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DIAGNÓSTICO INMUNOLOGICO
Dra Ma Elena Tosello
El diagnóstico inmunomicológico :
diagnóstico presuntivo de la infección: va a
depender de la especificidad de la técnica usada
seguimiento de terapia antifúngica: si responde
al tratamiento pueden llegar a dar negativo
en las micosis oportunistas ayuda a dar
significado clínico del hallazgo del agente en
Ex. directo y Cultivos
Depende del estado inmunológico
del hospedador
TECNICAS INMUNOLÓGICAS
Hongos patógenos u oportunistas
Histoplasma capsulatum
Paracoccidioides brasiliensis
Coccidioides posadasii
Coccidioides immitis
Complejo C. neoformans/
C. gattii
Aspergillus fumigatus y
otras especies
Candida albicans y otras
especies
Otros hongos emergentes
Ac
Ag
Detección de
TECNICAS INMUNOLÓGICAS
Con un hospedador inmunocompetente
Inmunodifusión (ID): técnica gold standard, se
debe titular el suero del paciente al momento
del diagnóstico para poder hacer seguimiento
Contrainmunoelectroforesis (CIE):
TECNICAS
MAS
USADAS
Con un hospedador inmunocomprometido
Ac
Se han desarrollado distintas técnicas específicas de
especies, aunque son pocas las que se han
comercializado
Ag
TIPOS DE ANTIGENOS USADOS
EXOMETABOLITOS
Cultivos en medio líquido en reposo
CITOPLASMATICOS
Histoplasma capsulatum
Paracoccidioides brasiliensis
Coccidioides posadasii / C. immitis
Aspergillus fumigatus / A. flavus /
A. niger / A. terreus
Antígenos que pueden ser proteínas o glicoproteínas que son excretadas en el medio de cultivo
Antígenos que son obtenidos por ruptura de la pared celular fúngica
Candida albicans
INTERPRETACION DE RESULTADOS EN INMUNODIFUSIÓN
IDENTIDAD
NO IDENTIDAD
IDENTIDAD
PARCIALS: Suero del paciente
SC: antisuero control
S
S
SC
Ag
S SC
S SC
Ag
SS SC
S SC
Ag
S SC
INTERPRETACION DE RESULTADOS EN INMUNODIFUSIÓN
En ese suero Ac específicos del hongo testeado.
La banda de identidad va a ser continua cuando titulamos el suero y va
a ir desapareciendo a medida que mejore el paciente con el tratamiento
IDENTIDAD
NO IDENTIDADEn ese suero no hay Ac específicos del hongo testeado, pueden ser
reacciones cruzadas ya que los Ag pueden compartir la porción
glicoproteica. Repetir la reacción con nuevo suero.
IDENTIDAD PARCIALEn ese suero hay Ac hacia algunos componentes antigénicas
pero existen otras que no están presentes en el suero. Repetir la
reacción con otro suero y realizar seguimiento
SE HACE SEGUIMIENTO CON LA CLÍNICA Y
ANÁLISIS MICOLÓGICO
TECNICAS INMUNOLOGICAS
Paracoccidioidomicosis (PCM)
Detección de anticuerpos
Inmunodifusión Ag de cada especie de Paracoccidioides
Los títulos son altos en formas graves de
PCM
Suero
En LBA y LCR (neuro PCM) pueden dar
falsos (-)
S: 65-100%
CIEF
S: 96%
Más rápida
Ag de cada especie de Paracoccidioides
Mejor en suero,
Puede realizarse en BAL y LCR
Paracoccidioidomicosis
TECNICAS INMUNOLOGICAS
Detecta Ag de gp43
con Ac
monoclonales
S: 96%, 100% y 100% (*)
Detecta Ac de gp43
S: 80-100%
S: 98%, 65% y 86% (*)
Técnicas artesanales de detección de Ac y Ag de pared
de glicoproteína de 43kDa (gp43) de P. brasiliensis
Todas las técnicas se pueden realizar en suero, LBA y LCR (*)
Ag Detecta Ag de gp43 con
partículas sensibilizadas
con Ac monoclonales
S: 97%, 84% y 86% (*)
Ac Detecta Ac de gp43 con
partículas sensibilizadas con
Ag de la misma glicoproteína
ELISA de inhibición Aglutinación partículas látex
(*) orden de %
HistoplasmosisDetección de anticuerpos
TECNICAS INMUNOLOGICAS
INMUNIDIFUSION Banda H
Banda M
•En formas crónicas
•Raro la influencia por
Intradermoreacción (IDR)
•Mas cerca pocillo del suero
•En fase temprana o de
recuperación
•Afectada por IDR
•Mas cerca pocillo del Ag
Muy usada en pacientes inmunocompetentes
Se puede hacer seguimiento de los pacientes
CIEF Es mas rápida que la ID
Histoplasmosis
Detección de componentes antigénicos de pared
TECNICAS INMUNOLOGICAS
ELISA IMMY para detectar Ag en ORINA con Ac policlonal
S: 61% y E: 79% Moderada sensibilidad y especificidad
ELISA IMMY para detectar galactomanano en ORINA con Ac
monoclonal
S: 90% y E: 96% Mayor poder de discriminación
Inmunocromatografía que detecta Ag galactomanano en
SUERO con Ac policlonal
No está disponible
Coccidioidomicosis
TECNICAS INMUNOLOGICAS
Inmunodifusión
Detección de anticuerpos
Muy útil en pacientes inmunocompetentes
Alta especificidad y sensibilidad
Prueba diagnóstico y para pronostico.
Los Ac duran 6 meses luego del
tratamiento
Si reaparecen Ac significa reactivación de
micosis
CIE
Fijación del complemento
Más rápida
Técnica en desuso
Inmunocromatografía de flujo lateral, detecta Ac de Coccidioides spp
Reacciones cruzadas con Histoplasmosis,
tener en cuenta síntomas y residenciaE: 93,8%
Detección de componentes antigénicos de pared
ELISA
Coccidioidomicosis
TECNICAS INMUNOLOGICAS
Detecta IgM contra el Ag TP (tube precipitin)
120 kDa, que es de aparición temprana
Detecta Enfermedad Aguda
Marca
MERIDIAN
Marca
IMMY
Detecta IgG contra el Ag CF ( complement
fixation) proteína de shock lábil, que es
aparición tardía
Detecta Enfermedad Crónica
Detección de anticuerpos
ELISA para detectar Ag galactomanano en suero, orina y LCR
No disponible en el país
El inmunodiagnóstico es un método económico y fácil
de implementar.
La detección de Ac depende de la respuesta inmune del
paciente y del tiempo de evolución de la micosis
Las técnicas de detección de Ag son prometedoras por
su detección en muestras de fácil obtención,
especialmente en pacientes inmunocomprometidos.
Los resultados de estas técnicas debe interpretarse en
el contexto clínico de cada paciente.
Resumiendo
Desde hace 30 años
Reacción de Aglutinación de partículas de látex
Partículas de látex sensibilizadas con antígenos de la
cápsula de mucopolisacáridos (GXM) del complejo
Cryptoccocus neoformans/ Cryptoccocus gattii
Títulos altos > 1/1024 mal pronóstico
Títulos < 1/1024 mejora el pronóstico
Pacientes VIH
Pacientes no HIV
< la sensibilidad (75%) en LCR y suero
Criptococosis
TECNICAS INMUNOLOGICAS
técnica sencilla y útil para el diagnóstico
sensibilidad del 93 al 100%
especificidad del 93 al 98%
Sobrenadante LCR
Suero
Detecta Ag en forma cualitativa o semicuantitativa
KIT
IMMY
Criptococosis
TECNICAS INMUNOLOGICAS
Reacción de Aglutinación de partículas de látex
Criptococosis
Falsos positivos
Falsos negativos
Pacientes con septicemia
Pacientes con infección diseminada por
otros hongos
Pacientes con artritis reumatoidea
Inmunocomplejos circulantes
Fenómeno de prozona
TECNICAS INMUNOLOGICAS
LCR: se inactiva a 100ºC baño maria
Suero: tratamiento a 56ºC con Enzima pronasa
dilución
Reacción de Aglutinación de partículas de látex
sensibilidad del 96 al 100%
especificidad del 98 al 100%
Inmunocromatografia para detectar Ag capsular
de Cryptococcus spp
Criptococosis
TECNICAS INMUNOLOGICAS
Muestras
LCR
Suero
Sangre
entera
Aspergilosis en pacientes inmunocompetentes
TECNICAS INMUNOLOGICAS
Detección de anticuerpos
Inmunodifusión Diagnóstico presuntivo si se
acompaña con la clínica y
antecedentes del paciente.
Conviene titular el suero del paciente
al momento del diagnóstico.
Sirve para hacer seguimiento
terapéutico.
Antígenos y antisueros
por separado
Aspergillus fumigatus
Aspergillus flavus
Aspergillus niger
Aspergilosis invasiva
Detección de componentes antigénicos de pared
Detección de galactomananoAntígeno de pared celular del
género Aspergillus que se libera
durante la invasión de los tejidos
Platelia Aspergillus Bio-Rad Francia ELISA
TECNICAS INMUNOLOGICAS
Suero
LBA
Biopsias
Orina
Líquidos de punción
Inmunocromatografia Lateral Flow Test Kit IMMY
Ambas técnicas:
Candidiasis invasiva
Ag Manano y Ac anti- Manano
(α y β-mananos, Ag de pared)
Para fines diagnóstico la detección de Ag se
combina con la de Ac
TECNICAS INMUNOLOGICAS
Se combinan ambas
porque las
antigenemias son
transitorias
Ac anti-micelio o de fase micelial
Ag Enolasa y Ac anti-enolasa
48 kDa
Infecciones fúngicas invasivas (IFI)
1,3 β D glucano MARCADOR PANFUNGICO
Aspergillus
Fusarium
Scedosporium
Acremonium
Candida
UBICUAContaminación en el laboratorio
Material descartable libre de hongos y
endotoxinas de bacterias
Detección de componentes no antigénicos
TECNICAS INMUNOLOGICAS
TEST DE EXOANTIGENO
Es un test utilizado cuando en los cultivos no
desarrollan estructuras de fructificación
caracteristicas
Cultivo del
hongo
P. brasiliensis
H. capsulatum
Aspergillus spp
Coccidioides spp
Sporotrix schenckii
Se le agrega merthiolate
0,02% o
azida sódica 0,02%
incuba 24 hs en heladera
Se repica e incuba
a 28°C
por 7 a 10 días
Se extrae el
líquido que se
concentra 25 a
50 veces a 37ºC
EXOANTÍGENO
Inmunodifusión con
Ag y Ac específicos
Banda de Identidad de
ambos Ag con el Ac
control a las 72 hs
Inmunoidentificación
de especie fúngica