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DENTALTEX
DISEÑO, OBTENCIÓN Y
COMPORTAMIENTO BIOLÓGICO DE
UN VELO DE NANOFIBRAS A DOS
CARAS PARA EL TRATAMIENTO DE
LA ENFERMEDAD PERIODONTAL
Este proyecto cuenta con el apoyo de la Conselleria d’Economia Sostenible, Sectors
Productius, Comerç i Treball de la Generalitat Valenciana, a través del IVACE.
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ÍNDICE DE CONTENIDO
1. FICHA TÉCNICA DEL PROYECTO............................................................ 4
2. ANTECEDENTES Y MOTIVACIONES ........................................................ 6
3. OBJETIVOS DEL PROYECTO .................................................................. 8
4. PLAN DE TRABAJO ............................................................................ 10
5. RESULTADOS OBTENIDOS ................................................................. 25
6. TRANSFERENCIA A EMPRESAS............................................................ 28
7. COLABORADORES EXTERNOS DESTACADOS ........................................ 31
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1.FICHA TÉCNICA DEL PROYECTO
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Nº EXPEDIENTE IMAMCI/2018/1
TÍTULO COMPLETO
DENTALTEX. Diseño, obtención y
comportamiento biológico de un velo de
nanofibras a dos caras para el
tratamiento de la enfermedad
periodontal.
PROGRAMA Plan de Actividades de Carácter no
Económico 2018
ANUALIDAD 2018
PARTICIPANTES AITEX
COORDINADOR AITEX
ENTIDADES
FINANCIADORAS
IVACE – INSTITUT VALENCIÀ DE
COMPETITIVITAT EMPRESARIAL
www.ivace.es
ENTIDAD
SOLICITANTE AITEX
C.I.F. G03182870
Este proyecto cuenta con el apoyo de la Conselleria d’Economia Sostenible,
Sectors Productius i Treball, a través de IVACE (Institut Valencià de Competitivitat Empresarial)
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2.ANTECEDENTES Y MOTIVACIONES
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Debido a la morfología y capacidad de liberación de fármacos y/o principios activos de los
velos de nanofibras, hacen que su utilización como barrera en la terapia periodontal
pudiese justificar una alternativa óptima a las membranas sin aditivos que se utilizan
actualmente.
La terapia periodontal tiene como objetivo la regeneración del periodonto. El conjunto del
periodonto está compuesto por la encía, el hueso alveolar y los ligamentos periodontales.
El método con mayor eficacia como terapia para tratar enfermedades periodontales es, en
la actualidad, la Regeneración Tisular Guiada (RTG). Básicamente consiste en colocar una
barrera física sobre el defecto periodontal, excluyendo así a los tejidos gingivales durante
las etapas tempranas de curación. Es decir, se trata de separar la zona ósea de la zona
que recubre el diente (zona periodontal).
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3.OBJETIVOS DEL PROYECTO
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El objetivo principal del presente proyecto ha sido desarrollar un velo de nanofibras
bioabsorbible a dos caras, capaz de aportar por cada una de ellas propiedades específicas
para el tratamiento de las distintas zonas afectadas por una enfermedad periodontal.
De tal forma que, una cara del velo estaría destinada a la regeneración del hueso alveolar
y la otra capa, destinada a la regeneración de los ligamentos periodontales y el cemento
radicular.
Para lograr el objetivo propuesto se optó por desarrollar la tecnología de electrospinning,
con la que es posible obtener un velo de nanofibras poliméricas aplicando un alto potencial
eléctrico a una disolución polimérica precursora que puede aditivarse fácilmente con
fármacos específicos. Para el tratamiento de la zona ósea se utilizarían sales inorgánicas
de calcio que provoquen la diferenciación de células en osteoblastos y para el tratamiento
de la zona del ligamento periodontal se utilizaría un fármaco para diferenciar células en
cementoblastos.
Planteando conseguir un prototipo final que cumpla con los siguientes requisitos:
• Ser bioabsorbibles, no tóxico y no antigénico
• Evitar la penetración de células a través del prototipo
• Poseer la suficiente rugosidad que sirva de matriz para la proliferación de células
óseas o dentales
• Capaz de liberar principios activos específicos para las diferenciadas zonas de
aplicación (sales minerales para la zona ósea y un factor de crecimiento del
cemento para la zona dental)
• Capacidad de aislar el defecto óseo
• Tejido estable, bien vascularizado y con alto grado de compatibilidad
• Manejo sencillo
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4.PLAN DE TRABAJO
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CRONOGRAMA DEL PROYECTO
TRABAJOS REALIZADOS POR PAQUETE DE TRABAJO
I. PREPARACIÓN TÉCNICA DEL PROYECTO
T1.1. Actualización de conocimientos relacionados con la materia.
Los objetivos de este paquete de trabajo eran:
− Actualizar la base de conocimiento sobre electrospinning en los campos de
aplicación del proyecto.
− Estudiar los artículos y las patentes concedidas sobre los productos que se pretende
desarrollar, analizar los solicitantes y la tendencia prevista respecto a años
anteriores.
− Conocer el mercado de los productos existentes y las propiedades deseables de
dichos productos.
Artículos técnicos.
El estudio del arte incluye artículos técnicos con la información relevante como el título,
los autores, el año de publicación y el resumen del contenido técnico (abstract).
Los criterios para buscar, comprobar y seleccionar los artículos han sido los siguientes:
− Tiempo: máximo 10 años de antigüedad (se consideran válidas los artículos
publicados entre el 2008 y el 2018).
− Geografía: artículos técnicos publicados en cualquier revista, búsqueda global.
− Keywords: electrospinning, electrospun, nanofiber, guided tissue regeneration.
01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12
F0. Gestión 01/01/2018 31/12/2018
F1. Preparación técnica del proyecto 01/01/2018 31/12/2018
F2. Obtención de muestras y prototipos 01/03/2018 31/12/2018
F3. Caracterización de muestras y prototipos 01/03/2018 31/12/2018
F4. Validación de la biocompatibilidad y la funcionalidad de muestras y prototipos 01/05/2018 31/12/2018
F5. Análisis de los resultados y conclusiones 01/09/2018 31/12/2018
F6. Difusión del proyecto 01/01/2018 31/12/2018
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El estudio se acompaña con gráficos para ilustrar de forma visual la evolución de los
artículos científicos publicados según los últimos años.
Figura 1. Número de publicaciones de artículos relacionados con la tecnología de
electrospinning relacionado con la regeneración tisular guiada.
Podemos observar que la tendencia es ascendente, es decir, que el número de artículos
publicados aumenta año tras año. Aunque los datos del 2018 no están actualizados.
Tras el estudio de su evolución, podemos deducir que seguirá aumentando su tendencia
en los próximos años, aunque poco a poco ya que es un tema relativamente nuevo que
empieza a despuntar.
Patentes.
El estudio de patentes incluye una tabla con las patentes y la información más importante
de cada una de ellas, acompañada de una imagen de la primera página de cada patente
de interés hallada, en la que se pueda observar el título, el tipo de patente, el año de
publicación y el resumen del contenido técnico (abstract). Los resultados se han ordenado
según el interés de los trabajos a desarrollar en el proyecto.
Los criterios para buscar, comprobar y seleccionar patentes han sido los siguientes:
0
5
10
15
20
25
30
35
40
2005 2006 2007 2008 2009 2010 2011 2012 2013 2014 2015 2016 2017 2018
Electrospinning en Regeneración Tisular Guiada
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− Tiempo: máximo 10 años de antigüedad (se consideran válidas las patentes
publicadas entre el 2008 y el 2018).
− Geografía: nacionales, europeas y también norteamericanas y mundiales
(WCT/WO).
− Keywords: electrospinning or electrospun or nanofiber and guided tissue
regeneration or guided bone regeneration.
Figura 2. Evolución del número de patentes basadas en el electrospinning (en general).
Figura 3. Patentes sobre el uso del electrospinning para la regeneración guiada de tejidos.
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Los datos del 2018 no están actualizados; por lo que es un valor que no tendremos en
cuenta a la hora de determinar la tendencia. Podemos ver que el tema de electrospinning
en general es un tema que sigue creando patentes y cuya ascendencia se debe a la
multitud de aplicaciones que posee. En el campo del uso del electrospinning aplicado a la
regeneración de tejidos podemos ver cómo se mantiene relativamente estable.
Figura 4. Número de patentes por países sobre electrospinning para la regeneración
guiada de tejidos.
Se han utilizado herramientas de búsqueda de artículos y bases de datos como
pubmed.gov; así como herramientas de búsqueda y gestión de patentes como Google
Patents y Patent Inspiration.
Productos relacionados.
Se ha realizado un estudio sobre la recapitulación de productos existentes en el mercado
relacionados con la materia.
La búsqueda se refiere a membranas para el tratamiento de la enfermedad periodontal
basados en nanofibras y a membranas de origen animal. En dicho proceso se ha recopilado
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la información existente y posteriormente se han valorado los pros y los contras de cada
producto.
El producto más destacado entre los diferentes productos analizados es la membrana
Activioss™ (Noraker).
Activioss™ es una membrana constituida por polímeros biorreabsorbibles sintetizados a
partir de ácido poliláctico y poliglicólico y presenta una estructura en doble capa. Esta
membrana posee doble capa para el tratamiento diferenciado de cada zona afectada pero
no contiene ningún fármaco para la diferenciación celular de osteoblastos y
cementoblastos.
Figura 5. Imagen de la membrana reabsorbible Activioss.
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T1.2. Preparación de disoluciones poliméricas precursoras y protocolo de obtención.
En este apartado se han realizado dos líneas de investigación:
− Descripción de un protocolo de obtención (mediante las instrucciones pertinentes
para la preparación de disoluciones precursoras y soportes, descripción y
preparación de los equipos y sus operaciones, post-tratamientos, caracterización y
envasado)
− Cálculos, dosis y procesos necesarios para obtener las disoluciones poliméricas de
DL-PLG, con y sin aditivos (HIDROXIAPATITA o factor de crecimiento BMP-7);
necesarias para la producción de los velos de nanofibras que serán destinados a
cada cara del prototipo final mediante la tecnología de Electrospinning.
El polímero DL-PLG (50:50 Poly (DL-lactide-co-glycolide)) se trata de un copolímero de
ácido láctico y ácido glicólico terminado en un grupo éster. Es de base biológica y
biodegradable. Se utiliza en aplicaciones biomédicas. Los polímeros de PLG son
biodegradables, biocompatibles, no inmunogénicos y con perfiles de liberación
controlables que van desde varias semanas a meses.
La Hidroxiapatita es adecuadas para la fabricación de injertos óseos tales como sustitutos
óseos inyectables. Debido a su alta similitud con el mineral óseo, es altamente
osteostimulante, promoviendo la adhesión de las células óseas y la formación rápida de
hueso nuevo. Los dispositivos médicos fabricados hidroxiapatita permiten una
regeneración ósea rápida, segura y son altamente biocompatibles. El uso de estos
materiales no han desarrollado reacciones adversas. En aplicaciones periodontales y
maxilofaciales se utiliza para: relleno de defectos periodontales, relleno óseo alveolar,
aumento y elevación de la base sinusal, reconstrucción de los defectos del quiste
mandibular y huecos después de las extracciones de dientes
La Proteína Morfogenética Ósea 7 (BMP-7) es un potente modulador de la osteogénesis y
tiene propiedades osteoinductivas. Se encuentra en los tejidos óseos humanos. Una de las
principales metas de la terapia génica con BMP es la regeneración periodontal. Para la
diferenciación, la BMP-7 se une a receptores específicos de las células indiferenciadas y se
transmite la señal para la formación de hueso a través de las proteínas
Se han realizado distintas disoluciones. En primer lugar, se han probado distintas
configuraciones polímero-disolventes para seleccionar las candidatas a constituir cada cara
destinada a diferentes zonas periodontales y a albergar los aditivos propuestos. Una vez
definidos los polímeros óptimos a utilizar para cada cara, se ha procedido a electrohilar
una capa sobre otra para crear el velo de 2 caras obteniendo muestras sin aditivos
(control) y otras con los diferentes aditivos (Hidroxiapatita o BMP-7).
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La finalidad de las mismas era aportar unas concentraciones determinadas de cada aditivo
a cada velo que compone el prototipo. Dichas concentraciones han sido determinadas por
profesores del Departamento de Patología de la Universitat de València Estudi General y
técnicos especializados de la Asociación de Investigación de la Industria Textil (AITEX).
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II. OBTENCIÓN DE MUESTRAS Y PROTOTIPOS. OPTIMIZACIÓN
Los objetivos de este paquete de trabajo eran:
− Encontrar polímeros óptimos para el tratamiento de cada zona de la enfermedad
periodontal.
− Aditivar los velos de nanofibras con sales inorgánicas de calcio como la
Hidroxiapatita y con factores de crecimiento como la proteína BMP-7.
− Conseguir electrohilar velos de nanofibras compuesto por 2 capas aditivadas
distintas.
En primer lugar, se realiza una batería de muestras preliminares de velos de nanofibras
de una única capa a partir de diferentes disoluciones poliméricas. Se realizan muestras sin
fármaco y se caracterizan mediante microscopía electrónica de barrido (SEM). Tras la
caracterización de las muestras obtenidas, se seleccionan los mejores candidatos para
cada una de las caras y se realizan nuevas muestras para estudio de viabilidad celular.
Figura 6. Detalle del proceso de electrospinning.
Una vez definidas las disoluciones de las que se obtienen las muestras óptimas para utilizar
en cada cara del prototipo, se realizan pruebas de electrospinning para obtener velos de
nanofibras a 2 caras.
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Posteriormente se realizan nuevas disoluciones, a partir de las seleccionadas como
óptimas para cada cara y se les añaden sus correspondientes aditivos para el tratamiento
de cada zona periodontal; produciéndose así nuevas muestras por cada cara por separado.
A dichas muestras se les realizan, de nuevo, estudios de Bioburden y Citotoxicidad.
El proceso se finaliza con la obtención de muestras o prototipos de velos de nanofibras a
2 caras, aditivados por principios activos distintos en cada una de ellas.
Lámina de corcho
Cara A (velo de
nanofibras de DL-PLG
con HA)
Cara B (velo de
nanofibras de DL-PLG
con BMP-7)
Lámina de corcho
Figura 7. Esquema de prototipo formado por 2 velos de nanofibras aditivados. Imagen
SEM a 600x.
Cara A (velo de
nanofibras de DL-PLG
con HA)
Zona de intersección
entre caras
Cara B (velo de
nanofibras de DL-PLG
con BMP-7)
Figura 8. Esquema de prototipo formado por 2 velos de nanofibras aditivados. Imagen
SEM a 3000x.
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III. CARACTERIZACIÓN DE MUESTRAS Y PROTOTIPOS.
Se realiza un estudio morfológico de cada muestra obtenida mediante la visualización a
través de un microscopio electrónico de barrido (SEM).
Figura 9. Detalle de las diferentes caras del prototipo formado por 2 velos de nanofibras
aditivados. Imágenes SEM a 3000x. Imagen Izquierda: Cara A (DL-PLG + HA) Imagen
derecha: Cara B (DL-PLG + BMP-7)
Por medio de un software de análisis de diámetros de nanofibras, se obtienen los
histogramas. Con ellos se determina que las nanofibras pertenecientes al prototipo final,
poseen un rango aproximado de diámetros (en ambas caras) entre los 500-950
nanómetros.
Ensayos BIOBURDEN
El ensayo se basa en las normas UNE-EN ISO 11737-1: 2007 + UNE-EN 11737-1:
2007/AC:2009 o en la Farmacopea Española o Europea.
El objetivo de este ensayo es determinar el número de microorganismos viables en el
producto, o crecimiento total de microorganismos, (recuento total de gérmenes aerobios
y de mohos y levaduras). Se evalúa de este modo la calidad sanitaria de los productos
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analizados, además de las condiciones higiénicas de la materia prima y de la manipulación
del mismo previa a la esterilización.
En todas las muestras estudiadas los resultados están muy por debajo del nivel máximo
del requisito, por lo que cualquier muestra, con o sin acabado, de los velos de nanofibras
obtenidos cumplirían la norma UNE-EN 13795:2011+A1:2013.
Ensayos citotoxicidad
Se realiza según la norma UNE-EN ISO 10993-5:2009. Este ensayo evalúa el potencial
citotóxico de los productos. Este método ‘in vitro’ especifica la incubación de células de
cultivo en contacto con un producto y/o extractos de un producto durante un período de
tiempo, tras el cual se valora cuantitativa y cualitativamente la respuesta biológica de las
células.
Todas las muestras estudiadas cumplen exitosamente la norma UNE-EN ISO 10993-
5:2009 de citotoxicidad.
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IV. VALIDACIÓN DE PROTOTIPOS.
Se han validado la citotoxicidad, biocompatibilidad y la funcionalidad de muestras y
prototipos mediante cultivos celulares in vitro.
Los estudios se han llevado a cabo con la colaboración entre el Departamento de Patología
de la Universitat de València y Aitex.
En este estudio se han empleado dos tipos celulares, ambos de origen humano:
• Células madre de pulpa dental humana (hDPSC).
• Células madre de ligamento periodontal (hPDLSC).
• Velos de DL-PLG con Hidroxiapatita (PLG-HA) sobre hDPSC:
Adhesión y morfología
Figura 10. Adhesión y crecimiento de células hDPSC sobre velos PLG-HA.
El crecimiento y la morfología de las células fueron normales durante los periodos de
cultivo empleados y, con las técnicas utilizadas, no se apreciaron alteraciones nucleares
ni citoplasmáticas. Como se observa, los resultados obtenidos fueron muy similares en
todas las réplicas del velo PLG‐HAp. Las células se adhirieron sobre los velos a las 4 horas
de la siembra. A partir de las 24 h se aprecia que adquieren una morfología elongada,
fibroblástica, por lo general más alargada que la de las células crecidas directamente sobre
el soporte de vidrio. La distribución de las células sobre la superficie de los velos no fue
homogénea, ya que se observaron frecuentemente zonas en que había una mayor
concentración de ellas, disponiéndose en cúmulos redondeados.
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Proliferación
Figura 11. Proliferación de células hDPSC sobre velos PLG-HA.
Se observa una gran dispersión en los valores del número de células crecidas sobre los
velos. Una posible causa de los resultados observados podría ser el que las nano partículas
de hidroxiapatita interfiriesen en la proliferación celular, disminuyéndola. Si fuese así,
quizás este hecho está indicando que, positivamente, las células hDPSC están empezando
a entrar en la vía de diferenciación hacia osteoblastos, lo que podría ralentizar su velocidad
de proliferación y modificar su tamaño.
• Velos de DL-PLG con BMP-7 (PLG-BMP) sobre hPDLSC:
Adhesión y morfología.
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Figura 12. Adhesión y crecimiento de células hPDLSC sobre velos PLG-BMP.
El crecimiento y la morfología de las células fueron normales durante los periodos de
cultivo empleados y, con las técnicas utilizadas, no se apreciaron alteraciones nucleares
ni citoplasmáticas. Las células se adhirieron sobre los velos a las 4 horas de la siembra. A
partir de las 24 h se aprecian adheridas tanto células pequeñas que mantienen una
morfología redondeada, poligonal, como células que se extienden sobre la superficie y
adquieren una morfología más fibroblástica. Es el velo PLG-BMP el que induce esta
morfología más extendida de las células hPDLSC, ya que las células que se cultivaron
durante 24 h sobre vidrio mantuvieron un aspecto homogéneo, siendo la morfología de
todas ellas redondeada, poligonal. Las células se distribuyen de forma homogénea por
toda la superficie del velo, sin que se observe ningún patrón determinado, por lo que se
supone que el BMP-7 quedaría distribuido homogéneamente a lo largo del velo de
nanofibras.
Proliferación
Figura 13. Proliferación de células hPDLSC sobre velos PLG-BMP.
Los resultados obtenidos fueron los esperados para el crecimiento de las células sobre un
soporte aditivado con BMP-7 y que no tiene efectos negativos sobre la proliferación celular.
Como se observa, la proliferación celular empezó a frenarse antes del último punto
experimental analizado (día 7 de cultivo), como cabía esperar, ya que las células presentan
inhibición por contacto y cada vez queda menos superficie libre del velo a la que puedan
adherirse las nuevas células generadas por división.
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5.RESULTADOS OBTENIDOS
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Se han obtenido los siguientes resultados:
• Tras numerosas pruebas con diferentes polímeros capaces de albergar fármacos
específicos en su interior y liberarlos controladamente, se ha escogido el DL-PLG
como óptimo para la producción y caracterización de los prototipos propuestos.
Figura 14. Adhesión y crecimiento de células hDPSC sobre velos PLG.
• Se han producido y validado, velos de nanofibras de DL-PLG con hidroxiapatita
(HA) en su interior, destinados a la regeneración ósea en la enfermedad
periodontal.
• Paralelamente se han producido y validado, velos de nanofibras de DL-PLG
aditivados con factores de crecimiento (BMP7) para regeneración del ligamento
periodontal y el cemento de la raíz dental.
• Tras caracterizaciones mediante ensayos BIO-BURDEN y de CITOTOXICIDAD, se
ha determinado que, tanto en el prototipo final como en cada uno de sus
componentes por separado, el producto tiene una viabilidad del 100% a nivel
celular y no presenta carga bacteriológica.
• Una vez optimizados los resultados de cada velo destinado a cada una de las caras
del prototipo final y conjugando ambos procesos, se ha logrado generar un
prototipo de velo de nanofibras a dos caras.
• Se ha evaluado, mediante ensayos in vitro, el efecto de los velos de electrospinning
en el tratamiento de la regeneración periodontal en términos de cultivos celulares.
Obteniendo velos de nanofibras aditivados no tóxicos, con viabilidad, adhesión
proliferación y diferenciación celular.
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Figura 15. Velo de nanofibras aditivado a 2 caras (Imagen izq: vista macroscópica
superior, Imagen der: vista SEM 3000x de la sección transversal)
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6.TRANSFERENCIA A EMPRESAS
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En cuanto a la transferencia y promoción de resultados, se ha realizado una colaboración
con la empresa BioInica, S.L. con sede en la Comunidad Valenciana y perteneciente al
sector de los servicios técnicos de ingeniería. Está especializada en la ingeniería
biotecnológica dedicada al desarrollo, fabricación y comercialización de maquinaria y
servicios en el ámbito del procesado electro-hidrodinámico y/o aero-hidrodinámico, así
como la fabricación de producto farmacéutico, sanitario, biomédico, productos destinados
a alimentación y otros productos.
Participando en la siguiente fase del proyecto:
FASE 1: Preparación técnica del proyecto:
- Tarea 1.1. Actualización de conocimientos relacionados con la materia.
Revisión, validación y ampliación de la información generada en esta tarea mediante un
asesoramiento técnico sobre el proceso de producción. Para ello se han realizado
revisiones y actualizaciones en las formulaciones necesarias para poder aditivar las
disoluciones precursoras con adición de Hidroxiapatita o del factor de crecimiento BMP-7.
Se han mostrado nuevas configuraciones del equipo para obtener mayores producciones
de muestras en menor tiempo, mediante la instalación de cabezales multiaguja y la
recogida de los velos de nanofibras mediante un sistema de recolección a la continua.
Tras todo ello se ha realizado una puesta en marcha del equipo y una instrucción.
La empresa ha participado en la optimización del producto desde un punto de vista
productivo, teniendo presente la posibilidad de una futura producción y explotación del
producto.
La empresa ha ampliado su conocimiento respecto a la aplicación que puedan tener sus
equipos en el desarrollo de productos biomédicos para tratamientos de enfermedades
periodontales con aditivación de principios activos como la Hidroxiapatita y la proteína
BMP-7, además de nuevas configuraciones del equipo para optimizar el sistema de
producción de velos con varias capas. La empresa ha participado en la optimización del
producto desde un punto de vista productivo, teniendo presente la posible futura
producción y explotación del producto.
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Figura 16. Vista general del útil multiaguja para el proceso de electrospinning.
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31 | P á g i n a
7.COLABORADORES EXTERNOS
DESTACADOS
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I. DEPARTAMENTO DE PATOLOGÍA DE LA UNIVERSITAT DE VALÈNCIA
El trabajo realizado por el Servicio Externo del Departamento de Patología de la Universtiat
de Velència (UV) ha sido la validación de las muestras y prototipos in vitro, que se
encuadra dentro de la FASE 4. “Validación de la biocompatibilidad y la funcionalidad de
muestras y prototipos”.
Dividiendo su trabajo en las siguientes tareas:
T.1. Estudio mediante cultivo celular in vitro de muestras sin aditivos y depositadas sobre
papel, tratadas y sin tratar con plasma. Se estudiarán 2 tipos de velos de nanofibras por
separado; uno para el tratamiento del hueso alveolar y otro para el de la zona del
ligamento periodontal y raíz dental. Se realizarán pruebas con células madre de pulpa
dental (hDPSC) y células de ligamento periodontal (hPLSC).
Velo
SALES
INORGÁNICAS
/ FACTOR DE
CRECIMIENTO
POLÍMERO CULTIVO
CELULAR MUESTRAS TOTAL
Muestra A No 1 hDPSC x 4
16 1’ hDPSC x 4
Muestra B No 2 hPLSC x 4
2’ hPLSC x 4
Cada muestra se ha ensayado por cuadruplicado (4 ensayos diferentes x 4 muestras = 16
muestras)
T.2. Estudio de los cultivos celulares para muestras optimizadas con aditivos añadidos.
Sobre la base de muestras seleccionada en el estudio anterior (tratamiento con plasma
según cultivo celular) se añaden fármacos para modificar el crecimiento celular y se
realizan nuevos ensayos.
Velo
SALES INORGÁNICAS / FACTOR DE
CRECIMIENTO
DISOLUCIÓN POLIMÉRICA
CULTIVO CELULAR
MUESTRAS TOTAL
Muestra A Sí 1 ó 1’ + HA hDPSC x 4
16 1 ó 1’ + TCP hDPSC x 4
Este proyecto cuenta con el apoyo de la Conselleria d’Economia Sostenible, Sectors
Productius, Comerç i Treball de la Generalitat Valenciana, a través del IVACE.
33 | P á g i n a
Muestra B Sí
2 ó 2’ + FC hPLSC x 4
2 ó 2’ + FC + HA/TCP
hPLSC x 4
Siendo: HA (hidroxiapatita), TCP (sales de fosfato cálcico) y FC (factor de crecimiento).
Cada muestra se ha ensayado por cuadruplicado (4 ensayos diferentes x 4 muestras = 16
muestras)
T.3. Estudio mediante cultivo celular in vitro de prototipos con aditivos y depositados sobre
papel, tratados con plasma. Se estudiarán los 2 tipos de velos de nanofibras en conjunto;
una cara para el tratamiento del hueso alveolar y la otra cara para el de la zona del
ligamento periodontal y raíz dental. Se realizarán pruebas con células madre de pulpa
dental (hDPSC) y células de ligamento periodontal (hPLSC) sobre el prototipo conjunto.
Velo
SALES INORGÁNICAS / FACTOR DE
CRECIMIENTO
DISOLUCIÓN POLIMÉRICA
CULTIVO CELULAR
MUESTRAS TOTAL
Prototipo Sí
(1 ó 1’ + HA) ó (1 ó 1’ + TCP)
hDPSC x 4
8 (2 ó 2’ + FC) ó (2 ó 2’ + FC +
HA/TCP) hPLSC x 4
Cada muestra se ha ensayado por cuadruplicado (4 ensayos diferentes x 2 muestras = 16
muestras)