Determinación de Microorganismos en Los Alimentos

8/16/2019 Determinación de Microorganismos en Los Alimentos

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MÉTODOS MICROBIOLÓGICOS

PARA EL ANÁLISIS DE ALIMENTOS.

INGENIERÍA BIOQUÍMICA

MC. CARLA GABRIELA VARGAS VÁZQUEZ


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ANTECEDENTESMICROBIOLOGÍA DE LOS ALIMENTOS:RAMA DE LAMICROBIOLOGÍA QUE SE ENCARGA DEL ANÁLISIS DE LACOMPOSICIÓN MICROBIANA DE LOS ALIMENTOS,

MEDIANTE TÉCNICAS ESTANDARIZADAS QUE PERMITENLA DETECCIÓN DE DIFERENTES AGENTES MICROBIANOS(ASPECTOS POSITIVOS Y NEGATIVOS).

LOUIS PASTEUR Y ROBERT KOCH: CONSIDERADOS LOS

FUNDADORES DE LA MICROBIOLOGÍA.ROBERT HOOKE:EN SU LIBRO MICROGRAPHIA SEÑALOLA PRIMERA OBSERVACIÓN MICROBIOLÓGICAREGISTRADA.FERDINAND COHN: CLASIFICACIÓN TAXONÓMICA.

ROBERT KOCH: LOS POSTULADOS DE KOCH.MARTINUS BEIJERINCK:EL DESCUBRIMIENTOS DE LOS VIRUS Y EL DESARROLLO DE TÉCNICAS DE CULTIVOMICROBIOLÓGICOS.


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DESARROLLO DE TEMA.

Importancia de la calidad microbiana de los

alimentos.

Conservación Vida de anaquel

ETÁs

D́ETECCIÓN DE PATÓGENOS

TÉCNICASPRECISAS,COSTOSAS,

COMPLICADAS,LENTAS

NORMAS EN MATERIA DE ALIMENTOS establecen

CALIDAD

MICROBIOLÓGICA


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MICROORGANISMOS EN LOS ALIMENTOS

BACTERIAS:Organización celular relativamentesimple y primitiva, unicelulares, enforma de racimos, cadenas,bastoncillos, filamentos o micelios,con forma de cocos, cilíndricas,curva, espiral o filamentos.

Técnicade Gram.

Gram +

(color violeta)

Gram –(color rosado)

Cocos:micrococos, estafilococos y estreptococos

No patógenas,bastante resistentesal calor, algunas deellas sobreviven alestar 1 hr a 74C,

altas concentracionesde NaCl, resistentesa congelación y a la

desecación

Algunas variedades sonpatógenas, producen

enterotoxinas termoestables,en fuertes concentraciones

de NaCl.

Gram +, en cadenas,producen ácido lácticoa bajos pH , bastantesresistentes al calor,congelación ydesecación, enalimentos

pasteurizados.


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Forma cilíndrica:Gram + y -,producen y noesporas.

Lactobacilos,Clostridium,Pseudomonas,

Achromobacter,Flavobacter,

Proteus,Salmonella,Shigella,

Vibrio,Escherichia…

HONGOS Y

LEVADURAS.Pueden ser benéficos o perjudiciales ,unicelulares, cilíndricas o alargadas,reproducción sexual y asexual.

MOHOSBenéficos y perjudiciales, algunosproducen esporas, penicillium,aspergillus, geotrichum, alternarias.


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MICROORGANISMO

Necesidades nutritivasLitrotofos o autótrofos:carbono y nitrógenoLitrotofos; fotosíntesis, energía solar,cloroplastos.Organótrofos o heterótrofos;su fuente denitrógeno y carbono son los medios de cultivo,dentro de ellos están los fotoorganótrofos yquimiorganotrofos.

Necesidades de temperaturaPsicrófilos:por debajo de 15°C(hielo ).Psicótropos:de 0 a 5 °C, como: Alcaligenes,Shewanella, Bronchothrix,Corynebacterium, Flavobacterium,

Lactobacillus, Micrococcus, Pectobacterium, Psychrobacter, Enterococcus, Pseudomonas y Moraxela- Acinetobacter, géneros Aspergillus,Cladosporium yThamnidium.

Mesófilos:entre 20°C y 45°C, Enterococcus faecalisTermófilos:por arriba de 45°C:

Bacillus stearothermophilus, Bacilluscoagulans, Paenibacillus,Clostridium,Geobacillus, Alycyclobacillus,

Thermoanaerobacter y Lactobacillus thermophilus.


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Presencia y actividades de otros microorganismos

Algunos organismos de origen alimenticio producen substancias que pueden inhibir o serletales para otros, como antibióticos, bacteriocinas (proteinas de bacterias gram +), peróxidode hidrógeno y ácidos orgánicos.

De especial interés han resultado las bacteriocinas producidas por bacterias productorasde ácido láctico, que se originan en varios alimentos, como las carnes. Ciertas bacteriocinashan llegado a inhibir: Bacillus cereus, Clostridium perfringens, Listeria spp, Aeromonashydrophila y Staphylococcus aureus, entre otros.

Entre algunas de las bacterias productoras de ácido láctico y bacteriocinas se encuentran:

• Carnobacterium piscícola• Lactobacillus acidophilus• Lactobacillus bavaricus• Lactobacillus lactis• Lactobacillus plantarum• Lactobacillus sake• Lactobacillus viridescens• Leuconostoc sp• Pediococcus pentosauceus


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Actividad acuosa

La unidad de medida para elrequerimiento de agua de losmicroorganismos es normalmente expresada comoactividadacuosaoactividad de agua(Aw), definida comola presión devapor de agua del sustrato-alimento, dividida por la presión devapor de agua pura a la misma temperatura. Este concepto serelaciona con la humedad relativa así: RH=100 x Aw

La Aw óptima aproximada para el crecimiento de la mayoría delos microorganismos es0.99 y la mayoría de las bacteriasrequiere una Aw mayor de 0.91 para crecer, las bacterias Gram-negativo requirien valores más altos que las bacterias Gram-positivo.

La mayoría de las bacterias que descomponen los alimentos nocrecen con una Aw menor a 0.91, pero los hongos y levaduraspueden crecer con valores de 0.80 o menores, incluyendosuperficies parcialmente deshidratadas. El valor reportado másbajo para bacterias en alimentos es de 0.75 para las halófilas,mientras que los hongos xerófilos y las levaduras osmófilas hanmostrado crecimiento a valores de Aw de 0.65 y 0.61,respectivamente.


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Valores aproximados de Aw mínima para el crecimiento de algunosmicroorganismos:

• Clostridium botulinum, Tipo E (0.97)• Pseudomonas spp (0.97)

• Acinetobacter spp (0.96)• Escherichia coli (0.96)• Enterobacter aerogenes (0.95)• Bacillus subtilis (0.95)• Clostridium botulinum, tipos A y B

(0.94)• Candida utilis (0.94)

• Vibrio parahaemolyticus (0.94)• Botrytis cinerea (0.93)• Rhizopus stolonifer (0.93)• Mucor spinosus (0.93)• Candida scottii (0.92)• Trichosporon pollulans (0.91)

•


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Humedad relativa del ambiente

La humedad relativa del ambiente es importante desde el punto de vista de la actividadacuosa dentro de los alimentos y del crecimiento de microorganismos en las superficies ypuede ser influenciado por la temperatura. Cuando la Aw de un alimentos se establece a

0.60,es importante que este alimento sea almacenado bajo condiciones de RH que nopermitan que al alimento tome humedad del aire y por tanto incremente su propia Aw dela superficie a un punto donde pueda darse el crecimiento microbiano.

Una alta humedad relativa puede provocar condensación de humedad en los alimentos, elequipo, paredes y techos. La condensación causa superficies húmedas, que conducen alcrecimiento microbiano y descomposición. El crecimiento microbiano esinhibido por

una humedad relativa baja.Cuando los alimentos con valores bajos de Aw se colocanen ambientes de alta RH, los alimentos toman humedad hasta que se alcanza elequilibrio. De manera similar, los alimentos con alta Aw pierden humedad cuando secolocan en un ambiente con baja RH.

Hay una relación entre RH y temperatura que debe tenerse en cuenta al seleccionar losambientes de almacenamiento, cuanto mayor la temperatura, menos será la RH, yviceversa.

Las bacterias requieren una humedad mayor que levaduras y hongos. La humedadrelativa óptima para las bacteriases de 92% osuperior, mientras que las levadurasprefieren valores de90% o superiory los hongos prosperan si la humedad relativa estáentre85% y 90%.


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El pH para el crecimiento óptimo de la mayoría de los microorganismosestá cercano a la neutralidad (pH = 6.6 a 7.5). Las levaduras puedencrecer en un ambiente ácido y prosperan en un rango intermedio (4.0 a

4.5)aunque sobreviven a valores entre1.5 y 8.5.Los hongos toleran unamplio rango(0.5 a 11.0)pero su crecimiento es generalmente mayorcon un pH ácido (demasiado ácido para bacterias y levaduras).

pH

• Acetobacter spp (pH=4.0-9.2)• Alicyclobacillus spp. (pH=2.0-6.0)

• Bacillus cereus (pH=5.0-9.5)• Campylobacter spp (5.0-9.0)• Clostridium botulinum (pH=4.5-8.5)• Clostridium perfringens (pH=5.0-8.5)• Escherichia coli (pH=4.5-9.0)• Listeria monocytogenes (pH=4.2-9.8)

• Staphylococcus aureus (pH=4.2-9.8)• Vibrio cholerae (pH=5.0-9.7)• Vibrio parahaemolyticus (pH=5.0-11.0)• Yersinia enterocolitica (pH=4.2-9.0)


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Contenido de nutrimentos

En general,los hongostienen el menor requerimiento denutrimentos, seguidos por las bacterias Gram-negativo,luego las levaduras y finalmente las bacteriasGram-positivo,que son las que tienen los mayores requerimientos.

La mayoría necesita fuentes externas de nitrógeno, energía(carbohidratos, proteínas o lípidos), minerales, así como

vitaminas y factores de crecimiento relacionados para podercrecer.

Necesidades gaseosas

Solamente en aire ordinario:aerobios obligadosSolamente en ausencia de oxigeno:anaerobios obligados Adaptan su metabolismo a cualquier medio ambiente:anaerobios facultativos.Requieren concentraciones muy bajas de oxígeno:microaerobios.


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Substancias inhibidoras

La proliferación microbiana puede ser afectada por lapresencia o ausenciadesubstancias inhibidoras. Las substancias o agentes que inhiben la actividadmicrobiana sonbacteriostáticasy las que las destruyenbactericidas.Aceites esenciales de plantastienen actividad antimicrobiana; entre estos estánel eugenol en el clavo, alicina en el ajo, aldehído cinámico y eugenol en la canela,alil-isotiocianato en la mostaza, eugenol y timol en la salvia y carvacrol (isotimol) ytimol en el orégano.La leche bovinacontiene lactoferrina, conglutina y el sistema lactoperoxidasa. Laleche bronca contiene un inhibidor de rotavirus que puede inhibir hasta 106 pfu(unidades formadoras de placa)/ml; este inhibidor es destruido en la pasteurización.La caseína y ácidos grasos libres.Los huevos frescoscontienen Lisozima y la conalbúmina.Los derivados del ácido hidroxicinámico (ácidos p-cumárico, ferúlico, cafeico yclorogénico) que se encuentran en las frutas, verduras, te, melazas (actividad

antibacteriana y antifúngica)La lactoferrina se usa en lascanales de res. La ovotransferrina inhibe Salmonellaenteriditis.Las vacuolas celulares de las plantas crucíferas(col, colecita de Bruselas, brócoli,nabo, etc.) contienen glucosinolatos, que al momento de daño o molestia mecánicaproducen isotiocianatos.

Los nitritos, se adicional durante el procesamiento de los alimentos.


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TOMA DE MUESTRAREPRESENTATIVA:

PREPARACIONDE LA MUESTRA

PATOGENOS, MÉTODOS(TIPO, NORMAS…)

TÉCNICA

MEDIOSDE

CULTIVO

PROCEDIMIENTO

TIEMPO YTEMPERATURASDE INCUBACION

INTERPRETACIONDE RESULTADOS

NOM-065-SSA1-1993,

NOM-110-SSA1-1994,


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Medio de cultivoes el materialnutritivo en el que se puedenrecuperar, multiplicar y aislar los

microorganismos, así como efectuarpruebas de susceptibilidad.C, H, O, N, P, S, Na, K, Mg, Ca,Mn, Co, Fe, Mo, Zn, metabolitosesenciales.

desecado en forma de polvofino o granular.hidratado y preparado.

POR SU ASPECTO FÍSICO:Líquidos,Semisólidos,Sólidos.

POR DU USO:

GeneralesSelectivoDe enriquecimientoEspecíficos

De transporteDiferenciales

NOM-065-SSA1-1993,DIARIO OFICIAL DE LA FEDERACION (DOF)


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Medios líquidos.Se emplean fundamentalmente para:- Cultivar los microorganismos yobtener grandes cantidades de losmismos o bien la producción

de metabolitos específicos.- Estimular y promover la selecciónde algún o algunos microorganismose impedir que otros semultipliquen.- Identificar al microorganismo

estudiado mediante pruebasbioquímicas

Medios semisólidosSe utilizan para identificaciones bioquímicasy averiguar si el germen estudiado es móvil.Los medios semisólidos tienen unaconsistencia blanda.

Medios sólidos.- Se utilizan para obtener coloniasaisladas de microorganismos. Los

medios sólidos constituyen lamayor parte de los medios decultivo que se emplean enMicrobiología.


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1. Medios generales:caldo y agar de infusión (caldo y agarnutritivo) caldo o agar lemco (agua peptonada), agar extracto delevaduras, agar leche….2. Medios azucarados:son los medios de agua de peptona quecontiene un indicador y un carbohidrato o alcohol fermentablecomo; pentosas, hexosas, disacáridos, polisacáridos, alcoholes,glucósidos, etc.: agar sangre, agar chocolate, etc.3. Medios selectivos.Son medios solidos que contienen sustancias que impiden eldesarrollo de algunos microorganismos, pero en una flora mixta

permiten el aislamiento y recuperación del germen o grupo degérmenes de interés como el oxicolato citrato4. Medios selectivos de enriquecimiento.Son medios líquidos que estimulan la multiplicación de algúngermen determinado e impiden o inhiben la reproducción de

otros en un inoculo mezclado.5. Medios diferenciales.Contienen indicadores de ácido base, redox o sustancias quedetectan cambios en el medio o en las características típicas delas colonias. Existen para coliformes, enterobacterias,

estafilococos, estreptococos, lactobacilos, protozoarios, hongos ylevaduras.


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6. Medios para cultivar gérmenes anaeróbicos.Son medios de cultivo para aquellos gérmenes que requierancondiciones de anaerobiosis o demicroaerofilia.

7. Medios de cultivo para medir la potencia de los antibióticos.8. Medios de transporte.Sirven para transportar los especímenes que contienen a losmicroorganismos, del sitio de la toma del producto hasta ellaboratorio donde va a efectuarse el estudio.Estos medios impiden que se altere la proporción original de laflora microbiana en los especímenes.9. Medios para filtración a través de membrana.Pueden ser líquidos o sólidos. En el primer caso, se preparan ala concentración usual y permiten el crecimiento demicroorganismos presentes en la membrana.

Los medios sólidos tienen un contenido mínimo de agar parafavorecer la difusión de nutrientes del medio de la membrana.10. Diluyentes:Solución salina fisiológica y Ringer, aguapeptonada11. Indicadores: Andrade, azul de bromotimol, rojo de metilo,

fenolftaleína, cristal violeta…


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SUGERENCIAS.• No deben de usarse recipientes de cobre o zinc(bactericidas que pueden agregarse en pequeñas

cantidades a los medios)• Se pueden prepara en cubos de acero inoxidable omatraces resistentes.

• Se pueden filtrar (embudos de acero inoxidable y papelfiltro) y ajustar pH antes de agregar el agar.

• En ingredientes ( peptonas, agar, hidratos de carbono) de

medios de cultivo se pueden presentar sustanciasinhibidoras como zinc, cobre y ácidos grasos.• Calidad del agua destilada• Calidad del algodón (liberan productos grasos alesterilizarse en horno de aire caliente)

• Excesivo calentamiento: destruir factores de crecimiento,

modificar la capacidad de gelificación, oscurecimiento,alterar el pH.• Distribución en tubos de 1.5 a 50 ml, en tubos inclinadosde 3 a 7 ml, en placas de 12 a 15 ml.

• Esterilizar a 107°C de 10 a 15 min, 115°C 10 min.

ESPECIFICACIONES


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ESPECIFICACIONES

• El fabricante debe especificar en cada medio:• Contenido de humedad (medio deshidratado).• Composición del medio.•

Método de preparación.• Condiciones de presión y temperatura para la esterilización del mediopreparado (en autoclave).

• Advertencia de no esterilizar el medio, si es el caso.• Características de desarrollo de los microorganismos en el medio.• Advertencia sobre la conservación de los medios preparados.• Resultados de las pruebas de estabilidad del medio.• Resultado de las pruebas de viabilidad del medio.• pH del medio preparado.• Fuerza de gel (si procede).


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MÉTODOS MICROBIOLÓGICOS

FÍSICOS, QUÍMICOS, MOLECULARES E INMUNOLÓGICOS

Calcular el número de células o la cantidad desubproductos celulares, la mayoría se basan en laactividad metabólica de microorganismos o desustratos dados en medidas de la respuesta decrecimiento, en algunas partes de la célula o en

combinaciones de estos parámetros. A diferencia delos recuentos microscópicos directos.


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Impedancia y métodosafines:resistencia aparenteal paso de una corrienteeléctrica, los

microorganismosmetabolizan sustancia debaja conductividad en unosde alta conductividad a yreducen la impedancia enlos medios de cultivo. De 3 a

7 horas se detectanimportantes poblaciones

Micro calorimetría: sebasa en obtenerdiferentes termogramasde algunos

microrganismos, en baseal uso de medios decultivo azucarados endonde se miden loscambios de calorinsignificantes (cambio

de entalpia en eldesdoblamiento de lossustratos)

Cit tíd fl j


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Citometría de flujo:Determinar los componentes y características de los microrganismosen suspensión líquida, las que son llevadas a un detector por mediode un conducto de flujo laminar, que determina las trayectorias yvelocidades con las que las células atraviesan el detector y se

detectan la fluorescencia, absorbancia y la dispersión de la luz yentonces en base a ellas se determina que microrganismo es.


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MÉTODOS QUÍMICOS.

Nucleasa Termoestable (DNAasa): sebasa en la presencia de esta enzima

(espectrofotometría) principalmente porS. aureus produce una nucleasatermoestable con mayor rapidez y enmayor cantidad que la enterotoxinaresponsable de la intoxicación. Laendonucleasa puede detectarseexperimentalmente como un índice de lapresencia de S. aureus incluso enconcentraciones demasiado bajas paraque hayan producido unas cantidadesdetectables de enterotoxina.

Lisado de Limulus:Usado paradetección de endotoxinas

(constituyen una capa dellipopolisacárido LPS de lasbacterias Gram negativas,responsable de algunos síntomasde ETÁs). Se basa en la lisis deextractos de amebocito (proteínasde sangre de Limulus poliphemous(cangrejo de mar) producido porcantidades del orden depicogramos de LPS, que provocanla lisis. El método detecta células

viables y no-viables. Es muyrápido.


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Medida de ATP: Se detecta lapresencia de ATP usando luciferasa(sistema luciferina-luciferasa),aunque hay algunos problemasexperimentales que hacen que latécnica sea controvertida por laeliminación de ATP de los alimentos.La luciferasa emite luz en presenciade ATP medida con unespectrómetro de centello paralíquidos o con un luminómetro, lacantidad de luz producida esdirectamente proporcional a lacantidad de ATP.

TABLA

Radiometría: incorporaciónde un metabolito radioactivocon C14 en un medio decrecimiento de modo quecuando los organismos loutilizan, se libera y sedetermina mediante uncontador de radioactividad.En los organismos queutilizan la glucosa, se puedeemplear glucosa marcada conC14,también se puede utilizarC14-formiato o C14-glutamato.Medida de la transformaciónde un substrato con C14 enCO2: el tiempo necesario para

detectar el CO2 esinversamente proporcional ala cantidad demicroorganismos presente.

James M. Jay(Microbiología moderna de los alimentos


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SUSTRATOS FLUOROGÉNICOS Y CROMOGÉNICOS

Empleados en medios de cultivos:• 4-metilumbeliferil-β-D-glucorónico (MUG)•

4-metilumbeliferil-β-D-galactosido (MUGal)• O-nitrofenil- β-galactopiranósido(ONPG)• L-alanina-p-nitroanilido (LAPN)• Acido 5- bromo-4-cloro-3-indolil- β-D-glucorónico (salsódica o de ciclohexilamonio- de modos diversos, BCIG,

X-Gluc, X-GlcA)•

5- bromo-4-cloro-3-indolil- β-D-galactopiranósido (X-Gal)• Indoxil -β-D-glucurónido (IBDG)Se usan para las técnicas de siembra en placa, en caldospara NMP y en los métodos par filtración para membrana

El MUG es el más utilizado de los sustratos fluorogénicoses hidrolizado por la β-D-glucoronidasa (GUD) paraliberar la mitad fluorescente 4-metil-umbiliferil que sedetecta con la luz ultravioleta de onda larga. E. coli es elprincipal productor de GUD. , la que para dar resultadosde MUG detectables tiene que ser por arriba de 107

células.


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LUMINISCENCIA DEL GEN LUX

La luminiscencia es

controlada por genes,sobretodo en bacteriasmarinas, la capacidad paraproducir luminiscenciapuede ser transferida a otrosorganismos efectuando la

transferencia de algunos deestos genes. Los principalesgenes denominados lux, soncorrespondientes a laluciferasa denominados lux Ay lux B.

NUCLEACIÓN DE HIELO

Técnica muy parecida a la

anterior. Varias bacterias Gramnegativas, que habitan enlas plantas llevan consigoun gen (ina) que codifica lasíntesis de una proteína

que actúa como unnucleador de hielo, estasproteínas facilitan lacongelación del agua atemperaturas mástempladas que lo normal yocasionan el daño porhielo en muchas plantassilvestres a temperaturasde -6°C o inferiores antesde que la nucleación seactive.


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SEROTIPADO

Se aplica mucho apatógenos entéricos

gram negativos comosalmonella,

Escherichia y grampositivas como

Listeriasconsiste en eluso específico deanticuerpos paraidentificar antpigenoshomólogos

MÉTODOS PARA LA CARACTERIZACIÓN Y OBTENCIÓN DE LAHUELLA GENÉTICA DE ORGANISMOS TRANSMITIDOSNPOR

ALIMENTOS.

MÉTODOS MOLECULARES• Ácido nucleico y sondas.• Reacción de cadena de lapolimerasa

• Electroforesis de las

enzimas multiloculares• Análisis de enzimas derestricción

• Amplificación al azar delDNA polimórfico

• Gelectroforesis de campo

pulsado• Polimorfismo de la longituddel fragmento derestricción

• Ribotipado


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MÉTODOS INMUNOLÓGICOS.

ANTICUERPOFLUORESCENTE.

Un anticuerpo frente aun antígeno dado se hacefluorescente uniéndolo aun compuestofluorescente, de modoque cuando el anticuerporeacciona con suantígeno, el compuestoformado emite estafluorescencia y se detectacon el uso de unmicroscopio fluorescente

SEROLOGIA DEENRIQUECIMIENTO

Para aislar salmonellas,es un método másrápido que el método decultivo convencional.

RADIOINMUNOENSAYOIncorporar una marcaradioactiva a un antígenopermitiendo que elantígeno marcadoreaccione con suanticuerpo y determinala cantidad de antígenoque se ha unido alanticuerpo utilizando uncontador para medir la

radioactividad


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PRUEBA DE ELISAPrueba de inmunoadsorción ligada a enzimas (ELISA, EIA oenzimainmunoensayo), se utiliza una enzima unida a unantígeno o anticuerpo.SamonelasS. Aureus y sus enterotoxinasMohos y micotoxinasToxinas botulínicasEnterotoxinas de E. coli

Otras técnicas:• Geldifusión• Separación inmunomagnética• hemoaglutinación


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Sistemas de muestreo de superficie:hisopos (PathCheck, ProTec, etc.), placasde contacto RODAC, laminocultivos.Muestreadores de aire.

Sistemas de recuento y/o estimación deviables y microorganismos indicadoresrecuento mediante Petrifilm, NeoGrid,

Simplate, Colitrack, etc. Sistemasbasados en técnicas eléctricas(Bactometer, Malthus, Bactrace, RABIT),colorimétricas (BactAlert, Omnispect,BioSys, Microfoss), microscópicas(epifluorescencia directa), citometría de

flujo (D-Count, Bactiflow, Chemscan RDI,BactoCount) y sistemas de estimación de ATP mediante bioluminiscencia.


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Sistemas miniaturizados y/oautomatizados de identificaciónbioquímica: enterotube, API, BBLCrystal, microID, RapID, etc.Descripción, ventajas e inconvenientes.

Medios cromogénicos y fluorogénicospara el recuento y/o aislamiento decoliformes, Escherichia coli, Enterococos,

Staphylococcus aureus, Salmonella, etc.


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2. PREPARACIÓN DE LA MUESTRA DE ENSAYO.Lineamientos generales para la preparación de las muestras.La preparación de la suspensión inicial requiere 25g de la muestraen una cantidad suficiente del medio de pre-enriquecimiento, para

obtener una dilución 1:10.En una situación atípica y justificada, si la porción de muestrautilizada en el ensayo esdistinta a 25g, se deberá utilizar la cantidadnecesaria de medio de pre-enriquecimiento para obtener unadilución 1:10.En casos excepcionales, cuando es necesario analizarmás de una

porción de 25gde un lote específico de alimento y teniendo evidenciade que si hay mezcla de tales porciones no afecta el resultado, lasmuestras pueden ser compuestas; es decir, si 10 muestras de 25gserán examinadas, combinar las 10 porciones para obtener 250g yadicionar 2,25L del caldo de pre-enriquecimiento precalentado a37°C +/-1°C.

Manual de la FAO o NMX-110-SSA1-1994

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