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Desarrollo de un método analítico en continuo (HPLC-DAD) sencillo, rápido, y barato para separar, detectar y
cuantificar los estrógenos: etinilestradiol (E2), beta-estradiol (EE2), dietilestilbestrol (DES), estriol (E3) y estrona
(E1), en muestras de agua, mediante la técnica de extracción selectiva con inyección en flujo empleando
polímeros de impresión molecular (MISPE)
PROCEDIMIENTO
OBJETIVO
RESULTADOS
CONDICIONES
CONCLUSIONES
MISPE-Multi-residuo
Disolventes
de lavado y
elución
Muestra
Eluato HPLC-DAD
Bomba peristáltica
MIP- DES MIP- E2
MIP- EE2
MISPE-micro-columna
- Fase móvil Acetonitrilo:agua (50:50)
- Flujo 1.0 mL.min-1
- Volumen de injección 20 µL
- Tiempo del cromatograma 10 min
- Permite la determinación, libre de interferencias, de estos estrógenos, asegurando la calidad
de las muestras seleccionadas
- El método desarrollado ha sido validado utilizando muestras de agua de diferente naturaleza
adicionadas con los estrógenos a diferentes concentraciones (25–50 ng mL−1)
0
10
20
30
40
mU
A
minutes2.6 6.6 7.8 8.6 9.9
10 min
Desarrollo de un método MDGC-MS (SIM) para la detección de residuos de pesticidas en fresas.
Tabla. Condiciones optimizadas de MS en modo SIM Determinación de PBDEs e identificación de nuevos
isómeros no descritos de Tri-BHDs y Tetra-BHDs en
muestras de atunes mediante GCxGC-ToF MS.
EMPRESAS
sector alimentario
Kemira OYJ
Ganaderías Priégola
Grupo Mahou-San Miguel
Biosearch
Grupo Leche Pascual SAU
Campofrío Food Group
Novozymes Spain
EMPRESAS
instrumentación analítica
Agilent Technologies Spain
Thermo Fisher Scientific
Izasa
Konich-Tech
Bruker Española
EMPRESAS
productos químicos y
consumibles cromatogr.
Enantiosep
Sigma-Aldrich
ORGANISMOS
OFICIALES
Y ASOCIACIONES
FIAB, Federación Española de Industrias de la Alimentación y Bebidas
AESAN, Agencia Española de Seguridad Alimentaria y Nutrición
CS-CM, Consejería de Sanidad de la CM
PTE FFL-Spain, Plataforma Tecnológica Food For Life
CONSORCIO ANALISYC-II
Novozymes Spain
Grupo Leche Pascual SAU
Campofrío Food Group
Bruker Española
Agilent technologies Spain
Enantiosep
Konich-Tech
Biosearch Life
IZASA
Thermo Fisher Scientific
Ganaderías Priégola
Grupo Mahou-San Miguel
Kemira OYJ
RELACIÓN CON EMPRESAS
Conectados con los intereses
y/o problemática de la sociedad
(S2009/AGR-1464)
Grupos de
Investigación
Acrónimo Organismo Investigador
Principal (IP)
Personal
Investigador
CSIC-AI
Institutos Química Orgánica
General, Química-Física,
Ciencia y Tecnología
Alimentos y Nutrición y
Facultad de Veterinaria UCM
Dra. Mª José
González Carlos 12
UCM-QA Dpto. Química Analítica.
Fac. de Química (UCM)
Dra. Carmen
Cámara Rica 12
UAH-QA
Dpto. de Química Analítica,
Química Física e Ingeniería
Química. Facultad de Biología,
Cc. Ambientales y Química
(UAH)
Dra. Mª Luisa
Marina Alegre 8
CSIC-AA
Instituto Ciencia y
Tecnología Alimentos y
Nutrición (ICTAN)
Dr. Francisco J.
Morales Navas 6
UNED-QA
Dpto. Ciencias
Analíticas. Facultad de
Ciencias (UNED)
Dra. Pilar
Fernández
Hernando
4
Laboratorios
Lab-UR0520
Dpto. Química
Inorgánica y Analítica.
URJC
Dra. Isabel Sierra
Alonso 3
Lab-160
Unidad de Servicio de
Técnicas Analíticas,
Instrumentales y
Microbiológicas, ICTAN.
CSIC
D. Miguel A.
Martínez
Bartolomé
1
Detección de tóxicos emergentes en
alimentos.
• OBJETIVO 1:
Determinación de componentes
naturales y/o ingredientes autorizados
de los alimentos, incluyendo cultivos
de leguminosas y cereales o sus
derivados, frutos, aceites vegetales,
fórmulas alimenticias, alimentos
enriquecidos y extractos alimenticios.
• OBJETIVO 3:
Evaluación del efecto del procesado
de los alimentos sobre su
composición, calidad y seguridad.
• OBJETIVO 4:
Desarrollo y optimización de metodologías de
preparación y fraccionamiento de muestras; avances en
optimización y validación de datos analíticos; integración
de técnicas instrumentales mediante la creación de una
plataforma instrumental común (compartida).
OBJETIVO TRANSVERSAL (Objetivo 5)
Detección de adulteraciones alimentarias. • OBJETIVO 2:
OBJETIVOS BÁSICOS
Desarrollo de metodologías analíticas para:
Las nanoparticulas de titanio y plata
son de las más utilizadas para la
elaboración de protectores solares y
productos de consumo
respectivamente. El grupo UCM ha
desarrollado nuevos métodos
basados en el fraccionamiento en flujo
con campo de flujo asimétrico (AF4)
para la separación de NPs por
tamaños. El acomplamiento AF4-UV-
Vis/ICP-MS asegura una capacidad
de deteccion multielemental de NPs
inorgánicas.
El método desarrollado por AF4-UV-Vis/ICP-MS ha permitido la
caracterización y cuantificación de TiO2NP y AgNPs, a bajas concentraciones.
La sonicación de la muestras con sonda de ultrasonidos focalizada, previa al
empleo de la técnica AF4, mejoran la eficiencia del proceso de
fraccionamiento.
El método se ha aplicado al análisis de diferentes productos alimenticios
disponibles en herbolarios en los que se ha demostrados la existencia de
AgNPs y de TIO2.
TiO2NPs presente en:
Productos de consumo (azucar glass y crema de café) y cosméticos
AgNPs presente en:
Cerveza y nutraceúticos como Colloidal Silver, Oikos Silver,
Cannella composta, Camomilla composta y Equisetum CuAuAg
Fractogramas obtenidos por AF4-ICP-MS
Caracterización de Nanopartículas de TiO2 y Ag en productos de consumo
mediante AF4-UV-Vis/ICP-MS y TEM
Los resultados obtenidos por AF4-ICP-MS han sido validados por TEM.
www.analisyc.es
CSIC-AI
UCM-QA
UAH-QA
SEGURIDAD CALIDAD
PCBs quirales PXBs HBCDs
Ftalatos Metabolitos de PCBs
Piretroides Almizcles
Aditivos
Antibióticos Antiinflamatorios Antiparasitarios
Fármacos
COPs
Nanopartículas
Estrógenos
Colorantes azoicos
Comp.
Quirales
Selenio
Oligosacáridos
Aminoácidos
Péptidos bioactivos
Fosfolípidos
Proteínas
Nuevos marcadores de adulteraciones en aceites de oliva.
Aminoácidos no proteicos y betaínas
Por primera vez se han estudiado componentes minoritarios como las betaínas y los aminoácidos no
proteicos, en busca de marcadores novedosos de adulteraciones de aceites de oliva.
Estrategia innovadora: la sola presencia del marcador en el aceite de oliva pone de manifiesto la adulteración.
La estrategia se base en técnicas de Espectrometría de Masas en Tándem:
Método no separativo de cribado por FIA/MS/MS (QqQ)
Método separativo de confirmación por CE/MS2(IT)
Aceites de
semilla
Aceites Oliva
Adulteración
¡2 iones producto que
confirmen inequívocamente
la adulteración!
Aceites de soja
Aceites Oliva
Virgen extra
Aceites Oliva
Virgen Extra con
2% de aceite de
soja
0
2
4
6
4x10
Intens.
5 10 15 20 25 Time [min]
0
2
4
6
4x10
5 10 15 20 25 Time [min]
0.0
0.5
1.0
1.5
2.0
4x10
5 10 15 20 25Time [min]
70.3
115.1
172.0
0
1000
2000
3000
4000
Intens.
50 75 100 125 150 175 200 225 250 m/z
+MS2 (189.0)
Ornitina
0.0
0.2
0.4
0.6
0.8
1.0
5x10
Intens.
5 10 15 20 25 30 35 40 Time [min]
0.0
0.2
0.4
0.6
0.8
1.0
5x10
5 10 15 20 25 30 35 40 Time [min]
0.0
0.2
0.4
0.6
0.8
1.0
5x10
5 10 15 20 25 30 35 40Time [min]
EIE
EIE
EIE
EIE
EIE
EIE
0
1
2
3
4x10
Intens.
2 4 6 8 10
0
1
2
3
4x10
0
1
2
34
x10
Time [min]
Carnitina
EIE
EIE
EIE
Allo-isoleucina
85.2
103.1
159.0
0
1000
2000
3000
4000
Intens.
50 75 100 125 150 175 200 225 250 m/z
+MS2 (218.0) +MS2 (188.0)69.4 86.3
0.0
0.2
0.4
0.6
0.8
1.0
4x10
Intens.
60 80 100 120 140 160 180 m/z
Adulteración Adulteración
Departamento de Química Analítica,
Química Física e Ingeniería Química
Compound tr-1D (min) Heart-cut (min) m/z m/z time (min) tr-2D (min)
1. Molinate 15.26 15.2-16.5 83, 126, 187
0.50-19.00 16.64
2. Trifluralin 17.76 18.0-19.0 19.52
3. Simazine 19.16
19.2-20.8
248, 264, 306 19.0.20.5 20.86
4. Atrazine 19.31 21.03
5. Propazine 19.42
173, 186, 187, 200, 201, 204, 214, 215, 229
21.17
6. Terbuthylazine 19.81 20.5-21.8 21.54
7. Diazinon 20.16 21.3-21.8 21.88
8. Pirimicarb 21.14
22.0-24.5
152, 179, 199 21.8—22.5 22.84
9. Parathion-methyl 21.93 23.61
10. Ametryn 22.00 72, 166, 238
22.50-23.40 23.85
11. Prometryn 22.30 24.07
12. Terbutryn 22.79
109, 125, 160, 188, 194, 212, 226, 227, 237, 241, 263
23.40-24.40 24.52
13. Chlorpyriphos 23.66 25.32
14. Parathion-ethyl 24.72 23.61
15. Alachlor 185, 226, 241 24.40-24.75 23.85
16. Malation 23.61 24.91
17. Methalochlor 25.15
18. Parathion ethyl 24.72 25.32
16. Pendimethalin 24.96 24.8-25.5 162, 191, 252 25.9-46.67 26.383
PTFE disks Sorbent
Membrane
Conditioning:
4mL methanol
4 mL water
Sample loading:
150 mL water
Washing:
15 mL Milli-Q water
Elution:
3x2 mL methanol
Aplicación para la preparación de muestras de alimentos: Extracción en fase sólida (SPE) de contaminantes
Preparación y caracterización de nuevas sílices mesoporosas híbridas Se han preparado nuevas sílices mesoporosas (tipo SBA-15)
funcionalizadas vía post-síntesis o mediante co-condensación con
diversos ligandos orgánicos (octadecilsilano, mercaptopirimidina,
mercaptotiazolina, etc.)
Los materiales preparados han sido caracterizado mediante difracción de
Rayos X, 29Si MAS RMN, , FT-IR, análisis elemental, análisis térmico,
fisisorción de gases, SEM, TEM, etc.
Las sílices preparadas presentan muy buena adsorción de diversos contaminantes orgánicos
e inorgánicos por lo que han sido utilizadas para la extracción en fase sólida (SPE) de estos
contaminantes en muestras de alimentos (aguas, leche, etc.) como etapa previa a su
determinación analítica.
Se han obtenido muy buenos resultados en comparación con los materiales
comerciales que se utilizan hasta la fecha (cartuchos tipo C18, HLB, etc.)
especialmente para la preconcentración de hormonas esteroideas, así como para
la preconcentración de metales pesados.
Compuesto AGUA DE GRIFO AGUA DEL “RÍO MANZANARES”
(Adiciones)
(ng/mL)
25 50 25 50
Estriol 118 109 97 91
β-Estradiol 98 106 101 82
Ethynilestradiol 105 93 88 96
Estrone 95 96 98 98
Diethylstilbestrol 89 80 101 84
Compuesto Rango Lineal
(ng/mL) R2
RSD
(%)
LOD
(ng/mL)
LOQ
(ng/mL)
Estriol 12.5 – 100 0,9914 0,10 8.9 10.5
β-Estradiol 12.5 – 100 0,9905 0,10 9.1 12.5
Etinilestradiol 12.5 – 100 0,9902 0,15 3.6 8.9
Estrona 25 – 100 0,9974 0,12 19.5 25
Dietilstilbestrol 12.5 – 100 0,9910 0,06 8.0 8.4
Desarrollo y validación de un método para el análisis de 9 metabolitos de PAEs mediante UPLC-MS/MS (QqQ) en 7 minutos.
Time1.75 2.00 2.25 2.50 2.75 3.00 3.25 3.50 3.75 4.00 4.25 4.50 4.75 5.00 5.25 5.50 5.75 6.00 6.25 6.50 6.75
%
0
100
5.35
5.21
5.07
2.561.87
5.45
6.04
5.63
6.48
MMP MiBP
MnBP
MEP
MBzP
MEHP 5-OH-MEHP
5-OXO-MEHP
5-CX-MEPP
O
O H
O
O
O
O H
O
O
O H
O
O
O
O
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O
O
O
O
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O
O
O
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O
O
O
O H
O
O H
O
O
O
O H
O
O
O
O
O H
O
O H MMP
MnBP
MiBP
MEP
MBzP
MEHP
5-OH-MEHP
5-OXO-MEHP
5-CX-MEPP
Grupo de Investigación en Química Analítica aplicada a medioambiente, alimentos y fármacos
Contaminantes
de Procesado Acrilamida Furano
Citotoxicidad de compuestos polares (CP) de aceites de fritura en células Caco-2
Los compuestos polares (CP) se forman durante
la fritura y están constituidos mayoritariamente
por polímeros de triglicéridos y triglicéridos
oxidados. Su nivel es indicativo del grado de
alteración y está limitado en 25%. Los CP se
encuentran en gran parte en sus estructuras
originales a nivel de la mucosa intestinal pero se
desconocen sus posibles efectos tóxicos.
En este estudio se han realizado ensayos de
toxicidad en células Caco-2 mediante el test de
respiración mitocondrial MTT utilizando muestras
de ácido linoleico con cantidades crecientes de
CP. Los resultados muestran una reducción
significativa de la respiración celular en muestras
con contenidos de CP representativos de los
encontrados en alimentos fritos. En muestras al
límite del contenido de CP (25%) la respiración
celular se redujo un 20%.
0
20
40
60
80
100
120
Kre
bs
KR
EBS+
Trit
on
Ace
ite
Áci
do
lin
ole
ico
Áci
do
lin
ole
ico
+
10
% C
P
Áci
do
lin
ole
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+
15
% C
P
Áci
do
lin
ole
ico
+
25
% C
P
Áci
do
lin
ole
ico
+
40
% C
P
CP
* * * *
Control +
Control -
*Reducción de 15-40% respiración celular en muestras representativas de ingesta
Po
rcen
taje
(%
) d
e re
spir
ació
n c
elu
lar
(Tes
t M
TT
)
O
O
Polímeros
Triglicéridos
oxidados
Aceite Ornitina
Girasol 1,1 - 2,9
Maíz 1,4 - 1,6
Soja 1,1 - 2,2
Oliva ND
Mezcla 10 % 0,21 ± 0,01
Mezcla 5 % 0,15 ± 0,02
Mezcla 2 % 0,10 ± 0,06
