Practica 7Ftima Sarai Lpez Hernndez, Mnica Adriana Rodrguez Zavala, Sarai Ziga Estupian, Abraham Lpez Arellano

29/10/2011

Universidad Auto noma de Zacatecas Francisco Garc a Salinas Area de Ciencias de la Salud Unidad Academica de Ciencias Qumicas Qumico Farmaceutico Bio logoLABORATORIO DE INMUNOLOGIA DIAGNOSTICA

PRACTICA 7

DETERMINACIN DEL ANTGENO ESPECFICO DEPRSTATA

(PSA)

* Ftima Sarai Lpez Hernndez, Mnica Adriana Rodrguez Zavala, Sarai Ziga Estupian, Abraham Lpez Arellano Docente: Aracely Gmez Corvera

*7Semestre Grupo C Programa educativo Q.F.B. UACQ, ACS, CampusUAZ Siglo XXI, carretera Zacatecas-Guadalajara Km 6 s/n ejido La Escondida Cp. 98160 Zacatecas Zac. Agosto-Diciembre 2011 OBJETIVO Realizar la determinacin semi-cuantitativa del antgeno especfico de la prstata (PSA) en el suero humano.

INTRODUCCIN Y FUNDAMENTO El antgeno prosttico especfico (PSA), tambin llamado calicrena III, seminina, semenogelasa, -seminoprotein y antgeno P30, es una glicoprotena de 34 kD producida casi exclusivamente por la glndula prosttica. El PSA es producido con el fin de licuar el Campus UAZ Siglo XXI | ACS, UACQ, QFB, Sptimo Semestre grupo C Laboratorio de Inmunologa Diagnostica

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semen eyaculado y permitir un medio para que los espermatozoides se movilicen libremente. Tambin se cree que es til para disolver la capa mucosa cervical, permitiendo la entrada a los espermatozoides. Bioqumicamente, el PSA es una enzima sern-proteasa el gen de la cual est localizado en el cromosoma 19 (19q13). Es una protena cuya sntesis no es exclusiva de la prstata. Una pequesima parte de este PSA pasa a la circulacin sangunea de hombres enfermos, y es precisamente esta PSA que pasa a la sangre, la que se mide para el diagnstico, pronstico y seguimiento del cncer tanto localizado como metastsico y otros trastornos de la prstata, como la prostatitis. Los niveles normales en sangre de PSA en los varones sanos son muy bajos, del orden de millones de veces menos que el semen, y se elevan en la enfermedad prosttica. Los valores de referencia para el PSA srico varan segn los distintos laboratorios, aunque el valor normal aceptado actualmente es de hasta 2,5 ng/ml. Su produccin depende de la presencia de andrgenos y del tamao de la glndula prosttica. El PSA aumenta con el agrandamiento de la prstata, llamado tambin hiperplasia benigna de prstata o HBP, fenmeno que ocurre en muchos hombres conforme van avanzando en edad. Tambin puede aumentar en caso de irritacin, prostatitis una inflamacin de la glndula prosttica y en el infarto prosttico. El PSA tambin puede aumentar normal y lentamente conforme avanza la edad del hombre, incluso si la prstata es normal. La eyaculacin puede provocar un aumento temporal del PSA en la sangre, razn por la que se recomienda abstenerse de relaciones sexuales un mnimo de 2 das antes de la extraccin de sangre para el estudio del PSA. Al contrario de lo que se ha credo durante aos, el tacto rectal no altera significativamente los niveles del PSA. Utilizando conjuntamente el valor del PSA y el tacto rectal se puede descubrir ms del 60% de los cnceres de prstata que todava no estn localizados. FUNDAMENTO La prueba PSA ELISA est basada en el principio de un ensayo inmunoabsorbente vinculado a las enzimas de fase slida. El sistema de ensayo utiliza un anticuerpo Anti-PSA de ratn dirigido hacia el PSA intacto para la inmovilizacin de la fase slida(en los pozos de la microplaca) un anticuerpo Anti-PSA monoclonal conjugado para peroxidasa de rbano (HRPO) se encuentra en la solucin de conjugado de enzima-anticuerpo. La muestra de la prueba es permitida reaccionar primero con el anticuerpo de conejo inmovilizado a T C ambiente por 60los,pozos son lavados para remover cualquier Campus UAZ Siglo XXI | ACS, UACQ, QFB, Sptimo Semestre grupo C Laboratorio de Inmunologa Diagnostica2

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antgeno no adherido. El conjugado HRPO Anti-PSA monoclonal es entonces reaccionado con el antgeno inmovilizado por 60a T C ambiente provocando que las molculas de PSA se encuentren entre la fase slida y los anticuerpos vinculados a la enzima. Los pozos son lavados con agua para remover anticuerpos etiquetados no adheridos. Una solucin de reactivo TMB es agregada e incubada a T C ambiente por 20provocando el desarrollo de un color azul. El desarrollo del color es frenado con la adicin de solucin de frenado cambiando el color a amarillo. La concentracin de PSA es directamente proporcional a la intensidad del color de la muestra de prueba. La absorbancia es medida espectrofotomtricamente a 450 nm. INTERPRETACIN En la hiperplasia benigna prosttica, los valores de PSA son directamente proporcionales al tamao de la glndula prosttica. Un valor de PSA mayor de 10 ng/ ml siempre es patolgico, y en un 50 % de los casos se diagnostica un cncer prosttico mediante biopsia. Trabajos de investigacin han descripto que pacientes con hiperplasia benigna prosttica tienen mayor proporcin de PSA libre respecto a aquellos con cncer prosttico. La combinacin de ambos ensayos y la expresin del resultado a travs del ndice de PSA libre/total permitira utilizar el mismo para evaluar el riesgo relativo de CP .El valor de corte de este ndice no ha sido claramente definido. Segn la metodologa utilizada el punto de corte seria de 0.15-0.25 (valores por debajo indicaran mayor probabilidad de cncer). Se ha reportado su utilidad para valores de PSA total entre 4 -10 ng/ml Segn el criterio establecido por Mayo Clinic (USA): PSA < 4 ng/ml el riesgo de Cancer de prostata(CP) es bajo PSA > 4ng/ml y PSAL/PSA total