DETERMINACION DE GLUCOSA Y

HEMOGLOBINA GLUCOSILADA

Integrantes:• Gloria• Apolo Giovanni Melo Iriarte

MÉTODOS DE MEDICIÓN DE GLUCOSA

Actualmente las mediciones de glucosa se realizan en suero o plasma. El suero o plasma se debe refrigerar y separar de las células para evitar la perdida sustancial de glucosa por fraccionamiento celular.Se emplean iones de fluoruro de sodio como anticoagulante ya que inhibe las enzimas glucolíticas.

Glucosa sanguínea de ayuno se debe obtener después de un ayuno de casi 10 horas (no >16h)

Los valores normales en personas en ayunas oscilan entre 70 a 100 mg/dl, cuando los valores exceden los 100 mg/dl (hiperglucemia) se sospecha la presencia de diabetes mellitus

En los métodos mas comunes de análisis de glucosa se emplean las enzimas oxidasa de glucosa o hexocinasa.

Glucosa sanguínea de ayuno (GSA)

OXIDATO DE GLUCOSA

La oxidasa de glucosa es una enzima especifica que reacciona solo con β-D-glucosa convirtiéndolo en acido glucónico. Se consume oxigeno y se produce peróxido de hidrogeno.

La reacción se puede monitorear -Polarográficamente midiendo la tasa de desaparición de oxigeno con un electrodo para oxigeno

-Consumiendo el peróxido de hidrogeno en una segunda reacción catalizada por peroxidasa y oxidando un compuesto colorante (comúnmente hidrazona de 3-metil-2-benzotiazona y la N,N-dimetilanilina). Se puede monitorear espectrofotométricamente y es proporcional a la cantidad de glucosa presente en la muestra. (reacción de Trinder)

• Valores reducidos: concentraciones altas de acido urico, bilirrubina y acido ascórbico (oxida las peroxidasas)• Valores altos: oxidantes fuertes

Hexocinasa

Es mas exacto porque la reacción de acoplamiento con deshidrogenasa de glucosa-6 –fosfato es muy especifica.

Se puede llevar a cabo en suero o plasma recolectado con heparina, EDTA, fluoruro, oxalato o citrato.

Puede causar una disminución falsa una hemolisis total y concentraciones extremadamente altas de bilirrubina.

La hexocinasa en presencia de ATP convierte la glucosa en glucosa 6-fosfato. La glucosa 6-fosfato y el cofactor NADP+ se convierten a 6-fosfogluconato y NADPH mediante la deshidrogenasa de glucosa-6-fosfato. El NADPH tiene un máximo de absorbancia fuerte a 340 nm; la tasa de aparición de NADPH se puede monitorear por medio de un espectrofotómetro y es proporcional a la cantidad de glucosa en muestra.

HEMOGLOBINA GLUCOSILADA

Compuesto de hemoglobina que se forma cuando la glucosa reacciona con el grupo amino de la hemoglobina. La molecula de glucosa se une de manera no enzimática a la molecula de hemoglobina para formar una cetoamina. La tasa de formación es directamente proporcional a las concentraciones de glucosa plasmática.

Debido al promedio de vida de los eritrocitos la concentración de hemoglobina glucosilada refleja una concentración promedio de los 2 a 3 meses previos.

La medición de proteínas glucosiladas proporciona información más reciente acerca de las cantidades de glucosa (últimos 15-20 dias)

La hemoglobina A1c (HBA1c) es la detectada, es un método confiable para monitorear el control de la diabetes.

Esta constituida por tres componentes: A1a, A1b y A1c. la Hba1c es el componente que se une de forma mas intensa a la glucosa, por lo que proporciona datos mas precisos.

VENTAJAS

• Valoración del éxito del tratamiento y control del paciente• Comparar éxito en tratamientos• Individualizar los regímenes de control diabeticos• La muestra puede tomarse en cualquier momento, dado que no se ve afectada por variaciones de corto plazo (ingestión de alimentos, ejercicio, estrés)

VALORES NORMALES

Personas no diabéticas 4.5-6.0% y en diabéticos: buen control <7% aceptable 8-9% mal control>9%

Se ha determinado que por cada cambio de 1% hay un cambio de 35 mg/dl (2mmol/L) en la glucosa plasmática promedio

INTERFERENCIA

Enfermedades que modifiquen el tiempo de vida del eritrocito (hemoglobinopatías) afectan la concentración de hemoglobina glucosilada.Hemoglobinopatías causan variaciones en la hemioglobina A, lo que pueden afectar los resultados.

MÉTODOS

Métodos basados en diferencias estructuralesMétodo Descripción Características

Inmunoensayos Anticuerpos policlonales o monoclonales hacia el grupo N terminal glucosilado de la cadena β de Hgb

 

Cromatografía de afinidad

Separa con base en la estructura química usando borato para enlazar proteínas glucosiladas

Preferido ya que no depende de la temperatura ni afectado por otras hemoglobinas

Métodos basados en diferencias de cargaMétodo Descripción Características

Cromatografía de intercambio iónico

Cama de resina con carga positiva

Es muy dependiente de la temperatura y es afectada por hemoglobinopatías

Electroforesis Separación basada en diferencias de cargas

Interfieren valores de Hgb F

Enfoque isoeléctrico Tipo de electroforesis con punto isoeléctrico para separar

Interfiere con pre-Hgb A1c

Cromatografía líquida de alta presión (CLAP)

Una forma de cromatografía de intercambio iónico

Separa todas las formas de gluco Hgb: A1a, A1b, A1c

BIBLIOGRAFIA

Bishop Michael L. Química Clínica Principios, procedimientos y correlaciones 5ª edicion Mc Graw Hill Pagana Kathleen Laboratorio Clínico Indicaciones e interpretaciones de resultados Editorial Manual Moderno