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Diagnóstico de Morbillivirus en Mamíferos Marinos
Mariano Domingo, Sara SotoCentre de Recerca en Sanitat Animal (CReSA), UAB-IRTA, 08193 Bellaterra, Barcelona.
Dept. Sanidad y Anatomía Animal, Fac. Veter., Univ. Autónoma de Barcelona (UAB)
Paramixoviridae, Morbillivirusgenoma ssRNA, no segmentado, polaridad negativa
Erradicación global de la Peste Bovina (2011)
• Los Morbillivirus ocasionan enfermedad grave en sushospedadores respectivos. Hasta 1989 sólo se conocíanMorbillivirus en mamíferos terrestres.
• PDV fue descubierto en 1989, and CeMV en 1991
1991
1989
Arbol filogenético de Morbillivirus(de Raga et al., EID, 14, 471-473)
DMV N
Spanish Isolate 2007
PMV NG12 Isolate
CDV Ond Vacc N
PDVDK/88 N
PPRVNg75/1 N
MeVEd Vacc N
RPVRBOK N
0.05
69
69
45
100
99
Especificidad de hospedador (excepto CDV)
“Lógica” filogenética de la asociación a hospedador
Manifestación de las infecciones porMorbillivirus
Epizootias (fócidos, cetáceos) (humanos [MV], bovinos [RPV], félidos [CDV]
Poblaciones inmunológicamente naïve
Infecciones enzoóticas (la forma habitual en humanos y perros) (pero también en MarMam) (Van Bressem et al., 2001,
Daoust et al., 1993, Lipscomb et al., 1994; Duignan et al., 1997)Casos clínicos aislados, evidencia serológica de exposición
Inmunosupresión e infecciones secundarias(fócidos, cetáceos: Toxoplasmosis, Micosis)
(también en humanos y en perros)
Infección crónica latente (Encefalitis letal) (humanos: Panencefalitis Esclerosante Subaguda [SSPE]
(perros: Old Dog Encephalitis[ODE])(delfines Domingo et al., 1995, Soto et al., 2011)
Manifestación de las infecciones porMorbillivirus
Epizootias (fócidos, cetáceos) (humanos [MV], bovinos [RPV], félidos [CDV]
Poblaciones inmunológicamente naïve
Infecciones enzoóticas (la forma habitual en humanos y perros) (pero también en MarMam) (Van Bressem et al., 2001,
Daoust et al., 1993, Lipscomb et al., 1994; Duignan et al., 1997)Casos clínicos aislados, evidencia serológica de exposición
Van Bressem et al., 2001. An insight into the epidemiology of dolphin morbillivirus worldwide. Vet Microbiol, 81:2 87-304
Anticuerpos frente a Morbillivirus en numerosas especiesde odontocetos de todos los océanos
La infección por Morbillivirus en cetáceos (odontocetos) esendémica en muchas especies en el mundo. Las epizootiasrecientes son las últimas etapas de su distribución mundial
Lugar Especie Año Virus Bajas
USA (east c.) Tursiops truncatus 1987 PMV/DMV 2500
Lake Baikal Phoca sibirica 1987 CDV 2000
North Europe Phoca vitulina, Halichoerus gripus 1988, 2002 PDV 17000
Irish Sea Phocoena phocoena 1988 DMV 6
Mediterranean Stenella coeruleoalba 1990/92 DMV 2000
Gulf of Mexico Tursiops truncatus 1993 PMV 200
Black Sea Delphinus delphis ponticus 1994 DMV 47
Mauritania Monachus monachus 1997 Biotoxins (DMV) 200
Caspian Sea Phoca caspica 2000 CDV 10000
MediterraneanGlobicephala melas
Stenella coeruleoalba2007 DMV ¿200?
Epizootias en poblacionesinmunológicamente vírgenes
(1990) Epizootias por CeMV (2007) Delfín listado (Stenella coeruleoalba) del
Mediterráneo
Domingo et al., Nature, 1990Domingo et al., Vet Pathol, 1992Duignan et al., Can J Vet Res 56:242-248 (1992)
19901990 20072007
Raga et al., EID, 2008Fernandez et al., 2008Soto et al., Vet Rec 2011
No evidencia de circulación de CeMV:Sin casos sistémicos de CeMV
Soto et al., 2011, Vet Rec
Reducción del número de delfines inmunesVan Bressem et al., Vet Microbiol 2001
No evidencia de circulación de CeMV:Sin casos sistémicos de CeMV
Soto et al., 2011, Vet Rec
Reducción del número de delfines inmunesVan Bressem et al., Vet Microbiol 2001
Enfermedad sistémica: neumonía bronquiolo intersticial, encefalitis, inmunosupresión, CeMV+
Extensión de la epizootia de CeMV del 1990 por el Mar Mediterráneo y Mar Negro
19901991
1992
1994
Modified from Aguilar and Raga, 1993
Epizootia de CeMV en 2007: primeros signos de alarma en
2006• Infección por CeMV (y lesiones) en
calderones negros varados en la costaandaluza, Oct 2006- Abril 2007 (Fernandez et al., EID, 2008; 14, 792-794)
• Infection por CeMVconfirmada en delfineslistados en Valencia en Julio de 2007 (Raga et al., EID, 2008; 14, 471-473)
IHQ para detección de CeMV en tejidos fijadosen formol e incluidos en parafina
IHQ-CeMVMoAb CDV-NP, 1:200
(VMRD, Inc., Pullman, WA, USA) reacciona con CeMV
Suero cabra anti-Ratón (Biot) (1:200)
Complejo Avidina-Biotina-PO (1:100)
Contratinción con hematoxilina
Control PositivoCaso de CeMV
Control NegativoSustitución de
MoAb CDV-NP por monoclonal
irrelevante
Foto Macro?
Linfonodo Mediastínico: depleción linfoide grave, sincitios (H-E)
Linfonodo Mediastínico: IHQ CeMV
RT-PCR convencional para detección de CeMVen tejidos de delfín
RT-PCR sobre el gen P de CeMV
P-Gene, 78 bp fragment(Reidarson et al., JWD, 1998)
Util para casos de autolisis o fragmentacióndel RNA vírico
P-Gene, 429-bp(Barret et al., Virology, 1993)
Gen P (fosfoproteína) nt 1655nt 1
400 828 (Barret et al.,1993)
400 477 (Reidarson et al., 1998)
Muchas otras técnicas disponibles (conveniconales y cuantitativas)
Estimating the consequences of the 2006-2007 Morbillivirus Epizootic on Long-Finned Pilot Whalesin the Strait of Gibraltar (Pauline GAUFFIER, 2008)
“From a total abundance of 345 animals in 2006 Morbillivirus epizootic was estimated to induce a 21.2% reduction in the survival rate (decreasing to 0.776) and tocause 51 to 52 additional deaths, for a total of 77 to 7 8 deaths (including natural mortality) between summer 200 6 and summer 2007”.
Manifestación de las infecciones porMorbillivirus
Epizootias (fócidos, cetáceos) (humanos [MV], bovinos [RPV], félidos [CDV]
Poblaciones inmunológicamente naïve
Infecciones enzoóticas (la forma habitual en humanos y perros) (pero también en MarMam) (Van Bressem et al., 2001,
Daoust et al., 1993, Lipscomb et al., 1994; Duignan et al., 1997)Casos clínicos aislados, evidencia serológica de exposición
Inmunosupresión e infecciones secundarias(fócidos, cetáceos: Toxoplasmosis, Micosis)
(también en humanos y en perros)
Infección crónica latente (Encefalitis letal) (humanos: Panencefalitis Esclerosante Subaguda [SSPE]
(perros: Old Dog Encephalitis[ODE])(delfines Domingo et al., 1995, Soto et al., 2011)
Humanos: Subacute Sclerosing Panencephalitis [SSPE]Perros: Old Dog Encephalitis[ODE])
Descritas inicialmente tras la epizootia de 1990Se repite su aparición tras la epizootia de 2007
Lesiones y antígeno de CeMV exclusivamente en SNC (punto de vista epidemiológico: casos “cerrados”)
Infecciones cr ónicas latentes por CeMV
Zonas costeras sometidas a vigilancia (Andalucía, Valencia, Cataluña) y número de delfines investigad os
(2008-2010)
84
14
20
CRAMUAB-CReSA
Universidad de Valencia(Toni Raga)
Junta Andalucía(y entidades asociadas)
Cortes histológicosCeMV-IHQ
NecropsiaCeMV-IHQ Tejidos frescos
Tejidos fijadosCeMV-IHQ En algún caso, tejido fresco
Delfines CeMV+ del total de delfines investigados por cada una de las zonas marítimas
23/84 (27%)
4/14 (29%)
5/20 (25%)
TOTAL AFECTADOS32/118 (27%)
No diferencias por zonas
PRINCIPAL CONCLUSION
CeMV crónico en SNC: La causa más frecuente de
enfermedad/varamiento de delfines listados tras la epizootia (2008 - 2010)37% mortalidad
añadidaCONCLUSION
Tendencia a reducción en 2010%
15/50 13/424/26
Meningoencefalitis no supurativa (H-E)
Infiltrados perivasculares, espongiosis, gliosis
inclusiones víricas nucleares y citoplásmicas
IHQ-CeMV. Inmunotinción en cuerposneuronales, neuritas, y algunas célulasgliales de corteza cerebral m: meninge
IHQ para CeMV, Encéfalo
IHQ-CeMV, diferentes patrones de tinción neuronal y daño c elular, de intensidad ligera y morfología normal (A), a nódulos glial esneironofágicos (F). Inmunotinción de neuritas: patrón l ineal (G), tinción en rosario (H), y neuritas distroficas, tumefacta s (I)
IHQ para CeMV, encéfalo
• Infection during the epizootic• Infección vírica latente en encefalo
durante meses o años• Reactivación tardía, afectando
exclusivamente al SNC• Virus Defectivo, baja capacidad replicativa
(en SSPE-MV: mutaciones y deleciones en los genes genes P y/o M)
Hipótesis sobre el origen de formas crónicas por CeMV
Infección defectiva latente similar a la Panencefalitis Subaguda Esclerosante(SSPE) causada por MV (Lipton and Gilden, Viral pathogenesis, 1997) o a la “Old Dog Encephalitis” (ODE) debida a CDV
Manifestación de las infecciones porMorbillivirus
Epizootias (fócidos, cetáceos) (humanos [MV], bovinos [RPV], félidos [CDV]
Poblaciones inmunológicamente naïve
Infecciones enzoóticas (la forma habitual en humanos y perros) (pero también en MarMam) (Van Bressem et al., 2001,
Daoust et al., 1993, Lipscomb et al., 1994; Duignan et al., 1997)Casos clínicos aislados, evidencia serológica de exposición
Inmunosupresión e infecciones secundarias(fócidos, cetáceos: Toxoplasmosis, Micosis)
(también en humanos y en perros)
Infección crónica latente (Encefalitis letal) (humanos: Panencefalitis Esclerosante Subaguda [SSPE]
(perros: Old Dog Encephalitis[ODE])(delfines Domingo et al., 1995, Soto et al., 2011)
Situaci ón global de Toxoplasmosis y Aspergilosis en Delfín listado (1990 vs.
2007) (Datos de 1-Agosto/ 31-Diciembre)
1990 2007Delfines listado varados 110 39
Necropsiados 58 9CeMV+ (Positivos/investigados) 18/23 5/9
Toxoplasmosis diseminada 4 3
Encefalitis y neumonía micótica 3 1
Enfermedad por Herpesvirus - 1
1990Toxoplasmosis o encefalitis y neumonía micótica no detectadas en delfines listados durante el periodo
inter-epizootico2007
Aspergilosis y morbillivirus• La Aspergilosis es la micosis más frecuente en
cetáceos.
• Todos los casos recientes de Aspergilosis en delfines de vida libre estaban asociados a epizootias de CeMV o casos aislados de infección por CeMV
• En todas las epizootias de morbillivirus que se han dado hasta el momento ha habido casos de Aspergilosis
• Afecta al pulmón o al SNC, o a ambos órganos a la vez
Toxoplasmosis en Stenella coeruleoalbadel Mar Mediterráneo
• Linfadenitis necrotizante• Meningoencefalitis• Adrenalitis• Neumonía intersticial• Hepatitis multifocal
Resumen de lesiones en delfines con Toxoplasmosissistémica asociada a infección por DMV
Encefalitis
Quiste de Toxoplasma en encéfalo
• En delfines listados la infección por CeMV se ha manifestado de forma epizoótica en dos ocasiones
• En estas formas agudas la manifestación lesional ha sido muy similar (neumonía, encefalitis, depleciónlinfoide). No puede hacerse el diagnóstico solo en bas e a las lesiones macroscópicas.
• Tras las dos epizootias se han observado casos de infección restringida al SNC, en un porcentaje releva nte(27% de animales varados investigados)
• La toxoplasmosis y las micosis sistémicas se asocian a ambas epizootias (inmunosupresión), pero no se hanobservado en el periodo inter-epizootico
• Es recomendable el uso conjunto de Patología, IHQ, y técnicas moleculares para el diagnóstico de CeMV
Observaciones finales