DETERMINACIÓN DE METABOLITOS SECUNDARIOS DEL TALLO DE

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UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA

ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA

INFORME DE TRABAJO DE INVESTIGACIÓN I

DETERMINACIÓN DE METABOLITOS SECUNDARIOS DEL

TALLO DE Croton alnifolius L. (Tunga)

AUTORES:

CARRANZA VEGA, DHAILY ELAINE.

HUAYANAY VIERA, JOHSSY AQUILA.

ASESOR:

Q.F. CASANOVA HERRERA, HUGO ENRIQUE.

TRUJILLO - PERÚ

2009

Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/

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JURADO DICTAMINADOR

Mg. YURI CURO VALLEJOS…………….……………PRESIDENTE

Mg. GUILLERMO RUIZ REYES.………………….……...MIEMBRO

Q.F. HUGO CASANOVA HERRERA…………..….…..…MIEMBRO



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DEDICATORIAS

A Dios.

Por su inmenso amor hacia a mí, por haber iluminado

mi camino y por brindarme fuerza para completar una

meta más en mi camino.

A mis padres: Wilson y Elizabeth.

Por su amor, cariño, comprensión y apoyo sin condiciones

ni medida, porque creyeron en mí, porque admiro su

fortaleza, porque en gran parte, gracias a ellos veo

alcanzado mi meta. Los amo!

A mis hermanos: Luisa y Dark

Por tener una palabra de apoyo durante mis estudios,

por la compañía y el apoyo que me brindan, se que

cuento con ellos siempre.

Dhaily.



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A Dios

Por ser parte de mi vida, por darme fuerza y valentía

cuando no la tengo, por ser justicia, amor y caridad.

A mis padres: Pompilio y Aquila

Por su gran amor, por sus reproches y consejos, por sus

palabras de aliento en mis momentos más tristes, por su

paciencia y tesón, por nunca fallarme, por ser modelo en mi

vida, por creer siempre en mi.

A mis hermanos: Jaqueline y John

Por haber estado siempre a mi lado, por su cariño y apoyo

incondicional, por llenar mi vida de alegría, por compartir

mis triunfos y tristezas.

Johssy



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AGRADECIMIENTOS

A Dios por enseñarnos el camino correcto de la vida,

guiándonos y fortaleciéndonos cada día con su Santo

Espíritu.

A nuestro asesor el Q. F. Hugo Enrique Casanova Herrera

por su amistad, por su paciencia y enseñanzas, por

habernos ayudado en la realización de este trabajo.

Dhaily y Johssy.



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PRESENTACIÓN

Señores Miembros del Jurado:

En cumplimiento con las disposiciones vigentes emanadas del reglamento de

Grados y Títulos de la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la Universidad Nacional de

Trujillo, sometemos a vuestra consideración y elevado criterio, el presente informe de

investigación tipo I titulado: “Determinación de metabolitos secundarios del tallo de

Croton alnifolius L. (Tunga)”.

Esperando que el jurado se sirva a calificar este trabajo según su criterio

establecido, a pesar de la existencia de alguna deficiencia encontrada durante el desarrollo

del presente trabajo de investigación.

Trujillo, Setiembre del 2009

Carranza Vega, Dhaily E. Huayanay Viera, Johssy A.

Autor Autor



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ÍNDICE

RESUMEN………………………………………….……………………..

ABSTRACT……….………………………………...…….……….……….

I. INTRODUCCIÓN…...……………………………………….……..

II. MATERIAL Y MÉTODO...………………………………………..

III. RESULTADOS………….……………………………….....……....

IV. DISCUSIÓN……………..…………………………………............

V. CONCLUSIONES………………...……………………………….

VI. RECOMENDACIONES……………………………………………

VII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS………………………….…..

VIII. ANEXOS

i

ii

1

6

19

21

34

35

36



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RESUMEN

Cada día se presta más atención al estudio de las plantas medicinales de forma

que la etnobotánica, la fitoterapia y la fitoquímica están tomando un auge insospechado

ya que el empleo de las plantas medicinales con fines curativos es una práctica que se ha

utilizado desde tiempo inmemorial, y que desde el comienzo de la medicina fueron ellas

las que proveyeron las estructuras bases para numerosos medicamentos. La

identificación de la planta en estudio se realizó mediante el método tradicional o clásico

de herborización y su clasificación se llevó a cabo comparando el material fresco en el

Herbarium Truxillensis de la Universidad Nacional de Trujillo, llegando a concluir que

se trata de Croton alnifolius L. La finalidad del estudio fue extraer, separar en

fracciones e identificar metabolitos secundarios presentes en el tallo de Croton

alnifolius L. “Tunga”. Se trabajó con la marcha fitoquímica descrita por la Dra. Olga

Look y modificada por el Q. F. Hugo Casanova Herrera realizando la extracción de

principios activos a partir de 50 g de tallo de Croton alnifolius L. seco y molido, para

luego comenzar a separar los mismos con solventes de diferente polaridad, y con

cambios de pH aprovechando la solubilidad de los principios activos, llegando así a

obtener fracciones A, B, C, D y E; a las cuales se procedió a realizar la identificación

del tipo cualitativo, haciendo uso de reactivos de coloración y precipitación; también se

realizò la identificación de saponinas. Se logró determinar la presencia de taninos,

flavonoides, esteroides, quinonas, cardenólidos, alcaloides y saponinas en el tallo de

Croton alnifolius L.

Palabras claves: Croton alnifolius L., marcha fitoquímica, metabolitos secundarios.

i



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ABSTRACT

More and more we're paying attention to the study of the medicine plants, so the

ethnobotany, phytotherapy and the phytochemistry are taking an unexpected development.

We know that the use of medicine plants with curative aims; is a practice which has been

used since other times and from the beginning of the medicine. They gave us the bases for

numerous medicine production. The identification of this botany specie was done through

the traditional method of herbarium and its classification was done by comparing the fresh

material in the herbarium of the National University of Trujillo to conclude that treats of

Croton alnifolius L. The goal of this research was : to extract, separate infractions and

identify the secondary matabolytes presents in the stem of Croton alnifolius L. "Tunga" it

was worked with phytochemistry described for Dr. Olga Look and modified for the

studied by the Ch. Hugo Casanova Herrera he did the extraction of the active elements

from 50 gr of stem of Croton alnifolius L., dried and crushed, then he separated the

components with solvents of different polarity and with changes of pH, using the solubility

of active elements; with this process he got A, B, C, D and E fractions, of which they were

identified in a qualitative way, using the coloration and precipitation reagents; also

performed the test for saponins. The precense of tannin, flavonoides, esteroides, quinane,

cardenolidos, alkaloids and saponines were found in the abstract of the stem of Croton

alnifolius L.

KEY WORDS: Croton alnifolius L., Phytotherapy March, Secondary Metabolytes.

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ANEXO Nº 01: FICHA DE INGRESO AL HERBARIUM TRUXILLENSIS

(HUT) DE Croton alnifolius “Tunga”



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ANEXO Nº 02: EJEMPLAR DE Crotón alnifolius EN EL HERBARIO

TRUXILLENSIS.



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ANEXO Nº 03: DISEÑO DE INVESTIGACIÓN

MARCHA FITOQUÍMICA DESCRITA POR LA DRA. OLGA LOOK

MODIFICADA POR EL Q.F. HUGO CASANOVA HERRERA

IDENTIFICACIÓN DE SAPONINAS



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ANEXO Nº04: REACCIONES DE COLORACIÓN Y

PRECIPITACIÓN SEGÚN FRACCIÓN

Fracción “A”

- Fenoles FeCl3

- Flavonoides Shinoda.

- Taninos FeCl3 ,

Gelatina

Fracción “B”

- Esteroides Liebermann- Burchard

Ácido tricloroacético

- Quinonas Borntränger

Sodio bisulfito

Fracción “C”

- Cardenólidos Baljet.

Legal

Tollens

- Esteroides Ácido tricloroacético

Liebermann- Burchard

- Alcaloides Dragendorff,



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Ácido silicotungstico

Hager

Keller

Wagner

Murexida

Mayer

Fracción “D”

- Flavonoides Shinoda,

Ácido sulfúrico

Álcalis

Amoniaco

Dimroth

- Taninos FeCl3

- Cardenólidos Baljet.

Legal

Tollens

- Esteroides Ácido tricloroacetico

Liebermann- Burchard

Rosenthaler



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- Alcaloides Dragendorff,

Ácido silicotungstico

Hager

Keller

Wagner

Murexida

Mayer

Fracción “E”

- Taninos Gelatina

FeCl3

- Flavonoides Ácido sulfúrico

Dimroth

Identificación de saponinas:

Espuma

Molish



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GLOSARIO

Alcaloide: Cada uno de los compuestos orgánicos nitrogenados de carácter básico

producidos casi exclusivamente por vegetales. En su mayoría producen acciones

fisiológicas características, en que se basa la acción de ciertas drogas, como la morfina,

la cocaína y la nicotina. Muchos se obtienen por síntesis química.

Alcaloides del Ergot: El cornezuelo es el esclerocio desecado del hongo Claviceps

purpurea, que se desarrolla en el ovario del centeno (Secale cereale). Los alcaloides son

los principios activos del cornezuelo y aquellos mas farmacológicamente activos se

pueden clasificar en 3 grupos:

a) Grupo de la Ergometrina: ergometrina, ergometrinina.

b) Grupo de la Ergotamina: ergotamina, ergotaminina, ergonina, ergosinina.

c) Grupo de la Ergotoxina: ergocristina,ergocristinina, ergonina ergosinina.

Antioxidante: Aquellos elementos que tienen como función eliminar de nuestro

organismo los radicales libres.

Antraquinona: Estructura derivada del antraceno, tienen

propiedades laxantes. Posee dos cetonas en el anillo central.

Antocianidina: El aglicón tiene una estructura derivada del

ion flavinio, puede tener el grupo OH en su estructura.

O

O

Antraquinona

O

OH

Antocianidina



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Antocianina: Cada uno de los pigmentos que se encuentran disueltos en el citoplasma

de las células de diversos órganos vegetales, y a los cuales deben su color las corolas de

todas las flores azules y violadas y de la mayoría de las rojas, así como también el

epicarpio de muchos frutos.

Astringente: Cualquiera de las sustancias que con su aplicación externa local (tópica),

retraen los tejidos y pueden producir una acción cicatrizante, antiinflamatoria y

antihemorrágica.

Aurona:

Biocidas: Sustancias químicas sintéticas, naturales o de origen biológico o de origen

físico y están destinados a destruir, contrarrestar, neutralizar, impedir la acción o ejercer

un control de otro tipo sobre cualquier microorganismo considerado nocivo para el

hombre.

Biodiversidad: Término por el que se hace referencia a la amplia variedad de seres

vivos sobre la Tierra y los patrones naturales que la conforman, resultado de miles de

millones de años de Evolución según procesos naturales y también, de la influencia

creciente de las actividades del ser humano. La biodiversidad comprende igualmente la

variedad de ecosistemas y las diferencias genéticas dentro de cada especie que permiten

la combinación de múltiples formas de vida, y cuyas mutuas interacciones y con el resto

del entorno, fundamentan el sustento de la vida sobre el planeta.

O

O

Aurona



http://es.wikipedia.org/wiki/Tejido_(biolog%C3%ADa)

http://es.wikipedia.org/wiki/Cicatriz

http://es.wikipedia.org/wiki/Antiinflamatorio

http://es.wikipedia.org/wiki/Hemorragia

http://es.wikipedia.org/wiki/Microorganismo

http://es.wikipedia.org/wiki/Tierra

http://es.wikipedia.org/wiki/EvoluciÃ³n_biolÃ³gica

http://es.wikipedia.org/wiki/Ser_humano

http://es.wikipedia.org/wiki/Ecosistema

http://es.wikipedia.org/wiki/GenÃ©tica

http://es.wikipedia.org/wiki/Vida

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Carragenano: O carragenina (o más propiamente los carragenanos, dado que es una

mezcla de varios polisacáridos) se encuentra rellenando los huecos en la estructura de

celulosa de las paredes celulares de algunas algas de varias familias de Rhodophyceae

(algas rojas). Estas algas se han utilizado desde hace al menos 600 años para fabricar

postres lácteos, simplemente haciéndolas hervir en leche para que se liberen los

carragenanos.

Chalcona: Con el anillo C abierto

Cicatrizante: Estimula la curación de heridas por medio de la formación de tejido

cicatrizante.

Corteza: Parte exterior y dura de ciertos frutos y algunos alimentos; p. ej., la del limón,

el pan, el queso, etc. Superficie de órganos animales o vegetales.

Curtir pieles: Preparar y tratar las pieles para convertirlas en cuero.

Desnaturalización: Es cualquier proceso por el cual el ordenamiento espacial de una

proteína cambia de la estructura ordenada de la molécula original hacia una

configuración tridimensional mas desordenada.

Disolvente: sustancia liquida que por métodos físicos o químicos disuelve a otra.

Droga: Es toda materia prima de origen biológico que directa o indirectamente sirve

para la elaboración de medicamentos, siendo el principio activo la sustancia responsable

de la actividad farmacológica de la droga. La droga puede ser todo vegetal o animal

entero, órgano o parte del mismo, o producto obtenido de ellos por diversos métodos

O

A

B

C

Chalcona



http://es.wikipedia.org/wiki/Carragenina

http://es.wikipedia.org/wiki/PolisacÃ¡rido

http://es.wikipedia.org/w/index.php?title=Rhodophyceae&action=edit&redlink=1

http://es.wikipedia.org/wiki/Alga

http://es.wikipedia.org/wiki/Principio_activo

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que poseen una composición química o sustancias químicas que proporcionan una

acción farmacológica útil en terapéutica.

Droga vegetal: Parte de la planta que contiene el principio activo y que se utiliza en

terapéutica. Algunos ejemplos de drogas vegetales son: corteza de tilo, hojas de menta,

raíz de ipecacuana, etcétera.

Endemia: Enfermedad que reina habitualmente, o en épocas fijas, en un país o

comarca.

Endémico: Propio y exclusivo de determinadas localidades o regiones.

Espirostano: Estructura hexacíclica de 2 a

mas átomos de carbono. Su estructura deriva

del Ciclopentanoperhidrofenantreno con 2

heterociclos de 5 y 6 miembros y con una

cadena lateral en la posición 7.

Esteroide: Sustancia de estructura policíclica de la que derivan compuestos de gran

importancia biológica, tales como esteroles, ácidos biliares, hormonas, etc.

Extracción: Procedimiento de separación de una sustancia que puede disolverse en dos

disolventes no miscibles entre sí, con distinto grado de solubilidad y que están en

contacto a través de una interfase.

Fenol: Alcohol derivado del benceno, obtenido por destilación de los aceites de

alquitrán. Se usa como antiséptico en medicina.

O

O CH3

H

H

H

H

Espirostano



http://es.wikipedia.org/wiki/Sustancia

http://es.wikipedia.org/wiki/Disolvente

http://es.wikipedia.org/wiki/Solubilidad

http://es.wikipedia.org/wiki/Interfase

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Fitoquímica: Disciplina científica que tiene como objeto el aislamiento, análisis,

purificación, elucidación de la estructura y caracterización de la actividad biológica de

diversas sustancias producidas por los vegetales.

Flavanona: Sin doble enlace en la posición 2 y 3 y H

en la posición 3

Flavona: Tipo de flavonoide con doble enlace en la posición

2 y 3 y con Hidrogeno en la posición 3.

Flavonol: Con OH en posición 3.

Fuerzas intermoleculares: Se producen cuando los átomos pueden formar unidades

estables llamadas moléculas mediante la compartición de electrones. Las fuerzas de

atracción entre moléculas reciben el nombre de enlaces intermoleculares y son

considerablemente más débiles que los enlaces iónicos, covalentes y metálicos. Las

principales fuerzas intermoleculares son: enlace por puente de hidrógeno y las fuerzas

de Van der Waals.

Goma: Sustancia viscosa e incristalizable que naturalmente, o mediante incisiones,

fluye de diversos vegetales y después de seca es soluble en agua e insoluble en el

alcohol y el éter. Disuelta en agua, sirve para pegar o adherir cosas.

2

3

3

O

OFlavona

O

O

Flavanona

3

O

O

OHFlavonol



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Infusión: Bebida que se obtiene de diversos frutos o hierbas aromáticas, como té, café,

manzanilla, etc., introduciéndolos en agua hirviendo. Acción de extraer de las sustancias

orgánicas las partes solubles en agua, a una temperatura mayor que la del ambiente y

menor que la del agua hirviendo.

Jugo: Zumo de las sustancias animales o vegetales sacado por presión, cocción o

destilación. Parte provechosa, útil y sustancial de cualquier cosa material o inmaterial.

Látex: Jugo propio de muchos vegetales, que circula por los vasos laticíferos. Es de

composición muy compleja y de él se obtienen sustancias tan diversas como el caucho,

la gutapercha, etc. El de ciertas plantas es venenoso, como el del manzanillo; el de otras

muy acre, como el de la higuera común; el del árbol de la leche es dulce y utilizable

como alimento.

Leishmaniasis: Enfermedad zoonótica causada por diferentes especies de protozoos del

género Leishmania. Las manifestaciones clínicas de la enfermedad, van desde úlceras

cutáneas que cicatrizan espontáneamente hasta formas fatales en las cuales se presenta

inflamación severa del hígado y del bazo. La enfermedad por su naturaleza zoonótica,

afecta tanto a perros como humanos.

Longitud de una onda: Es la distancia entre dos crestas consecutivas, en otras palabras

describe lo larga que es la onda. Las ondas de agua en el océano, las ondas de aire, y las

ondas de radiación electromagnética tienen longitudes de onda. La letra griega λ

(lambda) se utiliza para representar la longitud de onda en ecuaciones. La longitud de

onda es inversamente proporcional a la frecuencia de la onda. Una longitud de onda

larga corresponde a una frecuencia baja, mientras que una longitud de onda corta

corresponde a una frecuencia alta.



http://es.wikipedia.org/wiki/Enfermedad

http://es.wikipedia.org/wiki/Zoonosis

http://es.wikipedia.org/wiki/Protozoo

http://es.wikipedia.org/wiki/GÃ©nero_(biologÃa)

http://es.wikipedia.org/wiki/Leishmania

http://es.wikipedia.org/wiki/Ãšlcera

http://es.wikipedia.org/wiki/CutÃ¡nea

http://es.wikipedia.org/wiki/InflamaciÃ³n

http://es.wikipedia.org/wiki/HÃgado

http://es.wikipedia.org/wiki/Bazo

http://es.wikipedia.org/wiki/Perro

http://es.wikipedia.org/wiki/RadiaciÃ³n_electromagnÃ©tica

http://es.wikipedia.org/wiki/Î�

http://es.wikipedia.org/wiki/Frecuencia

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Malaria: Es una enfermedad producida por parásitos del género Plasmodium. Es la

primera en importancia de entre las enfermedades debilitantes, con más de 200 millones

de casos cada año en todo el mundo. La enfermedad puede ser causada por una o varias

de las diferentes especies de Plasmodium: Plasmodium falciparum, Plasmodium vivax,

Plasmodium malariae o Plasmodium ovale. Los vectores de esta enfermedad son

diversas especies del género Anopheles. Como es sabido, tan sólo las hembras de

mosquitos son las que se alimentan de sangre para poder madurar los huevos y por tanto

los machos no pican y no pueden transmitir enfermedades ya que únicamente se

alimentan de néctares y jugos vegetales.

Medicina Alternativa: Designa de forma amplia los métodos y prácticas usados en

lugar, o como complemento, de los tratamientos médicos convencionales para curar o

paliar enfermedades.

Metabolitos Secundarios: Compuestos químicos sintetizados por las plantas que

cumplen funciones no esenciales en ellas, de forma que su ausencia no es fatal para la

planta, ya que no intervienen en el metabolismo primario de las plantas. Los metabolitos

secundarios de las plantas intervienen en las interacciones ecológicas entre la planta y

su ambiente.

Naftoquinona: Con estructura derivada del naftaleno, tienen

poder antiséptico, antibacteriano y antifúngico.

Orbital atómico: Se denomina orbital atómico a cada una de las funciones de onda

monoelectrónicas que describen los estados estacionarios de los átomos hidrogenoides.

No representan la posición concreta de un electrón en el espacio, que no puede

O

ONaftoquinona



http://es.wikipedia.org/wiki/Plasmodium

http://es.wikipedia.org/wiki/Plasmodium

http://es.wikipedia.org/wiki/Plasmodium_falciparum

http://es.wikipedia.org/wiki/Plasmodium_vivax

http://es.wikipedia.org/wiki/Plasmodium_malariae

http://es.wikipedia.org/wiki/Plasmodium_ovale

http://es.wikipedia.org/wiki/Anopheles

http://es.wikipedia.org/wiki/Mosquito

http://es.wikipedia.org/wiki/Medicina

http://es.wikipedia.org/wiki/Metabolismo_primario_de_las_plantas

http://es.wikipedia.org/wiki/ElectrÃ³n

http://es.wikipedia.org/wiki/Estado_estacionario

http://es.wikipedia.org/wiki/Ã�tomo_hidrogenoide

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conocerse dada su naturaleza mecanocuántica, sino que representan una región del

espacio en torno al núcleo atómico en la que la probabilidad de encontrar al electrón es

elevada (por lo que en ocasiones al orbital se le llama Región espacio energética de

manifestación probabilística electrónica o REEMPE).

Paliativo: Que mitiga, suaviza o atenúa el dolor o los efectos negativos de algo.

Pigmento: Es un material que cambia el color de la luz que refleja como resultado de la

absorción selectiva del color. Este proceso físico es diferente a la fluorescencia, la

fosforescencia y otras formas de luminiscencia, en las cuales el propio material emite

luz. Muchos materiales selectivamente absorben ciertas ondas de luz, dependiendo de su

longitud de onda. Los materiales que los seres humanos han elegido y producido para

ser utilizados como pigmentos por lo general tienen propiedades especiales que los

vuelven ideales para colorear otros materiales. Un pigmento debe tener una alta fuerza

teñidora relativa a los materiales que colorea. Además debe ser estable en forma sólida a

temperatura ambiente.

Planta medicinal: Cualquier vegetal que contenga, en cualquiera de sus órganos,

alguna sustancia con actividad farmacológica que se pueda utilizar con fines

terapéuticos o que se pueda emplear como prototipo para obtener nuevos fármacos por

síntesis o hemisíntesis farmacéutica.

Precipitación: Proceso o fenómeno de formación de un segundo estado o fase de la

materia, dentro de una primera fase.

Precipitado: Es el sólido que se produce en una disolución por efecto de una reacción

química o bioquímica. A este proceso se le llama precipitación. Dicha precipitación

puede ocurrir cuando una sustancia insoluble se forma en la disolución debido a una



http://es.wikipedia.org/wiki/Color

http://es.wikipedia.org/wiki/Luz

http://es.wikipedia.org/wiki/ReflexiÃ³n_(fÃsica)

http://es.wikipedia.org/wiki/Fluorescencia

http://es.wikipedia.org/wiki/Fosforescencia

http://es.wikipedia.org/wiki/Luminiscencia

http://es.wikipedia.org/wiki/Longitud_de_onda

http://es.wikipedia.org/wiki/Temperatura_ambiente

http://mx.encarta.msn.com/encyclopedia_761573345/Materia.html

http://es.wikipedia.org/wiki/SÃ³lido

http://es.wikipedia.org/wiki/DisoluciÃ³n

http://es.wikipedia.org/wiki/ReacciÃ³n_quÃmica


http://es.wikipedia.org/wiki/BioquÃmica

http://es.wikipedia.org/wiki/Insoluble

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reacción química o a que la disolución ha sido sobresaturada por algún compuesto, esto

es, que no acepta más soluto y que al no poder ser disuelto, dicho soluto forma el

precipitado.

Preventivo: Que previene un mal o peligro.

Reactivo: Toda sustancia que interactúa con otra (también reactivo) en una reacción

química da lugar a otras sustancias de propiedades, características y conformación

distinta, denominadas productos de reacción o simplemente productos.

Resina: Cualquiera de las sustancias de secreción de las plantas con aspecto y

propiedades más o menos análogas a las de los productos así denominados. Se puede

considerar como resina las sustancias que sufren un proceso de polimerización o secado

dando lugar a productos sólidos siendo en primer lugar líquidas.

Saturación: Estado de una disolución que no admite mas cantidad de soluto para

aquellas condiciones de volumen de disolvente y temperatura.

Solubilidad: Propiedad que presenta un sólido y un líquido, los cuales pueden formar

una mezcla homogénea. La solubilidad depende de la naturaleza del solvente y del

soluto y de la temperatura. Esta propiedad también se extiende a los líquidos y gases

como solutos.

Solvatación: Fenómeno que ocurre en algunas disoluciones en las cuales las moléculas

o iones del soluto se asocian con las del disolvente.

Subtropical: Perteneciente o relativo a las zonas templadas adyacentes a los trópicos,

caracterizadas por un clima cálido con lluvias estacionales.



http://es.wikipedia.org/wiki/Sobresaturada




http://es.wikipedia.org/wiki/Propiedad

http://es.wikipedia.org/wiki/CaracterÃstica

http://es.wikipedia.org/wiki/Producto


http://es.wikipedia.org/wiki/Secreci%C3%B3n

http://es.wikipedia.org/wiki/Planta

http://es.wikipedia.org/wiki/Polimerizaci%C3%B3n

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Tanino: Sustancia astringente contenida en la nuez de agallas, en las cortezas de la

encina, olmo, sauce y otros árboles, y en la raspa y hollejo de la uva y otros frutos. Se

emplea para curtir las pieles y para otros usos.

Tegumento: Sistema Orgánico más extenso de un animal ya que lo recubre por

completo, tanto externamente, como numerosas cavidades internas. Su función es la de

separar, proteger e informar al animal del medio que le rodea; en ocasiones actúa

también como exoesqueleto.

Tensoactivo: O tensioactivo, son sustancias que influyen por medio de la tensión

superficial en la superficie de contacto entre dos fases (p.ej., dos líquidos insolubles uno

en otro). Cuando se utilizan en la tecnología doméstica se denominan como emulgentes

o emulsionantes; esto es, sustancias que permiten conseguir o mantener una emulsión.

Tropical: Perteneciente o relativo a los trópicos.

Tuberculosis: Enfermedad del hombre y de muchas especies animales producida por el

bacilo de Koch. Adopta formas muy diferentes según el órgano atacado, la intensidad de

la afección, etc. Su lesión habitual es un pequeño nódulo, de estructura especial,

llamado tubérculo.



http://es.wikipedia.org/wiki/Ã

http://es.wikipedia.org/wiki/Animal

http://es.wikipedia.org/wiki/Exoesqueleto

http://es.wikipedia.org/wiki/TensiÃ³n_superficial

http://es.wikipedia.org/wiki/TensiÃ³n_superficial

http://es.wikipedia.org/wiki/Emulgente

http://es.wikipedia.org/wiki/Emulsionante

http://es.wikipedia.org/wiki/EmulsiÃ³n

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1

I. INTRODUCCIÓN

El interés del hombre por conocer los diferentes vegetales, siempre ha sido y

sigue siendo una necesidad imprescindible porque de las plantas depende la

mantención de la vida, y por ende la subsistencia del resto de seres vivos, por ser

ellas las únicas transformadoras de material inorgánico en orgánico, es decir, en

alimento1.

Las plantas han sido desde la antigüedad un recurso al alcance del ser

humano para su alimentación y la curación de sus enfermedades; estas últimas

llamadas plantas medicinales, eran veneradas por las virtudes que se les había

reconocido, su uso en medicina tiene una historia honorable, este evento dio lugar

al establecimiento de una relación muy cercana y productiva entre el hombre y su

medio vegetal trasmitiéndose sus virtudes de generación en generación2, 3.

El 80% de la población mundial, más de cuatro mil millones de personas,

utilizan las plantas como principal remedio medicinal, según nos señala la

Organización Mundial de la Salud (OMS), esta práctica está asociada al empirismo

en muchos casos, y faltan estudios químicos, clínicos y epidemiológicos que

confirmen de forma fehaciente los efectos fisiológicos de las plantas y los principios

activos responsables. No hay que olvidar que el 25% de los fármacos existentes se

obtienen de extractos vegetales, o bien se han sintetizado a partir de sustancias

halladas en la investigación fitoquímica4.

La OMS considera como planta medicinal todo vegetal que contiene, en

uno o más de sus órganos, sustancias que pueden ser utilizadas con finalidades

terapéuticas o que son precursores en la semisíntesis químico-farmacéutica5.



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Las plantas contienen elementos activos que las protegen de los insectos,

mohos y otros parásitos, así como de los rayos ultravioleta del sol. Muchos de estos

componentes, ya sea de forma individual o en diferentes combinaciones, poseen

efectos estimulantes, calmantes o terapéuticos en el hombre3.

Las plantas medicinales deben su actividad terapéutica a compuestos

químicos complejos llamados metabolitos secundarios, que son compuestos

químicos de estructura relativamente compleja; cuya función en el vegetal no es

del todo bien conocida y no son esenciales en el desarrollo de la planta ni tienen

presencia universal para todas las especies vegetales, tienen funciones como las

relacionadas con los mecanismos de defensa o protección, y actúan como

biocidas, repelentes y/o inhibidores de la alimentación para patógenos, herbívoros

y competidores, de manera que puedan garantizar su sobrevivencia2,6.

Los metabolitos secundarios son de composición química muy variada, por

lo general pertenecen a una de estas categorías: fenoles, flavonoides, taninos,

esteroides, quinonas, cardenólidos, esteroides, alcaloides, leucoantocianidinas,

saponinas, aceites esenciales (esencias), gomas, resinas, etc.; cada uno de estos

con diversa actividad medicinal y que pueden encontrarse distribuidos por toda la

planta en forma de látex, jugos, secreciones, etc.3.

La importancia terapéutica de las plantas radica en la presencia de familias de

compuestos químicos que poseen propiedades farmacológicas variadas. La lista de

estas familias de compuestos es amplia y variada, y que son consideradas como

importantes por la industria farmacéutica7.

El Perú posee una variedad topográfica y diversidad de climas que favorecen

a la existencia de numerosas plantas, si bien su flora es rica en plantas medicinales,



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es poco lo que se conoce científicamente sobre ellas, y en las ya conocidas no se han

estudiado en su totalidad principios activos, mecanismos de acción, dosis y efectos

colaterales que pueden presentar al ser administradas empíricamente por lo que su

estudio puede otorgarnos posibilidades de aplicación práctica en la terapéutica

médica especialmente aquellas que tienen actividad leishmanicida8, 9.

El género Croton, perteneciente a la familia de las Euphorbiaceae,

comprende más de 1500 especies distribuidas en regiones tropicales y

subtropicales de todo el mundo, muchas de estas especies son utilizadas por la

tradición popular para el tratamiento de numerosas enfermedades. Gran número

de poblaciones indígenas, especialmente de Sudamérica utilizan el látex o

infusiones de las hojas o corteza de diferentes especies de Croton para el

tratamiento de heridas, dolencias estomacales e inflamación10.

Las plantas de este género, en especial Croton alnifolius L., crece en terrenos

arenosos, pendientes o laderas rocosas, secas, quebrada areno-rocosas; ubicadas

entre los 2000-2400 m.s.n.m. en los departamentos de Cajamarca, La Libertad, Lima

y Arequipa, encontrando en el primer departamento que los pobladores de dicha

zona la usaban en el tratamiento empírico contra la leshmaniasis11.

La leishmaniasis es considerada por la OMS como una de las catorce

enfermedades tropicales desatendidas debido a que persisten en las comunidades

más pobres y marginadas, y han sido prácticamente olvidadas, en las regiones menos

desarrolladas12.



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En el Perú, la leishmaniasis constituye una endemia que afecta a 12

departamentos, es la segunda endemia de tipo tropical y la tercera causa de

morbilidad por enfermedades transmisibles luego de la malaria y la tuberculosis13.

La zona endémica comprende aproximadamente el 74% del área total del

país (951 820 km2), se extiende a través de los Andes y los valles interandinos entre

los 6000 y los 3 000 metros sobre el nivel del mar, para la leishmaniasis cutánea, y a

las zonas de selva alta y selva baja por debajo de los 2 000 metros, para la

leishmaniasis mucocutánea14.

Actualmente, los pobladores de la sierra y tribus selváticas, utilizan plantas

con propiedades curativas contra la leishmaniasis, siendo de gran interés su estudio,

ya que el reino vegetal es considerado como fuente de productos naturales con valor

medicinal o de precursores útiles para el desarrollo de nuevos productos

farmacéuticos15.

En la actualidad, dadas las bajas condiciones económicas y la poca

accesibilidad de la población de escasos recursos a las instituciones de salud, surge

como una opción la medicina natural y alternativa, las cuales revaloran el uso de

plantas medicinales con acciones paliativas, preventivas o curativas sobre algunas

afecciones o sintomatologías. En muchos de estos casos, los tratamientos son

empíricos y carecen de fundamentación científica, es por eso el interés de lograr

hacer la identificación de metabolitos secundarios, para relacionar los compuestos

químicos encontrados como parte de su uso en medicina alternativa16.

Sin lugar a dudas establecer la composición fitoquímica, nos otorgará toda

una gama de posibles aplicaciones en la terapéutica que tendrán que ser evaluadas



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estableciendo las propiedades farmacológicas de las mismas, esto nos llevaría a

deducir el efecto que podrían tener los metabolitos presentes en el tallo de Croton

alnifolius L., teniendo como precedente que las especies del género Croton poseen

numerosos beneficios terapéuticos, como se señala en un estudio realizado en Croton

celtidifolius donde se puede evidenciar el efecto antioxidante mediante el incremento

de la actividad de Superoxido dismutasa, y el efecto antiinflamatorio de la fracción

etil acetato del extracto de dicha especie en la pleuritis inducida por carragenanos en

ratas machos (NARDI, G y col) 17; otro estudio, señala el efecto antibacteriano y

cicatrizante de varios de los metabolitos secundarios de diferentes plantas del género

Euphorbia (AMIR, R. )18, y el efecto vasodilatador de dos nuevos diterpenos

aislados de Croton schiedeanus en anillos de rata previamente contraídos con

cloruro de potasio o fenilefrina (GUERRERO, M y col) 19.

El tamizaje fitoquímico preliminar de plantas se hace en muchos países que

tienen una amplia biodiversidad y una cultura de técnicas curativas por productos

naturales, contribuyendo a su conocimiento científico para un posterior aislamiento

del compuesto responsable de la curación o alivio de alguna patología; que podrían

dar lugar en el futuro a una explotación racional de los mismos y por último se

contribuye al desarrollo socioeconómico del país2, 7.

De acuerdo a lo expuesto nos planteamos el siguiente problema de investigación:

¿Cuáles son los posibles metabolitos secundarios presentes en el tallo de Croton

alnifolius L.?



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Lo que nos llevó a plantearnos los siguientes objetivos:

Extraer los metabolitos secundarios presentes en el tallo de Croton alnifolius

L. “Tunga”

Separar en fracciones los metabolitos secundarios presentes en el tallo de

Croton alnifolius L. “Tunga” y realizar la determinación de saponinas.

Identificar los metabolitos secundarios presentes el tallo de Croton alnifolius

L. “Tunga”.



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II. MATERIAL Y MÉTODO

1. MATERIALES

1.1. MATERIAL BIOLÓGICO.

Se utilizaron tallos secos Croton alnifolius L. “Tunga” colectados

al azar en la provincia de Santa Cruz, departamento Cajamarca, en

el mes de marzo del año 2009.

1.2. MATERIAL DE VIDRIO

De uso común en laboratorio.

1.3. EQUIPOS DE LABORATORIO

01 estufa H. W. KESSEL Thelco MOD17

01 refrigeradora Coldex RN30

01 balanza analítica H. W. KESSEL Sartorius PT310

01 Baño maría H. W. KESSEL Sartorius PRECISTERM

01 bomba al vacío 0211-V45M

1.4. REACTIVOS

Ácido sulfúrico cc.

Ácido bórico q. p.



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Ácido clorhídrico cc.

Ácido silicotúngstico q. p.

Bisulfito de sodio q. p.

Cloruro de sodio 97%.

Hidróxido de sodio q. p.

Hidróxido de potasio q. p.

Hidróxido de amonio q. p.

Sulfato de sodio anhidro q. p.

Yoduro de potasio q. p.

Yodo resublimado q. p.

Limadura de magnesio q. p.

Tricloruro férrico q. p.

Nitroprusiato de sodio q. p.

Nitrato de plata q. p.

Ácido acético 99.7%

Ácido pícrico q. p.

Piridina q. p.



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Ácido tricloroacético q. p.

Acetona q. p.

Alcohol amílico q. p.

Alcohol etílico 96º Gay Lussac

Alfa- naftol q. p.

Anhídrido acético.

Amoniaco q. p.

Vainillina q. p.

Gelatina q. p.

Hexano 99.8%

Acido cítrico q. p.

Nitrato de bismuto q. p.

Cloruro de mercurio q. p.

Agua destilada.



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2. MÉTODO:

2.1. Recolección y clasificación de la especie botánica:

La recolección de la especie Croton alnifolius L. “Tunga”, se realizó

en las afueras de la provincia de Santa Cruz.

La identificación de esta especie botánica se realizó mediante el

método tradicional o clásico de herborización, se seleccionó el material en el

campo, verificando que esté en buenas condiciones, en estado de floración y

de fructificación; la identificación se llevó a cabo en el Herbarium

Truxillensis (J. A. HUAYANAY - 49411- HUT) (VER ANEXO 1 Y 2).

Croton alnifolius L.

2.2. Preparación de la muestra:

Se seleccionó los tallos de la planta, limpiándolos adecuadamente;

después se procedió a realizar el secado a temperatura ambiente para luego



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ser cortadas en trozos pequeños y ser trituradas mediante procesos

mecánicos.

2.3. Extracción e Identificación de fitoconstituyentes:

Se pesó 50 g de la muestra triturada y se trató según la Marcha

Fitoquímica preliminar descrita por la Dra. Olga Look y modificada por el

Q.F. Hugo Casanova Herrera20 (VER ANEXO N°3).

De acuerdo con este método para la marcha fitoquímica, cada

muestra fue sometida a la acción extractiva de solventes de diferente

polaridad: Etanol, Hexano y Agua, modificando el pH del medio con el fin

de obtener los metabolitos secundarios de acuerdo a su solubilidad, para

luego llevar a concentrar dichos extractos.

2.4. Procedimiento:

2.4.1. Procesamiento de la muestra:

Primera fase:

Se tomó 50g. de tallo de Croton alnifolius L., seco y

debidamente molido, se agregó 400 mL de etanol y se dejó macerar

por 48 horas, se llevó a reflujo por 3 h para ser filtrado en calor, se

dejó enfriar al filtrado, la parte soluble en agua viene a ser la

Fracción “A” y la no soluble se lleva a concentrar en baño maría

constituyendo el Extracto Seco.



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Segunda fase:

Al extracto seco obtenido se le agregó 30 mL de HCl al 1%, y

se calentó a 50ºC por 15 minutos, y luego se dejó enfriar y se filtró,

obteniéndose la Fracción “B” (insoluble). Nuevamente se agregó al

extracto seco 15 mL de HCl al 1% realizando el procedimiento

anterior. La fase insoluble constituye la Fracción “B” que se unió a

lo obtenido anteriormente, la cual podría contener metabolitos como

esteroides y quinonas. Al unir las dos soluciones viene a ser la

Solución Ácida.

Tercera fase:

Se concentró la solución ácida hasta 45 mL en baño maría. Se

alcalinizó la solución ácida con hidróxido de amonio hasta un pH de

7-8 obteniendo la Solución Alcalina. A la solución alcalina se extrajo

con 25 mL de hexano y 15mL de etanol por dos veces, donde se

formó dos fases: Fase Orgánica y Fase Acuosa.

Cuarta fase:

A la fase orgánica, se lavó con 40 mL de agua donde se

formó dos fases: La fase orgánica a la que se le agregó sulfato de

sodio para deshidratar, se separó la fase acuosa de la orgánica, y

esta última vino a ser la Fracción “C”, donde posiblemente

identificaremos cardenólidos, esteroides y alcaloides; y la fase

acuosa que la uniremos a la fase anterior.



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Quinta fase:

A la fase acuosa, se agregó 25 mL de hexano, por dos veces,

se formó 2 fases: la fase orgánica y la fase acuosa. A la fase

orgánica se agregó sulfato de magnesio para deshidratar, se formó 2

fases, la fase orgánica constituye la Fracción “D” en donde

posiblemente podremos identificar flavonoides, esteroides,

alcaloides, cardenólidos y leucoantocianinas; y la fase acuosa que la

uniremos a la fase acuosa anterior. Obteniendo así la Fracción “E”

donde posiblemente encontraremos flavonoides y

leucoantocianidinas.

Identificacion de saponinas:

Se tomó 1 g de tallo seco y molido, se agregó 50 mL de agua,

llevar a baño maría durante 15 minutos. Luego se filtró en caliente

para obtener la Fracción “F” donde posiblemente identificaremos

saponinas.

2.4.2. Identificación de metabolitos secundarios2, 21, 22:

Con cada una de las fracciones obtenidas se procedió

a la identificación de metabolitos secundarios utilizando

reactivos de coloración y precipitación.

2.4.2.1.1. Reacción de Gelatina Sal: Se preparó una

mezcla de solución de NaCl 5% con solución de

gelatina 1% y se agregó una porción del extracto.



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Un precipitado es indicativo de la presencia de

taninos.

2.4.2.1.2. Reacción con Ácido Sulfúrico: Dan

coloraciones amarillas para flavonas y flavonoles,

anaranjadas o guindas para flavanonas; rojo guinda

o rojo azulado con chalconas y auronas.

2.4.2.1.3. Reacción de Álcalis: La muestra en presencia

de álcalis (NaOH) produce las siguientes

coloraciones: amarillo (flavonas y flavonoles), rojo

flavonas e isoflavonas), púrpura rojizo (chalconas),

café anaranjado (flavonoles) y azúl (antocianidinas).

2.4.2.1.4. Reacción con Amoniaco: En una tira de papel

de filtro colocó una gota de muestra. Se secó y se

expuso a los vapores de amoniaco. La formación de

un determinado color depende del tipo de

flavonoide: amarillo para flavonas, flavonoles y

xantonas; amarillo a rojo para chalconas y auronas;

anaranjado para dihidroflavonoles; incoloro a

anaranjado, dihidroflavonas; y azúl antocianinas.

2.4.2.1.5. Reacción de Dimroth: Se agregó a la muestra

disuelta en acetona, una porción de ácido bórico y

otra de ácido cítrico. La coloración amarillo o

amarillo verde indica presencia de 5 –

hidroxiflavonas.



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2.4.2.1.6. Reacción de Shinoda: A la muestra problema

se agregó un trozo de cinta de magnesio seguido por

gotas de HCl cc, las coloraciones roja (flavonas),

roja a crimson (flavonoles), crimson a magenta

(flavononas) y algunas veces azúl o verde, son

consideradas positivas.

2.4.2.1.7. Reacción con Tricloruro Férrico: Presenta

coloración frente a cualquier compuesto fenólico, la

aparición de un color verde sugiere la presencia de

un derivado de catecol y de un color azúl de un

derivado pirogalol.

2.4.2.1.8. Reacción con Ácido Tricloroacético: La

muestra mas cristales de CCl3 – CO2H dan

coloración a 60°C si se trata de triterpenos

tetracíclicos y esteroides, mientras que pentacíclicos

dan color a partir de 110 °C.

2.4.2.1.9. Reacción de Liebermann – Burchard: Se

tomó 0.5 mL del extracto, se agregó algunas gotas

de ácido acético y 3mL de anhídrido acético, luego

se agregó de 2 a 3 gotas de ácido sulfúrico

concentrado y se vuelve a mezclar. La reacción será

positiva si aparece color azúl o verde naranja o rojo.

2.4.2.2. Reacción de Bornträger: Mezclar la muestra

agitando suavemente con 5 ml de NaOH 10%. La



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reacción es positiva si la fase acuosa toma un color

rojo.

2.4.2.3. Reacción con Sodio Bisulfito: En un tubo de

ensayo se colocó la muestra con bisulfito de sodio.

Agitar vigorosamente hasta que desaparezca el

color de la quinona.

2.4.2.4. Reacción de Baljet: Se mezcló una parte de

solución etanólica de ácido pícrico con una parte de

NaOH 10%, luego se agregó gotas de esta mezcla a

la muestra problema. Las lactonas , -insaturadas

dan coloración rojo claro a oscuro.

2.4.2.5. Reacción de Legal: 1-2 mL de extracto en 2-3

gotas de piridina se mezcló con 1 gota de

nitroprusiato de sodio 0.5% y luego 1-4 gotas de

KOH 2N. Las lactonas , - insaturadas dan color

rojo oscuro.

2.4.2.6. Reacción de Tollens: Se preparó una solución

fresca con 2 ml de AgNO3 5%, 1 gota de NaOH

10% y NH4OH 2% hasta aclarar. Se calentó la

solución y mezcló con el extracto. La presencia de

aldehídos aromáticos y alifáticos, y aminas

aromáticas producen un precipitado negro o espejo

de plata.



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2.4.2.7. Reacción con Ácido Silicotúngstico: Este

reactivo da con los alcaloides precipitados

cristalinos.

2.4.2.8. Reacción de Hager: La solución acuosa

saturada de ácido pícrico produce con los alcaloides

picratos cristalinos de color amarillo.

2.4.2.9. Reacción de Mayer: Este reactivo da con casi

todas las soluciones de alcaloides, precipitados de

color blanco, blanco amarillento o amarillo limón

claro.

2.4.2.10. Reacción de Dragendorff: Este reactivo (nitrato

de bismuto y yoduro de potasio) da, con los

alcaloides en solución débilmente acidulada,

precipitados de color rojo o anaranjado.

2.4.2.11. Reacción de Keller: La muestra en ácido

acético más trazas FeCl3anh./H2SO4, produce color

intenso en interfase con los alcaloides del ergot.

2.4.2.12. Reacción de Murexida: En una cápsula se

colocó el extracto, luego 2 gotas de HNO3 cc.

Evaporar en BM. El residuo exponerlo a vapores de

amoniaco dando color rojo purpureo intenso con los

alcaloides con grupo acido úrico.

2.4.2.13. Reacción de Wagner: Este reactivo es muy

sensible y da con los alcaloides, precipitados



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floculentos que varían del color café claro al rojo o

pardo oscuro.

2.4.2.14. Reacción de Espuma: En un tubo de ensayo se

colocó 2 ml de la muestra y agitar fuertemente

durante 15 segundos. Si a los 15 minutos persiste la

espuma con una altura mayor de 5 mm entonces la

reacción se considera positiva.

2.4.2.15. Reacción de Molish: A 1 mL del extracto se

le agregó 1-2 gotas de α-naftol 5%/Etanol, luego se

agregó por las paredes H2SO4 cc. Si se observa un

anillo violeta que indica la presencia de

carbohidratos de las saponinas.

2.5. Análisis de Resultados:

Los resultados obtenidos se presentan en cuadros donde se explica

en forma cualitativa la presencia (+) o ausencia (-) de los metabolitos

secundarios para cada ensayo realizado.



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III. RESULTADOS:

Cuadro Nº 1: Metabolitos secundarios presentes en el tallo de Croton alnifolius L.

FRACCIÓN METABOLITO

SECUNDARIO

REACCIÓN COLOR/PRECIPITADO RESULTADO

A

Taninos

Gelatina Precipitado +

Tricloruro Férrico Verde oscuro +

Flavonoides

Acido Sulfúrico Naranja (flavanonas) +

Álcalis Amarillo (flavonas y

flavonones)

+

Amoniaco Amarillo (flavonas,

flavonoles, xantonas)

+

Dimroth Amarillo (5-hidroxi

falvona)

+

Shinoda Rojo (flavonoides) +

B

Esteroides

Acido Tricloroacético Rojo oscuro +

Liebermann-Burchard Rojo oscuro +

Quinonas

Sodio Bisulfito Verde claro +

Bornträger Rojo +

C

Cardenólidos

Baljet Rojo ladrillo +

Legal Rojo ladrillo +

Tollens Precipitado negro +

Esteroides

Acido Tricloroacético Sin cambio de color -

Liebermann-Burchard Verde amarillento -

Alcaloides

Acido Silicotúngstico Precipitado +

Hager Cristales amarillos +

Dragendorff Precipitado naranja +

Mayer Precipitado blanco

amarillento

+

Keller Anaranjado verdoso -

Murexida Sin cambio de color -

Wagner Rojo +



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D

Flavonoides

Ácido Sulfúrico Rojo oscuro (chalconas y

auronas)

+

Álcalis Naranja oscuro

(flavonoles)

+

Amoniaco Amarillo (flavonas,

flavonoles y xantonas)

+

Dimroth Amarillo (5-

hidroxiflavona)

+

Shinoda Magenta (flavonoides) +

Taninos Tricloruro Férrico Verde oscuro +

Cardenólidos

Baljet Rojo ladrillo +

Legal Rojo +

Tollens No precipitado -

Esteroides Ácido Tricloroacético No precipitado -

Liebermann- Burchard Verde amarilento -

Alcaloides

Acido Silicotúngstico Precipitado +

Hager Cristales amarillos +

Dragendorff Precipitado naranja +

Mayer Precipitado blanco

amarillento

+

Keller Verde -

Wagner Marrón +

E

Taninos

Gelatina Precipitado +

Tricloruro Férrico Verde oscuro +

Flavonoides

Ácido Sulfúrico Rojo oscuro (chalconas y

auronas)

+

Dimroth Amarillo (5-

hidroxiflavona)

+

IDENTIFICACION DE

SAPONINAS

Espuma > 15 min +

Molish Anillo violeta +

LEYENDA: (-): Ausente. (+): Presente.



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IV. DISCUSIÓN

La identificación de las diferentes drogas es realizada principalmente por

métodos fisicoquímicos a través de una serie de ensayos de tipo cualitativo sobre

la droga entera, pulverizada o incluso extractos de la droga, estos métodos se han

desarrollado para una determinación preliminar de los diferentes constituyentes

químicos en las plantas basados en la extracción de éstos con solventes

apropiados2.

De acuerdo a la marcha fitoquímica descrita por la Dra. Olga Look y

modificada por el Q.F. Hugo E. Casanova Herrera, la muestra fue sometida a la

acción extractiva de solventes de diferente polaridad, bajo determinadas

condiciones, logrando solubilizar los metabolitos secundarios que estén presentes.

Esto se fundamenta en los efectos de polaridad de los solventes, el pH y la

temperatura del medio sobre la solubilidad de los metabolitos secundarios de las

plantas medicinales; es decir que las fuerzas intermoleculares, además de afectar

los puntos de ebullición y de fusión de las sustancias, determinan las propiedades

de solubilidad de los compuestos orgánicos en solventes de diferente polaridad

permitiendo la separación de los metabolitos secundarios en fracciones para luego

realizar la identificación de los metabolitos secundarios haciendo uso de reactivos

de coloración y precipitación20, 23.

Respecto a los solventes utilizados, la polaridad se encuentra muy

relacionada con la solubilidad, es por ello que un compuesto que forma enlaces de

hidrógeno con el agua tiende a ser más soluble en ella que uno que no los forma.

Por tanto, se puede decir que el agua es un excelente disolvente de compuestos



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polares porque los solvata. Así también, el etanol forma puentes de hidrógeno y

puede disolver compuestos polares, pero en menor proporción; el etanol es mejor

solvente que el hexano para sustancias polares, de otro lado el hexano no puede

disolver compuestos polares. Dependiendo de la finalidad deseada, el solvente

utilizado solubiliza, selectivamente o no, ciertas clases de compuestos7, 23.

Entre los solventes generales, los más utilizados son los alcoholes

alifáticos de hasta 3 carbonos o mezclas de estos con agua, hexano y agua. El

etanol, como solvente de polaridad intermedia, solubiliza fitoconstituyentes

afines; su labor se ve facilitada por la secuencia del procedimiento: cambios de

pH, temperatura y de solvente, así el hexano disuelve las membranas vesiculares,

rompiendo las interacciones que mantienen atraídos a los principios activos, hacia

los sistemas hidrofílicos y finalmente, el agua solubiliza los principios activos más

hidrosolubles, debido a su elevada polaridad, situación que escapa a las

particularidades de los solventes anteriores. Estos solventes logran extraer la gran

mayoría de las sustancias naturales de interés. La eficiencia del proceso extractivo

sería mayor cuando menor sea el tamaño de la partícula ya que, así, se obtiene una

mayor área de contacto con el solvente. En la práctica, la presencia de partículas

muy finas dificulta el proceso de extracción, pues presentan compactación y los

procesos de maceración, en donde las partículas pasan al extracto. La penetración

del solvente en fragmentos mayores de la planta es lenta y la salida de las

sustancias extraíbles es difícil, por esta razón, se recomienda la utilización de

tamaños de partícula semejante a polvos moderadamente gruesos en el proceso

extractivo7.



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La agitación hace que nuevas cantidades de solvente, pobre en las

sustancias extraíbles, entre en contacto con el sólido y un nuevo punto de

equilibrio de saturación es alcanzado. El movimiento del líquido, con ayuda de

bombas para la recirculación del solvente o agitadores magnéticos, desplaza el

equilibrio en el sentido de la saturación del solvente, aumentando la eficacia del

proceso7.

La disolución de las sustancias extraíbles es facilitada por el aumento de la

temperatura; de la misma manera que la agitación, la temperatura contribuye al

desplazamiento de la constante de equilibrio de saturación y aumenta la eficiencia

del proceso7.

El pH influye en la solubilidad de diversos compuestos ya que permite la

posibilidad de formación de sales7.

De esta forma se logró hacer la extracción de las fracciones, A, B, C, D y

E, para luego proceder a la identificación de metabolitos secundarios presentes en

ellas, mediante reactivos de coloración y precipitación; y la fracción F donde se

realizó la identificación de saponinas.

Las reacciones de coloración se basan en el movimiento de electrones

generados por sustancias ácidas, básicas o sales, cuando un electrón gana energía

es excitado y sube de nivel, mientras que las reacciones de precipitación se basan

en un intercambio del anión voluminoso del reactivo en acción, que reemplaza a

los aniones pequeños de las sales de los metabolitos secundarios, que tengan esta

característica24.

Los taninos, definidos como productos fenólicos que pueden precipitar las

proteínas a partir de sus disoluciones acuosas dada su capacidad de combinarse



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con las macromoléculas (proteínas, alcaloides, celulosa, gelatina), esta capacidad

para precipitarlas es la base de sus dos propiedades principales: su capacidad de

curtir la piel y su poder astringente, de esta forma se encuentra una reacción

positiva al enfrentar la fracción A frente a la reacción de la gelatina, esta reacción

se debe a la desnaturalización de la gelatina por formación de puentes de

hidrógeno entre el nitrógeno del enlace peptídico de sus aminoácidos y el

hidrógeno de los oxhidrilos fenólicos de los taninos 25, 26.

La reacción de cloruro férrico fue positiva lo que significa que existe la

presencia de taninos y metabolitos fenolados, esta reacción señala el carácter

fenólico, siendo soluble en agua, álcalis diluidos, alcohol, acetona y glicerina, es

un tipo de reacción ácido–base de lewis, teniendo como donador de electrones a

los hidroxilos del catecol del tanino, existiendo la formación de cargas parciales

para la posterior eliminación de átomos de hidrógeno y cloruro hasta llegar a la

formación de un complejo de color verde oscuro, sugieririendo la presencia de

taninos no hidrolizables27.

Los flavonoides se encuentran ampliamente distribuidos en plantas verdes

(especialmente angiospermas), y solo algunos pocos se han detectado en hongos y

algas, a éstos se les atribuye diversas propiedades en las plantas, entre ellos

podemos citar antioxidantes, antinflamatorio, antialérgico, entre otros como la

protección a los vegetales contra la incidencia de insectos, hongos virus y

bacterias los grupos mas numerosos y ampliamente distribuidos de los

constituyentes naturales, tienen una estructura química muy definida, son



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moléculas que tienen dos anillos bencénicos unidos a través de una cadena de tres

átomos de carbono10, 28.

Los flavonoides, son identificados en las fracciones A, D y E, puesto que

su solubilidad depende de la forma en que se encuentren y el número y clase de

sustituyente presente, los flavonoides con hidroxilos fenólicos son solubles en

soluciones alcalinas, pero algunos altamente hidroxilados se descomponen por

acción de las bases fuertes, un hecho que permite reconocerlos y diferenciarlos de

otros, es así como se puede justificar la presencia de flavonoides en la fracción D

y E7.

Los flavonoides al reaccionar con ácido sulfúrico concentrado, lo hacen

específicamente con las flavonas, flavonoles, flavanonas, chalconas y auronas,

dando variación de coloraciones que van desde el amarillo, anaranjado y rojos,

estas coloraciones son producto de la emisión de longitudes de onda diferentes a

las comprendidas entre los 435-510 nm . Es decir que cuando el ácido sulfúrico

ataca al oxígeno del grupo carbonilo del núcleo de los flavonoides, se produce una

deslocalización de electrones, este movimiento de electrones requiere de cierta

cantidad de energía, la cual se obtiene de una determinada longitud de onda, es

decir que cuanto mas número de electrones y grupos cromóforos existan, mayor

deslocalización y menor energía se requerirá24.

En la reacción de álcalis, se observan coloraciones amarillo y anaranjado

indicando la presencia de flavonas, flavononas, y flavonoles respectivamente; el

inductor del movimiento de electrones por el anillo heterocíclico, es el catión

sodio, donde el oxígeno del carbonilo lo solvata 24.



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Del mismo modo, los vapores de amoniaco inducen a la deslocalización de

electrones, dando una coloración amarilla, esto debido a que como la muestra se

encuentra en papel de filtro, los vapores del amoniaco inducen solo el movimiento

de una cantidad determinada de electrones que es menor a las producidas por los

álcalis y el ácido sulfúrico24.

La presencia de 5-hidroxiflavonas, se determinó mediante la reacción de

dimroth, mostrando una coloración amarilla al reaccionar con la muestra, teniendo

en cuenta que su absorción de las bandas están comprendidas entre los 400-480

nm, el ácido bórico, se acopla al flavonoide actuando como un ácido de lewis ya

que presenta un orbital vacío, teniendo una geometría plana trigonal, el boro actúa

como inductor del movimiento de electrones en el sistema conjugado π 22.

La reacción de shinoda (magnesio en ácido clorhídrico) permite distinguir

algunos tipos de flavonoides: coloración naranja con las flavonas, rojo cereza con

los flavonoles, violeta con las flavanonas. En esta reacción, el magnesio metálico

es oxidado por el ácido clorhídrico concentrado, dando como productos al

hidrógeno molecular, que es eliminado en forma de gas y el cloruro de magnesio,

que es el que forma complejos con los flavonoides dando coloraciones

características. El magnesio divalente, actúa sobre el grupo carbonilo de dos

flavonas, produciendo una coloración roja, este aumento de intensidad es debido a

que el magnesio divalente intensifica la coloración por estar doblemente

coordinado29.

En la fracción B se identificó la presencia de esteroides, mientras que en

las fracciones C y D, los resultados fueron negativos, esto se debe a que todos los



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esteroides han sido retenidos en la fracción B al momento de realizar la

extracción.

Los esteroides, pueden considerarse como un tipo especial de

triterpenoides con un esqueleto ciclopentano-perhidrofenantreno dotado de una

cadena alquílica en C-17, dos metilos en C-10 y C-13, y que carecen de las

sustituciones en C-4 y e1 C-14 características de los triterpenos en general 6. Para

su identificación se usó el ácido Tricloroacético, que reacciona con los

electrones π de dichos metabolitos tanto tetracíclicos, como pentacíclicos,

dando como producto un complejo de coloración naranja, rojo o rojo oscuro,

en el caso de que la reacción sea positiva, como es el caso de nuestra

muestra24.

La reacción de liebermann-burchard es típica de los ciclos fusionados que

contienen dos dobles enlaces conjugados, en un mismo anillo, en dos anillos

adyacentes o un doble en un anillo adyacente con un grupo hidroxilo. La reacción

debe realizarse en medio absolutamente anhidro, ya que, al existir moléculas de

agua, estas reaccionan con el anhídrido acético, anulando de esta manera la

formación de un agente oxidante, muy necesario para la efectividad del ensayo en

mención24.

El hexano solubiliza a la muestra, favoreciendo la captación de algunas

moléculas de agua presentes, debido a que es un solvente inmiscible, que absorbe

el agua y el ácido sulfúrico, reacciona con el anhídrido acético, dando lugar a la

liberación de hidrogeniones, los cuales catalizan la dimerización del triterpeno

inicial y además, la generación de trióxido de azufre, el agente oxidante que



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promoverá una deslocalización generalizada y, con ello la generación de un

compuesto coloreado que vira al rojo, color final para nuestro caso30, 31.

Las quinonas son pigmentos orgánicos caracterizados por ciertas

semejanzas estructurales que les proporcionan sus colores brillantes, normalmente

rojos, amarillos o anaranjados. Químicamente son compuestos oxigenados que

corresponden a la oxidación de derivados aromáticos y que presentan estructuras

cíclicas que incluyen dos dobles enlaces carbono-oxígeno, frecuentemente en

para (1, 4) en muy pocos casos en orto (1, 2), son diacetonas insaturadas que por

reducción se convierten en polifenoles, por eso es que también puede encontrarse

el agrupamiento quinónico en diferentes tipos de metabolitos secundarios; para su

identificación se usó la reacción con bisulfito de sodio que decolora a la solución

coloreada por las quinonas, por que interrumpe la deslocalización de electrones π,

ya que se produce una adición del bisulfito a grupos carbonilos de la quinona 24, 32.

En el ensayo de bornträger se obtuvo una gran intensidad de coloración en

la fracción B. Esto indica que las quinonas presentes en Croton alnifolius L., son

de naturaleza de mediana polaridad, considerando a las antraquinonas y

naftoquinonas, como constituyentes principales. Al estado libre, los derivados

quinónicos son prácticamente insolubles en agua y solubles en disolventes

orgánicos, como el hexano. La presencia de quinonas puede estar puesta de

manifiesto mediante el empleo de reacciones coloreadas, entre las que destaca la

reacción de bornträger, reacción que se obtiene disolviendo las quinonas en medio

alcalino acuoso: la disolución toma un color vivo que puede variar, según la

estructura y los sustituyentes de la quinona, de rojo-anaranjado a violeta-púrpura2,

21, 22 , 30, 32.



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La reacción de bornträger, produce una coloración roja cuando el

hidróxido de sodio reacciona con uno de los grupos hidroxilo, tanto de las

antraquinonas como de las naftoquinonas ya que la coloración depende de la

cantidad de electrones deslocalizados en movimiento24.

Los cardenólidos son más o menos solubles en agua dependiendo de la

cantidad de grupos hidroxilos que presente la parte glúcocidica, siendo solubles en

solventes apolares. En la identificación de los cardenólidos se recurre a las

reacciones relativamente específicas, debido a la existencia de una lactona

insaturada de 5 miembros unida a la posición 17, para reconocerlos se usó la

reacción de baljet, ésta reacción fue positiva en la fracción C y D, la coloración es

posible gracias a que el ácido pícrico reacciona en medio básico con la formación

de una molécula de agua, llegando a formar así el picrato de sodio que es el que

reacciona con el grupo carbonilo de la lactona insaturada de 5 miembros, lo que

permite la ruptura del anillo lactónico con la posterior formación de un complejo

de color rojo ladrillo21, 30, 33.

Al poner en contacto a la muestra con el reactivo de tollens, el cual

consiste en un ion complejo que se forma entre el nitrato de plata y el amoniaco,

al reaccionar éste con los aldehídos se observa la formación de un precipitado

negro, como esta reacción se realiza en un medio alcalino (hidróxido de sodio),

también se forma la sal del ácido correspondiente, y en otros casos cuando este

ensayo se realiza en un tubo de ensayo, la plata finamente dividida se deposita

como un espejo sobre la superficie del vidrio, indicando que la reacción es

positiva 34.



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Así mismo al reaccionar el extracto con el reactivo de legal, la cetona

reacciona con el nitroprusiato de sodio en un medio alcalino para formar un

complejo color violeta, indicando la presencia de cetonas35.

En la fracción C y D, se identifican los alcaloides, su obtención constituye

un ejemplo clásico de la influencia del pH en el proceso de extracción.

En el vegetal, los alcaloides se encuentran en forma soluble, de sales

(citratos, malatos, tartratos, meconatos, isobutiratos, benzoatos) o en combinación

con taninos. La microquímica permite comprobar que los alcaloides se localizan

generalmente en tejidos periféricos: capas externas de las cortezas de tallo y raíz,

tegumento de las semillas, etc32.

Su estructura se encuentra formada por carbono, hidrogeno y nitrógeno, el

cual, en la mayoría de los casos, forma parte de un anillo heterocíclico, siendo casi

todos ellos oxigenados; manifiestan la característica fisicoquímica de ser básicos,

por lo que forman sales al combinarse con los ácidos, propiedad que es más o

menos marcada dependiendo del tipo de compuesto; frecuentemente están

provistos de una gran actividad farmacológica o toxicológica y su biosíntesis es

generalmente a partir de aminoácidos precursores6, 32.

En el caso de extracción de alcaloides con soluciones acuosas es necesario

un pH ácido, buscando con esto la conversión de los alcaloides en sus respectivas

sales, solubles en agua. La extracción de alcaloides con solventes orgánicos de

baja polaridad exige un pretratamiento con soluciones alcalinas, buscando con

esto liberar los alcaloides de sus sales y, así, volverlos solubles en el solvente

orgánico. 7.



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La identificación de alcaloides con reactivos generales, se encuentran

dentro del grupo de las reacciones de precipitación. Estos principios activos,

poseen un grupo amino, que les confiere propiedades alcalinas y, al ser llevados a

un medio ácido, se protonan e interaccionan electrostáticamente con los aniones

voluminosos24.

Así por ejemplo en la preparación de ácido silicotúngstico, éste es disuelto

por una solución de H2SO4 6N; liberando macromoléculas (H4SiW12O40), que

reacciona con los alcaloides produciendo unos precipitados alcalinos24.

La reacción de hager presenta como reactivo al ácido pícrico, el cual, actúa

como tal frente al alcaloide, por otro lado, el anillo del ácido pícrico se encuentra

con deficiencia electrónica, la cual es compensada por el anillo donde se

encuentra el grupo metoxi del alcaloide, el cual esta hábido de electrones,

produciéndose de esta manera un complejo sigma, dando como resultado cristales

amarillos29.

La reacción de dragendorff produce sales de los alcaloides precipitados

coloreados; el bismuto presenta una geometría octaédrica y una carga formal de –

2, en su esfera de coordinación (anión voluminoso) para interactuar

electrostáticamente con dos moléculas de alcaloide protonadas24.

La reacción de mayer presenta como metal de coordinación al mercurio

(Hg2+), el cual forma una coordinación tetraédrica, con una carga formal, en su

esfera de –2; interactuando de manera semejante al reactivo anterior24.

En la reacción de keller, se forma en la interfase una coloración azúl

intensa, esto debido a que el fierro (Fe+3), se compleja con los grupos polares de



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los alcaloides de ergot, de esta forma se estaría evidenciando que la muestra no

presenta este tipo de compuestos2, 24.

La reacción de murexida, es típica para alcaloides derivados del ácido

úrico, en donde el ácido nítrico actúa como un potente oxidante, que no estarían

presentes en la muestra, puesto que al reaccionar este reactivo no se evidencia un

cambio de coloración24.

En la reacción de wagner, se forma un complejo de triyoduro (I3-), esto

debido a que el yodo (I2 ), se comporta como un ácido de Lewis frente al Yoduro

(I–), entonces se produce una interacción de I2-I–, en algunos casos se puede

formar pentayoduro (I5–) y/o heptayoduro (I7

–), esto depende de la concentración

de I2 respecto al I–. El anión triyoduro es el que atrae de manera electrostática al

alcaloide protonado24.

Las saponinas son glicósidos esteroides con un núcleo espirostano, sus

estructuras están formadas por una parte glucídica (azúcar) y una parte no

glucídica (aglicón) denominada sapogenina. Las unidades de azúcar pueden ser

neutras o ácidas y tienen la propiedad de hemolizar los glóbulos rojos y forman

espuma abundante y estable al agitar sus soluciones acuosas25.

La fracción F se obtiene a partir de 1g de muestra que es llevado a baño maría

por 15 minutos. La muestra es sometida a agitación constante por 15 segundos y

se deja en reposo 15 minutos notándose la formación de espuma, debido a que las

saponinas disminuyen la tensión superficial del agua. Son por lo tanto

tensioactivos naturales. Debido a la agitación se forma espuma y al reposar el

nivel de espuma desciende. Se considera espuma persistente, si transcurridos los

15 minutos, la espuma tiene una altura superior a 1 centímetro25.



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Las saponinas se hidrolizan fácilmente en soluciones ácidas liberando la

sapogenina y los carbohidratos ligados. En medio alcalino, además de liberarse la

sapogenina ocurre epimerización sobre el carbono 17 y apertura del anillo

lactónico, que es fácilmente reconocido mediante el reactivo de molish en la cual

el ácido sulfúrico concentrado conlleva a una disolución de azúcar provocando la

deshidratación del glúcido en la interfase, para dar un anillo de furfural o

hidroximetilfurfural que reacciona con -naftol, para dar un producto de color

púrpura 36, 37.



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V. CONCLUSIONES:

Los resultados obtenidos en el presente trabajo nos llevan a las siguientes

conclusiones:

1. Se logró extraer los principios activos del extracto del tallo de Croton

alnifolius L.

2. Se logró separar en fracciones los metabolitos secundarios presentes en el

extracto del tallo de Croton alnifolius L. de acuerdo a la marcha

fitoquímica descrita la Dra. Olga Look y modificada por el Q.F. Hugo

Casanova Herrera obteniéndose las fracciones A, B, C, D y E y se logrò

hacer la determinación de saponinas.

3. Los metabolitos secundarios identificados en el extracto del tallo de

Croton alnifolius L. son: taninos, flavonoides, esteroides, quinonas,

cardenólidos, alcaloides y saponinas.



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VI. RECOMENDACIONES

1. Fomentar la investigación de productos vegetales con valor medicinal,

por ser fuente importante de metabolitos activos para el alivio de

enfermedades, impulsando su utilización.

2. Realizar futuros estudios para evaluar el posible efecto farmacológico

de los metabolitos secundarios encontrados en el extracto del tallo de

Croton alnifolius L. y ver su posible aplicación contra alguna patología.

3. Divulgar la información obtenida de este estudio para contribuir a

promover la evaluación preliminar de metabolitos secundario en

plantas.



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DETERMINACIÓN DE METABOLITOS SECUNDARIOS DEL TALLO DE