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La microscopía de contraste de fase, fue desarrollada fundamentalmente por Zernike en 1932. Se basa fundamentalmente en el retraso que se produce en las ondas de luz al atravesar objetos de distintos índices de refracción, aprovechando y amplificando dichos retrasos.Es un microscopio óptico modificado que permite contrastar sustancias de diferente grosor o densidad.
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7/21/2019 Contraste de Fases
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Microscopía de
Contraste deFases
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r nc p o e a croscop a eContrastes
Se basa en el %ec%o de ue cuando inter'eren
ondas ue tienen un determinado desfase seproduce una interferencia constructi"a +con ma&oramplitud o destructi"a +con menor amplitud.
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Objetivo de la Microscopía deContrastes
(l ob#eti"o es manipular el desfase de dos %aces de
lu! para trasladar esas peue-as "ariaciones defase a los correspondientes cambios de amplitudue se "isuali!an como diferencias de contraste.
eue-as diferencias de fase se con"ierten encambios de intensidad.
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Constitución del Microscopio de Contraste
de Fase
El Microscopio de Contraste de Fases Contiene:
Diafragma anular en el Condensador que consta de unanillo transparente con la parte central oscurecida y queforma un cono de luz hueco como el del microscopio de
campo oscuro.
El condensador presenta un disco que proyecta un haz deluz con forma anular, y en la lente de salida de los objetivos,se agregan unos anillos de fase!, que son discos
transparentes con un dise"o en relieve, cabe destacar quee#isten dos tipos diferentes de anillos de fase, denominadospositivo y negativo, los cuales tienen distintos efectos sobrela luz y por lo tanto, las im$genes se ven diferentes en cadauno, esto se e#plicar$ m$s adelante.
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Constitución del Microscopio de Contraste
de Fase
Placa de Difracción ó Placa de Fase
dentro del tubo del sistema de lentes objetivos,la cual consta de un anillo ranurado a manerade disco.
Ocular similar al del microscopio de campoclaro.
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IPOS DE MICROSCPIOS DE CONRASE DE!ASES
Contraste de "ase osc#ro o
positivo$ cuando los ra&os de lu!, la des"iada& la no des"iada tienden a cancelarse creandouna interferencia destructi"a & %acer ue elob#eto apare!ca muc%o m0s oscuro ue los
alrededores.Contraste de "ase brillante one%ativo$ se presenta cuando retrasamos lalu! no des"iada & la %acemos 1 de lon)itud
de onda menor, lo ue %ace ue sal)a altiempo con la lu! des"iada, ue tiene unretraso de 1 de lon)itud de onda, lo)randode esta manera ue sal)an al mismo tiempo& se recombinen
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!ORMACI&N DE LA IMAGEN
(l primer paso es separar la lu! directa dela lu! difractada. ara ello se coloca, en elplano focal de la condensadora, un
diafra)ma anular ue pro&ecta en elin'nito la ima)en de un %a! anular.
(ste cono de lu! %ueco pasa a tra"*s de lamuestra sin des"iarse & la d*bil lu!difractada por la muestra se etiende entodo el plano focal posterior del ob#eti"o.
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A'(SE DELMICROSCOPIO
%a correspondencia entre las placas de fase de losobjetivos y los diafragmas anulares de la condensadora hade ser e#acta. & cada placa le corresponde un diafragmaanular y el centrado de ambos ha de ser e#acto.
El centrado se realiza con una lente de 'ertrand quepermite enfocar el diafragma anular del condensador
%a iluminaci(n de )*hler debe estar ajustada y eldiafragma de apertura completamente abierto paratrabajar en modo contraste de fases.
+ara centrar las placas con el diafragma anular se insertala lente de 'ertrand y se enfoca. e gira el disco de lacondensadora para insertar el diafragma anular quecorresponda y se hacen coincidir con unos tornillos de
ajuste
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A'(SE DELMICROSCOPIO
En el año 1893, el profesor August Köhler propuso un método de
iluminación para optimizar la oser!ación microscópica " la
microfotograf#a, $ue permite apro!echar al m%&imo las
capacidades de las lentes 'o(eti!os) iluminando la muestra enestudio con un campo de luz uniforme cu"o di%metro sea igual al
del %rea de captura del o(eti!o* +os microscopios modernos est%n
diseñados para aplicar la iluminación Köhler " los re$uerimientos
son 'figs* -1. " -13)/
0 ondensador $ue sue " a(a para enfocar el cono de luz*
0 2omilla con lente colectora*
0 os diafragmas, un diafragma de campo situado a ni!el de la
l%mpara " un diafragma de apertura, colocado dea(o del
condensador*
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A'(SE DELMICROSCOPIO
4luminaci$n 56%ler. Se debe iluminar el esp*cimen si)uiendo elesuema. La l0mpara posee un 'lamento +S incandescentecu&a lu! es captada por la lente colectora L1 & re)ulada por el
diafra)ma de campo 71. La ima)en S8 del 'lamento de lal0mpara es pro&ectada al plano del se)undo diafra)ma 72. (steprimer paso se reali!a con 71 completamente abierto. La alturadel condensador L2 se re)ula de manera ue su punto focal est*en el plano 72. La ima)en del diafra)ma de campo 71 es
pro&ectada en el plano de la preparaci$n por el condensador
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A'(SE DELMICROSCOPIO
E#isten dos tipos de iluminaci(n )*hler:
-n mtodo en el cual la luz es transmitida atravs del espcimen /transmitida0.
1tro mtodo cuando la luz es reflejada desdeel espcimen /incidente0.
%a iluminaci(n )*hler transmitida es usada
para especimenes transparentes osemitransparentes.
%a iluminaci(n )*hler incidente es 2til paraobjetivos como el metal, los cuales no
transmiten luz
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A'(SE DELMICROSCOPIO
La luz incidente atraviesa undiafragma anular, y la lente delcondensador focaliza un anillo circularde luz sobre la muestra. La luz quepasa sin obstáculos a través de lamuestra es focalizada por el objetivo
sobre el grueso anillo gris de la placade fase, que absorbe parte de la luzdirecta y altera su fase en un cuartode longitud de onda. Si una muestrarefracta ó difracta la luz, se altera lafase de algunas ondas lluminosas y
éstas se redirigen a través de ladelgada región clara de la placa defase. Se recombinan las lucesrefractada y no refractada en el planode la imagen para formar la imagen.
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A'(SE DELMICROSCOPIO
Pasos para el ajuste de iluminación Köhler:
1.- Enfoca el especimen.2.- Con el diafragma completamente cerrado localiado lo m!s cercadel origen de lu "campo iris# de manera $ue puedas %er los l&mites
del diafragma.'.- (rae los m!rgenes del campo iris a enfo$ue aumentando odisminu)endo el enfo$ue con la arueda del condensador. (anto elespecimen como el iris de*en estar en foco.+.- Centra la imagen del campo iris usando las ruedas decondensador-centrador.,.- *re el centrado ) enfoca el campo iriso de maneras $ue los
m!rgenes del campo iris estn m!s all! del campo de %isión./.- justa el condensador iris para incrementar o disminuir elcontraste de la imagen. 0a apertura óptima depende del especimen.unca uses esta apertura para controlar la intensidad de lu..- justa la intensidad de lu con el potenciómetro o con filtros dedensidad neutra "para fotograf&a en color#.
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RA)ECORIA DE LA L(* EN L MICROSCOPIO DE!ASES
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ara con"ertir un microscopio con"encional enuno de contraste de fases se sustitu&e elcondensador & el ob#eti"o por los de contraste
de fases, los cuales contienen un 'ltro enanillo & una placa de fases respecti"amente
Los ob#eti"os de contraste de fases se
identi'can por sus letras "erdes & la indicaci$ndel tama-o del anillo de fases +%1, %2, %3 o%C, %L, %
?Se puede con"ertir el microscopio normal enuno de contraste de fases@
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