Diagnóstico viral

Pasos útiles para el diagnóstico viral Toma y procesamiento de una muestra clínica adecuada. Información epidemiológica, identificación correcta y edad del

paciente Fecha de obtención de la muestra. Averiguar si el paciente ha recibido vacunas virales o terapéutica

antiviral en una fecha reciente.

MUESTRA CULTIVO CELULAR EXAMEN DIRECTO RESPIRATORIAS Si Inmunotinción (IF) Secreciones nasofaríngeas Si Virus sinicial respiratorio Secreciones endocraneales si Adenovirus, parainfluenza,

influenza Lavaje bronquioalveolar Si sarampión Biopsia del pulmón Si Hisopado faríngeo Único método disponible GASTROINTESTINALES Solo diarrea Microscopia electrónica Heces No ayuda Rotavirus, Adenovirus,

coronavirus, virus similares al Norwalk, astrovirus, calicivirus, inmunoensayo enzimático y aglutinación con latex solo para rotavirus

Enfermedad sistémica (otros síntomas además de diarrea)

Método de elección

Heces (preferentemente) Hisopado rectal (menos adecuado) CUTÁNEAS inmunotinción Vesiculas HSV Pústulas VZV Biopsia Vaccina OCULARES Inmunotinción Lágrimas HSV Tejido VZV

Adenovirus SANGUÍNEAS Uso experimental de hibridación in

situ de ácidos nucleicos para CMV, EBV y detección de antígeno para HIV

Anticoagulada con citrato Único método para la mayor parte de los virus

GENITOURINARIAS Experimental de hibridación de ácidos nucleicos in situ para CMV

Orina Si Secreción cervical vaginal / uretral Si DEL SISTEMA NEVIOSO CENTRAL LCR

si

Detección experimental de antígenos para HSV hibridación de cDNA/RNA para enterovirus

TEJIDO ENCEFÁLICO Indispensable: la inoculación de animales puede ser esencial para virus coxsackie A, MLC y algunos arbovirus

Inmunotinción para HSV o rabia

Muestras sugeridas para el diagnóstico viral

Condiciones de las muestras Obtenerlas en un estadio temprano de la enfermedad

(dentro de las primeras 72hs). Las muestras deben obtenerse de forma aséptica si se va

a intentar el aislamiento del virus. El volumen de la muestra debe ser suficiente como para permitir la realización de los ensayos apropiados y la conservación.

Obtención de muestras Hisopados: Conjuntivales, Genitales, Rectales, Mucosa

oral, Lesiones cutáneas Sangre Aspirado nasofaríngeo Lavado bronquioalveolar Expectoración Orina Líquido cefalorraquídeo Materia fecal Biopsias

Medios de transporte de los virus Transportar en un medio que les provea estabilidad. Esto se obtiene

agregando proteínas (albúmina de bovino o gelatina). Con el agregado de antibióticos y anti fúngicos se logra prevenir el sobre desarrollo de la flora bacteriana y fúngica residente del huésped

las muestras deben transportarse a 4ºC, en recipientes estériles adecuados y con tapa hermética.

Para enviar virus de alta transmisibilidad (virus de la Hepatitis B o VIH) deberá colocarse el recipiente que contiene la muestra dentro de un contenedor de preferencia metálico con tapa de rosca y rotularse como peligro biológico.

Principales técnicas Métodos directos:

Características clasificación virus

Aislamiento viral cultivos celulares

Tiene una sensibilidad y una especificidad muy alta

Cultivos 1arios, líneas celulares diploides, líneas celulares continuas, hemadsorción, hemaglutinación

VRS, Adenovirus, MRC5, CMV, VRS, Echo virus, Influenza

Aislamiento de CMV en líneas celulares continuas a partir de muestras de sangre entera.

características

clasificación virus

Técnicas inmunológicas

Detección de antígenos - anticuerpos

Inmunofluorescencia directa: identificación rápida del virus directamente sobre la muestra

Test de aglutinación: detección de antígenos virales en muestras clínicas

Radioinmunoensayo

Enzimoinmunoanalisis

CMV, VRS, Influenza Ay B, Parainfluenza 1, 2, 3, Adenovirus, HSV tipo 1 y 2

Antígeno de Rotavirus en heces, antígeno de Adenovirus

Antígeno de sup. hepatitisB

Características

Clasificación Virus

Investigación de ácidos nucleicos virales

Tecnicas de biología molecular

• Sondas de ac. Nucleico

• sonda sintética *

• Amplificación de ácidos nucleicos virales mediante una reacción en cadena de la polimerasa

Citomegalovirus, Papilomavirus, Epstein Barr

Características: Virus

Microscopia electrónica

Observa morfología de viriones en muestras clínicas

Rotavirus, Adenovirus, Coronavirus y Calicivirus

Métodos indirectos Son aquellos que reconocen la respuesta inmune (humoral o

celular) por parte del huésped:• Detección de anticuerpos específicos antivirales por técnicas

inmunológicas (EIA, IFI,WB, etc.).• Producción de anticuerpos in vitro.o Este método se emplea para el diagnóstico de enfermedades

como: Rubéola, Citomegalovirus, Hepatitis a virus A, VIH

Inmunofluorescencia indirecta Determina anticuerpos virales en el suero del paciente

Enzimoinmunoanalisis indirecto

Método versátil, económico, sensible y de lectura objetiva

Test de aglutinación Detecta anticuerpos antivirales

Western Blot Útiles para el diagnóstico de HIV

Producción de anticuerpos in vitro

Aplicada para el diagnostico de la infección perinatal

Elección de la prueba de diagnóstico: parámetros

sensibilidad Proporción de personas con la infección que reaccionan positivamente en la prueba diagnóstica realizada

especifidad proporción de personas sin la infección o enfermedad que reaccionan como negativos.

Valor predictivo

probabilidad de tener la enfermedad dado el resultado del test