EFECTO DEL PH SOBRE LA GLUCOSA OXIDASA1. OBJETIVOS Estudiar la influencia del pH sobre la glucosa oxidasa2. FUNDAMENTO TEORICO

Para cada enzima existe un óptimo de pH en el que se crean las condiciones más favorables para el mantenimiento de la conformación funcionalmente activa de la molécula. Los grupos amino y carboxilo de los restos de los aminoácidos ionizados a una magnitud de pH determinada, participan en el mantenimiento de la conformación de la molécula proteínica necesaria para la confrontación de los centros catalíticos de la enzima y favorecen también a su ligación con el sustrato. A magnitud de PH distinta se altera la ionización de los grupos correspondientes, y como resultado se rompen los enlaces que aseguran la formación de los centros catalíticos, y la enzima se inactiva. A los valores de pH muy altos o muy bajos las enzimas se desnaturalizan.3. REACTIVOS DE TRABAJO

Glucosa oxidasa Peroxidasa Indicador oxido-reducción(cromógeno) Ácido clorhídrico (HCl) Hidróxido de sodio (NaOH) glucosa

4. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL En 2 tubos de ensayo a 1 ml de glucosa oxidasa se agregó HCl (grupo 1 y 7) y encubar por 10 minutos para luego llevar al espectrofotómetro y medir la absorbancia. En 2 tubos de ensayo a 1 ml de glucosa oxidasa se agregó NaOH (grupo 3 y 9) y encubar por 10 minutos para luego llevar al espectrofotómetro y medir la absorbancia. En 2 tubos de ensayo a 1 ml de glucosa oxidasa se le agrega glucosa (grupo 5 y 11) y encubar por 10 minutos para luego llevar al espectrofotómetro y medir la absorbancia.

GRUPO 1 y 7 GRUPO 3 y 9 GRUPO 5 y 11Reactivo de trabajo 1 ml 1 ml 1 mlAgregar HCl 0.01M 0.1 ml -- --Agregar NaOH 0.01M -- 0.1 ml --Agregar glucosa (ul) 10 10 10Incubar a 37 °C por 10 min. * * *LECTURA: EL espectrofotómetro utiliza una longitud de onda de 505 nm para la medición de la absorbancia

5. CALCULOS y RESULTADOS DE LA EXPERIMENTACIÓN[Glucosa]= F*absorbancia del tubo problemaF=

(glucosa)absorvid .del estandar

=229mg /dl

GRUPO 1 y 7 GRUPO 3 y 9 GRUPO 5 y 11Absorbancia 0.100 0.058 0.121 0.179 0.293 0.105[Glucosa] mg/dl 22.900 13.282 27.709 40.991 67.097 24.045 Las observaciones más visibles fueron con los ensayos del reactivo de trabajo cuando se le modifico el pH (agregando NaOH), cambiando de color la muestra. A comparación de los ensayos en la cual solo se agregó glucosa no se modificó el color de la muestra.6. DISCUSIÓN

Uno de los atributos más sobresalientes de las enzimas es el de su especificidad de actuación, de suerte que tan solo ciertos sustratos experimentan su acción y únicamente tiene lugar a un tipo de reacción sin que se produzca reacciones laterales o sus productos. Sin embargo al modificar el pH de una enzima puede modificar así también su naturaleza (el pH desnaturaliza las enzimas).7. CONCLUSIÓNSe estudió y comprobó que la glucosa oxidasa pierde su naturaleza (desnaturaliza), al ser modificado su pH por una solución. EFECTO DE LA TEMPERATURA SOBBRE LA GLUCOSA OXIDASA1. OBJETIVOS Demostrar el efecto de la temperatura sobre la glucosa oxidasa2. FUNDAMENTO TEORICO

La temperatura del medio influye mucho en la actividad de las enzimas. La temperatura óptima para la acción de enzimas es la temperatura del cuerpo de los animales que oscilan en el intervalo de 36 a 41 °C. Con cierto aumento de la temperatura del medio ocurre aceleración de la reacción a consecuencia de la activación de las moléculas del sustrato. A la vez, incluso un aumento pequeño de la temperatura conduce al debilitamiento de los enlaces que mantienen la conformación de las moléculas de las enzimas, necesaria para la manifestación de su actividad catalítica.Empieza gradualmente, la desnaturalización de la enzima cuando se acelera bruscamente la temperatura y esta sobrepasa los 50 °C. La inactivación de la enzima con aumento de la temperatura del medio es irreversible. Al bajar la temperatura la actividad de la enzima disminuye. El mecanismo de este proceso no está claro. Sin embargo, el enfriamiento no causa desnaturalización de la enzima por lo tanto su inactivación puede ser reversible.3. REACTIVOS DE TRABAJO

Glucosa oxidasa Peroxidasa Indicador oxido-reducción(cromógeno) Ácido clorhídrico (HCl) Hidróxido de sodio (NaOH) Glucosa Agua destilada

4. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL En 2 tubos de ensayo a 1 ml de glucosa oxidasa (grupo 4 y 10), llevar los tubos a una temperatura de 0°C, luego agregar glucosa (10 ul), luego encubar nuevamente por 10 minutos a 0°C; para luego llevar al espectrofotómetro y medir su absorbancia. En 2 tubos de ensayo a 1 ml de glucosa oxidasa (grupo 2 y 8), llevar los tubos a una temperatura de 37°C, luego agregar glucosa (10 ul), luego encubar nuevamente por 10 minutos a 37°C; para luego llevar al espectrofotómetro y medir su absorbancia. En 2 tubos de ensayo a 1 ml de glucosa oxidasa (grupo 6 y 12), llevar los tubos a una temperatura de 70°C, luego agregar glucosa (10 ul), luego encubar nuevamente por 10 minutos a 70°C; para luego llevar al espectrofotómetro y medir su absorbancia.

GRUPO 4 y 10 GRUPO 2 y 8 GRUPO 6 y 12Reactivo de trabajo 1 ml 1 ml 1 mlLlevar lo tubos (RT) a temperatura(°C) 0 37 70Encubar 10 minutos * * *Agregar glucosa (ul) 10 10 10Incubar 10 minutos (°C) 0 37 70

LECTURA: EL espectrofotómetro utiliza una longitud de onda de 505 nm para la medición de la absorbancia

5. CALCULOS y RESULTADOS DE LA EXPERIMENTACIÓN[Glucosa]= F*absorbancia del tubo problemaF=

(glucosa)absorvid .del estandar

=229mg /dl

GRUPO 4 y 10 GRUPO 2 y 8 GRUPO 6 y 1Absorbancia 0.299 0.196 0.092 0.315 0.0.54 0.239[Glucosa] mg/dl 68.471 44.884 21.068 72.135 12.366 54.731

6. DISCUSIÓNUno de los atributos más sobresalientes de las enzimas es el de su especificidad de actuación, de suerte que tan solo ciertos sustratos experimentan su acción y únicamente tiene lugar a un tipo de reacción sin que se produzca reacciones laterales o sus productos. Sin embargo al modificar la temperatura a una más alta de una enzima puede modificar así también su naturaleza (la temperatura elevada desnaturaliza las enzimas).7. CONCLUSIÓNComprobó que la glucosa oxidasa pierde su naturaleza (desnaturaliza), al ser modificado la temperatura ( elevar la temperatura).8. BIBLIOGRAFIALibro bioquímica lehninger.

“AÑO DE LA DIVERSIFICACION PRODUCTIVA Y DEL FORTALECIMIENTO DE LA EDUCACION”UNIVERSIDAD NACIONAL DE PIURAFACULTAD DE INGENIERIA DE MINASESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERIA QUIMICA

CURSO: BIOQUIMICA TRABAJO: INFORME DE LABORATORIO N° 3 y 4

TEMA: efecto de la temperatura y pH sobre la glucosa oxidasa CICLO: V SEMESTRE 2015-I DOCENTE DE TEORIA: CESAR TORRES DIAZ DOCENTE DE PRACTICAS: JORGE BERMEJO BENITES INTEGRANTES DEL GRUPO N° 11

ABAD ABAD MILAGROS DEL SOCORRO PANTA FIESTAS JOSE NARCISO

UNP – PIURA- PERU- 2015