Determinacin de metabolitos secundarios yensayodebiotoxicidadenArtemiasalinadelcaldodecultivodePleurotusostreatusydelextracto acuoso de Ganoderma sp.INTRODUCCIONEn la actualidad, consumir alimentos que contengan gran cantidadde nutriente y que tenga sobre todo, tenga un efecto positivo sobre lasalud del consumidor es esencial para el mercado y para la sociedad queest al tanto de la existen de esto alientos alimentos. Esto nos trae a lamente a los hogos, que de tiempos inmemorables son conocidos por sualta capacidad de almacenar nutrientes necesarios para el organismos,sino que tambin tiene un efecto positivo en aquel que lo consume. Enla actualidad se est comercializando hongos como Pleurotus ostreatus yotros no muy conocidos estn empezando a llamar la atencin como loshongos del genero ganoderma.Loshongosanodermaconocidospor lacultura!aponscomo"eishi y por cultura china como #Ling $hi# por ms de %.&&& a'os. (usmilagrosas aplicaciones han sido empleados por las culturas orientalesdurante siglos, pero slo se han introducido en el mundo occidental enlos )ltimos *& a'os. "eishi es el legendario rey de todos losmedicamentos considerados como hierbas superiores, debido a sue+caciamdicaylaausenciadeefectossecundariosytoxinasensuconsumo.Los hongos "eishi hansido ampliamente utilizados en lamedicina por los chinos tradicionales como un enfoque alternativo parala saludy el tratamiento de las enfermedades. (in embargo, esteenfoque ha no ha sido ampliamente respaldado por la medicinaoccidental debido a la falta de amplias investigaciones realizadas por losprofesionales. ,n n)mero creciente de mdicos e investigadores-ccidentales estn traba!ando ahora para a entender me!or las terapiasabasedehierbascomoel consumodereishi ro!oparaquepuedanayudarle a tomar decisiones en cuestiones mdicas ."amachara/a,0&102.El 3leurotus es un hongo comestible gastronmicamente deprimer4sima calidad. (u color es blanco o casta'o, aunque hayvariedades azuladas y rosadas. (u carne es compacta en el sombrero y+brosa y blanca en el pie con sabor y olor agradable. Esta especie escosmopolita y crece sapro+ticamente en ambientes naturales sobretroncosde rboles ca4dos y otras plantas le'osas en descomposicin. Esun hongo semianaerbico que soporta un *0 5 de 6-0 y +!a el nitrgenoatmosfrico. 7ebido a sus poco requerimientos nutricionales y a su fciladaptacin a los ambientes de cultivo, requiere de tcnicas simples ybaratas para su cultivo y sus desechos, con capacidad para degradarmaterialeslignocelulsicos, porloquequedanconvertidosenpiensoanimal. En ese sentido resulta interesante obtener un alimento tan ricoen prote4nas con la simple conversin de residuos agroindustriales.uzmn y 8ata, 199*2. El ob!etivo del presente traba!o es determinar los metabolitossecundarios que contienen el medio de cultivo de Pleurotus ostreatus yel extracto acuosos deGanoderma spp.y determinar el grado detoxicidad que tienes estas soluciones sobre Artemia salina.MATERIALM!TODO" Material biol#ico Los hongos tantoGanoderma sp.6omoPleurotus ostreatusfueronproporcionados por el profesor :os ;rellano ?raccin ;@.Determinacin de taninos*se le agreg la solucin de clorurofrrico .?e6l*2.Determinacin de %lavonoides*se realiz la prueba de(hinoda que consiste enagregarlimadura de 8agnesio y unasgotas deA6l cc.%raccin C (e coloc B ml del medio de cultivo en un tubo de ensayo y se evapora ba'o 8ar4a, se agreg C gotas de A6l 15. Luego se verti el contenidodel tubo de ensayo a una pera de decantacin, se le adicion cloroformoy se agit vigorosamente. (e de! reposar hasta obtener 0 fases, la faseclorofrmicaseutilizparatraba!arlafraccin6ylafaseacuosaseconserv para traba!ar la +raccin D, (e coloc una peque'a cantidad de la fase clorofrmica en 0 tubos deensayo, se llev a ba'o 8ar4a hasta sequedad.Determinacin de alcaloides* en un tubo se agreg unas gotasdel reactivo de 8ayer.Determinacin de esteroides* en el otro tubo se agreg C gotasde cido actico y 0 gotas de cido sulf)rico.%raccin D y E(e utiliz la fase acuosa de la fraccin 6a la cual se le agregcloroformoD etanol *E 0, se agit vigorosamente obteniendonuevamente dos fases la fase clorofrmica etanlica, se utiliz para lafraccin >7@ y la fase acuosa se utilizpara la fraccin >E@.%raccin D(e coloc una peque'a cantidad dela fase orgnicaen tres tubos deensayos y se llev a ba'o 8ar4a hasta sequedad. Determinacinde-avonoides*Enel tubo1conlamuestraseca se agreg unas gotas de alcohol, limadura de 8g y 0 gotasA6l cc.Determinacin de alcaloides* En el tubo 0 con la muestra secase agreg C gotas de A6l 15 y 0 gotas del reactivo de 8ayer.Determinacin de esteroides* En el tubo * con la muestra secaseagreg*gotasdecidoacticoglacial y0gotasdecidosulf)rico.%raccin E Determinacin de -avonoides* (e coloc en un tubo de ensayouna peque'a cantidad de la fase acuosa, se agreg limaduras de8agnesio y unas gotas deA6l cc. MARC$A %ITO&U'MICA (RELIMINAR DEL E.TRACTO ACUO"O DE Ganoderma sp.3ara anoderma sp. (olo se realiz la fraccin 7 y E.(e coloc B ml del extracto acuoso en un tubo de ensayo y se evaporaba'o 8ar4a, se agreg C gotas de A6l 15. Luego se verti el contenidodel tubo de ensayo a una pera de decantacin, se le adicion cloroformoy se agit vigorosamente. (e de!o reposar hasta obtener 0 fases, con lafase acuosa se traba! la +raccin D, %raccin D y E(e utiliz la fase acuosa de la fraccin 6a la cual se le agregcloroformoD etanol *E 0, se agit vigorosamente obteniendonuevamente dos fases la fase clorofrmica etanlica, se utiliz para lafraccin >7@ y la fase acuosa se utilizpara la fraccin >E@.%raccin D(e coloc una peque'a cantidad dela fase orgnicaen tres tubos deensayos y llevar a ba'o 8ar4a hasta sequedad. Determinacinde-avonoides*Enel tubo1conlamuestraseca se agreg unas gotas de alcohol, limadura de 8g y 0 gotasA6l cc.Determinacin de alcaloides* En el tubo 0 con la muestra secase agreg C gotas de A6l 15 y 0 gotas del reactivo de 8ayer.Determinacin de esteroides* En el tubo * con la muestra secaseagreg*gotasdecidoacticoglacial y0gotasdecidosulf)rico.%raccin E Determinacin de -avonoides* se coloc en un tubo de ensayouna peque'a cantidad de la fase acuosa, se agreg limaduras de8agnesio y unas gotas deA6l cc. (rueba de toxicidad en Artemias salina de medio de cultivo de Pleurotus ostreatus(e realiz un dise'o experimental de cuatro tratamientos problema y un control con tres repeticiones cada uno, las concentraciones fueron de C&5, 0C5, 10,C5 y F,0C5 del medio de cultivo de Pleurotus ostreatus. El control fue agua de mar, para dar validez a nuestro dise'o experimental. ;l transcurso de 0% horas se realiz el contero de las artemias sobrevivientes.(rueba de toxicidad en Artemias salina de extracto acuoso de Ganoderma sp(e realiz un dise'o experimental de cuatro tratamientos problema y un control con tres repeticiones cada uno, las concentraciones fueron de C&ppm, 0Cppm, 10,Cppmy F,0Cppmdel extracto acuoso de Ganoderma sp. El control fue agua de mar, para dar validez a nuestro dise'o experimental. ;l transcurso de 0% horas se realiz el contero de las artemias sobrevivientes3osteriormenteserealizel anlisisestad4sticocorrespondienteparacada d4selo experimental.RE"ULTADO"*Tabla N/ 01,"esultados de la marcha +toqu4mica del medio decultivo de 3leurotus ostreatusRE"ULTADO" DE LA MARC$A %ITO&U'MICA DEL MEDIO DE CULTI)O DE(leurotus ostreatus%RACCI2N (RUE3A RE"ULTADO%RACCI2N ATaninos (ositivo%lavonoides (ositivo%RACCI2N 3 Esteroides (ositivoCardenlidos (ositivo%RACCI2N CAlcaloides (ositivoEsteroides (ositivo%RACCI2N D%lavonoides (ositivoAlcaloides (ositivoEsteroides (ositivo%RACCI2N E %lavonoides (ositivoTablaN/04,"esultadosdelamarcha+toqu4micadel extractoacuoso de anoderma spp.RE"ULTADO" DE LA MARC$A %ITO&U'MICA DEL E.TRACTO ACUO"ODE 5anoderma s66,%RACCI2N (RUE3A RE"ULTADO%RACCI2N D%lavonoides (ositivoAlcaloides (ositivoEsteroides (ositivo%RACCI2N E %lavonoides (ositivoTabla N/ 07,(upervivencia de los individuos de Artemia salinaque fueron expuestas a las concentraciones de C&5, 0C5, 10.C5 yF.0C5 del caldo de cultivo de Pleurotus ostreatus.N/de Artemia salina 8ue sobrevivieron a lasconcentraciones del caldo de cultivo de Pleurotusostreatus.Tratamiento9Re6eticioT1Control:0;;T714,>;T?4>;T>>0;nesR1 9 9 1& G 1&R4 9 1& 1& G 1&R7 1& 1& 1& G GTabla N/ 0?,(upervivencia de los individuos de Artemia salinaque fueron expuestas a las concentraciones de C&5, 0C5, 10.C5 yF.0C5 del extracto acuoso de Ganoderma spp.N/de Artemia salina 8ue sobrevivieron a lasconcentraciones del caldo de cultivo de Ganoderma spp.Tratamiento9Re6eticionesT1Control:0;;T714,>;T?4>;T>>0;R1 9 B F * &R4 9 G % % &R7 1& F % * &AN@LI"I" E"TAD'"TICO DE LO" DATO" DE Artemia salinaEN LA" CONCENTRACIONE" DE Pleurotus ostreatus.5rABco N/ 01,5rABco de medias 6ara los datos de N/ de Artemia salina ex6uesta a los concentraciones de caldo de cultivo de Pleurotus ostreatus.Tabla N/ 0>, Tabla ANO)A6ara los datos de N/ de Artemia salina ex6uesta a los concentraciones de caldo de cultivo de Pleurotus ostreatus.Fuente Suma de Cuadrados Gl Cuadrado Medio Razn-F Valor-PEntre grupos 6.93333 4 1.73333 4.33 0.0273Intra grupos 4.0 10 0.4Total (Corr.) 10.9333 14Tabla N/ 0=, (ruebas de MClti6le Ran#os 6ara los datos de N/ de Artemia salina ex6uesta a los concetraciones de caldo de cultivo de Pleurotus ostreatusMtodo: 9.0 por!enta"e #$%TRATAMIENTOS Casos Media Grupos omo!"neos4 3 &.0X1 3 9.33333 X 3 9.33333 X2 3 9.66667 X3 3 10.0 XContraste Si!# $i%eren&ia '(- )*mites1 ' 2 '0.333333 1.10611 ' 3 '0.666667 1.10611 ' 4 ( 1.33333 1.10611 '0 1.10612 ' 3 '0.333333 1.10612 ' 4 ( 1.66667 1.10612 '0.333333 1.10613 ' 4 ( 2.0 1.10613 '0.666667 1.10614 '( '1.33333 1.1061( )nd)!a una d)*eren!)a s)gn)*)!at)+a.AN@LI"I" E"TAD'"TICO DE LO" DATO" DE Artemia salinaEN LA" CONCENTRACIONE" DE Ganoderma spp.5rABco N/ 04,5rABco de medias 6ara los datos de N/ de Artemia salina ex6uesta a los concentraciones de extracto acuoso de 5anoderma s66.Tabla N/ 0D, Tabla ANO)A6ara los datos de N/ de Artemia salina ex6uesta a los concentraciones de extracto acuoso de Ganoderma spp.FuenteSuma deCuadradosGl Cuadrado Medio Razn-F Valor-PEntre grupos 11.733 4 37.9333 63.22 0.0000Intra grupos 6.0 10 0.6Total (Corr.) 17.733 14Tabla N/ 0E, (ruebas de MClti6le Ran#os 6ara los datos de N/ de Artemia salina ex6uesta a los concentraciones de extracto acuoso de Ganoderma spp.Mtodo: 9.0 por!enta"e #$%TRATAMIENTOS Casos Media Grupos omo!"neos 3 0 X4 3 3.33333X3 3 4.66667X2 3 7.0 X1 3 9.33333XContraste Si!# $i%eren&ia '(- )*mites1 ' 2 ( 2.33333 1.40921 ' 3 ( 4.66667 1.40921 ' 4 ( 6.0 1.40921 '( 9.33333 1.40922 ' 3 ( 2.33333 1.40922 ' 4 ( 3.66667 1.40922 '( 7.0 1.40923 ' 4 1.33333 1.40923 '( 4.66667 1.40924 '( 3.33333 1.4092( )nd)!a una d)*eren!)a s)gn)*)!at)+a.DISCUSIN: - Al realizar una marcha fitoqumica preliminar se originaron resultadospositivos por la presencia de diversos metabolitos secundarios, presentesen el hongo Pleurotus ostreatus, estos resultados pueden ser avalado porotras investigaciones como la de Chidinma y Chigozie (200! quetraba"aron con el g#nero Pleurotus spp$, endonde lograron identificar quees rica en flavonoides y taninos, moderadamente rica en alcaloides$ %eg&n'reene (())0! P. ostreatus, tiene una buena cantidad de esteroides$ - *ada (20(+! indica que el hongo Ganoderma spp$ contiene gran cantidadde antio,idantes como polifenoles y flavonoides$ Adem-s %-nchez (20(+!argumenta que Ganoderma spp.entre sus constituyentes activos presentaalcaloides$ Con estos reportes podemos avalar nuestros resultadospositivosenlamarchafotoqumicapreliminar realizadosenlaespecieGanoderma spp. - *eferentealapruebadeto,icidaddeP.ostreatussobreArtemiasalinapodemos validar nuestros resultados con otras investigaciones como la de.ieto (200! que en su traba"o afirma que P. ostreatus no presenta to,icidadsobre A$ salina en concentraciones inferiores a ($000 mg/ml$ - %asidharany col$ (20((! en su prueba de to,icidad en Artemia salinanomostr0 resultado de to,icidad significativa para la e,posici0n a corto plazodel e,tracto de metanol de 1anoderma spp$(2C30 valor de 2,2(4 mg / ml(5 h! y unos resultados significativos de to,icidad para la e,posici0n a largoplazo (2C30 delvalor de 0$540 mg / ml(24 h!, es por eso que podemosdeducir que e,posiciones a largo plazo en un e,tracto de Ganoderma spp.se origina mayor to,icidad enArtemia salinay por ende menorsupervivencia de los especmenes$CONCLUSION:- 6ediantelamarchafotoqumicapreliminar sedetermin0quePleurotusostreatusdareacci0npositivaenla7racci0n A (8aninosy7lavonoides!,7racci0n ' (9steroides y Carden0lidos!, 7racci0n C (Alcaloides y9steroides!, 7racci0n : (7lavonoides, Alcaloides y 9steroides! y 7racci0n 9(7lavonoides!$ - 6ediante la marcha fotoqumica preliminar se determin0 queGanodermaspp.da reacci0n positiva en la 7racci0n :(7lavonoides, Alcaloides y9steroides! y fracci0n 9 (7lavonoides!$D 9nlapruebadeto,icidaddel caldodecultivodePleurotusostreatusye,tractoacuosodeGanodermaspp$ sobreArtemiasalina,sedetermin0que e,iste mayor supervivencia de especmenes con el caldo de cultivo de;leurotus ostreatus, evidenciando que e,iste mayor to,icidad deGanoderma spp. BIBLIOGRAFIA:D Chidinma, C$ y Chigozie,