Contenido de Fenoles y Flavonoides

7/25/2019 Contenido de Fenoles y Flavonoides

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UNIVERSIDAD NACIONAL DE SAN CRISTBALDE HUAMANGA

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLGICAS

ESCUELA DE FORMACIN PROFESIONAL DE FARMACIA YBIOQUMICA

Contenido de fenoles totales y flavonoides totales enOenothera rosea Ait yawar suqu, Baccharis salicifolia

R&Pchilca y Piper elongatum Vahl matico . Ayacucho - 2014.

TESIS PARA OPTAR EL TTULO PROFESIONAL DEQUMICO FARMACETICA

PRESENTADO POR:

Bach. VALDEZ PALOMINO, ROSARIO DEL PILAR

Ayacucho-Per2014


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ii

DEDICATORIA

A Dios, mi madre, mi hermana, misabuelos Inocencio y Justina, a JuanCarlos y mis tos Lucho, Gladys, Zayda,Orlando, Percy y Nancy por ser mismejores guas durante mi formacin

profesional, este es el fruto de susconsejos.


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iii

AGRADECIMIENTO

A mi Alma Mater Universidad Nacional de San Cristbal de Huamanga, por haberme

albergado cinco aos en sus aulas y por ser la forjadora de excelentes profesionales

al servicio de la sociedad.

A la Facultad de Ciencias Biolgicas, en especial a la Escuela de Formacin

Profesional de Farmacia y Bioqumica, y a los excelentes docentes que en ella

laboran, los cuales contribuyeron en mi formacin y por brindarme las herramientas

necesarias para mi desenvolvimiento profesional.

Un reconocimiento especial a mis asesores Mg. Q.F. Enrique Aguilar Felices y Q.F.

Roxana Len Arons, por su generosidad al brindarme la oportunidad de recurrir a su

capacidad y experiencia que hicieron posible el desarrollo y culminacin de esta

investigacin.

A todas las personas por el apoyo brindado en la ejecucin de mi trabajo y por estar

siempre conmigo.


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NDICE GENERALPgina

DEDICATORIA ii AGRADECIMIENTO iiiNDICE GENERAL ivNDICE DE TABLAS vNDICE DE FIGURAS viNDICE DE ANEXOSRESUMEN

viix

I. INTRODUCCIN 1II. MARCO TERICO 4

2.1. Antecedentes del estudio 42.2. Clasificacin taxonmica segn el sistema Cronquist A. 1988 62.3. Oenothera rosea Aityawar suqu, Piper elongatum Vahlmatico y Baccharis salicifolia R&P chilca.

7

2.4. Compuestos fenlicos 9III. MATERIALES Y MTODOS 143.1. Ubicacin del trabajo de investigacin 143.2. Definicin de poblacin y muestra 143.3. Diseo metodolgico para la recoleccin de datos 153.3.1. Recoleccin de la muestra 153.3.2. Preparacin del extracto hidroalcohlico 153.3.3. Tamizaje fitoqumico 153.3.4. Determinacin del contenido de fenoles totales 163.3.5. Determinacin del contenido de flavonoides totales 163.4. Anlisis de datos 17

IV. RESULTADOS 18V. DISCUSIN 23VI. CONCLUSIONES 29VII. RECOMENDACIONES 30

VII. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS 31


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v

ANEXOS 35

NDICE DE TABLAS Pgina

Tabla 1. Metabolitos secundarios presentes en los extractoshidroalcohlicos de las hojas y flores de Oenotherarosea Ait yawar suqu, Baccharis salicifolia R&Pchilca y Piper elongatum Vahl matico.

19

Tabla 2. Certificado de identificacin botnica de Oenotherarosea Ait yawar suqu, Baccharis salicifolia R&P

chilca y Piper elongatum Vahl matico.

36

Tabla 3. Anlisis de varianza del porcentaje de fenoles totalesde Oenothera rosea Ait yawar suqu, Piperelongatum Vahl matico y Baccharis salicifolia R&Pchilca.

58

Tabla 4.

Tabla 5.

Tabla 6.

Tabla 7.

Tabla 8.

Prueba de Tukey para el porcentaje de fenoles totalesde Oenothera rosea Ait yawar suqu, Piperelongatum Vahl matico y Baccharis salicifolia R&Pchilca.

Anlisis de varianza del porcentaje de fenoles totalesde Oenothera rosea Aityawar suqu, Piper elongatum Vahl matico y Baccharis salicifolia R&P chilca. Prueba de Tukey para el porcentaje de flavonoidestotales de Oenothera rosea Ait yawar suqu, Piperelongatum Vahl matico y Baccharis salicifolia R&P

chilca .Porcentaje de fenoles y flavonoides totales ydesviacin estndar de Oenothera rosea Ait yawar

59

60

61

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63


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vi

suqu, Piper elongatum Vahl matico y Baccharissalicifolia R&P chilca .Matriz de consistencia

NDICE DE FIGURAS

Pgina

Figura 1. Estructura del cido benzoico 10Figura 2. Estructura del cido cinmico 11Figura 3.Figura 4.

Ncleo bsico de los flavonoidesClasificacin de los flavonoides

1212

Figura 5. Porcentaje de fenoles totales presentes en Oenotherarosea Ait yawar suqu, Baccharis salicifolia R&Pchilca y Piper elongatum Vahl matico.

20

Figura 6. Porcentaje de flavonoides totales presentes enOenothera rosea Ait yawar suqu, Baccharissalicifolia R&P chilca y Piper elongatum Vah.matico.

21

Figura 7. Variacin del porcentaje de fenoles y flavonoidestotales presentes en Oenothera rosea Ait yawarsuqu, Baccharis salicifolia R&P chilca y Piperelongatum Vahl matico.

22


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vii

NDICE DE ANEXOS Anexo 1. Certificado de identificacin botnica de Oenothera

rosea Ait yawar suqu. Ayacucho 2014. 37

Anexo 2.

Anexo 3.

Anexo 4.

Certificado de identificacin botnica dePiper elongatumVahl matico. Ayacucho -2014.Certificado de identificacin botnica de Baccharissalicifolia R&P chilca. Ayacucho - 2014Flujograma del procedimiento de cuantificacin defenoles y flavonoides totales de Oenothera rosea Aityawar suqu, Baccharis salicifolia R&P chilca y Piperelongatum Vahl matico.

38

39

40

Anexo 5. Hojas y flores de Oenothera rosea Ait yawar suqu (a),Piper elongatum Vahl matico (b) y Baccharis salicifolia

R&Pchilca (c).

41

Anexo 6. Hojas y flores trituradas de Oenothera rosea Ait yawarsuqu (a), Baccharis salicifolia R&P chilca (b) y Piperelongatum Vahl matico (c).

42


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viii

Anexo 7. Extraccin hidroalcohlica mediante el equipo Soxhlet delas hojas y flores trituradas de Oenothera rosea Aityawar suqu (a), Baccharis salicifolia R&P chilca (b) y

Piper elongatum Vahl matico (c).

43

Anexo 8. Concentracin de los extractos hidroalcohlicos de lasHojas y flores de Oenothera rosea Ait yawar suqu (a),Baccharis salicifolia R&P chilca (b) y Piper elongatumVahl matico (c).

44

Anexo 9. Extractos secos de las hojas y flores de Oenothera rosea Aityawar suqu (a), Baccharis salicifolia R&Pchilca (b)y Piper elongatum Vahl matico (c).

45

Anexo 10. Reconstitucin con metanol de los extractos de las hojasy flores de Oenothera rosea Ait yawar suqu, Baccharissalicifolia R&P chilca y Piper elongatum Vahl matico.

46

Anexo 11.

Anexo 12.

Esquema de las reacciones para la identificacin demetabolitos secundarios de los extractoshidroalcoholicos de Oenothera rosea Ait. yawar suqu,Baccharis salicifolia R&P chilca y Piper elongatumVahl. matico .Marcha fitoqumica e identificacin de catequinas de losextractos hidroalcoholicos de Piper elongatum Vahl.matico (a,2), Oenothera rosea Ait yawar suqu (b,3) yBaccharis salicifolia R&P chilca (c,1).

47

48

Anexo 13. Reactivos usados en la determinacin del contenido defenoles totales y flavonoides totales de las hojas y flores

de Oenothera rosea Ait yawar suqu, Baccharissalicifolia R&P chilca y Piper elongatum Vahl matico.

49

Anexo 14. Preparacin de los estndares de quercetina y cidocafico a diferentes concentraciones.

50


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ix

Anexo 15. Soluciones de quercetina y cido cafico, despus deagregar los reactivos correspondientes para obtener lacurva de calibracin de fenoles totales y flavonoides

totales.

51

Anexo 16. Lectura de las soluciones de quercetina y cido caficoen el espectrofotmetro UV, en el Laboratorio deFarmacognosia. Ayacucho-2014.

52

Anexo 17. Preparacin de reactivos usados para la determinacinde fenoles totales y flavonoides totales. (a) Bicarbonatode sodio al 7 por ciento, (b) Folin Ciocalteu, (c) Nitrito de

sodio al 5 por ciento, (d) Cloruro de alumnio al 10 porciento, (e) Hidrxido de sodio 1M.

53

Anexo 18. Preparacin para determinar fenoles totales deOenothera rosea Aityawar suqu, Piper elongatum Vahlmatico y Baccharis salicifolia R&P chilca.

54

Anexo 19. Lectura en el espectrofotmetro UV de las soluciones deOenothera rosea Aityawar suqu, Piper elongatum Vahlmatico y Baccharis salicifolia R&P chilca paradeterminar fenoles totales.

55

Anexo 20. Preparacin para determinar flavonoides totales deOenothera rosea Aityawar suqu, Piper elongatum Vahlmatico y Baccharis salicifolia R&P chilca.

56

Anexo 21. Lectura en el espectrofotmetro UV de las soluciones deOenothera rosea Aityawar suqu, Piper elongatum Vahlmatico y Baccharis salicifolia R&P chilca para

determinar flavonoides totales.

57

Anexo 22. Curva de calibracin utilizando cido cafico comoestndar a 550 nm. Ayacucho-2014.

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xi

matico y Baccharis salicifolia R&P chilca, d urante los meses de marzo a agostodel 2014. Las muestras fueron recolectadas en el distrito de Huamanguilla y laprovincia de Cangallo del departamento de Ayacucho. La identificacin taxonmica

se realiz en el Herbarium Huamangensis de la UNSCH segn el sistema deClasificacin de Cronquist. A. El extracto hidroalcohlico se obtuvo mediante elmtodo Soxhlet. Se realiz el tamizaje fitoqumico de los extractos hidroalcohlicosmediante reacciones de coloracin y precipitacin segn el procedimiento descritopor Miranda y Cuellar (2000). El contenido de flavonoides totales y fenoles totales serealiz mediante los mtodos de Zhishen et al y Singletn y Rossi. Es as que secompara el contenido de fenoles y flavonoides totales de las tres muestras, enequivalentes de cido cafico y quercetina. Baccharis salicifolia R&P chilca,

present 12.62%, Oenothera rosea Ait. yawar suqu 6.42% y Piper elongatum Vahl.matico 3.88% de fenoles totales. El contenido de flavonoides fue Oenothera rosea

Ait. yawar suqu 8.32%, Piper elongatum Vahl. matico 6.21% y Baccharis salicifoliaR&P chilca 9.96%.Se concluye que Baccharis salicifolia R&P chilca present cantidades superioresde fenoles y flavonoides totales frente a Oenothera rosea Ait yawar suqu, y Piperelongatum Vahl matico. Palabras clave: Compuestos fenlicos, flavonoides, Oenothera rosea Ait, Piperelongatum Vahl, Baccharis salicifolia R&P.


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1

I. INTRODUCCIN

Hay unas ocho mil plantas naturales con compuestos fenlicos y aproximadamente

la mitad de este nmero son flavonoides 1. Los fenoles poseen un amplio espectro de

actividades bioqumicas como antioxidante, antimutagnica, anticancergenos 2. Los

compuestos fenlicos son el grupo ms grande de los fitoqumicos que representan

la mayor parte de la actividad antioxidante en las plantas 3.

Los flavonoides son el grupo qumico ms grande de origen natural, que se producen

en partes de diferentes plantas tanto en estado libre como glucsidos. Se encuentran

al tener muchas actividades como; antiulcerosos, antiartrticos, anticancergenas,

etc4. Las flavonas y flavonoles son los ms ampliamente distribuidos de todos los

compuestos fenlicos5.

Adems, los compuestos fenlicos son metabolitos esenciales para el crecimiento y

reproduccin de las plantas y actan como agentes protectores frente a patgenos,

siendo secretados como mecanismo de defensa a condiciones de estrs; tales como

infecciones, radiaciones UV, entre otros6. Los flavonoides, una clase de metabolitos

aromticos ampliamente distribuidos en la naturaleza, poseen una gran variedad de

efectos biolgicos entre los que sobresale la actividad antiinflamatoria7.


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2

Baccharis salicifolia R&P chilca, se utiliza tradicionalmente como antiinflamatorio en

varios pases, como: Colombia, Ecuador, Per, Argentina y Bolivia8,9.

De una revisin profunda de los estudios qumicos y biolgicos realizados en estaespecie se reporta la actividad antiinflamatoria in vitro sobre varios mediadores de

inflamacin10. Sobre esta base se realizaron varios estudios que demostraron la

presencia de flavonoides en las partes areas de la planta 11, 12.

Oenothera rosea Aityawar suqu, se utiliza ampliamente en la medicina tradicional

peruana por sus efectos antiinflamatorios, antitusgeno, antirreumtico, etc 13.El

estudio fitoqumico del extracto etanlico de Oenothera rosea Ait yawar suqu ,reporta la presencia de metabolitos secundarios como: flavonoides, taninos,

cumarinas, quinonas y saponinas 14. Estudios realizados han informado que los

resultados del edema subplantar, inducido por carragenina, demuestran que el

extracto hidroalcohlico de yawar suqu posee efecto antiinflamatorio14.

Piper elongatum Vahl. matico, en la medicina tradicional es usado como

antiinflamatorio, hemosttico, antisptico13. Se ha reportado que en su composicinpresenta aceites esenciales, cido artnico, resinas, sustancias amargas (maticina),

taninos, alcaloides, saponinas, flavonoides triterpenoides 15.

Las especies Baccharis salicifolia R&P chilca, Oenothera rosea Ait yawar suqu y

Piper elongatum Vahl matico, son usados ampliamente en el departamento de

Ayacucho, por su actividad antiinflamatoria, es por tal motivo que se propuso realizar

la presente investigacin para determinar el contenido de fenoles y flavonoidestotales; compuestos que estn estrechamente relacionados con la actividad

antiinflamatoria.


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3

Objetivo General:

Realizar la cuantificacin de fenoles totales y flavonoides totales de Oenothera

rosea Ait yawar suqu, Baccharis salicifolia R&P chilca y Piper elongatum

Vahl matico.

Objetivos Especficos:

Identificar los metabolitos secundarios presentes en los extractos

hidroalcohlicos de Oenothera rosea Ait yawar suqu, Baccharis salicifolia

R&P chilca y Piper elongatum Vahl matico.

Realizar la cuantificacin de fenoles totales de Oenothera rosea Ait yawar

suqu, Baccharis salicifolia R&P chilca y Piper elongatum Vahl matico.

Realizar la cuantificacin de flavonoides totales Oenothera rosea Ait yawar

suqu, Baccharis salicifolia R&P chilca y Piper elongatum Vahl matico.

Realizar la comparacin del contenido de fenoles totales y flavonoides totales

de Oenothera rosea Ait yawar suqu, Baccharis salicifolia R&P chilca y

Piper elongatum Vahl matico.


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4

II. MARCO TERICO

2.1. Antecedentes del estudio

Garcia et al (2012), realizaron el estudio denominado compuestos fenlicos totales,

flavonoides y actividad antioxidante en las flores de Cratagus spp de Mxico. La

actividad antioxidante, se midi con el mtodo DPPH (2,2-difenil-1-picrilhidrazilo) y los

flavonoides se identificaron con HPLC, la quercetina-3-0-glucsido, quercetina-3-

ramnosido, quercetina-3-0-ramnosil-(1,6)-glucsido y quercetina-3-0-ramnosil-(1,2)-

ramnosil-(1,6)-glucsido. El contenido de fenlicos fu mayor que los flavonoides16.

Espinoza et al (2010,) realizaron el estudio denominado determinacin de fenoles

totales, fructanos y pungencia en seis cultivares de ajos ( Allium sativum L.) en el Per,

teniendo como resultado que los niveles de fenoles totales, fructanos, cido pirvico

(pungencia) y pH varan en un rango de 0,307-0,626 mg de cido glico por gramo

de muestra fresca, 16,13 - 22,50 gramos de fructano por 100 gramos de muestra

fresca; 55,13 - 86,21 mol de cido pirvico por gramo de muestra fresca, y 6,01-6,10

de pH17.

Llano et al (2009), evaluaron la actividad antioxidante y contenido de fenoles totales,

en vinos de origen nacional (Argentina), los principales compuestos fenlicos; son el


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5

cido cafico, epicatequina, cido glico, cianidina, malvidina-3-glucsido, rutina,

mircetina, quercetina, resveratrol. Estos fenoles, adems de contribuir a las

caractersticas organolpticas del vino, poseen en mayor o menor grado propiedades

antioxidantes18.

Palomino et al (2009), determinaron el contenido de fenoles y evaluacin de la

actividad antioxidante de propleos recolectados en el departamento de Antioquia

(Colombia). Las determinaciones para el contenido total de compuestos fenlicos se

encuentran entre 22,11 +/- 0,54 y 75,22 +/- 1,35 mg de cido glico por gramo de

extracto etanlico, y para el contenido total de flavonoides entre 4,75 +/- 0,01 y 34,50

+/- 0,07 mg de quercetina por gramo de extracto etanlico. La actividad antioxidante

vara entre 33,9 +/- 9,7 y 324,6 +/- 15,0 y entre 455,5 +/- 7,8 y 1,091 +/- 17,3 mol de

equivalentes Trolox (cido 6-hidroxi-2,5,7,8-tetrametilcromo-2-carboxlico) por gramo

de extracto etanlico19.

Muoz et al (2007), estudiaron el contenido de flavonoides y compuestos fenlicos de

mieles chilenas e ndice antioxidante, dando como resultado que los principales

flavonoides detectados fueron la pinocembrina, pinobanksina, quercetina,

kaempferol, criseria, galanginas y otras dos flavonas no identificadas, en tanto el

contenido de fenoles totales fue 8,83 mg por cien gramos de miel de la regin

metropolitana (Chile central), la actividad antioxidante dio 1,77 mol Trolox (cido 6-

hidroxi-2,5,7,8-tetrametilcromo-2-carboxlico) por gramo de muestra20.

Zavaleta et al (2008), determinaron la capacidad antioxidante y el contenido de los

principales cidos fenlicos y flavonoides de algunos alimentos. Dando como mayor

resultado de cido clorognico en el huacatay (16,60 mg por gramo) y el

sachaculantro (15,99 mg por gramo) en las dems especies se encontraron

cantidades mnimas. Mayor concentracin de cido cafico presentaron el huacatay


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6

(3,98 mg por gramo) y el sachaculantro (0,95 mg por gramo). El flavonoide rutina se

present en mayor concentracin en el sachaculantro (288,7 g por gramo), el

huacatay (1,80 mg por gramo) y el olluco (142,22 g por gramo), la capacidad

antioxidante fue para el huacatay (9,44 mg/mL), seguido por el aguaymanto

(41mg/mL), pituca (95,53 mg/mL), el tumbo (101,1 mg/mL), sachapapa morada

(109,27 mg/mL), sachatomate (140 mg/mL), olluco (147,29 mg/mL), sachaculantro

(213,86 mg/mL) 21.

An en la actualidad, cientos de plantas, son utilizadas en la medicina pero la ciencia

moderna, analizando y estudiando los efectos teraputicos de las plantas, quiere

precisar, comparar y clasificar las diversas propiedades, no con el fin de disminuir

esta confianza sino para agrupar a plantas con efectos similares, para conocer los

principios activos responsables de cortar, aliviar o curar enfermedades, separarlos de

las plantas que los contienen, determinar sus estructuras qumicas, procurar su

sntesis, proponer modificaciones estructurales en busca de una mayor actividad y,

finalmente, dar a conocer a la humanidad los resultados de los estudios 13.

2.2. Clasificacin taxonmica segn el sistema Cronquist. A. 1988.

Divisin : Magnoliophyta

Clase : Magnoliopsida

Sub Clase : Rosidae

Orden : Myrtales

Familia : Onagraceae

Gnero : Oenothera

Especie : Oenothera rosea Ait.

Nombre vulgar : yawar suqu chupa sangre



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7


Sub Clase : Magnolidae

Orden : Piperales

Familia : Piperaceae

Gnero : Piper

Especie : Piper elongatum Vahl

Nombre vulgar : matico



Sub Clase : Asteridae

Orden : Asterales

Familia : Asteraceae

Gnero : Baccharis

Especie : Baccharis salicifolia R&P

Sinonimia : Baccharis salicifolia (kunth)

Nombre vulgar : chilca

Fuente: Certificado emitido por el Herbarium Huamangensis de la Facultad de

Ciencias Biolgicas (Anexo 1, 2 y 3).

2.3. Oenoth era ros ea Ait. yawar suqu, Piper e longatum Vahl. matico y

Baccharis sa l ic i fol ia R&P chilca.

2.3.1. Oenothera rosea Ait yawar suqu

Descripcin botnica.- Planta herbcea, perenne, de ms o menos 30 cm de alto,

aunque existen arbustos que miden un metro o ms, de raz tuberosa. Tallo herbceo,

erecto o ascendente, simple o ramificado, coloreado de rojo violceo. Hojas oblongo-


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8

lanceoladas, subenteras, irregularmente dentadas, de dos a cinco cm de longitud con

peciolo delgado. Flores agrupadas en inflorescencia racimosas. Son hermafroditas,

pedunculadas. Fruto ovoide de ocho a diez mm de longitud, extrados con ocho

costillas longitudinales y caras arrugadas 13.

Principales constituyentes qumicos. - Contiene sustancias fenlicas: cido

eglico, glico, cafico, o-cumarnico, kaempferol, cianidina, glicsidos: rutina,

isoquercetina; taninos, muclago, antocianinas, resinas, saponinas esteroides y/o

triterpenoides13.

Uso en medicina tradicional.- Es conocida vulgarmente como chupasangre en la

medicina tradicional peruana; es utilizada para diferentes tratamientos como:

antiinflamatorio, para la neumona, gonorrea y para nuestro inters, en hinchazones

por su uso para absorber la sangre de los hematomas provocados por golpes y

contusiones 22.

2.3.2. Piper e longatum Vahl . matico

Descripcin botnica.- Arbusto perenne de 2 a 2,5 m de alto. Tallo herbceo,

dicotmico con numerosas ramas delgadas con nudos salientes y vellosidades,

longitudinalmente estriado. Hojas simples, grandes, con peciolo corto, de superficie

spera, muy reticulado de color verde intenso. Flores pequeas numerosas,

hermafroditas, corola blanca. Fruta drupa, pequea, de forma ovoide 13.

Principales constituyentes qumicos. - Contiene aceites esenciales, resinas,

sustancias amargas (maticina), taninos, alcaloides, saponinas, flavonoides

triterpenoides15.

Uso en medicina tradicional.- Sus propiedades teraputicas son hemostticos,

antiinflamatorios, en tratamientos dermatolgicos y afecciones urinarias13.

2.3.3. Baccharis sa l ic i fol ia R&P chilca.


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9

Descripcin botnica.- Arbusto de 1 a 1,5 m de alto. Tallo muy ramificado,

densamente folioso. Hojas simples, de disposicin alterna, forma aovada espatulada.

Inflorescencias, cabezuelas o captulos numerosos, ssiles, cortamente

pedunculados ya sea en las axilas de las hojas superiores o a lo largo de las ramas

terminales. Flores en escaso nmero con la corola algo filiforme13.

Principales constituyentes qumicos.- Presenta los siguientes principios activos

como, taninos, flavonoides triterpenoides y saponinas13.

Uso en medicina tradicional.- Se usa como analgsico, antirreumtico,

antiespasmdico y en tratamiento de fracturas 13.

2.4. Compuestos fenlicos

Son metabolitos secundarios producidos por todas las plantas, son un grupo de

sustancias que poseen en comn un anillo aromtico con uno o ms sustituyentes

hidroxilos y que ocurren frecuentemente como glicsidos, combinados con unidades

de azcar. Son relativamente polares y tienden a ser solubles en agua, pueden ser

detectados por el intenso color verde, azul o negro, que producen cuando se les

agregan una solucin acuosa o alcohlica al 1 por ciento de cloruro frrico 15.

Adems los compuestos fenlicos son utilizados para tratar enfermedades

relacionadas con procesos inflamatorios y desordenes cardiovasculares debido a la

actividad que ejercen sobre el sistema circulatorio, mejorando la circulacin perifrica,

la movilizacin del colesterol y disminuyendo la fragilidad capilar 23.

2.4.1. Clasificacin

Los polifenoles se pueden clasificar de muchas maneras debido a su diversidad

estructural. Segn su estructura qumica tenemos dos grandes grupos:

cidos fenlicos.- Derivados del cido benzoico C6-C1 y cido cinmico C6-C324.

Flavonoides (C6-C3-C6)


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10

Formados por dos grupos bencnicos unidos por un puente tricarbonado, antocianos,

flavonas, flavononas, flavanoles, taninos condensados y lignanos 24.

2.4.1.1 cidos fenlicos

Estos compuestos tienen una funcin carboxlica y un grupo hidroxlico fenlico, estos

compuestos derivan del cido benzoico (vanillina, cido vertrico, cido ansico, cido

glico,) y del cido cinmico (clorognico, cafeico, ferlico y sinptico, p-cumarico,

elgico) 25. Algunos autores afirman que el cido elgico tiene como funcin detectar

y restaurar clulas carentes del gen P53, gen encargado de la apoptosis y del control

de la proliferacin celular responsable del cncer 26.

Los cidos fenlicos tienen propiedades antispticas, antiinflamatorias de los

derivados saliclicos. Inhiben la 5-lipooxigenasa de granulocitos humanos, de ello

resulta una inhibicin en la formacin de hidroperxidos y leucotrienos que podran

justificar el empleo en el tratamiento de enfermedades inflamatorias o alrgicas27.

Los cidos fenlicos tienen gran importancia debido a su amplia actividad biolgica

como son: antioxidantes, antivirales, antitumorales, antifngicos, antimutagnicos,

hepatoprotectores, antiinflamatorias28.

cidos fenlicos derivados del cido benzoico

cido p-hidroxibenzoico

Figura 1. Estructura de los cidos benzoicos 25.

cidos fenlicos derivados del cido cinmico

R1 R2H H cido p-hidroxibenzoicoOCH3 H cido vanllicoOH OH cido glico

OCH3 OCH3 cido sirngico

COOHOH

R 2

R 1


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12

Sus propiedades anti-radicales libres se dirigen fundamentalmente hacia los radicales

hidroxilos, especies altamente reactivas. Se ha descrito su capacidad de modificar la

sntesis de eicosanoides (con respuestas antiinflamatoria), de prevenir la agregacin

plaquetaria (efectos antitrombticos) 30.

O

O

C A

B1

2

34

5

6

7

8

2'

1'

3'

4'

5'

6'

Figura 3. Ncleo bsico de los flavonoides30.

Clasificacin

Los flavonoides se clasifican en varios grupos de acuerdo con las variantes

estructurales que presentan: flavonas, flavonoles, flavanoles, isoflavonas y

antocianidinas, con variada actividad farmacolgica entre las que destacan:

antioxidante, antiinflamatoria, antimicrobiana, analgsica, antiespasmdica27, 31

.

O

O

O

O

OH

O

OH

Flavona Flavonoles Flavanoles

O

O

O

+

OH

O

O

Isoflavona Flavanona Antocianidina

Figura 4. Clasificacin de flavonoides32.


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13

Propiedades

Los flavonoides son sustancias slidas cristalizadas de color blanco o amarillento.

Son solubles en agua caliente, alcohol y disolventes orgnicos polares, siendoinsolubles en los apolares. Sin embargo, cuando estn en estado libre, son poco

solubles en agua, pero son solubles en disolventes orgnicos ms o menos

oxigenados, dependiendo de su polaridad. Por otro lado, son sustancias fcilmente

oxidables y, por tanto, tienen efecto antioxidante, ya que se oxidan ms rpidamente

que otro tipo de sustancias 33.

Actividad farmacolgica

Farmacolgicamente, los flavonoides destacan por su baja toxicidad. Asimismo,

tienen efecto antioxidante, poseen efectos antimutagnicos y tienen la capacidad de

inhibir diversas enzimas. La accin antioxidante de los flavonoides depende

principalmente de su capacidad de reducir radicales libres y quelar metales,

impidiendo las reacciones catalizadoras de los radicales libres.

Por otro lado, los flavonoides ejercen otras acciones: diurtica, antiespasmdica,

antiulcerosa y antiinflamatoria33.


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III. MATERIALES Y MTODOS

3.1. Ubicacin del trabajo de investigacin

El presente trabajo de investigacin se realiz en el Laboratorio de Farmacognosia

del rea de Farmacia, de la Facultad de Ciencias Biolgicas de la Universidad

Nacional de San Cristbal de Huamanga, durante los meses de marzo a agosto

del 2014.

3.2. Definicn de la poblacin y muestra

Poblacin: Hojas y flores de Oenothera rosea Ait. yawar suqu, Piper elongatum

Vahl. matico, (recolectadas del d istrito de Huamanguilla, durante los meses de

febrero a marzo, en estado de floracin) y Baccharis salicifolia R&P chilca

(recolectada en la provincia de Cangallo, durante los meses de febrero a marzo,

en estado de floracin) del departamento de Ayacucho.

Muestra: Cinco gramos de hojas y flores secas de Oenothera rosea Ait yawarsuqu, Piper elongatum Vahl matico y Baccharis salicifolia R&P chilca.

3.3. Diseo metodolgico para la recoleccin de datos


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3.3.1. Recoleccin de la muestra: Se procedi a recolectar aquellas hojas y

flores que se encontraban en buen estado, mediante un muestreo por

conveniencia, para luego lavarlas con la finalidad de eliminar sustancias

contaminantes que puedan interferir con la investigacin, despus se procedi a

secarlos al medio ambiente por siete das, una parte de las muestras fueron

llevadas al Herbarium Huamangensis de la UNSCH para la identificacin

taxonmica (Anexo 1,2 y 3).

La muestra restante se moli haciendo uso de un mortero.

3.3.2. Preparacin del extracto hidroalcohlico

Se pesaron cinco gramos de hojas y flores secas Oenothera rosea Ait yawar

suqu, Baccharis salicifolia R&P chilca y Piper elongatum Vahl matico, las

cuales fueron molidas en un mortero hasta su pulverizacin. Las muestras secas

y molidas fueron sometidas a extraccin hidroalcohlica (20:80) con etanol al 96%,

utilizando el equipo de Soxhlet (Anexo 7). Los extractos se concentraron a

sequedad en un rotavapor Buchi 3000 (Anexo 8). Los residuos secos fueron

disueltos en 100 ml de metanol (Anexo 10). Los extractos se utilizaran para el

screening fitoqumico y la determinacin del contenido de fenoles totales y

flavonoides totales.

3.3.3. Tamizaje fitoqumico

Una vez obtenido el extracto hidroalcohlico se realizar las pruebas pertinentes

para la identificacin cualitativa de los principales grupos de metabolitos

secundarios, directamente sobre el extracto de la planta con reacciones simples

especficas de coloracin y precipitacin34. (Anexo 11 y 12)

3.3.4. Determinacin del contenido de fenoles totales


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El contenido de fenoles totales se determin por el mtodo colorimtrico de

Singletn y Rossi 35, con algunas modificaciones. (Anexo 18)

Procedimiento:

Transferir un mL del extracto obtenido de cada muestra, en una fiola de 25 mL

que contenga nueve mL de agua destilada.

Seguidamente se agreg un mL de reactivo Folin-Ciocalteu (grado analtico

Merck).

Se agita y luego se deja en reposo por cinco min.

Posteriormente se adiciona diez mL de carbonato de sodio al 7 por ciento, y se

afora con agua destilada a 25 mL.

Despus de 90 min en la oscuridad a temperatura de ambiente se procede a

realizar la lectura a una longitud de onda de 550 nm.

Para realizar la curva de calibracin se usa soluciones de cido cafico a

concentraciones entre 100-500 g/ml, preparadas a las mismas condiciones

antes mencionadas.

Se prepara el blanco a las mismas condiciones que la muestra problema usando

un mL de agua destilada.

3.3.5 Determinacin del contenido de flavonoides totales

El contenido de flavonoides totales en los extractos etanlicos se determin por el

mtodo de Zhishen et al 36. (Anexo 20)

Procedimiento:

Transferir un mL de los extractos obtenidos, a una fiola de diez mL que

contenga cuatro mL de agua destilada.

Seguidamente se le adiciona 0,30 mL de nitrito de sodio al 5 por ciento.


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Despus de cinco minutos se agrega 0,3 ml de cloruro de aluminio al 10 por

ciento.

Se deja transcurrir cinco minutos para agregar, dos mL de hidrxido de sodio

1M, se agita y afora a diez mL con agua destilada.

Se realiza la lectura a una longitud de onda de 510 nm.

Para la curva de calibracin se usa soluciones de quercetina a

concentraciones entre 20-100 g/ml.

Se prepara el blanco a las mismas condiciones antes mencionadas usando un

mL de agua destilada.

3.4. Anlisis de datos

Los resultados se expresan en forma de medias y desviacin estndar, y son

representados mediantes grficos en forma de histogramas. Las diferencias entre las

medias son contrastadas mediante el Anlisis de Varianza (ANOVA) a un nivel de

confianza de 95% (p


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IV. RESULTADOS


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20

ANOVA: p


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21

ANOVA: p


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V. DISCUSIN

La presente investigacin se bas en la cuantificacin de fenoles y flavonoides totales

de Oenothera rosea Ait yawar suqu, Piper elongatum Vahl matico y Baccharis

salicifolia R&P chilca, mediante el mtodo de Singletn y Rossi35, y Zhishen et al 36.

Los compuestos fenlicos o polifenoles constituyen un amplio grupo de sustancias

qumicas, con diferentes estructuras, propiedades qumicas y actividad biolgica,

englobando ms de ocho mil compuestos distintos.

Como antioxidantes, los polifenoles pueden proteger las clulas contra el dao

oxidativo y por lo tanto limitar el riesgo de varias enfermedades degenerativas

asociadas al estrs oxidativo causado por los radicales libres 30, 37.

Para obtener el extracto hidroalcohlico se realiz mediante el mtodo de Soxhlet,

que se define como la accin de separar con un lquido una fraccin especfica de

una muestra, dejando el resto lo ms ntegro posible 38.

En el tamizaje fitoqumico del extracto hidroalcohlico desarrollado segn la tcnica

de Miranda y Cuellar (2000)34, se reporta la presencia de los metabolitos secundarios

como: fenoles y/o taninos, flavonoides, lactonas y/o cumarinas, catequinas,

alcaloides, triterpenos y/o esteroides (Tabla 1 y Anexo 11).


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Villena 14,reporta para el caso de la Oenothera rosea Ait yawar suqu , que confiere

a estos metabolitos secundarios su accin farmacolgica como antiinflamatoria.

Los metabolitos secundarios que ms se encontraron en Oenothera rosea Ait yawar

suqu, Piper elongatum Vahl matico y Baccharis salicifolia R&P chilca, fueron: en

el primer caso se encontraron fenoles y/o taninos, flavonoides, catequinas, lactonas

y/o cumarinas; en el matico se observ la presencia de fenoles y/ taninos, flavonoides

y alcaloides; y finalmente en la chilca se encontraron fenoles y/o taninos, flavonoides,

catequinas, lactonas y/o cumarinas, y alcaloides, los compuestos fenlicos pueden

ser detectados por el intenso color verde, azul o negro que producen cuando se le

agrega el cloruro frrico al 5 por ciento15. La muestra que reaccion inmediatamente

a este ensayo fue la Baccharis salicifolia R&P chilca, que al agregar una gota del

reactivo se produjo una coloracin azul intensa, en el caso de Oenothera rosea Ait yawar suqu y Piper elongatum Vahl matico, h ubo un cambio de coloracin a un

azul intenso despus de unos segundos de agregar el reactivo. Los compuestos

fenlicos poseen propiedades como antiinflamatorias, antimicrobianas,

antitrombticas, antialrgicas, antitumorales, anticancergenas y antioxidantes. De

esta ltima, principalmente, radica su funcin en el sistema nervioso, pues se ha visto

relacin de proteccin en enfermedades neurodegenerativas 39. Al realizar el ensayo

de catequina se evidencia la fluorescencia verde a la luz UV, es asi que al comparar

las tres muestras se observa que la Baccharis salicifolia R&P chilca obtuvo (+++),

Oenothera rosea Ait yawar suqu (++) y Piper elongatum Vahl matico (+)

respectivamente (Anexo 11). Con la reaccin de shinoda el cambio de color de

amarillo a rojo indica la presencia de flavonas y flavonoles15, de esta manera al realizar

el ensayo se diferencia las intensidades de la coloracin rojo entre cada muestra

dando como resultado que Oenothera rosea Ait yawar suqu fue la que obtuvo una


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coloracin ms intensa en comparacin con Piper elongatum Vahl matico y

Baccharis salicifolia R&P chilca . El tamizaje fitoqumico es un ensayo previo de gran

importancia para determinar cualitativamente la presencia de ciertos metabolitos

secundarios presentes en muestras vegetales, dado que los ensayos como el de

Shinoda y cloruro frrico que son especficos para compuestos fenlicos, dieron

positivo en las tres muestras se continua con los ensayos para determinar

cuantitativamente fenoles y flavonoides totales.

En el anexo 22 se observa la curva de calibracin del cido cafico a 550 nm para

determinar la cantidad de fenoles totales de las muestras, para obtener la ecuacin

se prepararon soluciones de cido cafico a 100, 200, 300, 400 y 500 g/mL (Anexo

14), de igual manera en la figura 28 se muestra la curva de calibracin de quercetina

a 510 nm, en este caso las soluciones del estndar fueron preparadas a

concentraciones de 20, 40 ,60 ,60, 80 y 100 g/mL (Anexo 14), a las cuales se le

agregaron distintos reactivos necesarios para cuantificar fenoles y flavonoides totales

(Anexo 13), que fueron preparados a las concentraciones segn se indica en el

mtodo (Anexo 17), una vez obtenida las soluciones preparadas (Anexo 15) se hizo

la lectura correspondiente a una longitud de onda de 550 nm y 510 (Anexo 16). La

curva de calibracin son grficos que muestran la respuesta de un mtodo analtico

(Seal) en funcin de cantidades conocidas de analito (concentraciones) 40.

El contenido de fenoles y flavonoides presenta una amplia ubicuidad en la naturaleza

ya que son responsables del buen funcionamiento de las plantas y, en su relacin con

el hombre ya que son utilizados para tratar enfermedades como ciertos cnceres y

desordenes cardacos por su poderosa actividad antioxidante; el consumo promedio

de fenoles en los pases europeos se estima en 23 mg por da 41.


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Los mtodos de Folin-Ciocalteau y de formacin del complejo con AlCl3 para

determinar el contenido total de compuestos fenlicos y flavonoides, respectivamente,

son comnmente usados para analizar plantas y alimentos 42. En el presente estudio,

estos mtodos se aplicaron para determinar el contenido de fenoles y flavonoides

totales en tres muestras vegetales de la regin de Ayacucho.

En el anexo 18, se muestra las preparaciones del blanco y las tres muestras por

triplicado para determinar el contenido de fenoles totales, las cuales se dejaron que

reaccionen durante 90 min a temperatura de ambiente para luego realizar las lecturas

correspondientes a una longitud de onda de 550 nm (Anexo 19), la cual se

acondicion con un blanco que fue preparado a las mismas condiciones que las

muestras.

En la Figura 5 y Tabla 7, se muestra el porcentaje de fenoles totales de cada muestra

en estudio, en los resultados obtenidos se observa que por lo menos todos los

extractos contienen compuestos fenlicos en cantidades significativas, siendo de esta

manera y comparando las tres especies se observa que el contenido de fenoles entre

el extracto hidroalcohlico de Oenothera rosea Ait yawar suqu y Piper elongatum

Vahl matico , presentaron porcentajes de 6.42 % +/- 0.433 y 3.88 % +/- 0.469. Por

otra parte Baccharis salicifolia R&P chilca, es el que posee el mayor porcentaje de

fenoles siendo de 12.62 % +/- 0.220, superando los valores encontrados en las otras

dos especies. En el gnero Baccharis, Rojas 43, ha reportado la presencia

principalmente de compuestos fenlicos y flavonoides.

Garca 44, cuantific fenoles totales con el mtodo de Folin-Ciocalteu en duraznos

(Prunnus persica L.) procedentes de tres diferentes zonas de cultivo. Las muestras

del estado de Sonora fueron las que presentaron valores ms altos, de fenoles totales

(121 mg de cido cafeico por100 gramos peso fresco).


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Al igual que para determinar fenoles totales se prepararon el blanco y soluciones por

triplicado (Anexo 20), de los extractos hidroalcohlicos para determinar el contenido

de flavonoides totales, en este caso se realiz las lecturas a una longitud de onda de

510 nm (Anexo 21), se prepar el blanco con la finalidad de acondicionar el

espectrofotmetro UV- Vis.

En la Figura 6 y Tabla 7, se observa la variacin del promedio en porcentaje de

flavonoides totales, se aprecia que cada una de las muestras en estudio contienen

cantidades significativas de este compuesto, as se compara las tres especies dando

como resultado que Oenothera rosea Ait yawar suqu y Piper elongatum Vahl matico, pr esentaron cantidades de 8.32% +/- 0.153 y 6.21% +/- 0.091.

Por otra parte al igual que en la determinacin del contenido de fenoles totales la

especie Baccharis salicifolia R&P chilca, fue la que present el ms alto contenido

de flavonoides totales (9.95% +/- 0.058), superando a las dos especies antes

mencionadas. En la prueba de Shinoda en un estudio reportado por Rojas 43,

demuestra que el gnero Baccharis contiene cantidades significativas de flavonoides.

De la Rosa 45, cuantificaron los flavonoides totales del extracto metanlico de la

semilla de Glycine max soya , expresados como quercetina por espectrofotometra

UV-Vis, el contenido de flavonoides totales fue 16.528% de quercetina.

En la figura 7, se observa la comparacin del porcentaje de fenoles y flavonoides

totales de las tres muestras en anlisis, lo cual demuestra que el extracto

hidroalcohlico deBaccharis salicifolia R&P chilca, es la muestra vegetal que posee

mayores cantidades de estos dos componentes qumicos presentes en las plantas.

Palacios 13, en la especie Baccharis lanceolata Kth. ha reportado la presencia

principalmente de flavonoides triterpenoides y esteroides, aminogrupos, taninos y

saponinas. Es as que se pondra gran inters en esta especie ya que los flavonoides


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ejercen acciones diurticas, antiespasmdicas, antiulcerosa, antiinflamatorias y

antioxidantes33.

El anlisis de varianza, es una prueba estadstica para analizar si ms de dos grupos

difieren significativamente entre s en cuanto a sus medias y varianzas 44. El nivel de

significancia es un nivel de la probabilidad de equivocarse y que fija de manera a priori

el investigador. El nivel de significancia de 0.05, el cual implica que el investigador

tiene 95% de seguridad para generalizar sin equivocarse y slo 5 por ciento en

contra46.

Del anlisis estadstico, (Anexo 24 y 26), se demuestra que hay una diferencia

significativa del contenido de fenoles y flavonoides totales entre las tres muestras

vegetales, en la prueba de Tukey (Anexo 25 y 27), se demuestra que la cantidad de

fenoles y flavonoides totales entre cada muestra son distintas.

Los factores ambientales parecen no influir en el contenido de compuestos fenlicos

entre las especies, y las variaciones de los metabolitos pueden ser de origen

gentico47.

Con estos resultados obtenidos en la presente investigacin se afirma que Oenothera

rosea Ait yawar suqu, Piper elongatum Vahl matico y Baccharis salicifolia R&P chilca, presentan cantidades significativas de fenoles y flavonoides totales .


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VI. CONCLUSIONES

1. Se realiz la cuantificacin de fenoles totales y flavonoides totales deOenothera rosea Ait. yawar suqu, Baccharis salicifolia R&P chilca y

Piper elongatum Vahl. matico .

2. Los extractos hidroalcoholicos de Oenothera rosea Ait. yawar suqu,

Baccharis salicifolia R&P chilca y Piper elongatum Vahl. matico ,

presentaron metabolitos secundarios como: fenoles y/o taninos,

catequinas, lactonas y/o cumarinas, triterpenos y/o esteroides, flavonoidesy alcaloides en diferentes proporciones.

3. Los fenoles totales de Oenothera rosea Ait. yawar suqu, Baccharis

salicifolia R&P chilca y Piper elongatum Vahl. matico, fueron: 6.42%,

12.62% y 3.88%.

4. Los flavonoides totales en Oenothera rosea Ait. yawar suqu, Baccharis

salicifolia R&P chilca y Piper elongatum Vahl. matico, fueron: 8.32%,

9.96% y 6.21%.

5. Se compar el contenido de fenoles totales y flavonoides totales de

Oenothera rosea Ait. yawar suqu, Baccharis salicifolia R&P chilca y

Piper elongatum Vahl. matico; sie ndo as que la chilca present mayor

contenido de los componentes en estudio.


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VII. RECOMENDACIONES

1. Determinar mediante cromatografa lquida de alta eficacia (HPLC) losdiferentes tipos de compuestos fenlicos de Oenothera rosea Ait. yawar

suqu, Baccharis salicifolia R&P chilca y Piper elongatum Vahl. matico.

2. Comparar el contenido de fenoles totales y flavonoides totales de Oenothera

rosea Ait.yawar suqu, Baccharis salicifolia R&P chilca y Piper elongatum

Vahl. matico provenientes de distintos lugares del departamento de

Ayacucho.3. Determinar la fecha ptima de recoleccin de Oenothera rosea Ait. yawar

suqu, Baccharis salicifolia R&Pchilca y Piper elongatum Vahl. matico , para

realizar la cuantificacin de fenoles y flavonoides totales.

4. Determinar el mtodo ptimo de extraccin para la cuantificacin de fenoles

y flavonoides totales de Oenothera rosea Ait. yawar suqu, Baccharis

salicifolia R&P chilca y Piper elongatum Vahl. matico.

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45/80

34

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46/80

35


47/80

36

ANEXOS

Anexo 1


48/80

37

Figura 8. Certificado de identificacin botnica de Oenothera rosea Ait. yawarsuqu. Ayacucho -2014


49/80

38

Anexo 2

Figura 9. Certificado de identificacin botnica de Piper elongatum Vahl.matico. Ayacucho -2014


50/80

39

Anexo 3

Figura 10. Certificado de identificacin botnica de Baccharis salicifolia R&Pchilca. Ayacucho-2014


51/80

40

Anexo 4

Figura 11. Flujograma del procedimiento de cuantificacin de fenoles y flavonoidestotales de las hojas y flores de Oenothera rosea Ait. yawar suqu, Baccharissalicifolia R&P chilca y Piper elongatum Vahl. matico.

MUESTRASOenothera rosea Ait. yawar suqu, Baccharis salicifolia R&Pchilca y Piper elongatum Vahl. matico,

Procedimiento para la recoleccin delas muestras

Obtencin de los extractoshidroalcohlicos

Reaccin para identificarcompuestos fenlicos

Anlisis estadstico eInterpretacin de resultados

Cuantificacin de fenoles yflavonoides totales


52/80

41

Anexo 5

Figura 12. Hojas y flores de Oenothera rosea Ait. yawar suqu (a), Piperelongatum Vahl. matico (b) y Baccharis salicifolia R&P chilca (c).

a b

c


53/80

42

Anexo 6

Figura 13. Hojas y flores trituradas de Oenothera rosea Ait. yawar suqu, Baccharissalicifolia R&P chilca y Piper elongatum Vahl. matico.


54/80

43

Anexo 7

Figura 14. Extraccin hidroalcohlica de hojas y flores trituradas deOenothera rosea Ait. yawar suqu (a), Baccharis salicifolia R&P chilca (b) y Piper elongatum Vahl.matico (c) usando equipo Soxhlet.

Anexo 8

a

c

b


55/80


56/80

45

Figura 16. Extractos secos de las hojas y flores de Oenothera rosea Ait. yawar suqu (a), Baccharis salicifolia R&P chilca (b) y Piper elongatum Vahl. matico (c).

a

c

b


57/80

46

Anexo 10

Figura 17. Reconstitucin con metanol de los extractos de las hojas y flores deOenothera rosea Ait. yawar suqu, Baccharis salicifolia R&P chilca y Piperelongatum Vahl. matico


58/80

47

ANEXO 11

Figura 18. Esquema de las reacciones para la identificacin de metabolitossecundarios de los extractos hidroalcoholicos de Oenothera rosea Ait. yawar suqu,Baccharis salicifolia R&P chilca y Piper elongatum Vahl. matico .

EXTRACTO HIDROALCOHLICO

DIVIDIR EN FRACCIONES

1 mlENSAYO

DEFeCl3

(Fenoles ytaninos)

1 mlENSAYO

DE

SHINODA (Flavonoides)

1 mlENSAYO

DEBALJET

(Lactonas y/ocumarinas)

1 mlENSAYO

DE

CATEQUINAS

1 mlENSAYO

DEMAYER

(Alcaloides)

1 mlENSAYO

DE

DRAGENDORFF (Alcaloides)

1 mlENSAYO

DELIEBERMANBURCHARD (Triterpenos

y/oesteroides )


59/80

48

ANEXO 12

Figura 19. Marcha Fitoqumica e identificacin de catequinas de los extractoshidroalcoholicos de Piper elongatum Vahl. matico (a,2), Oenothera rosea Ait.yawar suqu (b,3) y Baccharis salicifolia R&P chilca (c,1).

ba

c

321


60/80

49

Anexo 13

Figura 20. Reactivos usados en la determinacin del contenido de fenoles totales yFfavonoides totales de las hojas y flores de Oenothera rosea Ait. yawar suqu,Baccharis salicifolia R&P chilca y Piper elongatum Vahl. matico .


61/80

50

Anexo 14


62/80

51

Figura 21. Preparacin de los estndares de quercetina y cido cafico a diferentesconcentraciones.

Anexo 15


63/80

52

Figura 22. Soluciones de quercetina y cido cafico, despus de agregar los reactivoscorrespondientes para obtener la curva de calibracin de fenoles totales y flavonoidestotales.

Anexo 16

Figura 23. Lectura de las soluciones de quercetina y cido cafico en elespectrofotmetro UV, en el Laboratorio de Farmacognosia. Ayacucho-2014.


64/80

53

Anexo 17

ba

edc


65/80

54

Figura 24. Preparacin de reactivos usados para la determinacin de fenoles totalesy flavonoides totales. (a) Bicarbonato de sodio al 7 por ciento, (b) Folin Ciocalteu, (c)Nitrito de sodio al 5 por ciento, (d) Cloruro de alumnio al 10 por ciento, (e) Hidrxido

de sodio 1M.Anexo 18

b

a


66/80

55

Figura 25. Preparacin para determinar fenoles totales de Oenothera rosea Ait.yawar suqu (a), Piper elongatum Vahl. matico (b). Baccharis salicifolia R&Pchilca (c).

Anexo 19

c


67/80

56

Figura 26. Lectura en el espectrofotmetro UV de las soluciones de Oenothera rosea Ait. yawar suqu, Piper elongatum Vahl. matico y Baccharis salicifolia R&P chilcapara determinar fenoles totales. Ayacucho 2014

Anexo 20


68/80

57

Figura 27. Preparacin para determinar flavonoides totales de Oenothera rosea Ait. yawar suqu (a), Piper elongatum Vahl. matico (b). Baccharis salicifolia R&Pchilca (c).

Anexo 21

a

b

c


69/80

58

Figura 28. Lectura en el espectrofotmetro UV de las soluciones de Oenothera rosea Ait. yawar suqu, Piper elongatum Vahl. matico y Baccharis salicifolia R&P chilcapara determinar flavonoides totales. Ayacucho 2014

Anexo 22


70/80

59

Figura 29. Curva de calibracin utilizando cido cafeco como estndar a 550 nm. Ayacucho - 2014

Anexo 23

y = 0.0011x + 0.1387R = 0.9999

0

0.1

0.2

0.3

0.4

0.5

0.6

0.7

0.8

0 100 200 300 400 500 600

A b s o r

b a n c

i a

u g de cido cafico

Curva de calibracin utilizando cidocafeco como estndar a 550 nm

Series1

Lineal (Series1)


71/80

60

Figura 30. Curva de calibracin utilizando quercetina como estndar a 510 nm. Ayacucho - 2014

Anexo 24

y = 0.0053x + 0.0184R = 0.9885

0

0.1

0.2

0.3

0.4

0.5

0.6

0 20 40 60 80 100 120

A b s o r b a n c

i a

u g de quercetina

Curva de calibracin utilizando quercetinacomo estndar a 510 nm

Series1

Lineal (Series1)


72/80

61

Tabla 3: Anlisis de varianza del porcentaje de fenoles totales de Oenothera rosea Ait. yawar suqu, Piper elongatum Vahl. matico yBaccharis salicifolia R&P chilca .

ANOVA

Suma de gl Media cuadrtica F Sig.cuadrados

Inter-grupos 121.226 2 60.613 77300.460 .000

Intra-gupos 4.705E-03 6 7.841E-04

Total 121.231 8

Anexo 25


73/80

62

Tabla 4: Prueba de Tukey para el porcentaje de fenoles totales de Oenothera rosea Ait. yawar suqu, Piper elongatum Vahl. matico yBaccharis salicifolia R&P chilca .

Fenoles totales (mg%)

HSD de Tukey N Subconjunto para alfa = 0.05

1 2 3

Oenothera rosea Ait. 3 3.8782

Piper elongatum Vahl 3 6.4230

Baccharis salicifolia R&P 3 12.6176

Sig. 1.000 1.000 1.000

Semuestran las medias para los grupos en los subconjuntos homogneos

a. Usa el tamao muestral de la media armnica = 3.000

Anexo 26


74/80

63

Tabla 5: Anlisis de varianza del porcentaje de flavonoides totales de Oenotherarosea Ait. yawar suqu, Piper elongatum Vahl. matico y Baccharis salicifolia R&Pchilca para determinar flavonoides totales.

ANOVA

Suma de gl Media cuadrtica F Sig.cuadrados

Inter-grupos 21.198 2 10.599 174752.9 .000

Intra-gupos 3.639E-04 6 6.065E-05

Total 21.198 8

Anexo 27


75/80


76/80

65

Tabla 7. Porcentaje de fenoles y flavonoides totales y desviacin estndar presentesen Oenothera rosea Ait. yawar suqu, Baccharis salicifolia R&P chilca y Piperelongatum Vahl. matico.

Extracto Fenoles totales mg%, Flavonoides totales mg%,Desviacin estndar desviacin estndar

P. elongatum Vahl 3.8782% +/- 0.469 6.2051% +/- 0.153

O. rosea Ait 6.4230% +/- 0.433 8.3155% +/- 0.091

B. salicifolia R&P 12.6176% +/- 0.220 9.9545% +/ 0.058


77/80

66

Contenido defenoles totalesy flavonoidestotales enOenotherarosea Ait.Yawar suqu,Baccharissalicifolia R&Pchilca yPiperelongatumVahl. matico . Ayacucho -2014

.

EntreOenotherarosea Ait.yawar suqu,Baccharissalicifolia R&Pchilca y PiperelongatumVahl. matico,cul de estasespeciespresentamayorcontenido defenoles totalesy flavonoidestotales?.

Objetivo general:Realizar la cuantificacin defenoles totales y flavonoidestotales de Oenothera rosea

Ait. yawar suqu, Baccharissalicifolia R&P chilca yPiper elongatum Vahl.matico,

4.2. Objetivos especficos

- Identificar los metabolitossecundarios presentes en losextractos hidroalcohlicos deOenothera rosea Ait. yawarsuqu, Baccharis salicifoliaR&P chilca y Piperelongatum Vahl. matico, .- Realizar la cuantificacin defenoles totales de Oenotherarosea Ait. yawar suqu,Baccharis salicifolia R&Pchilca y Piper elongatumVahl. matico, - Realizar la cuantificacin deflavonoides totalesOenothera rosea Ait. yawarsuqu, Baccharis salicifoliaR&P chilca y Piper

elongatum Vahl. matico, - Realizar la comparacin delcontenido de fenoles totalesy flavonoides totales deOenothera rosea Ait. yawarsuqu, Baccharis salicifolia

Oenothera rosea Ait. : Esconocida vulgarmente comochupasangre en la medicinatradicional peruana; se utilizacomo: antiinflamatorio, para laneumona, gonorrea.

Baccharis salicifolia R&P: Seusa como analgsico,antirreumtico, antiespasmdicoy en tratamiento de fracturas.

Piper elongatum Vahl. : Suspropiedades teraputicas sonhemostticos, antiinflamatorios,en tratamientos dermatolgicos yafecciones urinarias.

Compuestos Fenlicos: Sonmetabolitos secundariosproducidos por todas las plantas,adems estos metabolitosesenciales favorecen elcrecimiento y reproduccin delas plantas y actan comoagentes protectores frente apatgenos, siendo secretadoscomo mecanismo de defensa acondiciones de estrs, talescomo infecciones, radiacionesUV, entre otros.Farmacolgicamente losflavonoides ejercen o acciones:antiespasmdica, antiulcerosaantioxidante gstrica yantiinflamatoria.

Baccharissalicifolia R&P.chilca presentamayor contenidode fenoles totales

y flavonoidestotales que Piperelongatum Vahl.matico yOenothera rosea

Ait. yawar suqu,

Variable independiente: Fenoles totales y flavonoidestotales de las hojas y flores deOenothera rosea Ait. yawarsuqu, Baccharis salicifolia R&Pchilca y Piper elongatum Vahl.matico.

Indicador: Un mL de losextractos hidroalcohlicos deOenothera rosea Ait. yawarsuqu, Baccharis salicifolia R&Pchilca y Piper elongatum Vahl.matico.

Variable Dependiente.Contenido de fenoles totales yflavonoides totales de losextractos hidroalcohlicos deOenothera rosea Ait. yawarsuqu, Baccharis salicifolia R&Pchilca y Piper elongatum Vahl.matico.

Indicadores: Fenoles Totales:mg equivalente de cido cafeico/g de extracto hidroalcohlico deOenothera rosea Ait. yawarsuqu, Baccharis salicifolia R&Pchilca y Piper elongatum Vahl. matico.

Flavonoides totales: mgequivalente de quercetina/ g deextracto hidroalcohlico de

Tipo de investigacin: Bsico - Descriptivo Poblacin: Hojas y flores de Oenothera rosea Ait. suqu, Baccharis salicifolia R&P chilca y Piper elongVahl. matico.Muestra: Cinco gramos de hojas y flores de Oenrosea Ait. yawar suqu, Baccharis salicifolia R&Py Piper elongatum Vahl. matico. las cuales sern upara la determinacin del contenido de fenoles toflavonoides totales. Preparacin del extracto etanlico.- Se pesarong de hojas y flores secas de las tres muestras las cufueron molidas en un mortero hasta su pulverizacmuestras secas y molidas sern sometidas a extrahidroalcohlica (20:80) utilizando aparato soxhextractos se concentraran a sequedad en un rotavLos residuos secos sern disueltos en 100 ml de meLos extractos sern utilizados para la determinaccontenido de fenoles totales y flavonoides totales.Determinacin del contenido de fenoles totales.contenido de fenoles totales se determinar por el mcolorimtrico de Singletn y Rossi Determinacin del contenido de flavonoides totalEl contenido de flavonoides totales en los exetanlicos ser determinado por el mtodo de Zhisal.Anlisis de Datos:Las diferencias entre las medias sern contrasmediante el Anlisis de Varianza (ANOVA) a un nconfianza de 95% (p


78/80

67

Anexo 29

R&P chilca y Piperelongatum Vahl. matico,

Oenothera rosea Ait. yawarsuqu, Baccharis salicifolia R&Pchilca y Piper elongatum Vahl.matico.

TITULO PROBLEMA OBJETIVOS MARCO TEORICO HIPOTESIS VARIABLES METODOLOGIA


79/80

2

Tabla 8. Matriz de consistencia. Ayacucho 2014


80/80

Documents

Contenido de Fenoles y Flavonoides