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Cromatografía de Líquidos
M. en C. Elba Rojas Escudero.
Separación
◼ Para separar se emplean básicamente tres
alternativas:
◼ Separaciones mecánicas
◼ Procesos cinéticos y electrocinéticos
◼ Equilibrios de distribución entre dos fases
Elba Rojas E.
Cromatografía
Sólido Líquido Sólido Líquido
Gas Líquido
CGS CGL CLS CLL
Elba Rojas E.
Gas Líquido
Columna Plano
CLS CLL CFE CII CE
CPG CFG
CCF CP
Cromatografía
Elba Rojas E.
Proceso Cromatográfico
◼ La fase móvil fluye, arrastrando consigo los
solutos
◼ Los solutos se reparten entre ambas fases
MuestraFase móvil Fase estacionaria
Elba Rojas E.
Muestra
Elba Rojas E.
Objetivos
SeparaciónMezcla de
compuestos
Cuantitativo
Purificación
Cualitativo
Elba Rojas E.
Cromatografía
◼ Fase Normal
◼ FE → Polar
◼ FM → No polar
◼ Fase Inversa
◼ FE → No polar
◼ FM → Polar
Elba Rojas E.
Elución
◼ La muestra se aplica al principio de la
columna como una banda fina
◼ El eluyente tiene menor afinidad por la fase
estacionaria que los solutos
◼ Los solutos avanzan por el sistema a
velocidades diferentes, menores a la de la
fase móvil
◼ Los solutos se separan en bandas que eluyen
al final de la columna
Elb
a R
oja
s E
.
Requisitos de la muestra
◼ Presión de vapor baja
◼ Compuestos iónicos
◼ Compuestos de peso molecular elevado
◼ Termolábil
Elba Rojas E.
Instrumentación
Fase móvilBomba de
alta presión
Inyector
Columna
Detector
Muestra
Control de
temperatura
Gradiente
de elución
Registrador
Elb
a R
oja
s E
.
Fase móvil
Disolvente o
Hexano 0.00
Isoctano 0.01
Éter isopropílico 0.22
Cloruro de metileno 0.32
Acetonitrilo 0.50
Metanol 0.73
Elba Rojas E.
Fase móvil
◼ Disolventes grado cromatográfico
◼ Agua de 18 m
◼ Baja viscosidad
◼ No volátil
◼ Miscibilidad
◼ Filtrada
◼ Sin oxígeno disuelto (degasificada)
◼ Solubilidad de los analitos
◼ Compatible con el detectorElba Rojas E.
Cromatografía Fase Inversa
◼ F E
◼ Sílica químicamente modificada con
grupos no-polares: hidrocarburos
saturados: C2 dimetil, C4 tetrametil,
C8 octil, C18 octadecil
◼ F M
◼ Mezclas: acuosos / orgánicos
H2O + (CH3OH, CH3CH2OH, CH3CN)
Elb
a R
oja
s E
.
Fase estacionaria (columna)
◼ Empaque
◼ Sílica gel, C8, C18, Ciano, Amino,
Resinas, Polímeros
◼ Carga de Carbón 5-20 % w/w
◼ Intervalo de pH = f (FE)
◼ Límite de presión de trabajo
◼ Compatible con la fase móvil
Elba Rojas E.
Cromatografía Fase Inversa
◼ Efecto solvofóbico fuerte:
◼ Parte apolar de la molécula del soluto es mayor
◼ % C en la FE es mayor
◼ Polaridad de la FM es alta (mayor % de H2O)
Elba Rojas E.
Cromatografía Fase Inversa
◼ Ventajas
◼ Reproducibilidad en las separaciones
◼ Estabilidad de la FE (pH 7)
◼ Mezclas: acuosos/orgánicos
H2O + (CH3OH, CH3CH2OH, CH3CN)
Elba Rojas E.
Gradiente de Elución
Elba Rojas E.
Problema general de la
elución
Elba Rojas E.
Elución
Elba Rojas E.
Instrumentación
Fase móvilBomba de
alta presión
Inyector
Columna
Detector
Muestra
Control de
temperatura
Gradiente
de elución
Registrador
Elb
a R
oja
s E
.
Proceso Cromatográfico
◼ El lecho cromatográfico puede ser abierto
(placa) o cerrado (columna)
◼ La fase móvil fluye a lo largo del lecho
cromatográfico en contacto con la fase
estacionaria
Elb
a R
oja
s E
.
Separación de los solutos
Elb
a R
oja
s E
.
Ventajas
◼ Análisis de compuestos iónicos, de alto
peso molecular
◼ Diversidad de columnas y detectores
◼ Formación de derivados pre-columna y
post-columna
◼ Separaciones con control de pH
◼ Separaciones preparativas
Elba Rojas E.
Limitantes
◼ Muestras “relativamente” limpias
◼ Solubilidad de la muestra en la fase móvil
◼ Viscosidad de la fase móvil
◼ Dimensiones de la columna
◼ Presión de trabajo
◼ Intervalo de pH
◼ Utilizar un filtro (pre-columna)
Elba Rojas E.
Equipo para la
formación de derivados
FMFE
Inyector Reactor Detector
FMFE
Inyector Reactor Detector
Elb
a R
oja
s E
.