em várias concentrações, e os valores de CE50 serão obtidos por regressão não linear a partir

de cada curva individual de relaxamento induzida por esses produtos.

ANÁLISE ESTATÍSTICA

Os resultados serão expressos como a percentagem da média e o e.p.m e analisados estatisticamente

empregando-se o teste “t” ou análise de variância (ANOVA) “one-way” seguido do teste de Bonferroni,

onde os valores de p < 0,05 serão considerados significantes. Os valores de CE50, CI50 e DE50 serão

calculados por regressão não-linear para todos os experimentos realizados. Todos os dados serão

analisados pelo programa GraphPad Prism (GraphPad Software Inc., San Diego CA, USA).

REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

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PLANO DE TRABALHO INDIVIDUAL E DIFERENCIADO ∗

CANDIDATO A BOLSA PRIORIDADE 1 PARA O ORIENTADOR INDICADO

TÍTULO: “Monitoração das atividades tóxica e antidiarréica de Solanum stramonifolium Jacq. (Solanaceae)”

ORIENTADOR: FABIANA DE ANDRADE CAVALCANTE OLIVEIRA

ESTUDANTE: LUCIANA OLIVEIRA LIMA

TÓPICOS A SEREM DESENVOLVIDOS, DE MODO A FICAR CLARA A CONEXÃO ENTRE O PLANO DE TRABALHO DO ESTUDANTE E OS OBJETIVOS ESPECÍFICOS DO PROJETO DO ORIENTADOR: 1. Levantamento bibliográfico do gênero Solanum, bem como, da espécie Solanum stramonifolium;

2. Atualização dos estudos teóricos e práticos dos mecanismos envolvidos na diarréia e na contração e

relaxamento do músculo liso;

3. Adaptação aos novos protocolos experimentais empregados durante o desenvolvimento do projeto;

4. Apresentação e discussão de seminários enfatizando a análise de trabalhos científicos nas áreas da

fisiologia, toxicologia e farmacologia geral e molecular;

5. Investigação do potencial citotóxico dos extratos etanólicos brutos obtidos dos frutos maduros

(SSfm-EtOH), frutos verdes (SSfv-EtOH), raízes (SSr-EtOH) e partes aéreas (SSp-EtOH) de Solanum

stramonifolium em eritrócitos de rato;

6. Avaliação da toxicidade aguda através da determinação da DL50 dos extratos SSfm-EtOH, SSfv-EtOH,

SSr-EtOH e SSp-EtOH em camundongos;

7. Investigação dos efeitos antidiarréicos dos extratos SSfm-EtOH, SSfv-EtOH, SSr-EtOH e SSp-EtOH em

modelo de diarréia induzida por óleo de rícino em camundongos;

8. Avaliação do efeito dos extratos SSfm-EtOH, SSfv-EtOH, SSr-EtOH e SSp-EtOH no trânsito

gastrintestinal de camundongos;

9. Análise do efeito dos extratos SSfm-EtOH, SSfv-EtOH, SSr-EtOH e SSp-EtOH sobre o conteúdo

intestinal de camundongos;

10. Elucidar possíveis mecanismos de ação antidiarréica do extrato que apresentar maior potência;

11. Análise estatística e interpretação dos resultados obtidos;

12. Relatório Parcial e Final;

13. Apresentação oral/painel em congressos nacionais, internacionais e no Encontro Acadêmico de

Iniciação Científica da UFAL com data a ser definida.

∗ É recomendável que o Plano de Trabalho relacione as atividades e/ou ações a serem executadas aos objetivos específicos da pesquisa. Não esquecer de colocar o nome de cada candidato de acordo com a prioridade para cada orientador. Reproduzir essas duas folhas quantas vezes necessárias para atender a todos os orientadores do projeto.

I - DEFINIÇÃO DOS OBJETIVOS DO TRABALHO DO ESTUDANTE;

1. Contribuir com o estudo farmacológico da família Solanaceae, em particular, da espécie

Solanum stramonifolium Jacq.;

2. Avaliar o potencial citotóxico dos extratos etanólicos brutos SSfm-EtOH, SSfv-EtOH, SSr-EtOH

e SSp-EtOH em eritrócitos de rato;

3. Determinar a dose letal 50 % (DL50) dos extratos SSfm-EtOH, SSfv-EtOH, SSr-EtOH e

SSp-EtOH em camundongos;

4. Avaliar os efeitos dos extratos SSfm-EtOH, SSfv-EtOH, SSr-EtOH e SSp-EtOH em modelo

diarréia; sobre a motilidade intestinal e a secreção de fluidos em camundongos;

5. Elucidar um possível mecanismo de ação antidiarréico do extrato que apresentar maior

potência;

II - DETALHAMENTO DA METODOLOGIA CORRESPONDENTE:

Efeito dos extratos etanólicos SSfm-EtOH, SSfv-EtOH, SSr-EtOH e SSp-EtOH em eritrócitos de rato

Esse procedimento seguirá a metodologia descrita por Rangel et al. (1997). Os ratos pesando

entre 200 e 300 g serão mantidos em jejum por um período de 12 horas, tendo acesso à água ad libitum

antes do início dos experimentos. Após este período uma amostra de sangue será coletada, misturada a

uma solução de NaCl (0,9 %) e CaCl2 (10 mM) e centrifugada a 5000 rpm durante 3 minutos para

obtenção dos eritrócitos. Separadamente, os extratos serão adicionados a suspensão de eritrócitos em

várias concentrações e em preparações diferentes. O controle negativo será montado com suspensão de




Triagem farmacológica comportamental e determinação da DL50 dos extratos SSfm-EtOH,

SSfv-EtOH, SSr-EtOH e SSp-EtOH em camundongos

Nestes experimentos seguirá a metodologia descrita por Almeida et al. (1999), onde serão

utilizados 10 camundongos, sendo 5 machos e 5 fêmeas, que após jejum de 12 horas, eram tratados com

solução salina 0,9% (10 mL/kg) mais cremofor ou dos extratos nas doses de 2500 e 5000 mg/kg via oral

(v.o.) ou 1000 e 2000 mg/kg por via intraperitoneal (i.p.). Uma série de parâmetros comportamentais

serão observados durante as 4 primeiras horas. A ocorrência de alguma alteração comportamental dos

animais, em decorrência do tratamento, permitiria inferir uma relação com a atividade no sistema nervoso

central e, consequentemente, sinais de toxicidade. Os animais serão ainda avaliados por 24, 48 e 72 horas

com a finalidade de verificar se haveria alguma morte e assim determinar a DL50 dos extratos. Além

disso, com a realização deste ensaio, será possível inferir as doses dos extratos que serão utilizadas nos

estudos farmacológicos posteriores.

Diarréia induzida por óleo de rícino em camundongos

Será utilizado o método descrito por Awouters et al. (1978). Os camundongos, em jejum de 12 horas,

serão divididos em grupos (n = 6) e tratados com solução salina (10 mL/kg) mais cremofor (controle

negativo), 10 mg/Kg de loperamida (controle positivo), extratos (várias doses). Após 30 minutos dos

tratamentos, será administrado 0,01 mL de óleo de rícino por grama de animal por via oral. Após a

administração do agente indutor da diarréia, será realizada a contagem do número de bolos fecais e

observado a consistência dos bolos fecais por até 4 horas, classificando-os de acordo com a consistência

em líquidos ou sólidos.

Trânsito intestinal normal em camundongos

Será utilizado o método descrito por Rao et al., 1997. Onde os camundongos (jejum de 12 horas) serão

divididos em grupos (n = 6) e tratados com solução salina (10 mL/kg) cremofor (controle negativo), 2

mg/kg de atropina (controle positivo) e extratos (várias doses). Após 30 minutos, será administrado 0,01

mL/grama de animal de carvão ativado (5%) em goma arábica (0,5%) e os animais eutanasiados por

deslocamento cervical, 30 minutos após a administração do carvão ativado. A cavidade abdominal será

aberta e o intestino delgado removido. Será determinado o comprimento total do intestino delgado de

cada animal e a distância percorrida pelo marcador. Os resultados serão expressos em porcentagem da

distância percorrida pelo marcador em relação ao comprimento total do intestino delgado.

Acúmulo de fluido intestinal induzido por óleo de rícino em camundongos

Este método será realizado como descrito por Dicarlo et al. (1994). Os camundongos machos, em jejum

de 24 horas e com livre acesso a água, serão divididos em grupos (n = 6) e tratados com solução salina

0,9% 10 mL/kg mais cremofor (controle negativo) e os extratos (várias doses) através de gavagem. Após

30 minutos, será administrado 2 mL de óleo de rícino por animal. Após 30 minutos da administração do

óleo, os camundongos serão eutanasiados, onde o pequeno intestino será dissecado por fora, do piloro até

o ceco, sendo expulso o conteúdo em uma proveta para medir o volume do fluido. Os valores de DE50

serao calculados como descrito anteriormente.

Análise Estatística

Os resultados serão expressos como a média e o e.p.m e analisados estatisticamente empregando-se o

teste “t” ou análise de variância (ANOVA) “one-way” seguido do teste de Bonferroni, onde os valores de

p < 0,05 serão considerados significantes. Os valores de DE50 serão calculados por regressão não-linear

para todos os experimentos realizados. Todos os dados serão analisados pelo programa GraphPad Prism

versão (GraphPad Software Inc., San Diego CA, USA).

III - CRONOGRAMA DE ATIVIDADES DIMENSIONADO PARA 1 (UM) ANO.

Meses 2010 2011 ATIVIDADES

AGO SET OUT NOV DEZ JAN FEV MAR ABR MAI JUN JULLevantamento bibliográfico x x x x x x x x x x x x Atualização dos estudos teóricos e práticos dos mecanismos envolvidos na diarréia e na contração e relaxamento do músculo liso

x x

Adaptação aos novos protocolos experimentais

x x x

Apresentação e discussão de seminários

x x x x x x x x x x x x

Investigação do potencial citotóxico dos extratos SSfm-EtOH, SSfv-EtOH, SSr-EtOH e SSp-EtOH em eritrócitos de rato;

x x

Avaliação da toxicidade aguda através da determinação da DL50 dos extratos SSfm-EtOH, SSfv-EtOH, SSr-EtOH e SSp-EtOH

x x

Investigação do efeito antidiarréico dos extratos SSfm-EtOH, SSfv-EtOH, SSr-EtOH e SSp-EtOH em modelo de diarréia induzida por óleo de rícino em camundongos;

x x

Avaliação do efeito antidiarréico dos extratos SSfm-EtOH, SSfv-EtOH, SSr-EtOH e SSp-EtOH no trânsito gastrintestinal de camundongos

x x

Análise do efeito antidiarréico dos extratos SSfm-EtOH, SSfv-EtOH, SSr-EtOH e SSp-EtOH sobre o conteúdo intestinal de camundongos

x x

Elucidar possíveis mecanismos de ações

x x x

Análise estatística x x x x x x Relatório Parcial x Relatório Final x Apresentação oral/painel em congressos

CANDIDATO A BOLSA PRIORIDADE 2 PARA O ORIENTADOR INDICADO

TÍTULO: “Investigação das atividades tóxica, espasmolítica e antidiarréica de Croton echioides BAILL. (Euphorbiaceae)”


ESTUDANTE: ANNE DAYSE SOARES DA SILVA

TÓPICOS A SEREM DESENVOLVIDOS, DE MODO A FICAR CLARA A CONEXÃO ENTRE O PLANO DE TRABALHO DO ESTUDANTE E OS OBJETIVOS ESPECÍFICOS DO PROJETO DO ORIENTADOR: 1. Levantamento bibliográfico do gênero Croton, bem como, da espécie Croton echioides Baill.;






5. Investigação do potencial citotóxico do extrato etanólico bruto obtido das cascas do caule de Croton

echioides (CE-EtOH) em eritrócitos de rato;

6. Avaliação da toxicidade aguda através da determinação da DL50 do extrato CE-EtOH em

camundongos;

7. Investigação dos efeitos antidiarréicos do extrato CE-EtOH em modelo de diarréia induzida por óleo

de rícino em camundongos;

8. Avaliação do efeito do extrato CE-EtOH no trânsito gastrintestinal de camundongos;

9. Análise do efeito do extrato CE-EtOH sobre o conteúdo intestinal de camundongos;

10. Investigar a atividade espasmolítica do extrato CE-EtOH em íleo de cobaia;






1. Contribuir com o estudo farmacológico da família Euphorbiaceae, em particular, da espécie

Croton echioides Baill.;

2. Avaliar o potencial citotóxico do extrato CE-EtOH em eritrócitos de rato;

3. Determinar a dose letal 50 % (DL50) do extrato CE-EtOH em camundongos;

4. Avaliar os efeitos do extrato CE-EtOH em modelo diarréia; sobre a motilidade intestinal e a

secreção de fluidos em camundongos;

5. Investigar um possível efeito espasmolítico do extrato CE-EtOH em íleo de cobaia;


Efeito do extrato etanólico obtido do caule de Croton echioides (CE-EtOH) em eritrócitos de rato










Triagem farmacológica comportamental e determinação da DL50 do extrato etanólico obtido do

caule de Croton echioides (CE-EtOH) em camundongos



solução salina 0,9% (10 mL/kg) mais cremofor ou extratos nas doses de 2500 e 5000 mg/kg via oral
































serão calculados como descrito anteriormente.

Efeito espasmolítico do extrato etanólico obtido do caule de Croton echioides (CE-EtOH) em íleo de

cobaia

O animal será mantido em jejum por 18 horas (dando-lhe somente água nesse período) e

sacrificado por concussão cerebral seguida por secção dos vasos cervicais. O abdômen será aberto e um

segmento do íleo retirado e colocado em solução nutritiva de Krebs modificado a 37 °C sob aeração com

carbogênio. Após cuidadosa dissecação, o segmento do íleo será secionado em fragmentos de 2 a 3 cm de

comprimento, suspensos individualmente em cubas de vidro e deixados em repouso por 30 minutos,

tempo necessário para perfeita estabilização da preparação.

Após a estabilização do tecido, serão obtidas duas contrações fásicas de magnitude similares,

controles, induzidas por concentrações submáximas (10-6 M) de carbacol ou histamina, em preparações

diferentes. Em seguida o tecido será incubado por 15 minutos com o extrato em concentrações crescentes.

Após este período, o tecido será contraído com carbacol ou com histamina, ainda na presença do extrato.

A percentagem de inibição será calculada comparando-se a amplitude média das curvas antes (100 %) e

após a aplicação do extrato à cuba.




p < 0,05 serão considerados significantes. Os valores de CI50 e de DE50 serão calculados por regressão

não-linear para todos os experimentos realizados. Todos os dados serão analisados pelo programa

GraphPad Prism versão (GraphPad Software Inc., San Diego CA, USA).



AGO SET OUT NOV DEZ JAN FEV MAR ABR MAI JUN JULLevantamento bibliográfico x x x x x x x x x x x x Atualização dos estudos teóricos e práticos dos mecanismos envolvidos na diarréia e na contração e relaxamento do músculo liso

x x


x x x


x x x x x x x x x x x x

Investigação do potencial citotóxico do extrato CE-EtOH em eritrócitos de rato;

x x

Avaliação da toxicidade aguda através da determinação da DL50 do extrato CE-EtOH

x x

Investigação dos efeitos antidiarréicos do extrato CE-EtOH em modelo de diarréia induzida por óleo de rícino em camundongos;

x x

Avaliação do efeito antidiarréico do extrato CE-EtOH no trânsito gastrintestinal de camundongos

x x

Análise do efeito antidiarréico do extrato CE-EtOH sobre o conteúdo intestinal de camundongos

x x

Investigar a atividade espasmolítica do extrato CE-EtOH em íleo de cobaia

x x x


CANDIDATO A COLABORADOR PRIORIDADE 1 PARA O ORIENTADOR INDICADO

TÍTULO: “Investigação das atividades tóxica e antidiarréica de Rollinia leptopetala R. E. Fries (Annonaceae)”


ESTUDANTE: KAROLINE DE MELO E SILVA

TÓPICOS A SEREM DESENVOLVIDOS, DE MODO A FICAR CLARA A CONEXÃO ENTRE O PLANO DE TRABALHO DO ESTUDANTE E OS OBJETIVOS ESPECÍFICOS DO PROJETO DO ORIENTADOR:

1. Levantamento bibliográfico do gênero Rollinia, bem como, da espécie Rollinia leptopetala R. E.

Fries;






5. Investigação do potencial citotóxico do extrato etanólico bruto obtido do caule de Rollinia

leptopetala (RL-EtOH) e de suas frações: hexânica (RL-Hex), clorofórmica (RL-CHCl3) e acetato

de etila (RL-AcOEt) em eritrócitos de rato;

6. Avaliação da toxicidade aguda através da determinação da DL50 do extrato RL-EtOH e de suas

frações RL-Hex, RL-CHCl3 e RL-AcOEt em camundongos;

7. Investigação dos efeitos antidiarréicos do extrato RL-EtOH e de suas frações RL-Hex, RL-CHCl3 e

RL-AcOEt em modelo de diarréia induzida por óleo de rícino em camundongos;

8. Avaliação do efeito do extrato RL-EtOH e de suas frações RL-Hex, RL-CHCl3 e RL-AcOEt no

trânsito gastrintestinal de camundongos;

9. Análise do efeito do extrato RL-EtOH e de suas frações RL-Hex, RL-CHCl3 e RL-AcOEt sobre o

conteúdo intestinal de camundongos;

10. Elucidar possíveis mecanismos de ação antidiarréica do extrato/fração que apresentar maior

potência;






1. Contribuir com o estudo farmacológico da família Annonaceae, em particular, da espécie

Rollinia leptopetala.;

2. Avaliar o potencial citotóxico do extrato RL-EtOH e de suas frações RL-Hex, RL-CHCl3 e RL-

AcOEt em eritrócitos de rato;

3. Determinar a dose letal 50 % (DL50) do extrato RL-EtOH e de suas frações RL-Hex, RL-CHCl3

e RL-AcOEt em camundongos;

4. Avaliar os efeitos do extrato RL-EtOH e de suas frações RL-Hex, RL-CHCl3 e RL-AcOEt em

modelo diarréia; sobre a motilidade intestinal e a secreção de fluidos em camundongos;

5. Elucidar um possível mecanismo de ação antidiarréico do extrato que apresentar maior

potência;


Efeito do extrato RL-EtOH e de suas frações RL-Hex, RL-CHCl3 e RL-AcOEt em eritrócitos de

rato





obtenção dos eritrócitos. Separadamente, os extrato/frações serão adicionados a suspensão de eritrócitos

em várias concentrações e em preparações diferentes. O controle negativo será montado com suspensão

de eritrócitos mais NaCl e CaCl2 (0 % de hemólise) e o controle positivo com suspensão de eritrócitos

mais 100 µL de Triton X-100 1 % (100 % de hemólise). A hemólise será quantificada por

espectrofotometria a 540 nm e expressa em percentagem.

Triagem farmacológica comportamental e determinação da DL50 do extrato RL-EtOH e de suas

frações RL-Hex, RL-CHCl3 e RL-AcOEt em camundongos



solução salina 0,9% (10 mL/kg) mais cremofor ou dos extrato/frações nas doses de 2500 e 5000 mg/kg

via oral (v.o.) ou 1000 e 2000 mg/kg por via intraperitoneal (i.p.). Uma série de parâmetros

comportamentais serão observados durante as 4 primeiras horas. A ocorrência de alguma alteração

comportamental dos animais, em decorrência do tratamento, permitiria inferir uma relação com a

atividade no sistema nervoso central e, consequentemente, sinais de toxicidade. Os animais serão ainda

avaliados por 24, 48 e 72 horas com a finalidade de verificar se haveria alguma morte e assim determinar

a DL50 dos extratos. Além disso, com a realização deste ensaio, será possível inferir as doses dos extratos

que serão utilizadas nos estudos farmacológicos posteriores.




negativo), 10 mg/Kg de loperamida (controle positivo), extrato/frações (várias doses). Após 30 minutos

dos tratamentos, será administrado 0,01 mL de óleo de rícino por grama de animal por via oral. Após a







mg/kg de atropina (controle positivo) e extrato/frações (várias doses). Após 30 minutos, será administrado

0,01 mL/grama de animal de carvão ativado (5%) em goma arábica (0,5%) e os animais eutanasiados por








0,9% 10 mL/kg mais cremofor (controle negativo) e os extrato/frações (várias doses) através de

gavagem. Após 30 minutos, será administrado 2 mL de óleo de rícino por animal. Após 30 minutos da

administração do óleo, os camundongos serão eutanasiados, onde o pequeno intestino será dissecado por

fora, do piloro até o ceco, sendo expulso o conteúdo em uma proveta para medir o volume do fluido. Os

valores de DE50 serão calculados como descrito anteriormente.




p < 0,05 serão considerados significantes. Os valores de DE50 serão calculados por regressão não-linear

para todos os experimentos realizados. Todos os dados serão analisados pelo programa GraphPad Prism

versão (GraphPad Software Inc., San Diego CA, USA).



AGO SET OUT NOV DEZ JAN FEV MAR ABR MAI JUN JULLevantamento bibliográfico x x x x x x x x x x x X Atualização dos estudos teóricos e práticos dos mecanismos envolvidos na diarréia e na contração e relaxamento do músculo liso

x x


x x x


x x x x x x x x x x x X

Investigação do potencial citotóxico do extrato RL-EtOH e de suas frações RL-Hex, RL-CHCl3 e RL-AcOEt em eritrócitos de rato;

x x

Avaliação da toxicidade aguda através da determinação da DL50 do extrato RL-EtOH e de suas frações RL-Hex, RL-CHCl3 e RL-AcOEt

x x

Investigação do efeito antidiarréico do extrato RL-EtOH e de suas frações RL-Hex, RL-CHCl3 e RL-AcOEt em modelo de diarréia induzida por óleo de rícino em camundongos;

x x

Avaliação do efeito antidiarréico do extrato RL-EtOH e de suas frações RL-Hex, RL-CHCl3 e RL-AcOEt no trânsito gastrintestinal de camundongos

x x

Análise do efeito antidiarréico do extrato RL-EtOH e de suas frações RL-Hex, RL-CHCl3 e RL-AcOEt sobre o conteúdo intestinal de camundongos

x x

Elucidar possíveis mecanismos de ações

x x X

Análise estatística x x x x x X Relatório Parcial x Relatório Final X Apresentação oral/painel em congressos

PLANO DE TRABALHO INDIVIDUAL E DIFERENCIADO ∗

CANDIDATO A COLABORADOR PRIORIDADE 2 PARA O ORIENTADOR INDICADO

TÍTULO: “Estudo farmacológico comparativo entre as raízes e as partes aéreas de Solanum decompositiflorum Sendtn. (Solanaceae)”


ESTUDANTE: JOSÉ CLEMENTINO NETO

TÓPICOS A SEREM DESENVOLVIDOS, DE MODO A FICAR CLARA A CONEXÃO ENTRE O PLANO DE TRABALHO DO ESTUDANTE E OS OBJETIVOS ESPECÍFICOS DO PROJETO DO ORIENTADOR: 1. Levantamento bibliográfico do gênero Solanum, bem como, da espécie Solanum decompositiflorum

Sendtn;






5. Investigação do potencial citotóxico dos extratos etanólicos brutos obtidos das raízes (SDr-EtOH) e

das partes aéreas (SDp-EtOH) de Solanum decompositiflorum em eritrócitos de rato;

6. Avaliação da toxicidade aguda através da determinação da DL50 dos extratos SDr-EtOH e SDp-EtOH

em camundongos;

7. Investigação dos efeitos antidiarréicos dos extratos SDr-EtOH e SDp-EtOH em modelo de diarréia

induzida por óleo de rícino em camundongos;

8. Avaliação do efeito dos extratos SDr-EtOH e SDp-EtOH no trânsito gastrintestinal de camundongos;

9. Análise do efeito dos extratos SDr-EtOH e SDp-EtOH sobre o conteúdo intestinal de camundongos;

10. Investigar a atividade espasmolítica dos extratos SDr-EtOH e SDp-EtOH em íleo de cobaia;





∗ É recomendável que o Plano de Trabalho relacione as atividades e/ou ações a serem executadas aos objetivos específicos da pesquisa. Não esquecer de colocar o nome de cada candidato de acordo com a prioridade para cada orientador. Reproduzir essas duas folhas quantas vezes necessárias para atender a todos os orientadores do projeto.


1. Contribuir com o estudo farmacológico da família Solanaceae, em particular, da espécie

Solanum decompositiflorum Sendtn.;

2. Avaliar o potencial citotóxico dos extratos SDr-EtOH e SDp-EtOH em eritrócitos de rato;

3. Determinar a dose letal 50 % (DL50) dos extratos SDr-EtOH e SDp-EtOH em camundongos;

4. Avaliar os efeitos dos extratos SDr-EtOH e SDp-EtOH em modelo diarréia; sobre a motilidade

intestinal e a secreção de fluidos em camundongos;

5. Investigar um possível efeito espasmolítico dos extratos SDr-EtOH e SDp-EtOH em íleo de

cobaia;


Efeito dos extratos etanólicos brutos obtidos das raízes (SDr-EtOH) e das partes aéreas (SDp-EtOH)

de Solanum decompositiflorum em eritrócitos de rato










Triagem farmacológica comportamental e determinação da DL50 dos extratos etanólicos brutos

obtidos das raízes (SDr-EtOH) e das partes aéreas (SDp-EtOH) de Solanum decompositiflorum em

camundongos



solução salina 0,9% (10 mL/kg) mais cremofor ou extratos nas doses de 2500 e 5000 mg/kg via oral
































serão calculados como descrito anteriormente.

Efeito espasmolítico dos extratos etanólicos brutos obtidos das raízes (SDr-EtOH) e das partes

aéreas (SDp-EtOH) de Solanum decompositiflorum em íleo de cobaia

O animal será mantido em jejum por 18 horas (dando-lhe somente água nesse período) e

sacrificado por concussão cerebral seguida por secção dos vasos cervicais. O abdômen será aberto e um

segmento do íleo retirado e colocado em solução nutritiva de Krebs modificado a 37 °C sob aeração com

carbogênio. Após cuidadosa dissecação, o segmento do íleo será secionado em fragmentos de 2 a 3 cm de

comprimento, suspensos individualmente em cubas de vidro e deixados em repouso por 30 minutos,

tempo necessário para perfeita estabilização da preparação.

Após a estabilização do tecido, serão obtidas duas contrações fásicas de magnitude similares,

controles, induzidas por concentrações submáximas (10-6 M) de carbacol ou histamina, em preparações

diferentes. Em seguida o tecido será incubado por 15 minutos com o extrato em concentrações crescentes.

Após este período, o tecido será contraído com carbacol ou com histamina, ainda na presença do extrato.

A percentagem de inibição será calculada comparando-se a amplitude média das curvas antes (100 %) e

após a aplicação do extrato à cuba.




p < 0,05 serão considerados significantes. Os valores de CI50 e de DE50 serão calculados por regressão

não-linear para todos os experimentos realizados. Todos os dados serão analisados pelo programa

GraphPad Prism versão (GraphPad Software Inc., San Diego CA, USA).



AGO SET OUT NOV DEZ JAN FEV MAR ABR MAI JUN JULLevantamento bibliográfico x x x X x x x x x x x x Atualização dos estudos teóricos e práticos dos mecanismos envolvidos na diarréia e na contração e relaxamento do músculo liso

x x


x x x


x x x X x x x x x x x x

Investigação do potencial citotóxico dos extratos SDr-EtOH e SDp-EtOH em eritrócitos de rato;

x x

Avaliação da toxicidade aguda através da determinação da DL50 dos extratos SDr-EtOH e SDp-EtOH

x x

Investigação dos efeitos antidiarréicos dos extratos SDr-EtOH e SDp-EtOH em modelo de diarréia induzida por óleo de rícino em camundongos;

X x

Avaliação do efeito antidiarréico dos extratos SDr-EtOH e SDp-EtOH no trânsito gastrintestinal de camundongos

x x

Análise do efeito antidiarréico dos extratos SDr-EtOH e SDp-EtOH sobre o conteúdo intestinal de camundongos

x x

Investigar a atividade espasmolítica dos extratos SDr-EtOH e SDp-EtOH em íleo de cobaia

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CNPq UFAL UNIVERSIDADE FEDERAL DE ALAGOAS PRÓ … · Cada orientador só poderá solicitar, no máximo, 2 bolsas, de acordo com o Edital 2010-2011, e também, solicitar o cadastro