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DEMOSTRACION DE LA ESPECIFICIDAD ENZIMTICA

1. OBJETIVOS1.1 Demostrar la especificidad enzimtica de la enzima de glucosa oxidasa sobre la glucosa.

2. INTRODUCCION La glucosa oxidasa es producida por Penicillium notatum. Esta enzima tiene una afinidad extremadamente marcada por la glucosa. En la presente prctica vamos a demostrar la especificidad de la enzima sobre un sustrato. Para ello, emplearemos glucosa y fructosa; dos ismeros que tiene la formula general C6H12O6.La Glucosa oxidasa (GOD) cataliza la reaccin siguiente:Glucosa + O2 + H2O2 -----GOD----- cido Glucnico + H2O2.El H2O2 uno de los productos de la reaccin pude ser determinado utilizando la enzima Peroxidasa, la misma que al actuar sobre el H2O2 libera Oxigeno, el cual reacciona con la 4-aminofenazona (4-AF) y el fenol, en forma proporcional a la concentracin de H2O2.La reaccin es la siguiente:2 H2O2 + 4 AF + fenol -----POD---- Quinona coloreada + 4 H2O.

3. MATERIAL METODOS

3.1 Materiales:PipetasTubos de ensayosBao maraCocina elctrica3.2. Reactivos.Solucin fructosa.Solucin glucosa.Solucin GOD/POD.

4. PROCEDIMIENTO:4.1. PREPARACION DE 3 SISTEMAS. Utilizando la tabla a continuacin se debe prepara 3 sistemas. Favor utilizar pipetas individuales por reactivo utilizado (no contaminar pipetas).

Tabla 01: Sistema Experimentales:COMPONENTES Y PROCESOSISTEMA (Tubos)

123

Solucin de Glucosa 1 g/L (mL)-0.1-

Solucin de Fructosa 1 g/L (mL)--0.1

Solucin GOD/POD (mL)2.02.02.0

Incubar a 37 C por 10 minutos.

Agua destilada (mL)3.13.03.0

Mezclar por inversin

Posteriormente leer mediante el colormetro a 505 nm la absorbancia.

5. ESQUEMA.Sistema experimental

FructosaGlucosaGOD-POD

Tubo 13.1Tubo 23.0Tubo 33.0Agua destilada Incubar durante 10 minutos a 37CTubo 3Tubo 2Tubo 1GOD-PODGOD-POD

6. RESULTADO

7. DISCUSION.

8. CONCLUSION.

9. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS.

10. CUESTIONARIO.1. Explicar el diseo experimental: Cul es el propsito de cada tubo. Cul es el tubo control? Es necesario ms de un tubo control? Explicar2. Observar los tubo y anotar sus observaciones en la seccin resultados. Explicar la discusin y conclusiones.3. Disear una tabla con resultados. ResultadosTubos1- 520Abs2-420 Abs2- 520 Abs

1-0.2530.005-0.002

2-0.2480.008-0.013

3-0.2560.012

4. Explique usted los tipos de especificidad enzimtica.5. Qu tipo de especificidad enzimtica representa glucosa oxidasa.6. Citar ejemplos de enzima que catalizan reacciones especficas.